Digestián

Digestión
Anaerobia
Anaerobia
una
una aproximación
aproximación
aa lala tecnología
tecnología
 Digestión
Digestión.
Anaerobia
Ana_erobia
una ,aproximación,
una aproximación
tecnología,
a la tecnología

M AA RíA
M RíA (O NN SS UU EE 100
(O 100 z -B
íí AA z-B ÁÁ EEZZ

SANDRA
SANDRA El lANA
lANA ESP I TIA
ESPillA VA RGAS
VARGAS

FRANCISCO
FRANCISCO MOIINA
MaliNA PÉREZ
IpÉREZ

UNIVERSIDAD
UNIVERSIDAD
NACIONAL
NACIONAL
DECOLOMBIA
DECOLOMBIA:
Instituto de
Instituto de Biotecn01ogia
Biotecnelogia

Bogotá, junio de 2002

 Este libro
Este "bro fue pOSi~e graCias
graC.s al apoyo
al"1O d~ Siguiente grupo
gNI" de lraba..b'
lraba'"

Plazas
Engie Carolina Plazas BacIIlrióloga¡
Bacteriólogal
Investlgacion
Asistente de Investlgac:ion
Insllulo de Biotecnolog~
Instituto Biotecnolog~
Unhlersidad Nacional de Colombia
Universidad

Mana. Sena
Mana Sena. Gonzalez
Gonzalez Bacteridoga
Bacl¡¡ridoga
Facultad de Ingenieria
Faculfad
Universidad de AntlaqUla
AnuaqUla

Garda
Carolina Garda Microbióloga
Posgrado
Posgr'OOo Irledawllades
Inledarullades MlCro~dOlla
de Mlt:rol;jd~a
Universidad NaCional
UniVersk:lad NaCiOnal de Colombia'

cados J....
casos JlJio CoIazos
io CoIazos Ingemero Sanitario
Ingemero sanitario M.se..
M.se.

Facula:l de Ingenlena
~GESTIÚN
DIGESTION ANAEROBIA
ANAEROBIA
Universidad NaCional
Nacional de Colombia
UNA APROXIMACION
APROXIMACION A LA TECNOLOGIA
TECNOLOGIA
© UNIVERSIDAONACJONAL
DECOLOMBIA
UNIVERSIDADNACJONALDE
COLOMBIA
INSTITUTODEBI01ECNOLOGIA
INSTITUTODEBI01ECNOLOGIA

MARIA CONSUELO
MARIA CONSUELO DI/>J-$AEZ
DIAI·BAEZ
~ilIogo. M.5c.
~0I0g0. M.5c.

Ingenieria Ambiental
Universidad Nacion~ de Colombia
Universk:lad CoIomtHa

SANORA BIANA
SANORA BIANA ESPilA
ESPilA VARGAS
VARGAS
Bacteridoga.
Bicteridóga. M.SQ..
M.Se..
Instiulo de Biotecnologla
Instituto Biotecnologla
Nadonal de Colombia
Universidad Nadonal

FRANCISCOMOIINA
FRANCISCO PEREI
MOIINA PEREI
sanitario. M.$e..
Ingeniero Sanitario. M.se~
FacuJta:l de Ingeniena
Facultad
Un'erS~ad
Un'erSklitd AntioqUIa
de AntioqUIa'

Pnmera edlCion 2002

Pninera 2002
958· 70 1-1%-1
ISBN 9$8- 1·1%-1

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'Fran~"" lose· de
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ALEJANDRWrOINA

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UNlBIBIOS
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urifJItikl@.dnlc.unal.oou
uriflltilotMnlc.unal.oou.oo
C9
AGRADECIMIENTOS
AGRADECIMIENTOS

Los
Los autores
autores queremos
queremos dar
dar un
un reconocimiento
reconocimiento especial
especial al
al profesor
profesor Didier
Didier
A1azard,Microbiólogo
Alazard, Microbiólogo Ph,Ode
Ph,Ode la
la ORSTOM,quienha
ORSTOM,quienha sido
sido uno
uno de
de los
los pioneros
pioneros
en
en la
la enseñanza
enseñanza yy el
el estudio
estudio de
de la
la microbiología anaerobia
anaerobia en
en Colombia.
Colombia.

Además,
Además, los
los autores
autores quieren
quieren expresar
expresar sus
sus agradecimientos
agradecimientos a:
a:
Instituto
Instituto de
de Biotecnologia
Biotecnologia de
de la
la UJ.1iversidadNacional
lUI,1iversidad Nacional de
de Colombia
Colombia
Facultad
Facultad de
de Ingeniería
Ingeníería de
de la
la Universidad
Universidad !Nacionalde
lNacional de Colombia
Colombia
Facultad
Facultad de
de Ingeniería
Ingeniería de
de la
la Universidad
Universidad de
de Antioquia
Antioquia

Finalmente,
Finalmente, nuestros
nuestros agradecimientos
agradecimientos aa Colciencias,
Colciencias, Programa
Programa
de
de Biotecnología,
Biotecnologfa, por
por el
el apoyo
apoyo financiero'
financiero' brindado
brindado aa los
los dos
dos grupos
grupos de
de
trabajo,
trabajo, el
el cual nos
nos permitió
permitió explorar
explorar este
este campo,
campo, así
así como
como contar
contar con
con la
la
infraestructura
infraestructura necesaria
necesaria para
para continuar en
en el
,elestudio
estudio ee investigación
investigación de
de
la
la digestión
digestión anaerobia.
anaerobia.
CONTENlmo
CONTENIDO ~

PRÓLOGO

CAPITULO
CAPITULO

RECURSOSHíDRIOOSy TRATAMIENTODE
TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES
Recursos hídricos
hídrícos
Opciones
Opcíones tecnológicas de tratamiento
Experiencias con digestión anaerobia en Colombia y América Latina
Problemas asociados con la digestión anaerobia

CAPiTULO
CAPiTULO 2

HISTORIADE
HISTORIA DE LA DIGESTiÓNANAEROBIA
Microbiología
lMicrobiología
Desarrollo y apli:ación
aplicación de la digestión anaerobia al tratamiento de residuos

CAPiTULO
CAPiTULO

MICROBIOLOGíADE LA DIGESTiÓNANAEROBIA
DIGESTIÓNANAEROBIA
Interacciones microbianas
Degradación
Degradación· anaerobia de la materia orgánica
orgániea
Bacterias
Bacterias· involucradas en el proceso de digestión anaerobia
anaerobia
Metanogénesis
IMetanogénesis
Bacterias sulfato-reductoras
sulfato-reductoras (BSR)

CAPiTULO
CAPiTULO

PUESTA
PUESTA EN MARCHAY OPERACiÓN DE REACTORES
REACTORESANAEROBIOS
Reactores anaerobios:
anaerobios: ¿Caja
¿Caja negra
negra o ecosistema
ecosistema microbiano?
microbiano?
Etapa
IEtapa de
de puesta
puesta en
en marcha
marcha oo arranque
arranque del
del reacJor
reaelor
Etapa
Etapa de
de operación
operación

CAPITULO
CAPITULO

CARACTERIZACiÓNDE LODOS
CARACTERIZACiÓND'E LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS Yy AGUAS
AGUAS RESIDUALES
Lodos
Lodos anaerol)ios
anaerollios
Aguas
Aguas residuales
residuales

ANEXOS
ANEXOS
 [9]

IPRÓLOGO
PRÓLOGO I

AUNQUE COLOMBIA
AUNQUE! COLOMBIA CUENTA
CUENTA CON
CON GRAN
GRAN CANTIDAD
CANTIDAD IDERECURSOS,HíI)RleOS
DE RECURSOS HíDRICOS E HIDROBIOLÓGICQS.
HIDROBIOLÓGICQS

CONTINENTALES
CONTINENTALES (MÁS DE
(MÁS DE 2.6 MILLONES DE
MILLONES DE HECTÁREAS
HECTÁREAS DE LAGOS,
LAGOS, LAGUNAS,
LAGUNAS, EMBALSES,
EMBALSES,

ciénagas y pantanos,
ciénagas pantanos, y 720'.000 cauées), fenómenos
720.000 cauées), fenómenos como Ilaeroslón,
la erosión, la destrucción
destrucción
formaGibnes vegetales
de formaGibnes vegetales y la contaminación
contaminación de diversos
diversos oríg;enes,
oríg,enes, han IlIevado
llevado al
grave deterioro
'grave deterioro de tales recursos
recursos que vemos en la actualidad.
actualidad.
En términos generales,
lEntérminos generales, la contaminooión
contaminación de los recursos
recursos hídrícos
hídricos se debe a
la descarga de aguas residuales
H3descarga residuales domésticas
domésticas e industriales
industriales sin ningún tratamiento,
tratamiento,
los derrames
derrames de bldrocarouros,
hidrocarburos, la actividad
actividad agropecuaria
agropecuaria y la minería.
minería. Es por elllo,
eUo,
parte de los
que gran parte los esfuerzos
esfuel2ios de las entidades
entidades gubernamentales
gubernamentales encargadas
encargadas de
de
protección de estos recursos,
la protección recursos, está orientada
orientada tanto a la apllceclón
aplicación de la normatividad
normatividad
existente en lo re'lativo
e~istente relativo al control de la calidad de los efluentes
efluentes vertidbs,
vertidos, así como a la
rehabilitación y recuperaclón
rehabilitación recuperación de la Ibase
base natural de los ecosistemas
ecosistemas afectados.
afectados. Como
resultado de estas medidas,
resultado medidas, en la actualidad
actualidad muchas
muchas industrias
industrias cuentan
cuentan con varia-
sistemas de tratamiento
dos sistemas tratamiento y a nivel municipal,
municipal, algunos
algunos centros urbanos
urbanos han abor-
el problema de tratamiento
dado elproblema tratamiento de sus aguas residuales.
residuales.
Aunque el tratamiento
Aunque tratamiento de aguas residuales
residuales domésticas
domésticas es un proceso
proceso co·
co-
nocido y bien estudiado,
nocldo estudiado, la aplicación
aplicación de tos
los mismos
mismos sistemas
sistemas al tratamiento
tratamiento de
de
residuos industriales
reslcuos industriales y a ta
la recuperación
recuperación y rehabilitación
rehabilitación de suelos, no siempre
siempre ha
resultados exitosos.
tenido resultados exitosos. 16nmuchos
En muchos casos
casos ha sido necesario,
necesario, no solo conocer
conocer
detallada los fenómenos
en forma detallada fenómenos que se llevan a cabo, sino que además
además para la
definición y aná'lisis
definición análisis del problema,
problema, ha sido indispensable
indispensable el trabajo coordínado
coordinado e
interdiscipllnario de diferentes
interdisCipllnario diferentes áreas del conocimiento
conocimiento como
como la biología,
biología, la química
química
ingeniería. Un ejemp'lO
y la ingeniería. ejemplo de la necesidad
necesidad de este trabajo coordinadb,
coordinado, es el trata-
anaerobio de aguas
miento anaerobio aguas residuales
residuales utilizado
utilizado exitosamente
exitosamente en diferentes
diferentes países
(Europa, Japón, China,
(Europa, China, IBrasil,
Brasil, Mé~ico,
México, etc.), mientras
mientras en otros,
otros, problemas
problemas como la
carencia de inóculos,
carenda inóoulos, la puesta en marcha
marcha de los reactores,
reactores, y la estabilidad
estabilidad del
proceso, han generado
proceso, generado gran,
gran desconfianza
desconfianza de esta tecnología
tecnología cuando,
cuando, en muchos
muchos
de estos casos podrían
podrían haberse
haberse solucionado
solucionado si se hubieran
hubieran abordado
abordado con la cola-
cola-
boración
boraclón de varias disciplinas.
disciplinas.
 Por esta
IPor esta razón,
razón, los
los autores
autores concientes
concientes de
de las
las bondades
bondades de
de 'esta
esta tecn010-~
tecnolo-
gía, así
gía, así como'
como de
de Su
su potencial
potencialI para
para el
el tratamiento
tratamiento de
de aguas
aguas residuales,
residuales, han
han que-
rido dar a los
rido los profesionales que trabajan
trabajan 'en
en el área de tratamiento ' de aguas
residuales, IUnlibro
residuales, un libro donde·
donde desde un punto'
punto de vista interdisoiplinario,
interdisciplinario, se consiq¡
consig-
nan los fundamentos teóricos
teóricos y algunas de las 'experiencias
experiencias prácticas logradas
manejo y apfcacién-
en el manejo aplicación- de la digestión anaerobia.
El presente documemto
61 documento se miela
inicia con los conceptos.
conceptos básicos
básicos de microbiolo--
microbiolo-
proceso, continúa c()nl
gía del procesa, con aspectos relacíonadés puesta en marcha y
relacionados con la puesta
anaeroJoios, y finaliza con los protocolos recomendados
reactores anaerobios,
operación de reactores.
para la medición parámetros de control y operación.
medición de parámetros 1 operación. Dado
Dado que no existe en ei
el
mercado un texto donde se consignen I todos estos elementos,
mercado' elementos, esperarnos
esperamos que
una guía importante
este texto pueda ser una importante para
para los profesionales 'que
que abordan 'esta
esta
tecnología, además de contribuir¡
tecnoleqís, contribuir a una mejor
mejor aplicacióm
aplicación de la
la misma
misma en el país,
país.
 Crtp'tulo.
Crtp'tulo:

l
LJ n1 ')
ú

RECURSOS I H~DRlaOS~ y
IH~DRlaOS

TRATAMIENTO
TRATAMIENTO DE
DE

AGUAS IRESIDU~LES·'
RESIDUALES·
 RECUI{SOS HíORIGOS
IRECl!JJ{SOS HíORICOS

AGUA lES
EL AGUA ES UNA
UNA MOLÉCULA,
MOLÉCULA, ESENCIAL
ESENCiAl lE
E INDISPENSABLE
INDISPENSABLE PARA
PARA LA VIDA;.
VIDA; 'CUANTITATIVAMENTE,
CUANTITATIVAMENTE, RE-

PRESENTA EL CONSTITUYENTE
PRESENTA CONSTITUYENTE INORGÁNICO
INORGÁNICO MÁS ABUNIDANTE
ABUNDANTE EN LA MATERIA
MATERIA VIVA.
VIVA. CERCA
CERCA DE TRES
TRES

cuartas partes
cuartas. partes de la superñeie
superficie terrestre
terrestre están oubiertas
oubiertas por
por Ila
la hidrosfera;
hidrosfera; de
ésta, los océanos
océanos representan
representan II el 97% de la masa
masa total 1de
de agua presente
presente y sólo un
corresponde a agua dulce,
3% correspondé dulce. EII79%
El 79% de esta 1Ú'ltima
ú~ima fracción
fracción I se localza
localiza en los
casquetes polares y en los
casquetes los glaciares,
glaciares, el .20%
20% contorna
conforma Ilas
las aguas subterráneas
subterráneas y
únicamente el 1% representa
únicamente representa agua dulce superfi&íall
superficial fácil'mente
fácilmente accesible,
accesible.
localizadón geográfica,
Por su loceflzsdón geográfica, su historia 'geológica
geológica y la presencia
presencia de Ilos
los An-
des, en Gdlombiase
des, Colombiase propició
propició laformación
laformación de seis grandes
grandes unidades
unidades o regiones
regiones natura-
¡natura-
les:Andina,
les: Caribe,Orinoquía,Amazonía,
Andina, Canibe,Orinoquia, losvalles
Amazonía, los Ilnterandinosyy del Pacífic0,llas
valles Ilnterandinos Pacífico,lascuales
cuales
lugar a !Unpaís
dan Ilugar un país privilegiado
privilegiado en recursos
recursos hídricos,
hídricos, cuyo rendimiento
rendimiento por km22 es
aprol<imadamenteseis
aproximadamente veces el planetario
seis veces planetario y tres veces el suramericano
suramericano (Tabla 1,1),
1.1). A la
retención que ocurre en la biosfera,
retención biosfera, producto
producto de Iladiferencia
la diferencia entre la Iprecipitación
precipitación y la
evaporación, se Ileoonoce
evaporación, le conoce como 'rendimiento,
'rendimiento hídrico',
hídrico'.

Tabla 1.11.
Tabla, 1.1. ,PreCipitación
Precipitación I1 y rendi·mientos,
¡rendimientos, hidriéos,·
hidricios,

Región
Región Precipitación
Precipitación anual media (mm)
anaal media (mm) Rendimiento(Vslkm')
Rendimiento(Vs/km')

Planeta Tierra
IPlaneta 900
900 10
10

América
Sur América 1.600
1.600 21

Colombia
Colombia 3.000
3.000 58

Fuente: Ministerio
Fuente: Ministerio..•. del Medio
... dal Medio Ambienté.
Anlbiente. 1996
1996

A pesar que 'el recurso

recurso hídrico en Colombia
Colombia ,es abundante, su distribl!Jción
es abundante, distriblilción 1

no es uniforme;
uniforme; por ejemplo,
ejemplo, en la cuenca Magd'alena-(i;auca
Magdalena-Cauca -donde se concentra
concentra
70 %'
el 70' % de la población-,
población-, sólo se ouenta con el 10 % de Ila
la oferta hídrica,
hídrica. El 30%
población restante,
de la población restante, se localiza
localiza en las
las cuencas
cuencas del Orinoco,
Orinooo, Amazonas,
Amazonas, Pací-
Pací-
Catatumbo y Sierra Nevada
fico, Sinú, Catatumbo Nevada donde
donde se encuentra
encuentra el 90 % restante
restante de la
oferta Ihídrica superficiall.
oferta superficial..
[14]
[14] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

En la acíuandad,
6n actualidad, delltotal
del total de la oferta hídrica superficial
superfi~al, solamente se utiliza
entre el 5S y 6% en actividades relacionadas oon:
con: aqricultura
agricultura {63%),
(63%), generacjón
generación de
humano (5%)"
energía (31 %), consumo humano (S%)" y actividades industriales {1%)L
(1%). Algunas esti-
maciones lndlcarnque
maciones indican que para un funcionamiento adecuado de los ecosistemas naturales-
naturales
regulación natural de estos cuerpos de
y el sostenimiento de la capacidad de autor reglJlación
agua, será necesario
necesario reservar 80% de la oferta superficial,
superfi~al, por lo que sólo IUn20%
un 20% de
la oferta hídrica
hídricatotal podrá utillzarse
total podrá utilizarse (Ministerio del [MedioAmbiente,
Medio Ambiente, 1996).
Sumado al problema de la distribución 'desigual,1
Sumado' desigual, en las últimas décadas se
observado un creciente deteriore
ha 'observado' deterioro de la calidad de este recurso."
recurso. La contamina-~
contamina-
las agUas
ción de tas aguas continentales y oceánicas
oceánicas es un problema vigente, y aurucuando
aunl cuando
y efectos de esta contaminación figlJran1entre
los mecanismos yefectos figuran entre los
Ilos más conocidos
todos los problemas ambientales, la búsqueda de soluciones eficaces muchas
de todos-
sido complicada
veces ha sidb 'complicada y no siempre ha conducido a soluciones técnicas y
económicas 'exitosas.
económicas exitosas.
gubernamentales se establece que las principales causas de
En informes gubernam-entales
este deterioro I estriban en la modificación de la cobenura
I cobertura vegetal y en las expl'ota-
explota-
ciones mineras, impactos ambientales que generan gram
clones gran cantidad de sedimentos,
y el vertimiento ' de aguas residuales y residuos sólidos
sólidms sin ningún tratamiento a
agua. En 1996, el Ministerio del Medío
las corrientes y cuerpos de agua.. Medio Ambiente re-
portó una descama
portó, descarga diaria de rnatena
materia orgánica de oríqen
origen doméstico a los ríos
carga orgániea
colombianos de 1.800 toneladas, y una carga- orgánica de '500
SOOtoneladas
toneladas de ori-
genll ind'ustrial
gen industrial {Mondragón¡ 1996). Por la misma época"
(Mondragón, 1996).1 época, sólo el 2% de la pobla-
algún tratamiento de sus aquas
ción urbana realizaba algún1tratamiento aguas residuales
residuales {Ministerio
(Ministerio ' dell
del
Medio Ambiente, 1996 y Mondragón, 1996).
Dos años más tarde, en el [nventano
IDosaños Inventario Nacional del Sector de Agua Potable
y Saneamiento Básico, realizado por el Ministerio de Desarrollo
Desarrollo Eoonómico
Económico (1998),
(1998),
se reportó que de los 1.068 municipios colombianos, solamente 154 (14%) rea-
lizaban algúlIlltipo
Ilizaban algún tipo de tratamento
tratamiento de sus aguas residuales domésticas.
domésticas. De éstos,
correspondían a áreas urbanas con menos
133 corraspondían menos de 10Q.(lO(}
100.000 I habitantes, y los
restantes 211municiplos
restantes 21 municipios tenían poblaciones mayores a 100.000 habitantes.
1

similar, para
De forma slrnllan, para la disposición
disposición de residuos sólidos sólb
1 sólo el 40% de la
población 'contaba
población contaba con sistemas adecuados de dispesieióru
disposición final, genenalmente
generalmente
 RECURSOS
RECURSOS HIDRlCOS
HIDRlC<DS'1 y TRATAMIENTO
TRATAMIENTO DE AGUAS
AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [15]

rellenos sanitarios
rellenos sanitarios (Mondragóm,
(Mondragón, 1996).
1996). De Ilos
los 1.068
1.068 municipios
municipios existentes
existentes en
1996, solamente
1996, solamente 940 contaban
contaban con servicio
servicio de
de aseo, 42 de ellos llevaban
llevaban a cabo
disposición finall
la disposición final de tas
las basuras
basuras directamente
directamente en los cuerpos
cuerpos de agua y 538 las
disponían en
disponían en botaderos
botaderos o mediante
mediante quema
quema a cielo abierto,
abierto (Ministerio
(Ministerio de Desarro-
Desarro-
Económico, 1998).
llo Económico, 1998).
pesar de este ,grave
A pesar grave panorama,
panorama, Ilas
las regul!aciones
regulaciones y las actividades
actividades de
control de Ilas
controll las agencias
agencias gubernamentales
gubernamentales encargadas,
encargadas, así
así como los principios
principios de
responsabilidad integrall
responsabilidadl integral asumidos
asumidos por
por la
la mdusfria,
industria, han lIIevado
llevado a que
que en algunos
algunos
sectores aqrolndlrsíriales
sectores agroindustriales e industriales
industriales se realicen
realicen esfuerzos
esfuerzos en el tratamiento
tratamiento de
aguas residuales.
aguas residuales. INo
No obstante
obstante estas iniciativas,
iniciativas, la continua
continua descarga
descarga de impor-
impor-
tantes volúmenes
tantes volúmenes de aguas
aguas resid'ual'es
residuales Ihace
hace que ríos como ellBogotá,
el Bogotá, ellMedellín,
el Medellín,
Cauca, el Chícemocha
el Cauca, Chicamocha y el Magdalena,
Magdalena, presenten
presenten altos índices
índices de contamina-
contamina-
por lo tanto,
ción, y por tanto, deberán
deberán someterse
someterse prioritariamemte
prioritariamente a planes
planes de saneamiento
saneamiento
recuperación.
y recuperación.

ÓPGIONES
OPCIONES - TECNOlÓGICAS
TECNOLÓGICAS
DE TRATAMIENTO '

términos generales,
En términos generales, las opciones
opciones tecnológicas
tecnológicas de tratamiento
tratamiento de aguas
aguas
residuales se pueden
residuales pueden clasificar
clasificar en dos clases:
clases: el tratamiento,
tratamiento fisicoquímico
fisicoquímico y el
tratamiento biológico.
tratamiento, biológico. Dadas
Dadas las características
características de la gran mayoría
mayoría de las
las aguas
aguas
residuales, Ilos
residuales, los sistemas
sistemas de tratamiento
tratamiento involucran
involucran una combinación
combinación de procesos
procesos
físicos, químicos
físicos, químicos y biológicos,
biológicos, los cuales
cuales se llevan
llevan a cabo en una secuencia
secuencia de
etapas conocidas
etapas conocidas como tratamiento
tratamiento preliminar,
preliminar, tratamiento
tratamiento primario,
primario, tratamiento
tratamiento
secundario o Ibiológico
seoundario Ibiológico y tratamiemto
tratamiento terciario
terciario o avanzado
avanzado (Figura
(Figura 1.1).
Los tratamientos
tratamientos prelrnlnares
preliminares sirven
sirven para
para aumentar
aumentar la efectividad
efectividad de los
tratamientos subsiguientes;
tratamientos subsiguientes; su papel se retaclona
relaciona principalmente
principalmente con Ilaremoción
la remoción de
sólidos de gran tamaño.
sólidos tamaño. Los tratamientos
tratamientos preliminares
preliminares más
más usua'les
usuales son: las rejillas,
rejillas,
tamices, los desarenadores,
los tamices, desarenadores, los tanques
tanques de Ihomogenización
homogenización o neutralización.
neutralización.
!Lostratamientos primarios tienen
ILostratamientos primarios, tienen como objetivo
objetivo principal
principal la rernocíón
remoción de
materiales que pueden
materiales pueden sedimentar
sedimentar (llamados
(llamados 'sólidos
'sólidos sedrnentables')
sedimentables') o flotar
[16]
1[16] !DIGESTIÓN
blGESnÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA ,~ I

'sólidos suspendidos').
(llamados 'sólidbs suspendidos'). 1L0stratamientos lutilizados son: la sedi-
ILostratamiemtos más uílllzados
precipitación química y la flotación.
mentación primaria, la precipitación
Tralámiento preliminar I
TratamientO: Tratamiento -.
Tratamiénto ~ ptirhario:
primario-

Agua
Agua"
'l.
!rllliil:luaLJ •
--='rÁ=$i=dl='ar::..¡1
Desareñaélo~
Desarenado!-
Igual8ción
Igúal8ción,

Tratamiento.~ terciano.-
Tretamiento. terciario Tratamiento 'secundario
Tratamiento secundal"io',
,_,

Agua
Ag(Ja~
; tratada
tratada
Oxidación aerobia: Lodos activados
Lodos
Filtros
Filtros
""
activados

;. percoladores
percoacores
Lagunas de
Lagunas
oxidación
oXidación
Biodiscos
Biodiscos

Digestión aerobia: UASB

RAP
RAP

Figura 1..11
IFigulá 1.1 Niveles de tratailiiento
Niveles. tratamiento residuales.
de las aguas residuales:

El objetivo Iprincipal
EII Ilostratamientos secundarios
principal de Ilostratamiemtos secundarios es la remoción de la
materia orgánica soluble. Se llevan a cabo mediante procesos biológicos en los
mioroorganismos utilizan aeróbica o anaeróbicamente
cuales, los mlcroorqanlsmos. anaeróbicamente el material
material
orgánico presente
'Orgánico presente 'en
en el agua residual. Los tratamientos
tratamientos más comunes son: los
lodos actívados,
activados, los filtros percotadores,
percoladores, las Ilagunas
lagunas de estabilización"
estabilización, las zan-
biodiscos y la digestión anaerobia. Esta !Últimapuede
jas de oxidación, los Ibiodiscos con-
úlílrna puede con-
algunos casos, como 'untratamiento,
siderarse, en algunos un tratamiento, intermedio,
intermedio ,entre Ilosprimares
los primarios
secundarios.
y los secundarios.
tratamientos terciarios están orientados
Los tratamientos, orientados a la remoción
remoción de elementos
nitrógeno, e'l
como el nlíróqsno, el fósforo, tos
los metales pesados y/o algunos materiales
materiales tóxi-
tratamientos avanzados que más se utlllzan,
cos. Los íratamlentos. utilizan, son: la nitrificación-
nitrificación-
desnitrificacilf>n, la adsorción en ,carbón
desnltriñéaclén, activado, Ila
carbón, actvado, la oxidación química, el
intercambio iónico y [la
mtercarnblo Iladoración.
cloración,
 R E e u RR SS o SS IH
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L lE
E S [1 7]

EXPERIENCIÁS '.' CON DIGESTiÓN'

EXPER1ENal~S IOIGESTiÓN
ANAEROBIA
ÁNAEIROElIA fiN
EIN COlL.oMBIA. y-
COL_OMBIA ___ y
AMÉRICA _ ILATINA
AMÉRICA lATINA_

La remoción de materia orgánica soluble puede ~Ievarse través de proce-

llevarse a cabo a través
Ibiológicos aerobios o anaerobios.
sos !biológicos anaerobios. En ambos casos,
casos, los mcroorgaelsmos
microorganismos utili-
zan 'la
la materia
materia orgánica
orgánica como fuente de energía y carbono, y generan
generalil nueva
Ibiomasa, además
btomasa, además de productos de oxidación:
oxidación: COzy los aerobios ó CHl
CO'l!f HzO,para Ilosaerobios CH44yy
COz'para los anaerobios.
COz'para anaerobios.
EnColombia,
En el 97% de tas
Colombia"e'197% las aguas residuales se vierten, ríos sin ningún
vierten en los Iríossin
tratamiento, razón Ipor
tipo de tratamiento, la contaminación por esta vía constituye
por la cual [lacontaminación constituye uno
uno de
de
problemas ambientales
los problemas ambientales de mayor ¡impactopara
impacto para la soáiedad
sooiedad colombiana.
colombiana. EII
E11
ssector
ector
agroindustrial origina
agroindustrial origina (sin incluir la caña de azúcar y el benefidio
benefiCiode café) luna
de café) una carga
carga
toneladas lOSO/día;,
de 4.000 tonelad'as OSO/día; lle
¡le siguen Ilos
los sectores pecuario,
pecuario, doméstico
doméstico (1.200'
(1.200
OSO/día) 'e
toneladas OSO/día) e industrial (520'
1(520'ttoneladas OSO/día).
onelad'as OSO/día).
Aunque en la mayoría de los países latinoamericanos
latinoamericanos solamente
solamente ,el
el 10% de
las aguas residuales domésticas
domésticas son tratadas (Oficina de Análisis Económico,
Económico, Mi-
nisterio del Medio Ambiente,
nlstero Ambiente, 1997)),
1997)1 esta tendeneia
tendencia Ihavenido
ha venido cambiadb
I cambiado en [los
I10s
utilización de reactores anaerobios
últimos años. La utiliización anaerobios para
para el tratamiento
tratamiento de aguas
ha creddb
residuales ha crecidb desde 1982 orientándose
orientándose principal'mente
principalmente al tratamiento
tratamiento de
agroindustriales. La importancia
aguas residuales aqrolndusíriales, importancia 'económica
económica de este sector, la
susceptibilidad de estos ,efluentes
susceptibilidad tratamiento anaerobio,
,efluentes. al tratamiento' anaerobio y las condiciones
condiciones de
temperatura de Ilospaises
temperatura los paises del trópico han favorecido
favorecido la operación de 'este
este tipo de
reactores (sorzacconu al., 1996). En la [Figura
(Sorzaccolili et a/., I Figura 1.2 se presenta
presenta ei
el número'
número, de
instalados entre 1982 y 1'99'3en
reactores instaladbs 1'993 en América Latina; de ellos, 82% corres-
UASS, 14% a filtros anaerobios
ponde a reactores tipo UAS:S,14% anaerobios y los señalados como 'otros'
representanI generalmente
representan generalmente sistemas híbridos.
I

en América lLatina
En 1994 existían ,en Latina aproximadamente
aproximadamente . 396 reactones
reactores
anaerobios Ilos
anaerobios los cuales
cuales trataean
trataban un volumen aproximadb
aproximado de 394.4211rn-
394.421 m3. IEII
El 443%
3%
(182.286mJ)3) eran utilizad'os
(182.286m utilizados en el tratamlento
tratamiento de aguas reslduales
residuales industriales
industriales y
[18]
[18] I 10
[10 G E
I G ESST
T I 66 N
N A
A N
N A E R O
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B I A

agroindustriales,
agroindustriales, yyelel 57% restante, para
57% restante, para domésticas, utilizaban en 11a
domésticas, o se utilizaban ,diges-
Iladiges-
tión final
tión final de lodos
lodos provenientes
provenientes de plantas
plantas de tratamiento
tratami.ento aerobias.
aerobias. La mayoría
mayoría de
los reactores
los reactores que
que trataban
trataban II efluentes
efluentes agroindustriales
agroindustriales (115),
(11 5), se localizan
localizan en Bra-
Bra-
sil, yen
sil, y en menor
menor propor~óm
proporción en México
México (22),
(22) y Colombia
Cdlombia (10)
(10) Yel resto
resto en otros
otros
países.
países. Básicamente,
Básicamente, los efluentes
efluentes tratados provenían de la industria
tratados provenían industria cervecera
cervecera
(40%)¡ malterías
(40%), malterías (21
(21 %),
%), destilerías
destilerías de caña
caña de azúcar (5%), yel 34%
azúcar (5%), 34% de la mdus-
indus-
tria
tria de Ilevaduras
levaduras (Borzacconi
(Borzaccons ,et
et al.,
a/., 1996).
1996).

80
o
13

!~!:~60
.:1.,
~
~ .. 40
:z

20
20

TIempo (años)
Tiempo (años)
QOlros 11
OOlros llFAFA UASB
UASB

Figura
Figuré 1.2. Reactores
Reactores anaerobios.
enaerebíos: utilizados
utilizados' en el tralBmienlo
tratamiento de' efluenlBs'
de efluentes'
agroindustriales
agroindustrlales en América
América Latina.
Latina ,(1982-1993).,
(19B2-1993).,

calcula que
Se calcula que en Colombia
Colombia existen
existen más
más de 80 reactores
reactores anaerobios
anaerobios los
cuales tratan
cuales tratan un caudal
caudal aproximado
aproximado de 855 Jlseg. Estas
855 J/seg. Estas instalaciones se utilizan
instalaciones se utilizan
para el tratamiento
para tratamiento de efluentes
efluentes de procesos
procesos industriales,
industriales, agroindustriales
agroindustriales yaguas
yaguas
residuales domésticas.
residuales domésticas. En
En la Figura
Figura 1.3 se presenta
presenta la distribución
distribución porcentuall
porcentuall por
volumen y caudal
volumen caudal tratado.
tratado. Los
Los biorreactores
biorreactores tratan
tratan efluentes
efluentes de las industrias
industrias
cervecera,
cervecera, de levaduras,
levaduras, de gaseosas
gaseosas y refrescos, papeleras y de lavado
refrescos, papeleras lavado de lana,
lana,
con eficiencias
con eficiencias que
que oscilan
oscilan entre
entre 40 y 70%
70% (Duque, 1996).
(Duque, 1996).
[18]
[18] !DIGESTiÓN
IoIGESTiÓN - J ANAEROBIA'
ANAEROBIA

agroindustriales, y el 57%
agroindustriales,. 57% restante,
restante, para domésticas, o se utilizaban en Iladiges-
la diges-
tratamiento aerobias. La mayoría de
tión final de lodos provenientes de plantas de tratamlento-
tratabalil efluentes agroindustriales (111
los reactores que tratalt>amefluentes (11 5), se localizan en Bra-
menor proporcíém
sil, yen menor proporción en lMéxico
México (22) y Cólombia
Colombia (10~
(10) Yel resto'
resto en otros
países. Básicamente, los efluentes tratados provenían ,de
de la industria cervecera
(40%), malterías (21 %), destilerías de caña de azúcar (5%)1yel
(40%)j,. (5%) yel 34%
34% de la indus-
Ilevaduras {Borzacconil
tria de levaduras (Borzacconi el al., 1996}.
1996).

120
12

100

••
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40
40

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o 1982 1983 1'984 1'985

1985 1'986
1l)86 1987
19S7 1988
19S8 1989
1981) 1990
19l)O 1'991
1991 1'992
1992 1993
1993
1'982

Tiempo(años)
Tiempo' (años)
o miEA
Otros 1mFA U.A:Sll
UASB

Figura 1.2.
Figura 1.2. !Reactores
lReactores anaerobios utilizados
utilizados en,
en el tratamiento
tratamiento de efluentes'
de' efluentes
agroindilstriales ,en
agroindustriales en América
América !Latina (1982-1993).
Latina, (1982-1993).,

80 reactores
Se calcula que en Colombia existen más de 80, reactores anaerobios los
cuales tratan un ,caudal
oua'lestratan aproximado de 855
caudal aproximadb
1 855 l/segl.
I/seg. IEstas
Estas instalaciones se utilizan
para el tratamiento,
tratamiento de efluentes de procesos
procesos industriales, agroindustriales yaguas
domésticas. lEnla
residuales domésílcas. En la IRigura
Figura 1.3 se presenta
presenta la distribución porcentuall
porcentual por
efluentes de las industrias
volumen y caudal tratado. Los biorreactores tratan efluentes,
levaduras, de gaseosas y refrescos, papeleras y de Ilavado
cervecera, de Ilevaduras, lavado de lana,
,entre 40 y 70%
con eficiencias que oscilan entre 70% (Duque, 1996).
1996).
 RECURSOS HiDRICOS
HiDRICOS y TRATAMIENTOI
TRATAMIENTO I DE
DE AGiJAS
AGUAS RESIDIlIALES
RESIDUALES [19]

Agua residual industrial

Vsegl
268 Vseg~
Agua residual 31%
dOlOéslica
dOlllésJica_
567 Vsegl
VsegL
66%

residual
Agua residuall
agrolndustrial
Vsegl
27 Vseg~
3%

1.3,. Distribución
Figura 1.3, Distribución porcentual
¡porcentual. del volumen y el caudal que tratan Ilós
los reactores-
reactores'
anaerobios instalados
anaerotlios instaladds en Colombia (Duque;
(Duque, 1996).
1996).

los 1M
Para las aguas residuales domésticas, de Ilos 154 municipios Gdlombianos
Cdlombianos
reporta tratamiento de aguas servidas, Ilas
donde se reporta- las Ilagunas
lagunas de establlízaclún
estabilización
constituyen 'el mayor número,
,elmayor número, seguidas
seguidas por sistemas de aireación extendida
extendida y reac-
tores anaerobios
anaerobios tipo UASB (Tabla 1.2).

1.2.
Tabla 1.2.· Sistemas de tratamiento
Sistemas. tratamiento,r. de'
de aguas residuales.
residuales en Ilos
los municipios'
municipios
colombianos, en 1996
'colombianos'

Tipo .de
Tipa J:1B,gJ,a"Wa, .da tratamiepto
,gJ,a"Wa, .da tratamiento Municipios
No. de Municipios

Plantas compactas aerobias 6

Lodos activados
todos 17

Filtros lpercoladores
Filtros percolacores 6

Lagunas de estabilización 96

Filtros biológicos
IFiltros 18

Aireación extendida 26

Reaelores anaerobios UAS8

Reactores 17

Otros
'Otros 16

Municipios que tratan sus aguas servidas: 1541 TDtal

Número de Municipios TOtal de Municipies:
Municipios: 1068

Fuente: Ministerio de Desarrollo. 1998.

Fuenle:
[20]
[20] o
10 G E
I 'G E S
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T IÓNI
IÓN I A N A
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A

PROBLEMAS ~ ASOCI~DOS
IPROBLEMAS ASOCI~DOS CON
CON LA.
LA
DI~GESTjd>NI ANAERO_BIA_
DIGESTiÓN ANAERO_BIA ~

Puesta en
Puesta enl marcha de los reacteres
réélctares

Una característica particular de los microorganismos

Unaoaracterfsñea microorganismos anaerobios es su baja tasa
de crecimiento;
crecimiento; por
por lo tanto, al míclar
iniciar el proceso
proceso se requiere
requiere un
un período,
período de
tiempo que puede oscilar entre 30 y 180 días
tíempo días dependiendo
dependiendo de la calidad y
cantidad del inóculo utilizadb
cantidad! utilizado (Weiland y Rozzi,
Rozzi, 19911),
1991). Sin embargo, en los ca·
ca-
adecuados esta
sos en los que no se cuenta con inóculos adecuados esta etepa
etapa se puede pro-
pro-
longar, mduso
lonqar, incluso Ihasta
hasta condícones.
condicii:mes críticas en las que nunca se alcanza la
estabilidad. Por 'ello la optimzacíón
estabilidad. optimización de la puesta
puesta ,en marcha requiere
,enmarcha requiere contar con
herramientas apropiadas.
las herrarnentas apropiadas para Ila
la evaluación de los inóculos; además, en
muchos casos 'es
muchos es neoesario
necesario desarrollar costosos procesos
procesos para la obtención I de
semillas o inóculos más eficientes.

Postratamiento
Postratamlento

lo general, con la digestión

Por 110 digestión anaerobia no se Ilogra
logra Ila
la misma remoción
remoción de
procesos aerobios. La presencia de concentrado-
materia orgánica que con los procesos concentracio-
importantes de sólidos suspendidos,
nes írrportantes suspendidos, nutrientes
nutrientes y organismos
organismos patógenos en
sistemas, hace necesario ccmplementan
el efluente de los sistemas, complementan el proceso con
postratamiento. 1L0srecursos
postratarnlento. Los recursos tecnológicos
tecnológicos más utilizados
utilizados incluyen procesos blo-
bio-
Ilógicos como los filtros percoladores,
lógicos oomo percoladores, las lagunas de oxidación, los humedales y
químicos o
estanques con plantas acuáticas; también se usan procesos físicos, quimicos
fisicoquímicos corno
fisicoquímicos como la
lafiltración desinfección con cloro o la
filtracióru en arena, la desinfección lafloculación
floculación
y coagulación
coagulación (Van Haandel y ILettinga, 1994).
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Producción de olores,

Uno
Uno de los mayores
mayores problérnas
problemas asoGiaddls
aso~ados con la tecn(illogía
tecnología anaerobia es la libera-
anaerol:lia es,
atribuida a la produeciérn
ción de' malos olores atribuida produccWn I de compuestos
compuestos .azuírados
azufrados- corno
como el
ácido sulfhídrico
ácidb sulfhídrico (H22S
S)) en el bioqás,
biogás. IEstos
Estos compuestos
compuestos tienen I un olor muy ofensivo
ofensivo
convertido en la principal
que se ha convertidd principal causa
causa de conñíctos
conflictos con las comuníaades
comunidades
aledañas alias
aledañas a las plantas
plantas de tratamiento
tratamiento de aquas resídualés; Un
agl!Jasresiduales. Un caso muy conocídé
conocido
el de la planta
es él planta El Vivero Municipalllde
Municipal de (ali,
{ali, [la
Ilacual cerrarse entre'
cuall tuvo que 'cerrarse entre 1991
yY 1994 por este problema
problema (Mora,
(Mora, 1996;, Sterling y Mora,
1996; Sterlim!!ll Mora, 1998). lEn este campe;
campo,
existen múltiples
'existen múltiples necesidades
necesidades de'
de investigación¡
investigación, por
por [o
lo que dife~entes-
diferentes grupos están I
desarrolldndo ,varios
desarrollando, varios proyectos
proyectos oríentadds
orientados a [la
la remecíén
remoción de estos gases (Gómez
(Gómez y
Figueroa, 1998; Martínez-
I"igu'eroa, Martínez et al., 1998; Sterlin!!l
Sterling y IMora, ellpaís.
Mora, 1998) en el país.I
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Producclén de olores
¡Producción

con IlatecoGllogia
Uno de los mayores problemas asociados 'con Ilatecnologia anaerobia es la libera-
ción de malos 'Olores atribuida a la producción de compuestos
compwestos azufrados como el
ol'or muy ofensivo
áddo sulfhídrico- (HzS) en el biogás. Estos compuestos tienen un orar ofensiyo
que se ¡ha
ha convertido en la principal causa de conflictos con las comunidades
aledañas a las plantas de tratamiento' de aguas residuales. U,ncaso
Un caso muy CQnoc<i~o
CQnoGi~o
,'
es el 'de la planta IEIVivero
El Vivero Municipal
Munic;:jpalde
de Cali, la cual tuvo que cerrarse entre 199~
1991
y 1994
1994 por este problema (Mora, 1996;, Sterlimg y Mora, 1998).
1996;, Sterlililg 1998). lEn este campo;
campo,
múltipl~s necesidades de investigación,II por lo ,que
existen múltiples que diferentes grupos están
desarrollandol varios proyectos orientados a la remoción
desarrollando remoción de estos gases (Gómez y
lFigueroa,
lFiglieroa, 1998;
1998; Martínez et al., 1998;
1998; Sterling y Mora, 1998)
1998) en el país.
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Producción I de clorss
Producción olor~s I

Uno
Uno de los mayores
mayores problsmas•
problemas asociados
asociados con la tecnol6gía
con tecnología anaerobia
anaerobia es la libera-
ción de' rrralos
malos olores atribuida
atribuida a Ila
la ¡producción
producoién I de compuestos.
compuestos azufrados
azufrados como el
sulfhídtico' (HzS) én
ácido sulfhídrico' en el bioqás.
biogás. Estos compuestos
'compuestos tienen un olor ¡muyofensivo,
muy ofensivo, 1

que se ha convenido
'que convertido en la principal
principal 'causa de corñíctos.
conflictos con las comunidades
comunidades
aledañas a las plantas-
aledañas plantas de tratamiento
tratamiento de aguas residuales,
residuales. Un 'caso
caso muy conocido,
conocido
el de la planta 81Vivero
es él 61Vivero lMunicipaUde
Municipall de Cali, la cual
cualltuvo que cerrarse,
tuwo' que: cerrarse, entre_
entre 19911
1991
por esté
y 1994 por este problema
promlema (Mora,
{Mora, Hl96; Sterling y Mora, 1998).1 En este campo"
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existen mútiplas
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necesidades de investigación,
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diferentes grlilpos , estén
están
desarrollandol varios proyectos
désarrollandol_varios proyectos oríentadds
orientados a la rernocíén
remoción de estos gases (Gómez
(Gómez y
Figueroa, 1998; fMartínez
FiglJeroa, Martínez el al.,
aI., 1998; Sterlin!il
Sterling y Mora, 1998) en el;
el país.
[22]
[22] o " G lE S T
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Seienee Teeho/lgy, 24 (8): 257-277.
257-277. .,
 capítulo
capítulo

d o s

HlrSTORIA lOE

ILA DI,S-ESTiÓN
ILA. DIG~ESTiÓNI

ANAEROBIA.
ANAEROBIA
COMO
COMO SE MENCIONA
MENCIONA lEN
EN DIFERENTES
DIFERENTES IREVISIONES
IREVISIONES (BARKER,
(BARKER, 1956; IEI:INDER,-'
IEI:lNDER, 1978) LA PRIMERA
PRIMERA

DESCRIPCiÓN
DESCRIPCiÓN SOBRE
SOBRE LA PRODUCCiÓN
PRODUCCiÓN DE METANO
METANO EN
EN ILA
LA NATURALEZA,
NATURALEZA. IFUE
FUE IHECHA
HECHA POR VOliJA
VOliTA EN

1776, quien 110

1(16, lo ddefinió pantanos'. IUnsiglo
efinió como el 'gas de los partanos'. demostró la
Un siglo después, se demostró
producción de este gas en el intestino grueso de Ilosreos
producción los reos recién ejeoutados,
ejecutados, asi
asícomo
como en
el estómago de Ilos
e'l rumiantes. En 1868, Bécharnp
los rumiantes. Béchamp realiza experimentos
experimentos en íos
los que
producción de metano a'linocular
observa la producción al inocular un medio de etanol con heces de conejo;
este resultado permite
perm~e confirmar lasobservacones
las observaciones realizadas por Retseten
Reíseten 1858 en Ilas
las
pilas de estiércol almacenadas
almacenadas (McCarty, 1982).

MltROBTOLQGíA
MICROBIOLOGíA II ~ "

Omelianski ¡realizan
A finales del siglo XIX, Popoff, Van Senus y Omelianski detallados
realizam estudios detallados
Ila producción
sobre la producción microbiológica
microbiológica de metano,
metano (McCarty, 1982).,
1982). IEstos
Estos investiga-
establecen que la metanogénesis - es un proceso, derivada,
dores establecen derivado· del rompimiemto
rompimiento
materiales polméríeos
de materiales poliméricos como Ila
la celulosa, dependiente lla temperatara.
dependiente de Ila temperatura. Sin
embargo, hasta
'embargo, hasta ese momento no era claro si Ilas
las bacterias productoras
productoras de metano
eran capaces de utilizar los polímeros:
eram polímeros directamente,
directamente, o si la generaciól7I
generacióR de este
utilizacióm de moléculas más simples
gas era el producto de la utilizacióm simples producidas
produGidas por ,el
el
rompimiento de los pollmacs
rompimIento.' polímeros por otros microorganismos}
microorganismos, En sus estudios;.
6n estudios,.
Omelianski demostró que durante
Ornellanskl durante la fermentaeíén
fermentacié>n metánica de
de la celulosa.
celulosa se pro-
hidrógeno, ácido acético, y ácido butírico, para
duce Ihidrógeno, [para finalmente
finalmente forman
formar metano
metano de
acuerdo· con la siguiente reacción¡
acuerdo, reacción:

observaciones de IBéchamp,
Las observacíones IBéchamp" y los Iresultados
resultados. obtenidos por Ornelianskí
OmeJianski,
Sohngen IlIeva~
permiten a Sohngen llevar a cabo una
una serie de experimentos
experimentos _ en los cuales'
cuales
[28]
[28] o '1I GG EE SS T
,o ION I
ION A N A
N A E
E R O B
IR O B I A
A

metano a parta
estudió la producción de metano partin de sustratcs
sustratos puros como el formato, ,el
el
butirato, el etanol y una mezcla de IH/COzl
acetato, el butirato,. H/COzl similar a la obtenida durante
descomposición anaerobia de la celulosa (McCarty, 1982). Los resultados
la descomposición resultados per-
per-
mitieron concluir que estos sustratos
mltlerorn sustratos son compuestos
compuestos intermediarios
intermediarios generados
durante la fermentación
fermentación metánica de la celulosa. Aunque se hicieron ,observacio-
observado-
nes mcroscoplcas
Ines microscópicas de algunas
algunas especies de microorganismos_
microorganismos que actualmente
actualmente se
Ireconocen metanogénicas, los investigadbnes
reconocen como metanogénicas, investigadores nunca
nunca lograren
lograron aislarlas y
oultivarlas 'en
cultivarlas ,enforma elllaboratorio.
forma pura en el laboretono.,
lEn 1936, Barker anuncia
16n 1936,. anuncia el primer aislamiento
aislamiento en cultivo puro de un
metanógeno al que denomina Melhanobac1llus
metanóqeno Melhanobac1llus omelianskil, resulta-
omelianskll" y muestra los resulta-
primeros estudios bioquímicos
dos de los primeros bioquímicos con este rnlcroorqanlsmo.
microorganismo. Señala Ila
capacidad de esta bacteria para
oapacldad para oxidar el ,etanol aoetato, y Ibasado
etanol a acetato, basado en Ilateoría
la teoría
de Ilareducción dióxido de carbono
la reducción del dióxido carbono desarrollada
desarrollada por Van Niel en 1934 (Bar~er,
(Barker,
1956), plantea que los electrones generados durante la oxidaclón
1956). oxidación son utili~ados
utililados
para reducir los iones
iones Ibicarbonato
bicarbonato los cuales actúan como aceptores finales de
electrones de la siguiente forma:

Oxidación:
Oxidación: ClfjCOOH + 2Hp
C1ljCQOIf =>-
=>- 2COz
2COz + 8H+
Reducción:
Reducción: 8H+ + COz - CH~
CH4 + 2Hp

Reacaión neta:
Reacoion neta:

Posteriormente en 1948, Buswell y Sollo, utilizando C14como

Posteriormente C14como trazador,
demosnarom
demostraron que la formación
formacióll de metano a partir de acetato,
acetato no ocurre por reduc-
reduc-
dón
Ción del dióxido de carbono, sino por la descarboxJlación
descarboxilación de este compuesto,
compuesto: Este
hecho posteriormente
posteriormente es veriñcado
verificado, por Stadman y Barker (1949},
(1949), Y
YPiney
Pine y Barker
(1956), conñrmando
(1956)" confirmandb la 'hipótesis
hipótesis formulada por Sohngen.
el desarrollo de nuevos
Con 'el nuevos procedimlentos
procedimientos para el cultivo de microorga-
nismos anaerobios
nismos anaerobios estrictos (Hungate,
(Hungate, 1969) se iniDialuna
iniDiauna nueva
nueva era en las investi-
gaciones sobre metanogénesis.
gadiones metanogénesis. La introducdión
introducción de Ila
la técnica del tubo rodado (roll
(roll
uso de las nuevas
lube), así como el lUSO
lube),. nuevas'cámarasde anaerobiosis, permite el aislamiento
cámaras de anaerobiosis, aislamiento
metanogénicas en cultivo puro,
de numerosas especies metanogénicas puro. Mediante el uso de estos
Iprocedimientos,Bryant
nuevos procedmíentos, iniOianel estudio sobre Ilametaboüzacíón
Bryant el al. (1967) iniDianel la metabolizaclión
 H 1ST O R I A O E L A oO I G
G E ST
E S T ION
ION A
A N
N A
A 'E
E R
R Ó
O B
B I A
A [29]

etanol por un cultivo de M. omeftanskJl,

del etanol omelianskll. los ¡investigadores
linvestigadores ,encontraron
encontrarort que para
fermentaciónl metánica,
poder llevar a cabo la fermentaeíóm metánica, ,este microorganismo (denominado
este microorganismo (denominado
posteriormente como
posteríormente oomo Methanobaden:t.im
Methanobaden:um bryantli), requería
requería de la asocíadon
asociación con otro
microorganismo que los autores
microorganismo autores denominaron
denominaron "Organismo
"Organismo No Metanogénico
Metanogénico Sil.
'Sil. De
proceso metanogénico
esta forma, para lograr el proceso metanogénico completo,
completo, era necesario
necesario contar con
un Organismo Metanogénico S
Organismo No Metanogénico el cual oxida el etanol a acetato
S ,el acetato e hidrógeno,
hidrógeno,
mientras que el M. bryantii cepa MoH reduce
mientras reduce e'l
el bicarbonato
bicarbonato presente
presente en e'l
el medio oon
hidrógeno ,generado
el hidrógeno organismo S. Tennoonamlcameote,
,generado por el organismo Termodinámicamente, las reacciones
reacciones
descritas de Ila
fueron descritas la siguiente
siguiente forma:

Microorganismos uc« (kJ)

L1Ca'

Microorganismo S:
Microorganismo
HpH _ + 2Hp
2C22HpH 2Hp -+ 2CHPOO-
2CHPOO- + 4H22
4H + H+
H+ + 19.2

bryantii:
M. bryantii:
4H22
4H + HC033_• +
+ H+
H+ -+ CH44 + 3Hp
3Hp -135.6

Reacción neta:
Reacción
2C2H 5OH + HCO3-_ 2CH 3COO- + H+ + CH4 + H20 -116.4

remooión del
La remoción de'l hidrógeno
hidrógeno por
por el M. bryantli' permitía
permitía mantener
mantener la
la presión
presión
parcial de este gas por debajo
parcial debajo de 10.
10 33 atmósferas,
atmósferas, lo cual
cual favorecía
favorecía termodinámica-
termodinámica-
primera reacción
mente la primera reacción y permitía
perm~íael,el crecimiento
crecimiento del Organismo
Organismo INolMetanogénico
INo rMetanogénico
descubrimiento mostró
S. Este descubrimiento mostró la importancia
importancia del
del hidrógeno
hidrógeno como intermediario
intermediarío 'en
en
habitats anaerobios
los habitats anaerobios (Hungate,
(Hungate, 1967) y permitió
permitió la formulación
formulación de una nueva
relación Ibiológica
relación biológica interespecífica
interespecíficaconocida 'asociación slntróñcs'
conooida como 'asociación sintrófica' 'o
o "transferencia
"transferencia
interespecíficade hidrógeno',
interespecíficade hidrógeno', que aclara una de las relaciones
relaciones más ¡imPortantes
importantes en la
ecología microbiana
ecología ambientes metanoqénlcos,
microbiana de los ambientes metanogénicos.
La subsecuente
subsecuente caracterízacón
caracterización de tas
las vías metabólicas
metabólícas típicas
típicas de las
bacterias metanogénicas,
bacterias_ metanogénicas, así como la de los cotacteres
cofactores lnvolucrados
involucrados _ en el
[30]
[3'0] o G lE
I G s
lE S T
T ION'
IÓN A
A. N A
N A E
E H
R O
O 8
8 I A
A

proceso generación dé
proceso de generación de metano,
metano, llevó
llevó al cuestionamiento
cuestionamiento ' de las rel!aciones
relaciones
filógenéticas con otras
filógenéticas otras bacterias;
bacterias¡ al ligual que su papel
ligual que papel en la evolución
evolución de la
Vida sobre 'el planeta.
Vida sobre' planeta. Mediante
Mediante el examen
examen de los patrones
patrones de secuencia
secuencia de
los olíg'onuéleóti~os'
Ilos oligonucleótidos ' de la fracción
fracción ribosomal
ribosomal 165"
165, fue poslbls
posibl'e dernosnar
demostrar que
este grupo'
esté grupo es filógenéticamehte
filogenéticamente diferente'
diferente de otros
otros procarióñdos
procariótidos y de tas
las cé-
luías eucariótidas
lulas eucariótidas (Figura
(Figura 2.1)!.
2.1). Como
Como también observó, una
también se observó, una alta
alta dlversl-
diversi,-
dentro del grupo
dad dentro grupo sugirió
sugirió la existencia
existencia de luna
una divergemcia
divergencia evolutiva
evolutiva que
que
IpUdo haber
pudo haber dado
dado lugar
lugar a la aparición,
aparicióm de las tres
tres lineas
l.íneas ancestrales
ancestrales que
que origi-~
origi--
naron los Ireinos,
naron reinos actualmente
actualmente conocidos_ como Eucariota.:
conocidos_ como, Eucariota, Eubacteria y
Eubacteria_
Archaebacteria (Balch
Archaebaeterta (Balch el al."
al.., 1977).
1977).

ARQUEOBACTERIAS
ARQUE0BACJERIAS :

METÁGENOS
METAGENOS
\
\. H~S
H~S 1ERMÓFILOS EXTREMOS
1ERM0FIWS EXTREMOS

""~
,l' M""~.JIr-EU_C_A_RI_0_TE_S
EUCARI0TES
__ ---,
= " ,,_:c:: '
1I I

,~ .__ ----.J
r_-;:.:EU~§"~~E_i&~~~d~
púrpura
Cloroplaslos
Bacteria
Cianobaclerias verdes no
Flavobaclecias azufradas
Thermologa

Figura 2.1'..
Figura 2.1. ÁrbOl
Árbol filoge:netico
filoge:nético ,ynj"ersaL,
universal."

DESA~ROt!.LO
IDESA~ROlILO- y AP'LILCACiON
APUCACiÓN PE
D~
LA ,oI'GESTimNI
LA DIGESTiÓNI AN~EROB1A
AN~EROBIA AL
AL
TRAIAMU3N,TO
TRATAMIENTO _ IDElOE IRESIDUO_S
IRESIDlJO_S-,

La
!La ,primera
primera aplicación,
aplicación documentada
documentada del' tratamiento anaerobio
del tratamiento anaerolilio de aguas
aguas
residuales domésticas
resíduaes domésticas fue descrita
descrita por
¡por Mouras
Mouras al final
final del siglb,
siglb, XIX
XIXen Fran __
en Fran,
cia. El tratamiento
cia. tratamiento ' se IlIeÍ/aba
llevaba a cabo
cabo en una
una cámara cerrada herrnétca-
cámara cerrada hermética-
mente,
mente, en la
¡la cuall
cual los sólidos
sólidos sedimentados· -
sedimentados se degr,adaban
se' degradaban
anaéróbicamente, - (McCarty"
anaeróblcemente (McCarty, 1982).,
1982).
 HISTORIA
HISTORIA I DE LA
ILA DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ,1' I ANAEROBIA
ANAEROBIA [3

última década
En la última década dél
del siglo
siglo XIX
XIX y oomienzos
comienzos del siglo
siglo XX,
XX, en Inglate-
Inglate-
rra, Pllemania,
rra, Alemania, Ilndia
India y IEstados
Estados Unidos
Unidos se desamilllaron
desarr011aron I varios
varios sistemas
sistemas muy
muy
conocidos: el tanque
conocidos: tanque séptico
séptico inventada'
inventado en Inglaterra,
Inglaterra ¡por (ameran y el tanque,
por (ameran tanque
Imhoff 'en
Ilmhoff en Alemania.
Alemania. 16nambos
En ambos casos
casos los sólidos
sólidos presentes
presentes decantam
decantan para
para ser
degradados aneróblcamente
dégradados aneróbicamente en el fondo,
fondo del
del reactor.
reactor. lEste
Este tratamiento.
tratamiento prima-
¡prima-
río
rio dé
de los sólidos
sólidos fue
fue ampliamente
ampliamente aplicado
aplicado entre
entre las dos
dos guerras,
guerras mundiales;
mundiales;
Alemania se utillzó
en Alemania utilizó el tanque
tanq~e Ilmhoff
Imhoff para
para una pobaclón
población de doce
doce miHones
millones
habitantes (Van Haandel
de habitantes Haandel y Lettinga,
Lettinga, 1994).
1994).
Debido a la baja
Debido baja remoción;
remoción de materia
materia orgánica,
orgánica, así ,como
como a los Ilargos
largos
períodos de ti'empo
penodos tiempo que requieren
requieren I íos
los sistemas
sistemas anaerobios,
anaerobios, a partir
partir de 1945
1945,
empieza la utilización
'empieza utilización masiva
masiva de sistemas
sistemas aerobios
aerobios especialmente,
especialmente, Ilodos activa-
Ilodos activa-
dos y filtros
dos filtros percaladores,
percalladores. La alta
alta 'eficiencia
,eficiencia de estos
estos sistemas
sistemas ,en cuanto la
en cuanto
remoción de la materia
remoción materia orgánica
orgánica expresada.
expresada en términos
términos de lOBO
OSO (90-95%),
(90-95%),
comparada con
comparada con la obtenida
obtenida con
con los procesos
procesos anaerobios,
anaerobios (30-5@%),
(30-50%) hacíana
hacían a
'estos
'estos !Últimos poco oompetitivos.
últimos IPOCO competitivos. En Ila
la actualidad,
actualidad, se reconoce
reconoce que
que la baja
baja eñ-
efi-
Ciencia de estos
denoia estos sistemas
sistemas se relaciona
relaciona con
con un pobre
pobre contacto
contacto entre'
entre la masa
masa
bacteriana presente
bacteriana presente y el material
material suspencído
suspendidb y disuelto
disuelto del .agua
agua residual
residual (Van
(Van
Haandel y Lettinga,.
Haandel Lettinga, 1994).
1994). Por ,esa
'esa razón,
razón, gran
gran parte
parte del material
material disuelto
disuelto o
hidrolizado no IPodía
hidrolitadb utilizado y era
podla ser utilizado era descarqacb
descargadb en e:1efluente
el efluente del sistema.
sistema.
A Ipartir década de los años
partir de la década años 70 fue plenamente
plenamente reconocida
reconocida Ila
la impor-
impor-
tancia dell
tancia del contacto
contacto 'entre
entre el lodo
lodo y el sustrato,
sustrato, lo oual
cual permító
permitió el desarrollo
desarrollo de
nuevas configuraciones
nuevas configuraciones de reactores
reactores y demostró
demostró que
que estos
estos procesos
procesos pueden
pueden al-
canzar eficiencias
canzar eficiencias de remoción
remoción de materia
materia orgánica
orgánica comparables
comparables con
con las de los
procesos de depuración
procesos depuración aerobios.
aerobios.
En términos
términos generalesl.
generales, se Iregistran tres generaciones
registran tres generaciones de reactores
reactores
anaerobios, las cuales
anaerobios, cuales se caracterizan
caracterizan IPorque cada generación
porque en cada reduce el
generación se reduce
tiempo de retención
tiempo retención hidráulico
hidráulico y mejora
mejora el oontacto
contacto entre
entre el lodo
lodo y el sustrato,
sustrato, lo
cual significa
cual significa menores
menores volúmenes
volúmenes de reactor,
reactor, oostos
costos más Ibajos,
bajos, sistemas
sistemas más
más
estab'les y de más
estables más fácil
fádil operación.
operación.
Aunque podría
Aunque podría pensarse
pensarse que
que en Ilaactualidad
la actualidad los reactores
reactores de Ila
la primera
primera
generación han
generación han dejado
dejado de utilizarse, muchos países
utilizarse, en muchos países se continúan
continúan usando,
usando,
'especiialmente en dos campos:
'espooialrnernteen campos:
 HISTORIA
HISTORIA DE LA DIGESTiÓN
DIGESTiÓN- , ANAEROBIA _ [31]

En la última década del siglo XIX y comlenzos

comienzos del siglo XX, en Inglate-
Inglate-
rra, Alemania,
Alemania, India y Estados
Estados Unidos se desarrollaron
desarrollaron varios sistemas
sistemas mlJy
muy
conocidos:
conocidos: el tanque séptico inventado
inventado en Inglaterra- (am~ran yY el tanque
Inglaterra- por (ameran tanque
Imhoff en Alemania.
lmhoff Alemania. En ambos casos los sólidos
sólidos presentes
presentes decantan
decantan para ser
degradados
degradados aneróbicamente
aneróbicamente en el fondb
fondo del ¡reactor. Este tratamiento
reactor, !;ste prima-
tratamiento prima-
rio de los sólid'os
sólidos fue ampliamente~aplicado guerras mundiales;
arnpllarrente'apllcado entre las dos guerras mundiales;
en Alemania
Alemania se utilizó el tanque Imhoff
Imhoff para una poblaci6nl
población de doce ¡mi,Uones
millones
de habitantes
habitantes (Van Haandel
Haandel y Lettinga, 1994).
Lettinga, 1994),
Debido a Ila baja
Debido Ibaja remoción
remoción de materia
materia orgánica,
orgánica, así como a los largos
períodos
períodos de tiempo
tiémpO' que requieren
requieren los sistemas
sistemas anaerobios,
anaerobios" a partir de 1945
empieza Ilautilización
srnpíeza Ila utilización masiva de sistemas aerobios especialmente,
sistemas aerobios especialmente, lodos activa-
activa-
dos y filtros Ipercoladores.
percoladores, La alta eficiencia sistemas en cuanto
eficiencia de estos sistemas cua,nto la
remoción
remoción de la materia orgánica
orgánica expresada términos de DI30
expresada en términos OSO (90-95%),
(90~95%),
comparada
comparada con la obtenida
'Obtenida con los procesos
procesos anaerobios (30~50%) hacían
anaerobios (30.50%) hacían a
estos últimos poco 'competitivos.
'Competitivos, En la actualidad, se reconoce
actualida_d,se reconoce que Ila efi-
la baja efi.
cienGia
ciencia de estos sistemas
sistemas se relaciona
relaciona con un pobre,
pobre contacto
contacto entre Iª
la masa
bacteriana
bacteriana ¡presente
presente y el material suspendido y disuelto
material suspendido disuelto del agua residual
residual (Vªn
(Van
Haandel
Haandel y Lettinga,
Lettlnga¡ 1994).
1994), Por esa ¡razón, material disuelto
razón, gran parte del material disuelto o
hidroliZado
hldrollzado no ¡podíaser
podía ser utilizado
utilizado y era descargado
descargado en el eflLJentedel
efluente del sistema,
sistema.
A partir de Iladécada
la década de los años 70 fue plenamente reconocida la impor-
plenamente reconocida impor-
tancia del contacto entre el lodo y el sustrato"
contacto 'entre permitió el desarrollo
sustrato, lo cual permitió desarrollo de
nuevas configuraciones
configuraciones de reactores
reactores y demostró
demostró que estos procesos
procesos pueden
pueden al-
canzar eficiencias
eñclendas de remoción
remoción de materia orgánica
orgánica comparables
comparables con las de tos
Ilos
procesos
procesos de depuración
depuración aerobios.
aerobios,
En términos generales, se registran
térrnlnos generales, registran tres generaciones reactores
generacione.s de reactores
anaerobios,
anaerobíos, las ouales
cuales se caracterizan porque en cada generación
caracterizan porque generación se reduce
reduce ,el
el
tiempo de retención
retención hidráulico
hidráulico y mejora el contacto
contacto entre el lodo y e,lsustrato,
el sustrato, lo
cual significa
sig'nifica menores
menores volúmenes
volúmenes de ¡reactor, costos más bajos, sistemas
reactor, costos sistemas más
estables
estables y de más fácil operación.
operación.
Aunque podría
pOdría pensarse
pensarse que en la actualidad reactores de ilª
actualidad los reactores primera
la primera
generación
generación han (lejMo
dejado de
dé utilizarse,
utilizarse, 'en muchos países
en muchos países se continúan,
continúan usando,
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especialmente en dos campos:
campos:
[32]
[32] o I GEST I6
I G E S T IÓN N A N A
N A E
E R
R O
O B
B II A
A

En la digestión de los sólidos sedimentados en reactores tipos tanque séptico

• En
o tanque Imhoff yen lagunas anaerobias. En
En estos casos, los lodos sedimenta-
dos en el fondo del reactor son degradados por procesos anaerobios.
• En
En la digestión anaerobia de los lodos resultantes del tratamiento aerobio (Iodos
activados, filtros percoladores), para lo cual se utilizan reactores donde el tiem-
po de retención celular es igual al tiempo de retención hidráulico, por lo que se
trabaja con tiempos de retención hidráulicos muy altos (mayores de 30 días).
Como se mencionó anteriormente, los largos tiempos de retención requeri-
dos, así como un contacto inadecuado entre la biomasa y el material orgánico, ha-
cían que estos reactores fueran poco competitivos, en especial para el tratamiento
de grandes volúmenes de aguas residuales. Con el fin de resolver estos problemas,
algunos grupos de investigadores de diferentes países abordaron el diseño de una
nueva generación de reactores (segunda generación), en los cuales se independiza
el tiempo de retención celular del tiempo de retención hidráulico y se incorporan
elementos para mejorar el contacto entre la materia orgánica y la biomasa anaerobia
presente en el reactor. A fin de evitar la pérdida de biomasa en los reactores se han
et al.
probado varias estrategias (Lettinga el a/. 1999; Van Den Berg, L., 1984):
• Aumentar la concentración de biomasa en el reactor mediante la recirculación
de los lodos separados en el sedimentador secundario. Este proceso que dio
origen a un sistema denominado 'reactor de contacto anaerobio' que es similar
a los lodos activados (Figura 2.2A) pero bajo condiciones anaerobias. Ha sido
utilizado en Suiza, Francia, Canadá y Estados Unidos principalmente para tra-
tar aguas residuales con materia orgánica fácilmente degradable, como el al-
midón. Sin embargo, la adherencia de las burbujas de gas a los lodos genera
problemas en la sedimentación del lodo y la clarificación del agua residual
tratada. Para mejorar la separación del lodo se han utilizado diversos métodos
como la adición de polímeros orgánicos y floculantes inorgánicos, la gasificación
y la centrifugación, pero sus resultados no han sido satisfactorios.
• Con base en la estrategia de fijar la biomasa a un soporte de material inerte, se
desarrollaron los filtros anaerobios de flujo ascendente, similares
conceptualmente a los filtros percoladores (Figura 2.2B) Estos reactores
fueron propuestos por Young y McCarthy (1969), Y en ellos se utiliza un
 HISTORIA DE LA DIGESTiÓN ANAEROBIA [33]
[33]

medio de soporte (carbón, grava, plástico, etc.) con una gran área superficial
para el desarrollo de una biopelícula anaerobia. Se han utilizado en el trata-
miento de aguas residuales con bajas cargas orgánicas y material suspendido
fácilmente biodegradable. Sin embargo, el principal inconveniente de este siste-
ma ha sido el frecuente taponamiento de los reactores, ya sea por los sólidos
presentes en el agua residual o por materiales como el carbonato de calcio o la
biomasa no adherida al soporte.
• Desarrollar un gránulo cuyas características de sedimentación y actividad
metanogénica, permitieran el desarrollo de todos los grupos bacterianos
involucrados en el proceso de degradación anaerobia de la materia orgánica.
Lodos con estas características facilitarían la segregación de las fases gaseosa,
sólida y líquida, y evitarían la pérdida de la biomasa del reactor. Como producto
de esta estrategia se presentó el reactor anaerobio de manto de lodos de flujo
Up Row Anaerobic
ascendente,comúnmente conocido como reactor UpRow Anaerobic Sludge
Sludge Blanket
Blanket
(UASB) (Figura 2.2C), sistema desarrollado en Holanda por el grupo de Lettinga
et al. (1980). En la actualidad, existen más de 1.000 reactores que tratan
exitosamente diferentes tipos de aguas residuales agroindustriales, domésticas e
industriales en Holanda, Bélgica, Estados Unidos, Brasil y Cuba.

r; Mezclador
í, Mezclador Gas
Gas Gas
Gas

- --J r1
Alimentación
~.\---+ e,","
Liquido
digerido digerido Área de
-»..
",."{
:'.)1; .:
\ Colector sedimentación

'»j> 'lo;. <.

de gas

Tanque de »\< Medio de

sedimentación ,>; ';.x:' soporte
Digestor
Digestor
Retorno I
;etorno
de lodo
de lodo
:~~:;~i
: :::::
:_:
Manto
Manto
de lodo

--.
-+ Liquido
J
-.J

LIquido digerido
digerido
•• )t', (

+t
Alimentación
Alimentación Alimentación
Alimentación
(A)
(A) (B)
(B) (e)
(e)

Figura 2.2
Figura 2.2 Diversos esquemas de reactores
Diversosesquemasde reactores anaerobios:
anaerobios:
(A) Contacto
(A) Contacto anaerobio,
anaerobio, (B)
(B) Filtro
Filtro anaerobio
anaerobio y (C)
(C) Reactor
Reactor UASB.
UASB.
[34]
[34] oD lúE
I G E S T ION A N A E R O B I A

Con aparición de la tercera generación de reactores anaerobios, se

optimizaron algunas variables del proceso, las cuales que se citan a continuación:
• A fin de mejorar el contacto entre el sustrato y la biomasa, ésta se adherió con
partículas inertes de arena (diámetro: 0.1--0.
O.1-o.3mm),
3mm), alúmina o plástico, las
cuales se expanden ante el flujo rápido del agua residual. Estos reactores se
denominaron de 'lecho fluidizado' o 'expandido', y se han utilizado en el trata-
miento de aguas residuales con alta carga orgánica (Figura 2.3A).
• También, para mejorar el contacto entre la biomasa y el sustrato, y evitar los
problemas de taponamiento de los filtros anaerobios, se desarrollo el 'reactor.
de película fija y flujo descendente', en el cual la biomasa se adhiere a una
superficie tubular (Figura 2.3B).
2.36). La cantidad de biomasa dependerá del área
superficial del soporte, el grosor de la película será controlado por el flujo del
agua descendente y la mezcla del residuo se logra por el flujo de gas ascen-
dente. Los sólidos suspendidos son eliminados con el efluent~
efluente evitando así los
problemas de taponamiento. Este sistema ha sido utilizado en el tratamiento
de aguas residuales con baja y alta carga orgánica en países como Canadá y
Puerto Rico.

Gas
Gas Gas
t i

..•. Alimentación
Alimentación
Uquido
Liquido
digerido
digerido

Trampade
Trampa de
soporte
soporte Material de
Lecho soporte
fluid izado

Bomba de
recirculación

Alimentación
Alimentación
Líquido
•digerido
Liquido digerido

(A) (B)
(B)

Figura 2.3
Figura 2.3 Reactoresde
Reactores lecho fluidizado
de lecho fluidizado (A)
(A) y de
de lecho
lecho fijo con flujo
fijo con flujo descendente
descendente(B).
(B).
 HISTORIA DE LA DIGESTiÓN ANAEROBIA [35]

La separación de la fase metanogénica de las fases de hidrólisis y acidificación

permite un manejo por aparte de los principales grupos microbianos
involucrados. Este sistema se denomina 'reactor de fases separadas' y logra
involucrados,
disminuir el tiempo de retención hidráulico, lo cual facilita la operación del
2.4). La separa-
sistema y confiere una mayor estabilidad al proceso (Figura 2.4),
ción ha sido exitosa principalmente con aguas residuales parcialmente
temperaturas.
acidificadas que se operan a bajas temperaturas,

Mezclador
Mezclador Gas

11j -~
-GasGas
)\\ L_. Líquido
Líquido
( I
digerido
digerido
Alimentación _.
Alimentación
Separador
Separador
gas,
gas. liquido,
líquido. sólido
sólido

Manto
Manto
de
de
lodos
lodos

Acidificación
Acidificación Metanogenización
Metanogenización

Figura 2,4
Figura 2.4 Reactores de fases
Reactoresde fases separadas
separadas
[36]
[36] D I G E S T ION
DIGESTiÓN A N A ERO B I A
ANAEROBIA

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R- 160.
 capítulo

t r e s

MICROBIOLOGíA
MICROBIOLOGíA DE

DIGESTiÓN
LA DIGESTiÓN

ANAEROBIA
ANAEROBIA
SE DENOMINA DIGESTiÓN ANAEROBIA AL PROCESO EN VIRTUD DEL CUAL LA MATERIA ORGÁNICA

ES CONVERTIDA EN METANO, DIÓXIDO

DiÓXIDO DE CARBONO E HIDRÓGENO, EN AUSENCIA DE OXíGENO

Y a causa de la acción combinada de diferentes poblaciones bacterianas. La

formación de metano y dióxido de carbono corresponde a la última etapa de
una serie de reacciones en las cuales los compuestos orgánicos son
degradados completamente.
La digestión anaerobia es un proceso que se produce en ambientes natu-
rales como los pantanos, en zonas anegadas para el cultivo del arroz, en los
sedimentos de lagos y mares, en las zonas anóxicas del suelo, en fuentes de aguas
termales sulfurosas y en el tracto digestivo de los rumiantes. Bajo condiciones
anaerobias, los diferentes grupos bacterianos interactúan unos con otros y cons-
tituyen una comunidad microbiana, la cual tiene una estructura definida y a la que
contribuye cada población para su mantenimiento.

INTERACCIONES
INTERACCIONES MICROBIANAS
MICROBIANAS

En una comunidad, las diferentes poblaciones pueden desarrollar interacciones

positivas y negativas, las cuales surgen en una sola población o entre las diferen-
Estas interacciones
tes poblaciones que la conforman. Estas interacciones permiten
permiten que las poblacio-
poblacio-
nes alcancen un tamaño
nes alcancen óptimo con los recursos
tamaño óptimo recursos disponibles
disponibles del habitar,' en su
del hebüat;
conjunto, las interacciones
conjunto,las interacciones mantienen balance ecológico
mantienen el balance comunidad
ecológico de la comunidad
De acuerdo al principio de AIIee, las interacciones positivas y negativas
que ocurren en una población, dependen de la densidad. Cuando se presenta
una relación positiva, la tasa de crecimiento aumenta y cuando es negativa, se
presenta el efecto inverso. En general, las interacciones positivas (cooperación)
se presentan en poblaciones con baja densidad, mientras que las interacciones
negativas (competencia) se presentan cuando existe una alta densidad
[42] DIGESTiÓN ANAEROBIA

poblacional. Como resultado, el máximo crecimiento se logra cuando se alcanza

la densidad poblacional óptima.
Cuando dos poblaciones diferentes interactúan, una o ambas podrán be-
neficiarse o afectarse negativamente de esta relación. Para categorizar estas re-
laciones se utiliza un sistema de clasificación conceptual en el cual se describe
3.1 l. En general, en comunidades simples sólo se pre-
cada una de ellas (Tabla 3.1).
sentan una o más de estas interacciones; sin embargo, en comunidades comple-
jas probablemente se presentan todas las interacciones posibles.

Tabla 3.1.
Tabla 3.1. Tipos
Tipos de
de interacciones
interacciones entre
entre poblaciones
poblaciones microbianas
microbianas

Efecto de
Efecto de la
la interacción
interacci6n

Interacci6n
Interacción Poblaci6n A
Población A Poblaci6n B
Población B

Neutralismo oO oO
Comensalismo oO ++
Sinergismo +
+ +
+
Mutualismo ++ +
+
Competencia

Amensalismo O/ ++
O/
Predación ++
Parasitismo ++
O= = Sin
Sin efecto.
= Efecto positivo.
++ = posñívo.
-- =
= Efecto negativo.
negativo.
Fuente:
fuente: Atlas
Atlas yy Bartha,
Bartha. 1993.
1993.

Con el desarrollo de interacciones positivas en una comunidad, los

microorganismos utilizan los recursos disponibles en un determinado habitat de manera
eficiente,combinando sus capacidadesfísicasy metabólicas,lo cual permite que lastasas
de
de crecimientoy/o
crecimiento y/o supervivenciaaumenten.
supervivenciaaumenten. Las interacciones negativas
negativas actúan como un
mecanismode
mecanismode retro-alimentación que
que limita la
la densidad
densidad poblacional;no
poblacional; no obstante, aa largo
plazo
plazo son
son un
un mecanismo
mecanismode
de auto regulación que beneficia las
las especies
especies porque
porque evita la
sobrepoblación,
sobrepoblación, la destrucción del habitat yy la
la extinción.
 MICROBIOLOGIA DE LA DIGESTiÓN
DIGESTIÓN ANAEROBIA [43]

ANAEROBIA
DEGRADACiÓN ANAEROBIA DE LA
MATERIA ORGÁNICA

Enel
En el proceso de degradación anaerobia de la materia orgánica intervienen
t
diversos grupos de bacterias anaerobias facultativas y anaerobias estrictas las
cuales utilizan en forma secuencial los productos metabólicos generados por cada
3.1. El flujo de carbones y electrones
grupo, según se esquematiza en la Figura 3.1.
generado durante la degradación anaerobia de los compuestos orgánicos involucra
tres grandes grupos tróficos:
• Grupo 1:1: bacterias hidrolíticas y fermentativas.
• Grupo 11:
11: bacterias acetogénicas.
• Grupo 111:
111:bacterias
bacterias metanogénicas.
El proceso se inicia con la hidrólisis de polisácaridos, proteínas y lípidos
por la acción de enzimas extracelulares producidas por las bacterias del Grupo
1.1.Los
Los productos de esta reacción son moléculas de bajo peso molecular como
los azúcares, los aminoácidos, los ácidos grasos y los alcoholes, los cuales son
transportados a través de la membrana celular; posteriormente son fermenta-
dos a ácidos grasos con bajo número de carbonos como los ácidos acético,
fórmico, propiónico y butírico, así como compuestos reducidos como el etanol,
además de Hz y COz. Los productos de fermentación son convertidos a acetato,
hidrógeno y dióxido de carbono por la acción de las bacterias del Grupo 11,
11,las
las
cuales son conocidas como 'bacterias acetogénicas productoras de hidrógeno'
3.1).
(Figura 3.1).
Finalmente, las bacterias del Grupo III o metanogénicas convierten el
acetato a metano y dióxido carbono, o reducen el dióxido de carbono a metano.
Estas transformaciones involucran dos grupos metanogénicos que son los en-
cargados de llevar a cabo las transformaciones mencionadas anteriormente.
En menor proporción, compuestos como el metanol, las metilaminas y el ácido
fórmico pueden también ser usados como sustratos de el grupo metanogénico
(Figura 3.1).
(Figura3.1).
[44]
[44] DIGESTiÓN ANAEROBIA

pOLíMEROS
POLi MEROS COMPLEJOS
COMPLEJOS
B. celuloHticas
celuloliticas O
Polisacáridos (celulosa).
(celulosa),
hidroliticas
Lípidos, Proteínas
Lípidos,

HIDRÓLISIS
HIDRÓLISIS Grupo I

MONÓMEROS
MONÓMEROS
B. fermentativas Azúcares,
Azúcares. Aminoácidos,
Aminoácidos.
Ácidos grasos

[
FERMENTACiÓN
FERMENTACiÓN

L 1
PROPIONATO
PROPIONATO
H, + CO,
H, + ACETATO
ACETATO
BUTIRATO
BUTlRATO

Bacterias B. acetogénicas
homoacetogenicas
homoacetogénicas ACETOGENÉSIS
ACETOGENÉSIS productoras
de H
deH
HOMOACETOGÉNESIS
HOMOACETOGÉNESIS
• 1 Grupo 11II
ACETATO
ACETATO 1
H,
H, + CO, ACETATO
ACETATO

•
B.
B. metanogénicas B. metanogenicas
metanogenicas Grupo 111
111
acetoclasticas hidrogenofilicas
hidroqenotuicas

METANO
METANO

Fuente:
Fuente: Madigan.
Madigan. Martinko
Martinko yy Parker.
Parker. 1997.
t 997.

Figura
Figura 3.1.
3.1. Principales
Principalesetapas
etapas de
de la
la digestión
digestión anaerobia
anaerobia yy grupos
grupos
bacterianos
bacterianos involucrados.
involucrados.

En la Tabla 3.2
3,2 se
se consignan
consignan las
las principales reacciones bioquímicas que se
llevan
llevan aa cabo
cabo en el
el proceso
proceso de
de digestión
digestión anaerobia con los
los correspondientes
correspondientes
cambios
cambios de
de energía libre.
libre,
 MICROBIOLOGíA
MICROBIOLOGIA DE LA DIGESTiÓN ANAEROBIA [45]

Tabla 3.2.
Tabla 3.2. Principales reacciones
Principales reacciones químicas
quimicas que
que ocurren
ocurren en
en la
la digestión
digestión anaerobia
anaerobia
de la
de la materia
materia orgánica
orgánica

Tipo de
Tipo de Reacción
Reacción Ecuación
Ecuación ÓG'·'1
LlGO· LlGo.2
óG~2
(KJ/reacclón) (KJ/reacción)
(KJ/reacción) (KJ/reacción)

Fermentaciónde Glucosa +
+ 4H 20 -+
4H,O - COO-+ 4H+ +
CH33COO-+ + 4H
4H,2 - 207 - 319
-319
glucosa a acetato

Fermentaciónde la Glucosa +
Giucosa + 2H
2H,O _
20 -+ C,H10, +
C,H¡02 + 2HC033-- +
+ 3H+ +
+ 2H
2H,2 . -135 -284
glucosa a bulirato

Fermentación
Fermentacióndeldel Bulirato +
Butirato + 2H 20 -
2H,O 2CH3COO-+ H+ + H, +
+ 48.2 -17.6
bulirato a acetato e H
H,2

Fermentacióndel Propionato+3H, - CH3COO-+ HC03-+H+ +H, +

+ 76.2 - 5.5
propionato a acetato

Acetogénesis a 4H, + HC03- + H+ - CH3COO-+ 2H,O -105 --7.1

7.1
partir del H
H,2yy CO
CO,2

Metanogénesis
Metanogénesisa a partir 4 H, + HC03- + H+ - CH, + 3H,O -136 - 3.2
-3.2
del CO
CO,2yy HH,2

Metanogénesis
Metanogénesisaa Acetato + H,O - CH, + HC03- + H+ -31
- 31 --24.7
24.7
partir del acetato
acetato

1I Condiciones
Condiciones estándar:
estándar: solutos
so lutos 1 molar.
molar, gases
gases 1 atmósfera.
atmósfera.

2Condiciones
'Condiciones típicas
típicas enen un reactor
reactor anaerobio:
anaerobio: AGV = 1mM, HC033 = 20mM,
20mM, Glucosa=
Glucosa= 1OmM, CH,
=0.6mM,
=O.6mM, HH,2 =10 ..• mM.
= 10_..

Fuente:linder.
Fuente: t984.
lindero 1984.

BACTERIAS INVOLUCRADAS EN EL
PROCESO DE DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

Grupo 1: Bacterias fermentativas - hidroliticas

La
La utilización
utilización microbiana
microbiana de
de polímeros
polímeros complejos
complejos requiere
requiere que
que los
los microorganismos
microorganismos
involucrados
involucrados en
en su
su degradación
degradación sean
sean capaces
capaces de
de hidrolizar
hidrolizar oo romper
romper las
las moléculas
moléculas
de
de polisacáridos, proteínas yy grasas
polisacáridos, proteínas grasas ee hidrolizarlas
hidrolizarlas aa compuestos
compuestos simples
simples como
como
azúcares, aminoácidos yy ácidos
azúcares, aminoácidos ácidos grasos.
grasos, Las
Las bacterias
bacterias que
que llevan
llevan aa cabo
cabo estas
estas reac-
ciones
ciones son
son anaerobias facultativas yy los
anaerobias facultativas los géneros
géneros más
más frecuentes
frecuentes que
que llevan
llevan aa cabo
cabo
esta
esta reacción
reacción son
son los
los miembros
miembros de
de la
la familia Enterobacteriaceae, además
familia Enterobacteriaceae, además de
de
[46] D I G E S T IÓN
DIGESTiÓN A N A E R
ANAEROBIA O B I A

los géneros: Baci//us, Peptostreptoeoeeus, Propionibaeterium,

Baeil/us, Peptostreptoeoeeus, Propionibaeterium, Baetero/des,
Bscteroides,
Microeoeeus
Microeoeeusyy [fostndium.
(Iosttidium.

DIGESTiÓN ANAEROBIA DE POLISACÁRIDOS

En aguas residuales, los polisacáridos más comunes son la celulosa, la hemicelulosa,

el almidón y la pectina; normalmente están presentes en materiales como el papel, la
madera o la paja, los cereales y tubérculos comestibles, así como en los productos
del procesamiento del café y la fabricación de cerveza.

POLlSACÁRIDOS
POUSACÁRIDOS

AZÚCARES

1
2H
2H PIRUVATO I 2H
2H

H,
H, 2H
2H OXALACETATO
I
~
CO, 1
LACTATO
CO,
L-
L________. •+
SUCCINATO

ACETILCoA ACRIDILCoA

4H
rACE~ATol 4H 2H
2H

ETANOL BUTIRATO PROPIONATO

Fuente: Bryant
Fuente: Bryant • t1979.
979.

Figura 3.2. Principales vías

vias metabólicas de la degradación anaerobia de polisacáridos.

Los polisacáridos son carbohidratos de alto peso molecular constituidos

por un gran número de unidades monoméricas unidas una a otra por enlaces
covalentes conocidos como enlaces glucosídicos. Estos enlaces pueden tener orien-
tación a o f),
¡3, por lo que algunos polisacáridos con las mismas unidades
monoméricas (por ejemplo, la glucosa), tienen propiedades funcionales diferentes
(a y ¡3)
debido a las diferentes configuraciones (a f)) de los enlaces glucosídicos. Es
 M I e Ro BI
B o Lo
LaG G rI A DEL
o E L A D
DI I G
GEE5
STT I 6N AN
A NA E
ER o
RO B I A
A [47]
[ 4 7]

común encontrar dos tipos importantes de polisacáridos: aquellos como la celulo-

sa y la hemicelulosa con enlaces 13-1-4,
13-1-4, y los polisacáridos como la pectina y el
almidón, con enlaces a-1-4.
a-1-4. En la Figura 3.2 se presentan las principales vías
metabólicas utilizadas en la degradación de polisacáridos.
El rompimiento de los enlaces 13-1-4
13-1-4 presentes en la celulosa se lleva a
cabo mediante la acción de enzimas extracelulares, las cuales rompen el enlace
introduciendo una molécula de agua. Las enzimas involucradas en la hidrólisis de la
celulosa se conocen como 'celulasas'. El rompimiento de los enlaces a-1-4,
a-1-4, comu-
nes en el almidón y la pectina, son hidrolizados por la acción de amilasas y pectinasas
las cuales son enzimas constitutivas de la gran mayoría de los organismos.

DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA DE PROTEíNAS
PROTEíNAS

Las proteínas se encuentran comúnmente en aguas residuales y están constitui-

das por aminoácidos unidos mediante enlaces peptídicos. Las proteínas son solu-
bles en agua y su hidrólisis se lleva a cabo por acción de proteasas; los productos
son generalmente péptidos de cadena corta y aminoácidos. Estos productos son
COz'2. Las bacterias con
rápidamente fermentados a ácidos orgánicos, amonio y C0
actividad proteólitica son en su mayoría especies de los géneros C/ostridium,
(Iostrkium,
Peptococcus,
Peptocoaus, Bifidobacteriumy
Bifidobacteriumy Staphy/ococcus.
5taphy/ococcus. Las vías metabólicas utilizadas en
la degradación de proteínas se presentan en la Figura 3.3.

PROTEiNAS
PROTEINAS
¡
POLlPÉPTIDOS
POLIPÉPTIDOS

!
Péptldos de
Aminoácidos
Aminoácidos + Péptldos de + NH, + CO,
cadena
cadena corta
corta

Acetato, Isobutirato ]
Acetato, Isobutirato] Crecimiento
Crecimiento
microbiano
microbiano
Metilbutirato
Metilbutirato --------+
f--------
1-.

Isovaleriato
Isovaleriato

NH, + ------+,
CO, -------+ Aminoácidos
Aminoácidos

Fuente:
Fuente: Mclnerney.
Mclnerney. 1988.
1988.

Figura 3.3.
Figura 3.3. Degradaciónde
Degradación de proteínas
proteínas y metabolismo
metabolismo del
del nitrógeno.
nitrógeno.
[48]
[48] o
D I 6 N
I G E S T IÓN A N A E R O B I A

DIGESTiÓN ANAEROBIA DE LíPIDOS

DE

Estasmoléculasestán constituidas por ácidos grasos unidos por un enlace éster a una
moléculade glicerol, y se denominan triglicéridos cuando tres ácidos grasos se unen al
glicerol. La hidrólisis dependerá de la solubilidad del ácido, la cual a su vez es función
del pH. Por tanto, a altos valores de pH la solubilidad aumenta y a bajos valores dismi-
nuirá, por lo que la hidrólisis tendrá un compo tamiento similar.
En ambientes anaerobios, los ésteres del glicerol son hidrolizados libe-
rando los ácidos grasos. El glicerol, la galactosa, la colina y otros componentes
también son liberados durante la hidrólisis y posteriormente fermentados a áci-
dos grasos volátiles por la acción de las bacterias fermentativas. Sin embargo,
los ácidos grasos libres no son fermentados por las bacterias fermentativas, y
solamente en algunos casos los ácidos grasos insaturados pueden ser
hidrogenados. En los digestores anaerobios y sedimentos acuáticos, donde el
tiempo de retención es suficientemente largo, los ácidos grasos (de cadenas
larga y corta) son oxidados por las bacterias sintróficas productoras de Hz a
acetato mediante la vía de la B-oxidación. En ambientes ricos en sulfatos como
los sedimentos marinos, la degradación se lleva a cabo por las bacterias sulfato
Anaerovibrio lipolytica
reductoras. Bacterias como Anaerovibrio lipolytica con actividad lipolítica han
sido aisladas del rumen; esta bacteria fermenta el glicerol, la ribosa y la fructosa
a acetato, propionato y succinato; sin embargo, no puede hidrolizar galacto-
Jípidos a menos que los residuos de galactosa sean removidos. Igualmente, la
lípidos
Butyrov/brio fibrisolvens
Butyrovibrio ftbrisolvens hidroliza fosfo-Iípidos
fosfo-Jípidos cuando crece con azúcares
fermentables como fuente de carbono.

Grupo 11:Bacterias acetogénicas

Para que tenga lugar una eficiente metanogénesis, los productos de fermentación
como el propionato y el butirato deben ser oxidados a acetato, COz'e Hz.Esta oxida-
ción es llevada a cabo por un grupo denominado organismos acetógenos productores
Obligate Hydrogen Producing Acetogens), mediante
obligados de hidrógeno (OHPA, OblígateHydrogenProducingAcetogens),
un proceso conocido como 'acetogénesis'.
 M Ie o
R B IoLoGrA
MICROBIOLOGIA DE
DEL LAA DIGESTiÓN
DI G E S T I 6 N ANAEROBIA
A N A E RO B I A [49]
[49]

Aunque la mayoría de este tipo de reacciones consumen energía, el aco-

piamiento de la actividad de las bacterias OHPAcon la de las bacterias consu-
midoras de Hz (metanógenos hidrogenofílicos), mediante la 'transferencia
interespecífica de hidrógeno', permiten un balance energético favorable. Esto
significa que en ambientes donde la energía disponible para los
microorganismos es baja, como ocurre en reactores anaerobios, las relacio-
nes de cooperación entre los dos grupos microbianos permiten el máximo
aprovechamiento de la energía. Así, si una célula requiere un mínimo de + 70kJ
para la síntesis de 1 mol de ATP, las relaciones de cooperación entre los
microorganismos, permitirán mantener sus actividades metabólicas con sólo
(Schink, 1997).
-20kJ (Schink,1997).

TRAN5FERENCIA
TRANSFERENCIA INTER-E5PECíFICA
INTER-ESPECíFICA DE HIDRÓGENO

Durante la acetogénesis el hidrógeno es un factor de regulación de la degrada-

ción anaerobia de compuestos orgánicos. La producción de hidrógeno en esta
fase proviene de la oxidación del NADPH(nicotin-adenin-difosfo-nucleótido) cuyo
potencial redox a pH 7 es -0.32 V (Wo/in, !976).
!976). Sistemas con bajos potenciales
(Eh)' como el que se obtiene durante la acetogénesis del piruvato, se ven
redox (Eh),
poco afectados por la presión parcial de hidrógeno y las reacciones están favore-
cidas, por lo cual no pueden ser controladas. Reacciones en sistemas con altos
potenciales redox (Eh)' como los que se presentan en la producción de Hza partir
del NADPH,o en la acetogénesis a partir del propionato o butirato, sólo estarán
favorecidas a bajas presiones parciales de hidrógeno, condición facilitada por la
interrelación entre las bacterias OHPA y las bacterias metanogénicas
hidrogenofílicas. Este último grupo, consume el hidrógeno generado por las OHPA
manteniendo una presión parcial de Hza un nivel adecuado para que termodiná-
micamente pueda darse la conversión de los AGV a acetato e hidrógeno. Esta
asociación se conoce como 'relación sintrófica' o 'transferencia interespecífica
de hidrógeno'.
El sistema sintrófico mejor estudiado en el metabolismo fermentativo,
es la fermentación del etanol a acetato y metano por un agente oxidante
anaerobio y un metanógeno.
[50]
[50] oD I G E S T IÓN A N A E R O B I A

fermentación del
Fermentación del etanol:
etanol:

2CH
2CH33CHpH
CHpH + 2Hp
2HP -+ 4H
4Hz2 + 2CH COO- + 2H+
2CH33COO- 2H+
Etanol
Etanol Acetato
Acetato

LiGo
L10 = + 41.9 KJ/reacción
KJ/reacción
Metanogénesis:
Metanogénesis:

4Hz + COz -+ CH4 + 2Hp

LiGo = -142.5 KJ!reacción
L1eo KJ/reacción
Reacción acoplada:
Reacción acoplada:
2CH3CHpH + COz --+ CH44
CH + 2CH COO- + 2H+
2CH33COO- 2H+
L1eo = -100.6
LiGo -100.6 KJ/reacción
KJ /reacción

En este sistema, los fermentadores del etanol producen hidrógeno y acetato

en una reacción con un balance energético desfavorable. Sin embargo, el hidrógeno
generado por las bacterias fermentativas es consumido por un metanógeno en una
reacción energéticamente favorable. Cuando el cambio en energía libre de estas dos
reacciones se suma la reacción total será energéticamente favorable.
Solamente un limitado número de especies del grupo OHPA han sido aisla-
das; probablemente existen más, pero aún no son conocidas. Dentro de las espe-
cies aisladas capaces de degradar ácidos grasos se pueden mencionar:
Syntrophomonas sapovorans
• Syntrophomonas sapovorans (Roy et a/.,
al., 1986): oxida ácidos grasos de 4 a 8
carbonos y algunos ácidos grasos insaturados produciendo acetato, COze Hz,
C02 e H 2.

• Syntrophobacter wo/inii ((Boone

Syntrophobader wo/imí' Boone y Bryant, 1980): oxida propionato generan-
do acetato, C0
COze
2 e Hz,
H2•

(OHPil)
(OHPAj

-+
-+ CH33COO-
CH COO- +H+
+H+ + 2H
2Hz2
L1eo
LiGo = + .76 KJ/reacción
Kl/reaccián
Reacción acopLada
Reacción acoplada con
con la bacteria
bacteria metanogénica:
metanogénica:

4CH33CH
4CH CHzCOO-
2COO- + 3Hp
3Hp -+
-+ 4CH33COO-
4CH COO- + 3CH +H++HC0
3CH44+H++HC0 3 3-
-

L1eo
LiGo = -102.4
-102.4 KJ/reacción
KJ/reacción
 MICROBIOLOGíA DE LA DIGESTIÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA [51]

5yntromonas wo/fei
• Syntromonas wo/fei (Mclnerney et a/.,
al., 1981). Oxida ácidos monocarboxilicos
saturados de 4 a 8 carbonos a acetato e hidrógeno.
5yntrophospara bryantti'
• Syntrophospara bryantti' (Stieb y Schink, 1985; al., 1990) : oxida
1985; Zhao et a/.,
ácidos grasos de cuatro a once carbonos.
5yntrophus buswe//¡7
• Syntrophus buswe/Ití' (Mountfort, 1984):
1984): oxida el benzoato.
Todas las bacterias OHPA aisladas crecen lentamente y sus tiempos de
5yntrophobacter wol!i7l7(Boone
generación son muy largos. El estudio de Syntrophobacter wohi7lí'(Boone y Bryant,
Methanospiri//um hungateitiene un tiempo de
1980) mostró que en sintrofía con Methanospiri//umhungateitiene
generación de 161 horas. Este hecho junto con las necesidades de aislarlas en
co-cultivo ha limitado su estudio fisiólogico. Sin embargo en 1987, Kaspar y su
grupo de trabajo lograron desacoplar la oxidación del butirato y la utilización del
hidrógeno, sustituyendo la bacteria hidrogenofilica por una oleofina en presencia
de catalizadores. De esta forma, se logró el cultivo puro de la bacteria OHPA
abriendo así, nuevas perspectivas para futuros trabajos.
(ÓGO) de todas las conversiones realiza-
Los rendimientos energéticos (~GO)
das por el grupo OHPAa condiciones estándar (solutos 1M; gases 1 atm) son
positivos, por lo que se piensa que la oxidación de los ácidos grasos a hidróge-
no deberá estar acoplada a la producción de ATP.Esto significa que la presencia
Hz2 afectará el rendimiento energético de la reacción. Como la
o ausencia de H
concentración tanto del reactante como la del producto afecta el cambio en
(ÓGO), .el rendimiento energético en situaciones
energía libre de la reacción (~G°).
reales puede diferir del rendimiento obtenido a condiciones estándar. Así, cuan-
Hz2 es un producto, las bacterias consumidoras de hidrógeno pueden man-
do el H
Hz2 tan baja que el rendimiento energético estará
tener la concentración de H
afectado significativamente. Por ello, durante la fermentación del etanol a acetato
eH
Hz2 el ~Go'
ÓGo' (a 1 atm) es de + 9.63 kJ, sin embargo a 10-4
10 atm. el cambio en
kJ.
energía libre es de -36.03 kJ.
Teniendo en cuenta lo anterior, en una digestión anaerobia estable, las
condiciones de las reacciones estarán controladas por la concentración de
propionato, acetato e hidrógeno libre, donde las concentraciones de acetato y
propionato oscilarán entre 10-44 Y 10-55 molar y las presiones parciales de
10-44 atmósferas (Figura 3.4).
hidrógeno serán inferiores a 10- 3.4). A presiones parcia-
[52] oD I G E S T IÓN A N A E RO B I A

les de Hz mayores a 10-11 para el etanol, 10-33 para el propionato, y 10-44 para el
butirato, la transferencia de hidrógeno no ocurre. A estos valores se produce una
inhibición de las bacterias hidrogenofilicas, lo cual genera una sobreproducción de
Hz cuya acumulación inhibirá el proceso. También es necesario tener en cuenta que
a nivel de la primera etapa las bacterias fermentativas transfieren los electrones vía
Hz a las bacterias hidrogenofilicas, haciendo que las primeras produzcan una mayor
cantidad de acetato y por tanto una mayor cantidad de energía. Cuando la transfe-
rencia de hidrógeno no ocurre, el metabolismo de las bacterias fermentativas se
desplazará hacia una mayor producción de compuestos reducidos como el etanol, el
lactato, el propianato, el butirato, etc.

-10
-10

-8 ,',, y, CH
V, CH20H + 1/2H
CH33CH,OH 1/2H,O
20 - y,
V, CH COOH + H
CH33COOH H,2

--6
-6 H,2 + 1/4C0
H 1/4CO,-
2- V, CH,
y, '/, HH,O
CH, + y, 20
....-
-c

.
--4
-4 'OCH,COOH"""'OCH, + "CO~
1/2CH3COOH _o. 1/2CH. + V, CO,
I ...- I
CH2COOH + 2/3H
1/3CH33CH,COOH
1/3CH 213H,O
20 - Región para la oxidación
Reglón

1/3CH

2
COOH + 1/3C0
1/3CH33COOH 1/3CO,2.:t-j- H
H,2

Región para la oxidación del

propionato a metano
L del etanol a metano

-8
-8 -7
-7 -6
-6 -5
-5 --4
-4 -3 -2
-2 -1 O

Log(H2)

Figura 3.4.
Figura 3.4. Efecto de
Efecto de la
la presión
presión parcial
parcial de
de hidrógeno
hidrógeno sobre
sobre la
la energia
energia libre
libre durante
durante la
conversión
conversión del
del etanol,
etanol, el
el propionato,
propionato, el
el acetato
acetato y el
el hidrógeno
hidrógeno durante
durante la
la
digestión
digestión anaerobia.
anaerobia.

Las relaciones dependientes de la transferencia interespecífica de hidró-

geno se pueden presentar en los siguientes casos:
 M I eRO B I
MICROBIOLOGfAo LO G ¡A o
DEE L A
LA DI G E S TI
DIGESTiÓN 6 N A N A E R
ANAEROBIA o B I A [53]

1. En bacterias involucradas en el catabolismo de alcoholes o lactato. Estos

microorganismos pueden crecer con otros sustratos sin necesidad de una transfe-
rencia de hidrógeno, pero sólo pueden degradar alcoholes o lactato cuando el
hidrógeno es removido por asociacióncon bacterias consumidoras de hidrógeno o
cuando hay un aceptor de hidrógeno inorgánico (sulfato) u orgánico (fumarato).
2. En bacterias que degradan carbohidratos simples y complejos. Crecen bien sin
que se produzca la remoción de hidrógeno, sin embargo cuando están en
presencia de bacterias consumidoras de hidrógeno incrementan la producción
de hidrógeno y acetato, disminuyendo la concentración de propionato, butirato,
lactato y etanol.
3. En bacterias que producen hidrógeno de forma obligatoria, por lo que deben
mantener una relación sintrófica obligada con bacterias consumidoras de hi-
drógeno las cuales reducen las concentraciones de hidrógeno en el medio
(Ramírez, 1997).
Aunque la transferencia interespecífica se asocia fundamentalmente al hi-
drógeno, se ha podido establecer que el formato y el acetato también pueden ser
transferidos. La difusión de estos compuestos de un organismo a otro, es un
fenómeno regulado por factores como la relación área superficial/volumen de las
bacterias, la constante de difusión del compuesto, el gradiente de concentración y
la distancia entre los dos organismos (Schink
(Schir'ikyy Thauer, 1988).
La distancia entre organismos productores y consumidores es un factor crí-
tico para la difusión del H22 y dependerá de la forma en que este estructurada la
biomasa. Célulasagrupadas en lodos granulares presentan alta densidad celular lo
cual favorece la transferencia interespecífica de electrones, por lo que con estos
\
lodos se obtiene una alta actividad metanogénica con sustratos como propionato y
eta!.,
butirato (Grotenhuis et al., 1991).
1991).
Estudios orientados a determinar la importancia relativa de otros sustratos
en la transferencia de electrones en cultivos sintróficos, no han mostrado resultados
concluyentes a este respecto. En el caso del formato, las bajas concentraciones, la
poca capacidad de las poblaciones acetogénicas para formar este sustrato, así
como la baja capacidad de los metanógenos y sulfato reductoras para utilizarlo,
son algunos de los factores que han dificultado establecer con claridad el papel
[54]
[54] Do II GG EE SS TT IION
6 N AA NN AA EE RR O
O BB II AA

de
de este
este compuesto
compuesto en
en la
la transferencia
transferencia interespecífica
interespecífica de
de electrones
electrones (Grotenhuis
(Grotenhuis
eteta/.,
al., 1991;
1991; Stams,
Stams, 1994).
1994).

BACTERIAS
BACTERIAS HOMO-ACETOGÉNICAS
HOMO-ACETOGÉNICAS

Dentro
Dentro del
del grupo
grupo de
de acetógenos
acetógenos existe
existe un grupo
grupo de bacterias
bacterias conocidas
conocidas como 'bac-
'bac-
terias
terias homo-acetogénicas' las cuales
cuales son anaerobias
anaerobias obligadas
obligadas yy utilizan el COz'
COz'
como
como aceptor
aceptor final de electrones,
electrones, produciendo
produciendo acetato como producto único
único de la
fermentación anaeróbica. Los electrones
electrones para la reducción del COzprovienen del Hz
Hz
y de una variedad de compuestos
compuestos como azúcares, ácidos orgánicos, alcoholes,
aminoácidos
aminoácidos y ciertas bases nitrogenadas.
Auque este grupo no es un grupo taxonómico
taxonómico definido, en él se incluyen una
amplia variedad de bacterias Gram (+) y Gram(-)
Gram( -) formadoras de esporas tales
como Clostridium aceticum, Clostridium
Oostridium aceticum, üostrküum formicoaceticumy
formicoaceticumy Acetobacterium
Acetobacterium wooddi
wooddi
eta/..,
(Balch et 1977).
al.., 1977).
(/ostndiumy Acetobacterium
Las especies Clostridiumy Acetobaderlum wood//pueden
woomí'pueden utilizar compues-
tos orgánicos o inorgánicos mediante la fermentación homoacética de azúcares o
C02. de la siguiente forma:
la reducción del COz'de

C6óHJP6
H¡P6 --+
-+ 3CH jCOOH
3CHjCOOH
2CO
2COzz + 4H
4Hzz -+
--+ CHjCOOH + 2Hp
2HP

Las bacterias homo-acetogénicas fermentan la glucosa mediante la vía

glucolítica produciendo dos moléculas de piruvato y dos moléculas de NADH.Ade-
más del acetato producido a partir de las dos moléculas de piruvato, una tercera
molécula de acetato se genera por la reducción del COzproducido
C02 producido en la reacción,
utilizando los 4 electrones generados en la glucólisis más los 4 electrones produ-
cidos en la oxidación del piruvato. Por tanto, la producción total a partir del piruvato
son tres moléculas de acetato.
La mayoría de los homoacetógenos convierten el COzen
C02 en acetato por la vía
acetil-Coá. La reacción de homoacetogénesis es:
de la acetil-CoA.

4Hz2 + H+ + 2HCO j-
2HCOj- -+
--+ CHjCOO- + 4Hp
4HP
.dGo
LiGO = -113.2 KJ/reacción
= -113.2 KJ/reacción
 M le RO B I o L o G í A
MICROBIOLOGíA o
DEE L A
LA DI G E S TI
DIGESTiÓN 6N A N A E R o B I A
ANAEROBIA [55]
[55]

En la Figura 3.5. se presentan las reacciones seguidas por las bacterias

homoacetogénicas, sulfato reductoras y metanogénicos para la síntesis de acetato.
El grupo metilo del acetato se origina en una serie de reacciones enzimáticas en las
se reduce para formar el grupo metilo del acetato, y otra molécula de
COzse
cuales el caz
COzse incorpora para formar el grupo carboxilo. La vía Acetil-CoA requiere H
Hzcomo
2 como

donador de electrones, y una enzima clave es la carboxil-monoxido-dehidrogenasa

carboxil-monoxido-dehidrogenasa
que contiene como cofactores los metales Ni, Zn, y hiero. La importancia de esta
enzima es que cataliza la reducción del dióxido de carbono a mdnóxido
monóxido de carbono,
el cual termina en la posición carbonil del acetato. Inicialmente el CO
COzse
2 se reduce a

formiato-dehidrogenasa,
formato por la acción de la enzima formiato-dehidrogenasa, y posteriormente se
convierte en formil-tetrahidrofolíato. El grupo metilo es entonces transferido a una
enzima que tiene vitamina B1Z
IZ como cofactor. En la fase final de la síntesis del

acetato, el grupo metilo se combina con el COen

ca en la monóxido dehidrogenasa. La
adición de la coenzima A se produce en este punto, y la CO-dehidrogenasa cataliza
la formación del acetil-CoA como producto final.

•..--------------------.
,..--------------------,
•
ca,
"-... 2H,
"-...
<, ~"B" "-.
"-....
i
CH,-B,
H, /" ) CHO-THF
CHa-THF • CH,-THF
CH,-THF CH,-B,.
/'/'
il

~::~:~~~~~~:ro
ATP THF
ATP THF Formil
Formil Metil
Metil Metil-B"
Metil-B"

L ~::~~~~~_:~::ro
:_~~~:~_~~~:::~_I:~::
~~:~~_~:~:::~~:~::

ca,
CO, ca
CO co------------:
ca ------------:
H, <,
"-... • I I ¡
H, Fe ------------'-+
Fe Fe
Fe ¡
-:
/" ¡.•

1-
I ~.I
Fe tiI-
tiI-Ni
Ni .-Ni-
-Ni-CH. CH.

r-
I
~-Ni
~-Ni "-... ccao dehidrogenasa
......•.. dehidrogenasa CoA N'
Na'
COA Fuerza
F~erza
Proton
Proton
CH,-COOH
CH,-caaH .•••••••
/~- CH,-Ca-SCoA Motriz
Motriz
CH,-CO-SCoA
.,/' ¡
Acetato
Acetato ATP
ATP Acetil CoA
Acetil CoA ATP
ATP

4H22 + 2C0
Neto: 4H
Neto: 2C022 Acetato- + 2H20 + H+

Figura 3.5.
Figura 3.5. Vía del
Via del Acetil-CoA,
Acetil-CoA, mecanismo
mecanismo autotrófico
autotrófico las bacterias
de las bacterias homo-génicas,
homo-génicas,
sulfato reductoras
sulfato reductoras y metanogénicas. (Tomado de Brock,
metanogénicas. (Tomado Brock, 1997)
1997)
[56]
[56] oDIGESTiÓN
I G E S T I 6 N A N A E RO B I A
ANAEROBIA

111:Bacterias metanogénicas
Grupo 111:Bacterias

Las bacterias metanogénicas pertenecen al grupo actualmente conocido como

Archeaea, cuyos miembros presentan características diferentes a las encontradas
Archeaea,
Bacteria. Estas características están relacionadas fundamentalmente con la
en Bacteria.
composición química de algunas estructuras celulares.
Aunque la estructura de la membrana celular es una bicapa de
fosfolípidos, en lugar de los enlaces éster presentes en la unión entre el
glicerol y los ácidos grasos, los lípidos del grupo Archaea son químicamente
únicos, debido a que la unión del glicerol a las cadenas laterales hidrofóbicas
se hacen mediante enlaces éter, además los Iípidos
lípidos carecen de ácidos grasos
y en su lugar presentan cadenas laterales constituidas por unidades del hi-
drocarburo isopreno. Los di-éteres de glicerol y los tetra-éteres de glicerol
son las principales clases de lípidos presentes en las especies del grupo
Arquea, e:los
ellos forman una monocapa lipídica, en lugar de un arreglo de bicapa.
Estas monocapas son muy resistentes y se encuentran ampliamente distri-
buidas en bacterias hipertermófilas.
En forma similar, las paredes de algunos metanógenos están constituidas
de un polisacárido similar al péptido-glucano, el cual se ha denominado
pseudopéptido-glucano y está compuesto de unidades alternadas de N-acetil-
glucosamina y ácido N-acetiltalosaminurónico. Los enlaces glucosídicos son 1-3
en lugar de los 1-4 encontrados en el péptidoglucano. Las paredes celulares de
Archaea están constituidas de polisacáridos, glicoproteínas, o proteínas.
otros Archaea
Methanosarcina presentan paredes gruesas de polisacáridos consti-
Especies de Methanosarcina
tuidos
tuidos de glucosa,
glucosa, ácido glucorónico, galactosamina, y acetato.
Las bacterias metanogénicas
metanogénicas son anaerobias estrictas
estrictas y producen
producen metano
como
como principal producto del metabolismo energético. A pesar de los
los requerimien-
tos
tos estrictos
estrictos de
de anaerobiosis obligada
obligada y el
el metabolismo
metabolismo especializado de este
grupo,
grupo, estas bacterias se encuentran ampliamente distribuidas en la naturaleza.
naturaleza.
La actividad
actividad metanogénica
metanogénica es
es mucho
mucho mayor
mayor en ecosistemas de
de agua dulce
dulce y te-
te-
rrestres,
rrestres, la
la menor
menor actividad
actividad detectada
detectada en
en océanos,
océanos, se debe
debe aa la alta
alta concentra-
concentra-
[56]
[56] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

111:Bacterias metanogénicas
Grupo 111:Bacterias

Las bacterias metanogénicas pertenecen al grupo actualmente conocido como

Archeaea, cuyos miembros presentan características diferentes a las encontradas
Archeaea,
Bacteria. Estas características están relacionadas fundamentalmente con la
en Bacteria.
composición química de algunas estructuras celulares.
Aunque la estructura de la membrana celular es una bicapa de
fosfolípidos, en lugar de los enlaces éster presentes en la unión entre el
glicerol y los ácidos grasos, los lípidos del grupo Archaea son químicamente
únicos, debido a que la unión del glicerol a las cadenas laterales hidrofóbicas
se hacen mediante enlaces éter, además los lípidos carecen de ácidos grasos
y en su lugar presentan cadenas laterales constituidas por unidades del hi-
drocarburo isopreno. Los di-éteres de glicerol y los tetra-éteres de glicerol
son las principales clases de lípidos presentes en las especies del grupo
ellos forman una monocapa lipídica, en lugar de un arreglo de bicapa.
Arquea, e:los
Estas monocapas son muy resistentes y se encuentran ampliamente distri-
buidas en bacterias hipertermófilas.
En forma similar, las paredes de algunos metanógenos están constituidas
de un polisacárido similar al péptido-glucano, el cual se ha denominado
pseudopéptido-glucano y está compuesto de unidades alternadas de N-acetil-
glucosamina y ácido N-acetiltalosaminurónico. Los enlaces glucosídicos son 1-3
en lugar de los 1-4 encontrados en el péptidoglucano. Las paredes celulares de
Archaea están constituidas de polisacáridos, glicoproteínas, o proteínas.
otros Archaea
Methanosarcina presentan paredes gruesas de polisacáridos consti-
Especies de Methanosarcina
Especiesde
tuidos
tuidos de glucosa, ácido glucorónico, galactosamina, y acetato.
Las bacterias metanogénicas son anaerobias estrictas y producen metano
como
como principal
principal producto
producto del metabolismo energético.
energético. A pesar de los requerimien-
tos
tos estrictos de
de anaerobiosis obligada yy el metabolismo especializado de este
grupo, estas
grupo, estas bacterias se
se encuentran
encuentran ampliamente
ampliamente distribuidas
distribuidas en
en la naturaleza.
La
La actividad metanogénica es
es mucho mayor
mayor en
en ecosistemas
ecosistemas de agua
agua dulce
dulce yy te-
te-
rrestres,
rrestres, la
la menor actividad
actividad detectada
detectada en
en océanos,
océanos, se debe
debe a la
la alta
alta concentra-
concentra-
 M I e RO B I o LO G f A oE L A DI G E S TI Ó N
T IÓN A N A E R o I A
B lA [57]
[57]

ción de sulfatos, condición que favorece la sulfato reducción en sedimentos mari-

nos (Whitman et al., 1992; Zinder, 1998).
seriede
Lasbacteriasmetanogénicaspueden llevar a cabo una serie de reaccionespor la
cualesno
presenciade ciertas coenzimas,las cuales no se encuentran en otros géneros de bacte-
rias,yy se clasificande la siguiente
rias, siguientemanera:
manera: coenzimastransportadoras de C1I :: coenzima
M, metanofurano y metanopterina, y coenzimas involucradas en reacciones Redox:
•
4Z0 y HS-HTP
coenzimaF420 H5-HTP (fosfato de 7-mercaptoheptanoil
7-mercaptoheptanoiltreonina
treonina ).
•o F4Z0: actua como donador de electrones en la reducción del COzen
Coenzima F4Z0: en la caz
metanogénesis hidrogenofílica. Esta coenzima en estado oxidado absorbe luz
a 420nm y presenta fluorescencia azul verdosa, esta fluorescencia constituye
una herramienta útil para la identificación preliminar de las bacterias
1992).
metanogénicas (Whitman et al., 1992).
•o F430: aactúa
Coenzima F~30: ctúa en el paso final de la metanogénesis como parte del
sistema metil reductasa. Absorbe luz a 430 nm pero a diferencia del factor F4Z0
F4Z0
no fluoresce.
•o Metanofurano: está involucrado en el primer paso de la formación de metano a
COz.
partir del COz.
•o Metanopterina: fluoresce a 342nm emitiendo un color azul brillante, es similar
al ácido fólico, y actúa como transportador de compuestos monocarbonados
COzaa metano. La forma activa de la coenzima "in
durante la reducción del COz
vivo" es la forma reducida, la tetrahidrometanopterina
tetrahidrometanopterina (THMP).
•o Coenzima M: transporta los grupos metílicos y se reduce por el complejo
enzimático metil-reductasa-F 430
430 al final de la formación de metano.

CH]-S-CoM+2H+
CH3-S-CoM+2H+ -+ HS-CoM+
HS-CoM+CH4 CH4

bromo-etano-sulfónico,
Un potente inhibidor de la coenzima M es el ácido bromo-etano-sulfónico,
106M causa una inhibición del 50% de la
este compuesto a una concentración de 10-6M
actividad de la metil-reductasa, así como el crecimiento de las bacterias
metanogénicas.
•o La HS-HTP: (fosfato de 7 mercapto-heptanoil-treonina),
mercapto-heptanoil-treonina), al igual que la
coenzima M, este cofactor está involucrado en la fase final de la formación
[58]
[58] o 6 N
I G E S T IION A R O B I A
N A E RO

de metano catalizada por el sistema metil-reductasa. Su estructura es simi-

lar al ácido pantoténico, y actúa como donador de electrones en el sistema
metil-reductasa.
Este grupo requiere amonio como fuente de nitrógeno, además de azufre, y
micronutrientes como cobalto, níquel y hierro. El tungsteno, selenio, molibdeno y
p-a¡ninobenzoico
ciertas vitaminas como biotina, ácido p-aminobenzoico y riboflavina son
(Jamel y Kalmokoff, 1987). Utilizan un limitado
estimuladores del crecimiento (Jarrrel
numero de sustratos para la generación de metano, los principales sustratos son: Hz
+ COz' formato y acetato. Adicionalmente otros compuestos de C"
COz'formato C,' pueden ser
utilizados como son: metanol, trimetilamina, y algunos alcoholes como isopropanol,
isobutanol, ciclopentano y etanol.
Con base en el tipo de sustrato utilizado, los bacterias metanogénicas se
subdividen en tres grupos (Whitman et
el al.,
a/., 1992):
Grupo /:1: Utiliza como fuente de energía Hz,formato y ciertos alcoholes, el COzes
Grupo caz es el
aceptor final de electrones el cual es reducido a metano. La reducción de COzes
importante para mantener una baja concentración de Hz y formato, condición indis-
interespecifica de electrones.
pensable para los procesos de transferencia interespecífica

Reacciones
( KJ [mo!
/moL de metano)
4Hz + COz
4Hz CH. + 2HP
COz -+ CH. 2HzÜ -135.6
-135.6
--~~--~---- ----=------
~~---------- ---
CH. + 3eOz + 2HzO
-----'=--------------- __
4 Fonllalo
Fonnalo -+
-+ CH. 3eOz ____
2H~
zO -130.1

Grupo
Grupo /1.'
l/.' Utiliza
Utilizauna ampliavariedad
una amplia variedad de compuestos que tienen el grupo metilo durante
COz'el
el metabolismo energético. Algunas de moléculas son oxidadas a COz' el cual actúa
como aceptor final de electrones y se reduce directamente a CH4.4•

}<"/I. ,'irilll's
KJ/lllo/ de metano)
( KJlmoL
-------_.
4 ¡\/t'lilamilla
,\ J ,'1 i/alll~/(1 + HzO
H zO -+ CH.¡ + COz + 4 NH4
CH--'4_+_C_O....;z=--...+_4_N_H_4:.-....... -75
-_7_5 _
_2 2 Dillldilalllilla + 22 HzO
lJilllt'tiLmllilla_+ HzO -+
-+ + COz + 2NH4
3CH4 _+_C_0_z::___+_2_N_H___,_4
3_C_H_4,--' -73.2
-_7_3_.2 _
 M e
I RO B I o o GíA
MICROBIOLOGIA L DE
DEL LAA DIGESTiÓN
DI G E S T IÓN o
ANAEROBIA
A NA ER B IA [59]
[59]

Hz-Caz, pueden ser metabolizados simultáneamente,

Aunque el metanol y Hz-COz,
el metanol es consumido más rápidamente. El metabolismo de la aminas metiladas
CH44,, conlleva
a CH conlleva a la producción de amonio, el cual es utilizado como fuente de
nitrógeno (Jarrrel
(Jarrrel y Kalmokoff,
Kalmokoff, (987).
1987).
111.'aunque la mayor parte del metano que se genera en la naturaleza
Grupo II/.·
Grupo
proviene del rompimiento del acetato, la habilidad de catabolizar este sustrato esta
limitada a los géneros: Methanosarcinay
Methanosarcinay Methanosaeta (Methanothrix). Elcarbono
Methanosaeta (Methanothrix).
metilado del acetato es reducido directamente a metano y el grupo carboxilo es
oxidado a COz'
CO2. El acetato es utilizado como fuente de carbono y de energía, sin
embargo, la energía que se obtiene a partir del acetato es pobre.

CH33COO- + HP
Hp -.
-+ CH.¡ + HC033--
L1ca'
Ll c" = - 31 kJ /moL
31kJ /mo! de
de metano
metano

Género Methanosarcina:
Methanosarcina: Se asocian formando pseudosarcinas y tienen
baja afinidad por el acetato. La constante de afinidad por este sustrato (Km) es
del orden de 5mM y el tiempo de generación pueden llegar a 30 horas cuando se
cultivan con este sustrato. Además del acetato, este género puede utilizar metil-
aminas, metanol y algunas especies pueden actuar hidrogenofílicamente. Las
especies más representativas son: Methanosarcina
Methanosarcina barker~
barkeri, Methanosarcina
Methanosarcina mazei
mazei
yy Methanosarcina
Methanosarcina thermophila.
thermophüs.
Género Methanosaeta
Methanosaeta (antes llamado MethanothriX¡:
Methanothrix): Este grupo tienen un
Km para el acetato entre 0.7-
0.7- 1.2 mM y tiempos de generación entre 65 y 70
70 horas.
Aunque las especies de este grupo no utilizan ni el hidrógeno, ni el metanol, ni las
metilaminas, no son inhibidas por el hidrógeno o el formato. Dada la gran afinidad
por el acetato, es recomendable mantener en los digestores anaerobios un alto
contenido en este grupo de bacterias. Por lo general , es frecuente encontrar en
lodos granulares un alto contenido de Methanosaeta.
Methanosaeta. (Whitman et
et a/.,
al., 1992).
1992).
Es frecuente encontrar en reactores
reactores anaerobios,
anaerobios, una competencia por el
acetato entre las especies
especies de los géneros Methanosaeta
Methanosaeta y Methanosarcina,
Methanosarcina, sin
embargo, las bajas concentraciones
concentraciones de acetato
acetato que usualmente predominan al
interior de
de los
los reactores favorece
favorece el crecimiento
crecimiento del género Methanosaeta.
Methanosaeta. Por
[60]
[60] DIGESTiÓN ANAEROBIA

otra parte, también existen diferencias en los requerimientos de pH entre los do~
do:
géneros, Methanosaetatrabaja
Methanosaetatrabaja a pH 7.0, mientras MethanosarctÍ7ageneralmentl
Methanosarcinageneralmentl
se presenta a valores inferiores a 7.0. Otra característica diferente se relaciona COI
COI
la predominancia del género Methanosaeta en lodos con altas concentraciones dI
Methanosaetaen
propionato, lo cual señala su mejor adaptación a este sustrato. En el caso dI
Methanosarcina hay una mejor adaptación al etanol, fenómeno asociado con lo:
MethanosarctÍ7a
cambios del pH, producidos cuando la oxidacion
oxidación del etanol no está acoplada con léli
conversión del acetato. Cuando esto ocurre, el pH disminuye y las concentracione~
concentracione:
de acetato se incrementan, lo cual favorece el desarrollo de la población dI
MethanosarctÍ7a
Methanosarcina (GrotenhU/;
(Grotenhu~ et al, 1991).
et a/., 1991).

METANOGÉN ESIS
METANOGÉNESIS

La producción de metano es la principal forma por medio de la cual las bacteria~

bacteria;
metanogénicas obtienen la energía necesaria para el crecimiento. Desde un punto dE
de
vista metabólico, la formación de metano es un tipo de respiración anaerobia en lé
le
cual, el dióxido de carbono actúa como aceptor de electrones y el hidrógeno es utiliza-
do para reducirlo. Los estudios bioquímicos indican que el sistema de transporte dE
de
electrones no es igual al encontrado en organismos aerobios, no hay citocromos ni
quinonas,y existe un sistema de transportadores en los cualesalgunas de las coenzimas
sistemade
mencionadas permiten la reducción secuencial de los intermediarios monocarbonados.
secuencialde

Metanogénesis hidrogenofil
Metanogénesis hidrogenofilica
ica

La reducción de COza metano es un proceso Hz dependiente aunque compuestos

como el formato, el monóxido de carbono, y aún el hierro elemental (FeO)pueden
actuar como donadores de electrones en este proceso (Vogels et
et al, 1982).
a/., 1982).
La reducción de COza CH44 se efectúa mediante la utilización de varios
intermediarios y los principales pasos se pueden resumir de la siguiente
manera (Figura 3.6):
 MICROBIOLOGfA
MICROBIOLOGIA DE LA DIGESTiÓN ANAEROBIA [61]
[61]

1. activación del COzmediante su unión al metanofurano, y la posterior reducción

del grupo formilo
2. transferencia del grupo formilo del metanofurano a la tetrahidrometanopterina,
y la posterior deshidratación y reducción en dos etapas separadas a nivel de
los grupos metileno y metilo.
3. transferencia del grupo metilo de la metanopterina a la coenzima M.
4. reducción del metil-coenzima M a metano mediante la acción del sistema metil-
reductasa en el cual participan el F430
430 y el HS-HTP.El donador de electrones para

esta reacción es el HS-HTP y el producto de la reacción además del CH44,• es un

disulfuro de la CoM y del HTP (CoM-S-S-HTP). Por reducción con Hzse regene-
ran CoM y HS-HTP en libre.

Falo
Foto de
de microscopía
mcroscopia electrónica
electrónica

Figura
Figura 3.6.
3.6. Methanobacterium
Methanobacterium formicicum
formicicum

Metanogénesis
Metanogénesis acetoclástica
acetoclástica
Las
Las reacciones
reacciones de la vía
vía acetil-CoA
acetil-CoAexplicadas anteriormente
anteriormente están relacionadas con
con la
producciónde
producción de metano
metanoaa partir de
de compuestos rnetkos y del
compuestos metmcos delacetato.Compuestosmetílicos
acetato.Compuestosmetnicos
como
como el metanol son
son catabolizados
catabolizados mediante
mediante la
la donación
donación de
de los
los grupos
grupos metílicos
metílicos aa una
una
proteína
proteínacorrinoide
corrinoide para
para formar
formar un
un complejo
complejo CH
CH3-Corrinoide.
3-Corrinoide. Los
Loscorrinoides
corrinoides son
son estructu-
ras
ras parentales
parentales como
como la
la vitamina
vitamina BBlz,
1Z' El
Elcomplejo Corrnoide-Gi,3 dona
complejo Corrinoide-CH dona el
el grupo
grupo metílico
metílico
[62]
[62] DIGESTiÓN ANAEROBIA

a la CoM para formar el complejo CoM-eH

CoM-CH33 a partir del cual se obtiene el metano por
los electrones obtenidos en la oxidación de otras moléculas de metanol a
reducción con 105
COZ'En
COz' En el metabolismo energético, el acetato es activado a Acetil-CoA,
Acetif-CoA, el cual interactúa
con el monóxido de carbono deshidrogenasa, para transferir el grupo menko
metnico a la enzima
corrinoide de la vía acetif-CoA.
acetil-CoA. A partir de este punto, el grupo metilo es transferido a la
tetrahidro-metano-pterina y a la coenzima M para formar el complejo CoM-CH
CoMf-CH3,3. Poste-
riormente, es reducido a metano con 105
los electr nes generados en la oxidación del CO
electrones CO a
COzpor
COz por la acción de la CO
COdehidrogenasa
dehidrogenasa (Figura 3.8),
3.8).

CO,
CO,

r-----· MF - -- 2H Hp
[_._.~__.__:~_ -::- 2H H,D
,.. __.. _.. _.... _ MF - CHO
Formilo
Formilo

¡-
MP

MP -:c:-
MP-CHO F~rod.,

I
H,O --
~:: ::>:--
<
MP > CH,
Melileno
Metileno
F42o-red¡

F420-oxi
F420-oxi
---.J
_j
,
Hidrogenasa
~::ogenasa
H,

2H
2H

MP-CH,
MP-CH. MF: Metanofurano,
Metilo
Metilo MP Tetrahidrometanopterina

r................... CoM-SH -_ -- Bomba de Na'

CoM-S-CH,
:-2H
: +- 2H
¡-¡------------------.
-............ HS-HTP-- Complejo FF",,-metil-
",,-metil· Bomba
HS-HTP--
reductasa
reductasa protónica
¡ ~___----: ¡
L..
i_ _ CoM-S-S-HTP CH,
ATP

Fuente: Madigan,
Fuente: Martinko y Parker,
Madigan, Martinko Parker, 1997.
t997.

Figura 3.7.
Figura 3.7. Metanogénesishidrogenofilica
Metanogénesis hidrogenofilica a partir
partir de
de la reducción
reducción del CO"
del CO"
 MICROBIOLOGíA DE LA DIGESTiÓN ANAEROBIA [63]
[63]

CH,-
CH 3- COOH

ATP
ATP -------.. .: CoA

CH, CO S- CoA Biosíntesis

CO Dehidrogenasa

CODH- Monóxido CH, CO-

CH. CO-CODH
CODH
de Carbono
Dehidrogenasa

CO-CODH CH, - Corrinoide

CH.

Fuente: Madigan. Martinko y Parker,

Fuente:Madigan,Martinko Parker. t997
1997

Figura 3,8,
Figura 3.8. Utilización
Utilización de
de las
las reacciones
reacciones de
de la vía
via acetil-CoAdurante
acetil-CoA durante el crecimiento
crecimiento con
con acetato,
acetato.

BACTERIAS SULFATO-REDUCTORAS
BACTERIAS SULFATO-REDUCTORAS (BSR)

Las bacterias sulfato reductoras son anaerobios estrictos, ampliamente distribui-

das en ambientes acuáticos y terrestres donde se lleva a cabo los procesos de
degradación de la materia orgánica,
orgánica. Utilizan el sulfato como aceptar de electrones
durante la oxidación anaerobia de compuestos orgánicos, aunque pueden utilizar
también, compuestos como el tiosulfato, el tetrationato y el azufre elemental. Los
donadores de electrones más utilizados por las BSRson Hz, lactato, piruvato aun-
restringidos.
que existen otros tipos fisiológicos más restringidos,

2CH 2 O
2CH + SO
SO 42- - H
H 2S + 2 HCO-
HCO-33
[64]
[64] D I G E S T ION
DIGESTiÓN A N A E RO B I A
ANAEROBIA

El grupo de las B5R es diverso morfológicamente pero fisiológicamente

unificado, taxonómicamente se reconocen 18 géneros capaces de llevar a cabo la
sulfato reducción desasimilativa, los cuales se agrupan en dos subgrupos fisioló-
gicos:
Grupo bacterias no oxidantes
Grupo 1: bacterias oxidantes del
del acetato
acetato
piruvato. el etanol o ciertos
Los miembros de este grupo utilizan el lactato, el piruvato,
ácidos grasos como fuente de carbono y energía.
energía, y reducen el sulfato a sulfuro de
hidrógeno. Los géneros representativos son:
Desu/fovibrio
Oesu/fovibrio Desu/fobacu/a
Oesu/fobacu/a
Desu/fomicrobium
Oesu/fomicrobium Archaeog/obus
Archaeog/obus
Desu/fobotu/us
Oesu/fobotu/us Desu/fobu/bus
Oesu/fobu/bus
Desu/fotomacu/um
Oesu/fotomacu/um Thermodesu/fobacterium
Thermodesu/fobacterium
Desu/fomoni/e
Desufomonüe
Grupo 11:bacterias oxidantes
Grupo 11:bacterias oxidantes del
del acetato
acetato
Las bacterias de este grupo se especializan en la oxidación de ácidos grasos parti-
cularmente el acetato y reducen el sulfato a sulfuro. Los géneros más representati-
vos son:
Desu/fobacter
Oesu/fobacter Desu/foarcu/us
Oesu/foarcu/us
Desu/fobacterium
Oesu/fobacterium Desu/fadnum
Oesu/facinum
Desu/fococcus
Oesu/fococcus Desu/forhabdus
Oesu/forhabdus
Desu/fonema
Oesu/fonema Thermodesu/forhabdus
Thermodesu/forhabdus
Desu/fosardna
Oesu/fosarcina

Sulfato reducción

Para la reducción del sulfato a sulfuro de hidrógeno es necesario una reducción de

ocho electrones, y se lleva a cabo a través de una serie de etapas. Como
Comoel
el ión sulfato
es muy estable, para su utilización es necesario una activación previa mediante el ATP
La enzima ATP-sulfurilasacataliza la unión del sulfato a uno de los fosfatos del ATP
formando el adenosin-fosfo-sulfato (AP5). En la sulfato reducción desasimilativa, el
complejo AP5 se reduce directamente a sulfito 503 2 con la liberación de AMP
AMP.En
En la
reducción asimilativa, un nuevo fosfato se une al AP5 para formar el fosfo-fadenosín-
 MICROBIOLOGíA DE LA DIGESTiÓN
DIGESTI6N1 ANAEROBIA [65]
[65]

fosfo-sulfato (PAPS) y solo entonces reduce el sulfato (Figura 3.9). En ambas reaccio-
nes, el primer producto de la sulfato reducción es el sulfito, a partir de este momento
las subsecuentes reducciones ocurren rápidamente. En la sulfato reducción asimilativa
el H22Sformado es convertido en azufre orgánico en la forma de aminoácidos, mientras
en la sulfato reducción desasimilativa el H
HzS
2S es excretado.

ATP
ATP PP
PP ATP
ATP ADP
ADFl

so,'
SO,'
U
ATP-Sulfurilasa
ATP-Sulfurilasa
APS
APS
U
U
APS- quinasa
APS- quinasa
PAPS
PAPS

2e-
2e-

LAMP ~ AMP
NADPH
NADPH

2e-
2e-
--. PAP
PAP
NADP·
NADP·

SO,->
SO," SO,"
SO,'

6e
6e
.•. 6e-
6e-

·1
I
•
I
1
H,s
H,s H,S
H,s

1
Excreción
Excreción Compuestos
Compuestos orgánicos azufrados:
orgánicos azufrados:
cisteína, metionina,
cisteína, metionina, etc
etc

REDUCCiÓN
REDUCCiÓN DESASIMILATIVA
DESASIMILATlVA REDUCCiÓN
REDUCCiÓN ASIMILATIVA
ASIMILATIVA

Fuente: Madigan.
Fuente: Madigan, Martinko
Marlinko y Parker,
Parker, 1997.
1997.

Figura 3.9.
Figura Sulfato Reducción
Sulfato Reducción Desasimilativa
Desasimilativa Asimilativa
y Asimilativa Bacterias Sulfato
de las Bacterias Sulfato Reductoras
Reductoras

B5R durante la degradación de

Interrelación de las BSRdurante
la materia orgánica
Una característica de los medios donde las BSR desarrollan una alta actividad
metabólica, es la presencia de olores desagradables producidos por el H22S, así
asi
[66]J
[66 D I G E S T IÓN A N A E R O B I A

como un color negro en las aguas y los sedimentos, debido a la formación de

sulfuros que precipitan al reaccionar con diferentes metales. Las BSRcumplen un
importante papel en las etapas finales de la degradación de la materia orgánica,
especialmente en la remoción de los sulfatos presentes en el afluente. Las bacte-
rias BSR pueden crecer en presencia o ausencia de sulfatos, utilizando dos vías
metabólicas diferentes; una fermentativa y la otra oxidativa. La Figura 3.10. pre-
senta las interrelaciones de las BSRdurante la utilización de la vía fermentativa en
la cual, crecen sintróficamente con las bacterias metanogénicas, sin embargo, en
la presencia de sustratos como lactato y etanol compiten con las poblaciones
fermentativas por sustratos comunes (Gibson, 1990). La siguientes reacciones
ilustran la capacidad fermentativa de las BSR.

3 Lactato -+
--+ Acetato +2 Propionato + HCO3-j-
HC0 + H+
Etanol + H CO
CO3- + H 2 --+
-+ Propionato
j-

HCO3- -+ Acetato + 2 Propionato + H

3 Etanol + 2 HC0 j- H++ + 3H220
Acetato + HC0
HCO3- + H+ + j-+3H Propionaio + 3 H22o.
3H22 -+ Propionato 0

En presencia de sulfatos, las BSR

BSRson
son capaces de acoplar la oxidación de
compuestos orgánicos e hidrógeno a la sulfato reducción, compitiendo con las
bacterias metanogénicas por sustratos comunes, generando la inhibición de las
bacterias acetoclásticas por la producción de HzS.
H2S. Los ácidos grasos como el
CO2 por las BSR, o
propionato, y el butirato son oxidados completamente hasta COzpor
parcialmente hasta acetato. Compuestos como el etanol, otros alcoholes, lactato,
malato y compuestos aromáticos pueden ser degradados completa o parcialmen-
te. La siguientes reacciones ilustran la capacidad de las BSRde acoplar la oxida-
ción de ciertos sustratos a la sulfato reducción (Oude Elferink et a/. 1994; Gibson,
el al.
1990; Widdel and Hansen, 1992).

4H 2 + SO 4-2
-2 + H+--+HS-
H+ -+ HS- + 4H 2 °
4Formato + H+ + S04-22 --+
-+ 4HCO
4HC03-j- + HS-
Acetato-+ S04-22 -+ HCO3-j-
2 HC0 + HS-
Propionato-
Propionato: + %S04-22
3hS04- -+ Acetato- + HCO-3++ j
%HS-
3hHS- + 1/¡H+
J/.¡H+
 MICROBIOLOGfA
MICROBIOLOGIA DE LA
LA DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA [67]
[67]

+ 1/2S04-
Blltirato-
B1ilirato- 1/2S04-2z --+ 2 Acetato- 112 HS- + 1/2H+
Acetato: + 112
Lactato- + 112 Z Acetato- + HC03-
0 S04-2--+Acetalo-
-.
3
- + 'l? H - + 112
0 HS- 'l? H+
Etanol + 112
1/2 S04- Z
S04-2 --+-. Acetato- + 112 S- + 112 H + + H zO
0 H S- 20
z
Glucosa + S04-2 -+ H + 2Acetato + 2CO 2C02z + HS- + 4HzÜ
4HzD

Moléculas Poliméricas
Moléculas Poliméricas

Proteínas, carbohidratos,
Proteínas, carbohidratos, Iípidos,
lípidos, ácidos
ácidos nucleicos
nucleicos

j Hidrólisis
Hidrólisis

Productos de
Productos de bajo
bajo peso
peso molecular
molecular

so;
so; Amino ácidos,
Amino ácidos, azucares,
azucares, ácidos
ácidos grasos,
grasos, etc
etc

j
s' Intermediarios de
Intermediarios de fermentación
fermentación

Alcoholes, lactato,
Alcoholes, lactato, piruvato,
piruvato, succinato
succinato

so; ~~
SO; BSR
BSR

S'
S~ --1
-1 Fermentación
Fermentación

Acidos grasos
Acidos grasos volátiles
volátiles

Acetato, propionato,
Acetato, propionato, butirato
butirato co,
CO, H,
H,

Acetogénesis
Acetogénesis
so;~
so.'~ BSR
BSR
S'
S'

o.' =iAcetato BM
BM
Metanogénesis
Metanogénesis
~~mro BSR
so/--..,
BM
BM BSR BSR
BSR S' _/
~ S'

CH, co,
CO, s" CH,

Fuente:
Fuente: Gibson.
Gibson. 1990
1990

Figura 3.10.
Figura 3.10. Interrelaciones entre
Interrelaciones entre las
las B5R
BSRdurante la degradación
durante la degradación de
de la
la materia
materia orgánica.
orgánica.
[68] DIGESTiÓN ANAEROBIA

Oude Elferink et
De acuerdo con Dude el a/.
al. (1994), durante el tratamiento
anaerobio de aguas residuales, la sulfato reducción puede interferir con la
metanogénesis, generando en los reactores problemas como:
1. Competencia por sustratos comunes y la consecuente disminución en la pro-
ducción de metano, entre BSRy bacterias metanogénicas.
2. Inhibición de varios grupos bacterianos por la presencia de H22S.
e --...
3. Toxicidad generada por el H22S, malos olores, corrosión en las calderas y los
motores operados con biogas
La forma tóxica del H22S es la forma no disociada lo que facilita su paso a
través de la membrana celular. Pequeñas variaciones de pH en los digestores,
pueden causar inhibición del proceso. Se ha recomendado para disminuir la toxi-
cidad generada por el H22S las siguientes estrategias (Tanaka y Lee, 1997; Hulshoff
Pol,1996):
Poi, 1996):
• Diluir el afluente con aguas residuales que no contengan sulfato.
• Adicionar metales como el hierro para remover el H22S por precipitación.
• Implementar sistemas de fases separadas de manera que la sulfato reducción
se limite al reactor acidogénico.
• Incrementar el pH para obtener una forma menos tóxica del H22S.
• Oxidar biológicamente el H22S hasta sulfuro elemental.

H+
H+ + HS-
H --H
-- 2SHzS olor
atar pH < 7.0
H S HS- + H+
HzS-HS-+H+
2
inodoropH > 8.
8. O
O

A pesar de los problemas que ocasiona la sulfato reducción al interior de

los reactores, esta reacción puede presentar algunas ventajas (Oude et
(Dude Elferink el
al., et al.,
a/., 1994; Dvorak el 1992):
a/., 1992):
1. Contribuye a mantener un bajo potencial de óxido-reducción al interior de los
reactores.
2. Constituye un método biotecnológico para la remoción de sulfato.
3. Los complejos Metal-S-
Metal-S 22 tienen baja solubilidad, propiedad que puede ser uti-
lizada para la precipitación de metales pesados como Co, Ni, Pb yY Zn.
 M I e Ro BIDI o L
B LOo G f A
A oE LA o IG ES I 6 N
S T IÓN A NA ERo B IA [6S

B5R - bacterias acetogénicas

Interrelación entre las BSR-
(BA) y las bacterias metanogénicas (BM)
(BM)

EN PRESENCIA
EN PRESENCIA SULFATO
DE SULFATO
•
Las bacterias sulfato reductoras compiten con las bacterias metanogénicas
(BM) por sustratos comunes como; formato e hidrógeno, con las bacterias
(-BA) por componentes como propionato y butirato (Lovley, et
acetogénicas -(BA)
al.
a/. 1982). Esto no significa que la metanogénesis y la sulfato reducción sean
excluyentes, pues pueden ocurrir simultáneamente cuando el metano se ge-
nera a partir del metanol y/o aminas metiladas, sustratos por los cuales las
BSR tienen poca afinidad.
La relación DQO/sulfato en las aguas residuales es un indicador de la
cantidad de materia orgánica que puede ser degradada vía sulfato reduc-
ción. En teoría todo el material orgánico puede ser degradado vía sulfato
reducción, si la relación DQO/sulfato es menor de 0.66. Si por lo contrario, la
relación DQO/sulfato es mayor de este valor, las BSR compiten con las bacte-
rias metanogénicas y acetogénicas por los sustratos disponibles, además de
otras sulfato reductoras por el sulfato disponible. Se ha estimado que la con-
centración de H2S al interior del reactor, no debe exceder de 150mg/L, para
HzSal
que el proceso metanogénico sea eficiente (Harada et al., 1994; Oude Elferink
etal.,1994).
et sl., 1994).
En general, los reactores anaerobios operan a valores umbrales para el
consumo de hidrógeno por la población metanogénica. Sin embargo, el valor umbral
de las BSRes más bajo, por lo que en presencia de sulfato el hidrógeno es consumi-
do principalmente por las BSR. Esta población tiene ventajas cinéticas frente a las
al., 1982).
BM que favorecen su proliferación al interior de los reactores (Lovley et sl, 1982).
[70] o I G E S T 1
1 I 6 N
Ó A N A E R O B 1
I A

Tabla 3.3.
Tabla 3.3. Parámetros cinéticos
Parámetros cinéticos de
de crecimiento
crecimiento entre las bacterias
entre metanogénicas y sulfato
bacterias metanogénicas sulfato
reductoras consumidoras
reductoras consumidoras dede hidrógeno
hidrógeno en
en presencia
presencia dede sulfato.
sulfato.

Microorganismo
Microorganismo Ks
Ks v.:
V
"'"
Rendimiento
Rendimiento Km
Km V....
V••••
(¡!M)
(11M) (dias"
(días·' ) (g/mol H,)
(g/moIH,) (¡!M)
(11M) (¡!mollmin.g)
(Ilmol/min.g)

Desulfovibrio desulfuricans
Desulfovibrio desulfuricans 2.4 -4.2
2.4 -4.2 1.2-1.6
1.2-1.6 1.4 -2.0
1.4 -2.0 1.1
1.1
cepa G11
cepa Gll

Melhanospirillum hungatei
Methanospirillum hungatei 5.8 - 7.3
5.8 7.3 1.2 -1.8
1.2 -1.8 0.3 - 0.5
0.3 0.5 5.0
5.0
Tomado de
Tomado de Harada
Harada el
el el,
al, 1994
1994

La población de bacterias metanogénicas acetoclásticas (BMA), predomi-

nan en reactores anaerobios cuando la concentración de sulfato es baja al interior
del reactor debido a que las BSRacetoclásticas compiten con las otras BSRpor el
acetato, Por otra parte, el
sulfato disponible y con las BM acetoclásticas por el acetato.
acetato es el sustrato menos utilizado por las BSRcomparado con el propionato,
butirato y el hidrógeno. Sin embargo, factores como tiempos de retención celular
cortos favorecen el crecimiento de la población BSRacetoclástica ya que la velo-
cidad de crecimiento es mucho más alta,alta. Para Desu/fotomacu/um acetoxidans se
ha reportado tJ.
f...l max entre 0.65 y 1,39
max
días-l , mientras para Methanosaeta
1.39 días':'
soehngenii las tasas de crecimiento oscilan entre 0,08
0.08 y 0.29 días-t.
días-l. Otros
parámetros como afinidad por el sustrato, la capacidad de utilizar otros sustratos
BMAen
y la temperatura también influyen en la competencia entre BSRAy BMA en presen-
cia de sulfato (Jetten et el,
a/., 1992; Visser et sl,
a/., 1993),
1993).
En reactores anaerobios con alta concentración de sulfato, las bacterias
sulfato reductoras también compiten con las bacterias acetogénicas (BA) por
sustratos como propionato y butirato, por lo que la relación sintrófica entre las BM
y BA para la oxidación de estos compuestos, son superadas por las BSR.

EN AUSENCIA DE SULFATO

En ausencia de sulfato, las BSR puede constituir el 15% del total de la biomasa
presente en el reactor, Bajo estas condiciones fermentan sustratos como: piruvato,
lactato, etanol, fructosa, propanol y acetato entre otros, y crecen como organis-
acetogenicos. Se ha reportado la degradación del formato mediante la rela-
mos acetoqenicos,
ción sintrófica de Desu/fovibrio
Desu/fovibrio vulgaris
vulgaris y Methanobacterium
Methanobacterium brysnti:
bryantti: Las BSR
 M I e RO B I o L
MICROBIOLOGIA o G lA DE
DEL LAA DIGESTiÓN
DI G E S T IÓN NA ERo BIA
ANAEROBIA
A [71]

mantienen una presión parcial de hidrógeno (1-2 Pa) por debajo de la requerida
para que se de la transferencia interespecífica de electrones con
can la población
metanogénica (3-10 Palo Esta diferencia, podría estar mostrando que la veloci-
veloci-
dad de crecimiento de las BA dependerá del organismo consumidor de hidrógeno.
Es por ello, que en algunos estudios se reportan tasas de crecimiento máximo
para las BA consumidoras del propionato y butirato en co-cultivo con BM de 0.10
dias',I, mientras en co-cultivo
Y 0.19 días- ca-cultivo con BSR es de 0.19 y 0.31 dias-
días'1 •. Esto
estaría sugiriendo que la utilización del propionato y butirato por las BSR, está
más relacionada con la presión parcial de hidrógeno, que con la capacidad de
esta población para utilizar estos sustratos. El crecimiento de BSRcon butirato en
ausencia de sulfato, no ha sido demostrado. Sin embargo Desu/fovibrio sp ha sido
aislado en
en reactores con altas concentraciones
concentraciones de butirato yy en
en ausencia de sulfato
(Mclnerney eta!., Bryant eta!.,
el a/., 1981; Bryant el a/., 1977; Stams,
Stams, 1994).
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 capítulo
capítulo

cuatro
cuatro

PUESTA EN
PUESTA MARCHA Yy
EN MARCHA

OPERACiÓN
OPERACiÓN DE
DE

REACTORES
REACTORES

ANAEROBIOS
ANAEROBIOS
 ANAEROBIOS:
REACTORES ANAEROBIOS: ¿CAJA
¿CAJA
MICROBIANO?
NEGRA O ECOSISTEMA MICROBIANO?

Los INGENIEROS
Los INGENIEROSGENERALMENTEUTILIZAN EL PROCESO
GENERALMENTE UTILIZAN EL PROCESODE DIGESTIQNANAEROBIA
DE DIGESTIQN PARTIENDODE
ANAEROBIA PARTIENDO DE

PRINCIPIOSBÁSICOS,
PRINCIPIOS CONTROLANDOyY OPERANDO
BÁSICOS, CONTROLANDO OPERANDO EL
EL PROCESO
PROCESOEN LA PRÁCTICA
EN LA pRÁalCA COMO
COMO UNA
UNA CAJA
CAJA
negra, en la cual se conocen las entradas: el caudal de agua residual y su carga
'orgánica, así como la existencia o no de sustancias tóxicas en concentraciones apre-
ciables, El seguimiento de las salidas del sistema de tratamiento se desarrolla a
ciables.
través del monitoreo de la calidad del efluente líquido y de la cantidad y calidad del
gaseoso, No obstante, al no disponer de un conocimiento detallado de
efluente gaseoso.
biológicos que ocurren dentro de los reactores, los ingenieros se
los procesos biológicos
el principio experimental de
guían fundamentalmente por el de ensayo yy error.
error, En este
campo existen
campo existen numerosos
numerosos trabajos que
que presentan
presentan metodologías
metodologías para
para el arranque
yy operación
operación de
de los
los sistemas
sistemas anaerobios,
anaerobios, las
las cuales
cuales se
se basan
basan fundamentalmente en
en
el seguimiento
el seguimiento de
de los
los parámetros
parámetros de
de operación
operación yy en
en el
el aumento
aumento paulatino
paulatino de
de la
la
carga,
carga, dependiendo
dependiendo de
de la
la "salud"
"salud" del
del sistema.
sistema,
De otro
De otro lado,
lado, microbiólogos
microbiólogos yy biólogos
biólogos se
se centran
centran en
en el
el estudio
estudio de
de las
las
poblaciones
poblaciones microbiológicas
microbiológicas existentes
existentes yy en
en el
el tipo
tipo de
de relaciones
relaciones que
que se
se estable-
estable-
cen entre
cen entre ellas,
ellas, aislándolas
aislándolas yy clasificándolas
clasificándolas con
con procedimientos
procedimientos que
que suelen
suelen de-
de-
morar días
morar días yy aún
aún meses.
meses, Se
Se estudian
estudian así
así mismo,
mismo, los
los fenómenos
fenómenos de
de competencia
competencia
por elel sustrato,
por sustrato, los
los procesos
procesos bioquímicos
bioquímicos yy en
en general
general se
se realiza
realiza lala evaluación
evaluación
cuidadosa
cuidadosa de
de las
las principales
principales relaciones
relaciones yy sucesos
sucesos que
que ocurren
ocurren dentro
dentro del
del proceso
proceso
de
de lala digestión
digestión anaerobia.
anaerobia,
Ambos enfoques,
Ambos enfoques, elel de
de lala ingeniería
ingeniería de
de orden
orden eminentemente
eminentemente pragmático
pragmático
yy práctico,
práctico, yy elel microbiológico
microbiológico poseedor
poseedor de
de una
una mirada
mirada más
más científica
científica yy analítica,
analítica,
deben complementarse
deben complementarse procurando
procurando un
un entendimiento
entendimiento integral
integral del
del proceso.
proceso, El
El
trabajo mancomunado
trabajo mancomunado debería
debería centrarse
centrarse en
en lala búsqueda
búsqueda de
de soluciones
soluciones para
para los
los
principales problemas
principales problemas de
de lalatecnología
tecnología anaerobia,
anaerobia, como
como son:
son: elel control
control de
de olores,
olores,
lalaoptimización
optimización de
de lalaetapa
etapa de
de arranque,
arranque, lala identificación
identificación yy manejo
manejo de
de sobrecar-
sobrecar-
gas,elelarrastre
gas, arrastre de
de sólidos
sólidos yylalavalorización
valorización de
desubproductos.
subproductos, Se
Sepone
pone entonces,
entonces, alal
[78] o I 6 N
I G E S T IÓN A N A E R O 8B I A

conformación de grupos interdisciplinarios

orden del día, la conformación estudien y expe-
interdisciplinarios que estudien
tecnología anaerobia,
rimenten con la tecnología anaerobia, avanzando de una manera más integral en
el conocimiento
conocimiento teórico yy práctico de la misma, y en su aplicación a nuestra reali-
dad, mediante un enfoque interdisciplinario
interdisciplinario (Figura 4.1).

Alluente
Afluente Efluente
Efluente

enfoque ingenierif
enfoque ingenieril II enfoque microbiológico
enfoque microbiológico

? /
/
mmm

Figura4.1.
Figura 4.1. Integración
Integraciónde
de los
losenfoques
enfoquesingenieril
ingenieril yy microbiológico
microbiológico en
en los
los
reactores anaerobios.
reactores anaerobios.

Reconociendo los
Reconociendo los vacíos
vacíos que
que existen
existen actualmente
actualmente en
en Colombia
Colombia respecto
respecto aa las
las
metodologías paraelelestudiode
metodologíaspara estudio deladigestiónanaerobia,en
la digestión anaerobia, eneste
estecapítulose
capítulo seconsideraránlos
considerarán los
aspectos críticosenlalaimplementaciónde
aspectoscríticosen implementación deestatecnología,buscandouna
esta tecnología, buscando unamayor
mayorintegración
integración
entrelos
entre lossaberes
saberesmicrobiológicoe
microbiológico eingenieril.
inqenieril
ElEl uso
uso de
de lala tecnología
tecnología implica
implica dos
dos etapas
etapas fundamentales:
fundamentales: elel arranque
arranque oo
puesta en
puesta en marcha
marcha del
del sistema
sistema yy lala operación
operación del
del mismo
mismo (Tabla
(Tabla 4.1).
4.1). En
En ambas
ambas
etapas lala microbiología
etapas microbiología juega
juega un
un papel
papel fundamental,
fundamental, aportando
aportando elementos
elementos que
que
permiten explicar
permiten explicar las
las respuestas
respuestas del
del sistema,
sistema, evaluar
evaluar lalasalud
salud del
del reactor,
reactor, planifi-
planifi-
car elel esquema
car esquema de
de trabajo
trabajo y,y,en
en general,
general, obtener
obtener información
información de
de los
los fenómenos
fenómenos
microbiológicos que
microbiológicos que ocurren
ocurren en
enelelsistema.
sistema.
 PU EST A EN M A R e H A Y o PERAe I6 N oE REA eTo RES A NA ER oBIos [79]
[79]

Tabla 4.1. Caracterización

Tabla4.1. Caracterizacióndel del residuo
residuo y dede los lodos anaerobios desde
los lodosanaerobios el diseño
desde el del
diseño del
reactor hasta
reactor hasta la fase de
la fase de estudios
estudiosde de mejoramientode
mejoramiento de lodos
lodos

Fase
Fase
DISEÑO
DISEÑO ARRANQUE
ARRANQUE OPERACiÓN
OPERACiÓN MEJORAMIENTO
MEJORAMIENTO
Componente
Componente

• Contenido
Contenido Remoción de DDO
• Remoción DaD • Remoción DDO
Remoción de DaD
RESIDUO
RESIDUO de nutrientes
nutrientes
• AGV efluente • AGV efluente
efluente
·DDO
• DaD
Alcalinidad y pH
• Alcalinidad • Alcalinidad
Alcalinidad y pH
• Biodegradabilidad
Biodegradabilidad efluente efluente
efluente

• Toxicidad
Toxicidad Producción de
• Producción • Producción
Producción de
biogas
biogas biogas

• Drigen
Origen del lodo • Actividad
Actividad Actividad
• Actividad • Actividad
Actividad
INÓCULO O
INÓCULO O
metanogénica
metanogénica metanogénica
metanogénica metanogénica
metanogénica
LODO
LODO Actividad
• Actividad
metanogénica
metanogénica • Sedimentabilidad
Sedimentabilidad Sedimentabilidad
• Sedimentabilidad Sedimentabilidad
• Sedimentabilidad

• Sedimentabilidad
Sedimentabilidad Relación SSV/SST
• Relación SSV/SST • Relación
Relación SSV/SST
SSV/SST Relación SSV/SST
• Relación SSV/SST

Relación SSV/SST
• Relación SSV/SST • Composición
Composición • Composición
Composición • Composición
Composición
bacterial (NMP)
bacterial (NMP)
• Composición
Composición bacterial (NMP)
bacterial bacterial (NMP)
bacterial (NMP)

bacterial (NMP) • Aislamiento

Aislamiento

• Indice de
diversidad de
diversidad
especies.
especies.

Lo anterior se logra estudiando y caracterizando el lodo en las dife-

rentes etapas: antes del arranque como inóculo potencial, durante el proceso
de arranque para evaluar la evolución del lodo y durante la etapa de opera-
ción para realizar el seguimiento de la calidad de éste. Es obvio qu'e
qu·e la infor-
mación sobre las características microbiológicas del lodo es de gran ayuda
para el ingeniero en la toma de decisiones frente a las dos variables de ope-
ración como la carga hidráulica y la carga orgánica.
[80]
[80] DD II GG EE SS TT I 6 N
IÓN AA NN AA EE RR O
O BB II AA

ETAPA DE
ETAPA DE PUESTA EN
EN MARCHA O
O
DEL REACTOR
ARRANQUE DEL

Es
Es el
el período
período de
de tiempo
tiempo durante
durante el
el cual
cual la
la biomasa
biomasa anaerobia
anaerobia se
se adapta
adapta aa la
la
cantidad
cantidad yy calidad
calidad de
de las
las aguas
aguas residuales
residuales que
que debe
debe tratar;
tratar; en
en dicho
dicho período
período
generalmente
generalmente el
el sistema
sistema de
de tratamiento
tratamiento se alimenta
alimenta con
con caudales
caudales menores
menores al
al de
de
diseño
diseño y la
la eficiencia
eficiencia de
de remoción
remoción de
de materia
materia orgánica aumenta
aumenta lentamente hasta
hasta
proyectados. Por
alcanzar los valores proyectados. Por lo
lo tanto,
tanto, es una
una etapa
etapa inestable yy crítica
crítica
cuya duración puede
puede oscilar entre un mes
mes yy un año
año oo más, dependiendo del inóculo,
inóculo,
las características
características del
del agua
agua residual y de
de la estrategia
estrategia de
de arranque
arranque utilizada. La
duración de la
la etapa de
de arranque está
está definida, según
según Van
Van Haandel y Lettinga
Lettinga
tiempo necesario para
(1994), por el período de tiempo para obtener
obtener una calidad constante
constante
del efluente y una masa de lodo que no varía cualitativamente con el tiempo.
La mayoría de los autores identifican el final del proceso de arranque en lo
que respecta a la biomasa,con la aparición del fenómeno de granulación y/o la forma-
ción de una biopelícula o floc estable (Weiminel
(Weimin et al.,
a/., 1986; Lane, 1986; Francese
Franceseyy
Siñeriz, 1990, 1994; Camposy Anderson, 1991; Weilandy Rozzi, 1991).
Se han podido definir tres etapas en el proceso de arranque de las unida-
des anaerobias (Lettinga el
et al., 1980):
Adaptación primaria y crecimiento de bacterias degradadoras de los ácidos
acético y propiónico.
Formación de una biomasa anaerobia metanogénica activa.
Formación de un lodo granular, si las condiciones del sustrato lo permiten.

etapa de arranque
Enfoques utilizados en la etapa arranque
AUMENTO
AUMENTO LENTO
LENTO DE
DE LA
LA CARGA
CARGA ORGÁNICA
ORGÁNICA

El enfoque tradicional de arranque de los reactores anaerobios se fundamenta en

una estrategia de aumento lento de la carga orgánica, siempre y cuando la 'salud'
del reactor lo permita; se inicia el arranque con cargas orgánicas bajas, las cuales
 P U E S T A E N M A R e HA
H A Y
Y o PE
P E R A
R A eCiÓI 6 NN oD EE R
R E
E A
A e T o RR EE SS A
A N
N A
A E
E R
R o B o
B IlOS s [81]
[81 ]

se incrementan cuando se alcanzan eficiencias de remoción de la materia orgá-

nica entre 60 y 80% Y el reactor presenta estabilidad en dichas remociones.
Este enfoque produce generalmente períodos de arranque largos, del orden de
varios meses; con el fin de reducirlos, se han desarrollado otros enfoques los
cuales se presentan a continuación.

ALTA PRESiÓN SELECTIVA

•
Se utiliza fundamentalmente para reactores de flujo ascendente y manto de lodos
(UASB). La velocidad ascensional conseguida funciona como factor de selección
del lodo: inicialmente se presenta el lavado del lodo floculento y disperso con
bajas actividades metanogénicas y, por lo tanto, en virtud de este fenómeno de
selección, suele aparecer el lodo granular (Hulshoff-Pol, 1989). La velocidad
ascensional está controlada por dos parámetros de operación: la carga hidráuli-
ca, relacionada directamente con la velocidad ascensional del líquido, y la carga
orgánica que regula la producción de biogas; al ascender, el gas aumenta la tur-
bulencia y, por lo tanto, la presión selectiva sobre las partículas de lodo.

ADICiÓN DE ELEMENTOS Y SUSTANCIAS QUE AUMENTAN

LA ADHESiÓN BACTERIAL

Esta estrategia consiste en agregar al reactor, a través del sustrato, elementos y sus-
tancias que incrementen la adhesión bacterial.Se
incrementenla bacteria!.Se ha probado, entre otros compuestos,
la adición de Ca++ y de polielectrolitos; se reportan valores de Ca++ de 100 mg/I-l con
un efecto positivo sobre la adherencia (Mahoney, 1987; Hulshoff-Pol, 1989).
Por su parte, el uso de polielectrolitos mejora las condiciones de forma-
ción de gránulos, incrementando su tamaño (Cail y Barford, 1985). Los
polielectrolitos pueden ser útiles cuando el arranque se realiza con lodos pobre-
mente aclimatados o para residuos concentrados que dificultan la utilización de
cargas hidráulicas altas buscando la granulación; la adición de polímeros catiónicos
en presencia de carbón activado, como soporte inicial del gránulo, se ha reporta-
do como una combinación exitosa para conseguir la granulación (Wirtz y Dague,
1996). También se ha reportado la adición de suerosa
sucrosa en proporción de 0.1 %
(masa/volumen) como estímulo para la formación de gránulos (Tay y Yan,
Van, 1996).
[82]
[82] o I 6 N
I G E S T IÓN A N A E R
ROO 8
B I A

FENÓMENO
FENÓMENO DE GRANULACiÓN
GRANULACiÓN

El fenómeno de formación de biomasa con buenas características de sedimenta-

ción, preferiblemente bajo la forma de agregados en granos, se denomina 'granu-
lación' y es resultado de varios procesos físicos, químicos y biológicos. El tiempo
necesario para que el fenómeno de granulación tenga lugar dependerá, entre
otras cosas, del tipo de agua residual, del lodo utilizado como semilla, la disponi-
bilidad de nutrientes esenciales y las condiciones de operación del sistema.
El conocimiento de la composición microbiológica del lodo y el papel de las
especies en la adhesión ha sido de gran utilidad para el cabal entendimiento de la
manera como los consorcios microbiológicos trabajan, así como de los factores
que contribuyen a la formación del gránulo (Wu et a/.,
a/., 1992; Dolfing, 1985;
Grotenhuis et a/., 1991).
El proceso de granulación se inicia cuando las bacterias se adhieren a los
precipitados inorgánicos o a las matrices formadas por las bacterias filamentosas.
En ambos casos los polímeros extracelulares excretados por los microorganismos
contribuyen a dar firmeza a la adherencia. Los conglomerados que se forman son
de tres tipos (Tay y Van,
Yan, 1996; Wentzel y Moosbrugger, 1995):
• Flocs: conglomerados con estructura suelta.
• Pellets: conglomerados con estructuras bien definidas que sedimentan rá-
pidamente. '.
<,

•
-
Gránulos: son pellets con apariencia granular y alta sedimentación.
Los principales factores que influyen en la granulación del lodo son
(Weigant et a/., 1986; Hulshoff-Pol, 1989): el tipo y concentración del lodo semilla;
las concentraciones de cationes bivalentes; la producción de sustancias poliméricas
extracelulares; el efecto hidráulico denominado 'presión selectiva'; la concentra-
ción del sustrato.
La formación de agregados celulares tiene las siguientes ventajas (Hulshoff-
Poi et a/.,
a/., 1986):
1986):
a. Conduce al ordenamiento de poblaciones heterogéneas de microorganismos
sintróficos en forma de asociaciones multicelulares, bajo condiciones fisiológi-
cas favorables.
[84] o I G E S T IÓN
1 A N A E R O 8 I A
B 1

CAPA CENTRAL
CAPACENmAL
• BACTERIAS METANOGÉNICA
BACTERIASMETANOGÉNICA
Meth8Jlosaetasp.
Methanosaeta sp.

CAPA EXTERNA
CAPA EXTERNA
ACIDÓGENOS y BACTERIAS
ACIDÓGENOS BACTERIAS
CONSUMIDORAS
CONSUMIDORAS DE
DE HIDRÓGENO
HIDRÓGENO

CAPA MEDIA
CAPA MEDIA
BACTERIAS ACIDOGÉNICAS
BACTERIASACIDOGÉNICAS
BACTERIASMETANOGÉNICAS
BACTERIAS METANOGÉNICAS

Tomado Fang, 1995.

lomado de Fang, 1995.

Figura
Figura 4.2.
4.2. Estructura
Estructura y composición
composición bacterial de los
bacterial de los gránulos que tratan
gránulos que tratan
carbohidratos
carbohidratos solubles.
solubles.

ETAPA DE OPERACiÓN
ETAPA OPERACiÓN

La operación
operación rutinaria del sistema se inicia una vez superada la etapa de arran-
que, cuando se alcanzan las condiciones de diseño de carga orgánica e hidráulica
y la eficiencia de remoción de materia orgánica proyectada. En esta etapa se
espera que el reactor funcione en condiciones
condiciones de estado estacionario
estacionario o estable,
en el cual las variables de salida del sistema se mantienen relativamente
relativamente constan-
tes a pesar de las variaciones
variaciones temporales
temporales en cantidad y calidad del afluente.
La carga hidráulica aplicada sobre un sistema de tratamiento
tratamiento de aguas
residuales se define como la relación entre el caudal del afluente y el volumen útil
del sistema; por lo tanto, la carga hidráulica es igual al inverso del tiempo de
retención hidráulico.
hidráulico.
El tiempo de retención hidráulico es el tiempo promedio de permanencia
permanencia
del líquido en el reactor, el cual se define mediante la sigiente relación:
 P U E S T A E N M A R
Re e H A Y oo P E R A CiÓ
e I 6 N
N o EE
o RE
R E A
A e TT oo RR EE SS AA N
e N A Ro
A EE R o B
B lOS
lOS [85]

Lh = Qa/Vr = l/Trh (1)

(1)
Donde,
Donde,
Lh = Carga hidráulica
Qa = Caudal del afluente
aflt¡,ente
Vr = Vol1m¡mútiL
Volumen útil del
de! reactor
Trh = Tiempo de retención hidráulico.

Por carga orgánica volumétrica se entiende la relación entre la masa de

material orgánico aplicada por unidad de tiempo y por unidad de volumen del
reactor, y se define así:

Lo = (Qa '.•.Ca)/Vr
*' Ca)/Vr = Ca/Trh
Ca/1M (2)
Donde,
Donde,
Lo = Carga orgánica
= Concentración
Ca = de DQO del afluente.
Concentraciónde

De otro lado, se define también la carga orgánica másica como la relación

entre la masa de material orgánico aplicada por unidad de biomasa presente en el
reactor y por unidad de tiempo:

Lm = (Qa '.•.Ca)/Mvl
*' Ca)/MvL (3)
Donde,
Donde,
Lm = Carga orgánica másico
másica
MvL = Biomasa presente en el reactor:
Mvl reactor.

Factores que influyen el arranque y la operación

de los reactores anaerobios

El arranque y operación de un reactor son procesos complejos que involucran

simultáneamente los siguientes factores relacionados (Figura 4.3):

Factores relacionados con el diseño y operación del reactor.

Factores ambientales (temperatura, pH, nutrientes).
Factores relacionados con la calidad y cantidad de la biomasa.
Factores relacionados con las características del residuo.
[86]
[86] D,GEST'ÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

RESIDUO
RESIDUO
Compoalclón
Composición
eonc ••.•lnlclón
Concentración
OegrlldM>lllded
Degr ..... Ud.d

A'IIBIENTE INÓCULO
T""'peralur. Cenlkllld
NUlrlenlH ActIvIdItd
Toxlcld.d Adapl8clón
pH

OPERACiÓN REACTOR
Carg. orgánica Geomeln.
Carga hldrliullc. T.m.ño

Figura 4.3.
Figura 4.3. Factores que
Factores que afectan
afectan el arranque operación de los
arranque y la operación los
reactores
reactores anaerobios.
anaerobios.

FACTORES RELACIONADOS CON EL DISEÑO Y LA OPERACiÓN

El diseño y operación de un reactor anaerobio debe asegurar las siguientes con-

diciones (Monroy, 1997):
• Retención de lodos viables dentro del reador.
reactor. Mientras mayor sea la concen-
tración de células activas retenidas (sedimentadas o adheridas), mayor será la
carga orgánica que podrá tratar. La capacidad que puede tener un reactor
para retener biomasa bajo diversas condiciones y el sistema de separación
gas-sólido-Iíquido son los fadores
factores claves en el diseño y operación de reacto-
res anaerobios.
• Contado
Contacto entre el lodo y el sustrato. El tiempo de retención hidráulica (TRH) debe
Eltiempo
ser suficiente para permitir un estrecho contado
contacto entre los reactantes.
reactantes, Si se tiene
en cuenta la baja velocidad de crecimiento de las bacterias
baderias metanogénicas, y
además que el 90% de la energía que utiliza esta población es para la produc-
ción de metano y sólo el1 0% para síntesis celular, el tiempo que se requiere para
celular,el
 PUESTA
PU E5TA ENN
E M A Re H A
MARCHA Y o P E R A CiÓ
OPERACiÓN N DE
D E R E A e T o RES
REACTORES A N A ERo B I
ANAEROBIOS o5 [8~
[8~

formar una biomasa activa implica que el tiempo de residencia del lodo con el
agua se debe incrementar. El contacto lodo-agua residual es efectivo solamente
si el lodo está localizado en la parte principal del reactor.
Un problema común es que algunos lodos pueden flotar en la superficie del
reactor; entonces, el lodo que flota no se pone en contacto con el agua resi-
dual y hay una alta posibilidad que el lodo que flota saldrá del reactor. Varias
condiciones pueden asociarse con la flotación de la biomasa: presencia de
biomasa ligeramente filamentosa (que puede entrapar el biogas); presencia
de sustancias grasas en el lodo las cuales absorben el biogas; presencia de
proteínas en el agua residual; contacto inadecuado entre la biomasa y el agua
residual debido a deficiencias en el sistema de alimentación.
• Velocidades
o de reacción. Es decir que los productos puedan salir fácilmente del
Velocidadesde
agregado, que los subproductos puedan transferirse inmediatamente entre las
especies bacterianas y que los sustratos se encuentren a concentraciones ade-
cuadas frente a dichas especies. La difusión del sustrato hacia el microambiente
que rodea las bacterias está limitada por la velocidad de difusión del sustrato en
el manto de lodo y en el lodo granular (Field, 1987) (Figura 4.4).

+ + + + +
••••
•••••
••••••
t
Difusión an
en el gránulo
••••• Difusión ah
en el menlo
manto de lodo

Figura
Figura 4.4.
4.4. Difusión de
Difusión de las
las partículas
particulas de
de lodo.
lodo.

• Transferencia de masa. El tamaño de las biopartículas o biopelículas debe per-

o

mitir el fácil acceso de los organismos al sustrato.

• Tiempo de retención de sólidos. Un tiempo de retención de los sólidos alto en
o

el reactor contribuirá a una mayor adaptación de los lodos al afluente, lo que

favorece la estabilidad de la biomasa.
[88]
[88] oD 6 N
I G E S T IIÓN A N A E R O 8
B I A

FACTORES
FACTORES AMBI ENTALES
AMBI ENTALES

Entre los factores ambientales que afecta la operación de un biorreactor anaerol

se encuentran el tipo de sustrato, la temperatura de operación, los nutrient
disponibles, el pH, la relación alcalinidad/ácidos grasos volátiles (AGV) y
toxicidad anaerobia.
TIpo
Tipo DE SUSTRATO. El tipo de sustrato determina la comunidad trófi.
DE SUSTRATO. trófi,
que se desarrolla. En ecosistemas complejos como el de un digestor anaerobio,
tamaño de cada grupo de organismos deberá ser proporcional al flujo de ~
correspondiente sustrato en el sistema y la prevalencia de una u otra rui
rul
metabólica está determinada por el acoplamiento entre la velocidad de produ
produ(
ción y la capacidad de asimilación del mismo. Si las diferencias entre el contenid
de OQO
DQO y OBOs
DBOs son grandes, indica que existe una alta proporción de componer
tes no biodegradables. Cuando la OQOso
DQOBD está compuesta por sustratos fácilment
biodegradables, tales como azúcar o aminoácidos, la etapa limitante en la diges
tión anaerobia es la metanogénesis, porque las bacterias fermentativas tienen leli
capacidad de acidificar el sustrato a una velocidad ocho veces más rápida compa
compa·
rada con la velocidad con que las bacterias metanogénicas consumen los ácido~'
ácidos
grasos volátiles (AGV) productos de la fermentación; como resultado, la capaci-
dad de utilización de DQO BDtotal
OQO so total de la población metanogénica en el reactor
determina la máxima carga de DQO BDque
OQO so que puede aplicarse. Si la velocidad de
carga excede la capacidad metanogénica se producirá una acumulación de AGV
en el reactor y el pH disminuirá (Zegers, 1987).
Cuandoocurren sobrecargas en el reactor puede darse lugar a dos situaciones:
• Las bacterias acetogénicas crecen rápidamente y producen grandes cantida-
des de ácido acético. Esto ocasiona una baja del pH y la liberación de hidróge-
no; sin embargo el aumento en la concentración de hidrógeno en el reactor
estimula una disminución en la producción de ácido acético, lo cual permite
que el reactor se recupere y que el metabolismo se desplace hacia la forma-
ción de ácido butírico, lo que reduce la carga sobre el sistema.
• Cuando la sobrecarga es muy alta, la concentración de hidrógeno induce la
formación de grandes cantidades de ácido propiónico y, paralelamente, el me-
 P U E ST A EN MA R eHA Y o P E R A CiÓ
eI6N DE REA eTo RES A NA ER o B 105 [89]
[89]

tabolismo y crecimiento de las bacterias acetogénicas cesa por el hidrógeno

acumulado en el sistema. Esta situación se conoce como 'sobrecarga por ácido
propiónico' y constituye un grave problema ya que su recuperación es incierta
y muy lenta (Zegers, 1987).
Por otra parte es importante conocer la composición promedia del agua
residual con respecto a:
• La presencia de compuestos tóxicos.
• La cantidad de nutrientes.
• La disponibilidad de trazas de elementos como Fe, Co y Ni.
TEMPERATURA. La mayoría de
TEMPERATURA. los digestores anaerobios operan entre 30-35°C,
por que la formación de metano a 20°C es baja. En reactores operados a 35°C se ha
observado un descenso del 50% en la actividad y crecimiento de las bacterias cuando
la temperatura disminuye en 10°(.
10°C. Por el contrario, el aumento en la temperatura
permite incrementar la producción de metano. Comparativamente, los reactores que
son operados en el intervalo termofílico (55-60°C) muestran el doble de la producción
de metano que a 35°C, lo cual disminuye el tiempo de residencia y volumen
volumen del reactor,
en contraprestación de la energía que se requiere para mantener el reactor a esta
et al.,
temperatura (Varel el al, 1977).
NUTRIENTES. Los nutrientes necesarios para el crecimiento de las bacterias
NUTRIENTES.
al interior del reactor dependen de la concentración de DQOBD del agua residual.
Aunque los requerimientos nutricionales de las bacterias durante el proceso de
degradación anaerobia son bajos, y la mayoría de las aguas residuales no presen-
tan tal deficiencia, los efluentes producidos en la fabricación de papel, almidón y
alcohol pueden ser deficientes en los micronutrientes esenciales. La adición de
nitrógeno y fósforo incrementa la eficiencia del proceso. Sin embargo, es necesa-
rio controlar la concentración de amonio en el afluente del reactor, pues aunque
éste es utilizable por las bacterias para su crecimiento, su exceso puede causar
toxicidad e inhibición de la población metanogénica (Field, 1987; Zegers, 1987).
PH. El reactor debe operar en un intervalo de pH entre 6.8 y 7.5, porque la
actividad de la población metanogénica es altamente vulnerable a los cambios de
pH comparada con las demás poblaciones presentes en el lodo. Los AGV son
tóxicos para la metanoqénesis,
metanoqénesis. solamente en la forma no ionizada. A oH
DH neutro.
[90]
[90] o
D I G E S T IÓN
ION A N A E R O
O B I A

los ácidos orgánicos están mayoritariamente (>99%) en la forma ionizada (no

tóxica). No obstante, cuando el pH disminuye, los AGV están menos disociados
(tóxicos), incluso a pH 5.0, los AGVestán disociados en un 50% aproximadamente
(Zegers, 1987).
RELACIÓN ALCALINIDAD/ÁCIDOS GRASOS
RELACIÓNALCALINIDAD/ÁCIDOS GRASOS VOLÁTILES. AGV/aicalinidad es
VOLÁTILES. La relación AGV/alcalinidad

un parámetro de utilidad para controlar la acumulación de AGV en los reactores

anaerobios: un valor de 0.2 indica una excelente capacidad buffer del sistema,
con un máximo valor de 0.4; sin embargo, en los reactores UASB,un valor de 0.35
indica acidificación. Así, esta relación es utilizada como un indicador temprano de
acidificación, comparado con los datos de pH y alcalinidad que se alteran en esta-
dos avanzados y de difícil recuperación (Rojas, 1987).
ANAEROBIA. El consorcio de microorganismos involucrados en el
TOXICIDAD ANAEROBIA.
TOXI(/DAD
proceso de digestión anaerobia de la materia orgánica, como cualquier organis-
mo vivo, no esta exento de ser inhibido por alguno de los compuestos presentes
en el agua residual. Sin embargo, dado el hecho de que las bacterias metanógenas
tienen tiempos de generación muy prolongados, la consecuencia de la introduc-
ción de sustancias tóxicas es mayor en un sistema anaerobio que en uno aerobio.
Es por esta razón que se debe conceder una especial atención a la operación de
este tipo de reactores para evitar que las sustancias tóxicas entren a los sistemas
anaerobios, por lo menos en concentraciones inhibitorias. Para tal fin es necesa-
rio conocer y entender a fondo el fenómeno de toxicidad.
El término toxicidad se refiere normalmente a la perturbación originada
por una sustancia sobre un proceso metabólico o sobre la viabilidad del organis-
mo en cuestión. En la práctica, durante el tratamiento anaerobio del agua resi-
dual, la toxicidad se observa como una reducción en la producción de metano a
consecuencia de un compuesto o una mezcla de compuestos. Cabe considerar
que la inhibición causada por determinadas sustancias puede ocurrir en cualquie-
ra de las poblaciones del consorcio bacteriano, lo que implicaría un desbalance
poblacional y, por consiguiente, una síntesis disminuida del producto final: el me-
tano. Esto implica que el efecto de un compuesto tóxico es muy complejo y no
puede asumirse solamente como la inhibición de las bacterias metanogénicas,
pues ellas dependen del metabolismo de las demás bacterias allí presentes; por
 P U E S T A E N M A R e H
H A Y o P E RR A CiÓ
eI6 N
N oE R
R EA eTo R
R ES A N
N A E R
R o B lOS
lOS [9

otra parte, la magnitud de la toxicidad es función de varios factores entre los que
se encuentran la concentración, la formación de complejos y la aclimatación,
entre otros.
De acuerdo con Lettinga (1999), se pueden distinguir tres tipos de toxicidad:
a. Toxicidad metabólica: Se refiere a la inhibición competitiva de un proceso
metabólico; al retirar la sustancia tóxica, la toxicidad es completamente reversible.
ToxicIdad fisiológica: Es la inhibición que resulta del daño sobre componentes
b. Toxicidad
subcelulares; al retirar el compuesto tóxico ocurre la recuperación, aunque de
manera tardía. Esta demora se debe al tiempo requerido para reparar los
daños ocurridos.
c. ToxiCIdadbeaendds:
badericida: Se aplica a sustancias tóxicas que causan la muerte celu-
lar; luego de su remoción, la producción de metano puede que se reanude
luego de mucho tiempo, pues se requiere que surja una nueva generación a
partir de las células viables, lo cual se ve muy limitado por los largos tiempos
de generación de las bacterias involucradas.
Existe una gran variedad de compuestos reportados como tóxicos; Lettinga
(1999) propone la siguiente clasificación en cinco clases principales:
Inhibldores típicos. Dentro de este grupo se encuentran aquellos compuestos
1. Inhib/dores
que son causa frecuente de toxicidad en la mayoría de las plantas de tratamiento
de aguas residuales. Tal es el caso de los ácidos grasos volátiles, sustratos típi-
cos de las aguas residuales, o del amonio y el sulfuro de hidrógeno, productos
finales de la digestión anaerobia que resultan de la degradación de proteínas y
de la reducción del sulfato. Estos compuestos tienen en común que su toxicidad
es dependiente del pH; esto se debe a que las especies no ionizadas de dichos
compuestos, al tener un carácter apolar, son absorbidas por la membrana celular
y alteran las funciones celulares, siendo entonces las responsables de la toxici-
dad. En la medida en que esta disociación está en función del pH, es posible
controlar hasta cierto punto el efecto de estos compuestos; así, a pH menores de
6, la fracción de ácido acético no ionizado es muy significativa, mientras que a pH 8
es sólo una traza. Por lo tanto, durante la operación del reactor es necesario man-
tener el pH en un intervalo ligeramente alcalino (7,5 - 8) de manera que no se
exceda la capacidad de carga orgánica particular del reactor.
[92]
[92] D 6 N
I G E S T IIÓN A N A E R O 8
B I A

En el caso del sulfuro, su toxicidad se debe a la forma no ionizada del sulfuro

de hidrógeno; como esta especie se incrementa a pH ácido, se estima que una
concentración
concentración de 250 mg/L causa la inhibición del 50% de la actividad
metanogénica.
rnetanoqénica. Para estimar la concentración
concentración de esta especie en el reactor se
debe tener en cuenta: la cantidad de sulfuro que se llega a producir por reduc-
ción del sulfato, la producción de biogas, pues junto con el metano también se
escapa una fracción de HzS,y
H2S, y finalmente, la ionización del sulfuro. Por su par-
te, el amonio es una fuente importante de toxicidad en aguas residuales ricas
en nitrógeno orgánico; el amoniaco, la base no ionizada del amonio, es consi-
derado como el responsable de la toxicidad, pues su concentración aumenta a
pH alcalino mientras en condiciones neutras disminuye significativamente.
significativamente,
2, Sales.
2. Sales, El agua residual de algunas industrias suele contener altas concentra-
ciones de sal. Los problemas más comunes de toxicidad se relacionan con Na+,
Na",
K+, Ca+2zy Mg+z.
K+, Ca+ Mg+2,
3, Compuestos
3. Compuestosnaturales,
naturales. En este grupo se encuentran aquellas sustancias natu-
rales que tienen efectos inhibitorios sobre las células bacterianas.
bacterianas, Este tipo de
compuestos es común encontrarlos en los efluentes de plantas de procesa-
miento de alimentos.
alimentos,
4, Contaminantes
4. Contaminantesindustriales,
industriales. Dentro de esta clase se agrupan los compuesto~
compuestos
xenobióticos que tienen generalmente un origen industrial, en algunas ocasio-
nes con una contraparte natural, pero cuya concentración en el ambiente e~
muy baja.
baja, Usualmente son muy tóxicos y ejercen fuertes efectos inhibitorios éé

muy bajas concentraciones; entre éstos se incluyen sustancias como solven·

solven
tes, pesticidas, surfactantes,
surfactantes , colorantes, organohalogenados y metales pesa·
pesa
dos, entre otros.
otros,
Los metales pesados pueden estar presentes en concentraciones considera
bies en las aguas residuales que provienen de industrias, fuentes doméstica:
yy comerciales (Hickey et al.,
(Hickey et a/., 1989; Bhattacharya etet al.,
a/., 1995).
1995), Una
Una concen
concen
tración alta de
de estos
estos metales
metales en
en los
los lodos
lodos puede conducir
conducir a la perturbaciór
perturbaciói
del proceso
proceso de estabilización del
del lodo y, por lo tanto, puede llegar
llegar aa limitar su:
opciones
opciones de
de disposición.
disposición, La
La digestión
digestión anaerobia
anaerobia es, por
por lo
lo general, el prime
proceso
proceso que
que sufre
sufre un
un deterioro
deterioro en su
su funcionamiento
funcionamiento debido aa estos
estos compues
compues
PUESTA EN MARCHA Y OPERACiÓN DE REACTORES ANAEROBIOS [93]

tos. Swandick (1969), citado por Battacharya, afirma que la inhibición por meta-
les pesados es la segunda causa, después del diseño y operación inadecuada,
relacionada con el bajo rendimiento de la digestión anaerobia y las consecuentes
fallas del proceso. Una de las principales características que distingue a los meta-
les pesados de otros compuestos tóxicos es que no son biodegradables y, por lo
tanto, se acumulanen el lodo hasta alcanzar concentraciones tóxicas (Bhattacharya
el al.,
et al., 1995). La especiación y partición de los metales es el factor que más
influyeen su potencial de toxicidad. Las investigaciones de Gouldy Genetelli (1978),
Genetelli(1978),
et al.
citados por Hickey el a/. (1989), muestran que los organismos vivos son más
sensibles a los metales iónicos libres en solución que aquellas especies del metal
unido a complejos o precipitados.
La toxicidad relacionada con los metales pesados ocurre debido a la alteración
de la estructura y las funciones de las enzimas, pues éstos se unen con de-
terminados grupos de la proteína o reemplazan los metales que ocupan nor-
malmente el grupo prostético Hickey et al. (1989). En consecuencia, cualquiera
el a/.
de las poblaciones del consorcio bacteriano son sensibles a estos elementos;
se ha reportado que los metales más tóxicos para las bacterias metanogénicas
son el cromo, el cadmio, el plomo, el zinc, el cobre y el níquel.
Los compuestos aromáticos están presentes en el ambiente en forma de deri-
vados de la lignina, los taninos, los aminoácidos fenólicos y otros componentes
aromáticos de las plantas. Así mismo, muchas actividades humanas contribu-
yen a la presencia en el medio de estos compuestos; dentro de las principales
fuentes de contaminación se encuentra la incineración de desechos, la minería
y la descarga a los cuerpos de agua de los desechos provenientes de las
industrias petroquímica, farmacéutica y productora de papel. Algunos de estos
compuestos son xenobióticos y tienden a bioacumularse resultando tóxicos
el al.,
para los microorganismos (Reyes et al., 1991). Según Reyes y Lettinga, los
bencenos monosustituidos que presentan mayor toxicidad para las bacterias
metanogénicas acetoclásticas son el clorobenceno, el metoxibenceno y el
benzaldehido; concluyen también que la toxicidad de los compuestos aromáti-
cos se incrementa al aumentar la longitud de las cadenas alifáticas sustituyentes,
al igual que el número de grupos alquil y cloro. Así mismo, estos autores repor-
[94]
[94] oD I G E S T I 6 N A N A E R O B I A

tan que existe una correlación positiva entre la hidrofobicidad del compuesto y
la inhibición de la actividad metanogénica.
5. Otras sustancias: Se han realizado otra serie de investigaciones en donde se
busca analizar el efecto de determinados compuestos que suelen entrar en
contacto con las bacterias encargadas de la degradación anaerobia, depen-
diendo de los procesos que se lleven a cabo en cada industria en particular. Es
así como se encontró que las resinas ácidas, presentes en el agua residual de
las industrias productoras de papel, resultan tóxicas para las bacterias
anaerobias (McCarthy el a/.,
al., 1990).
1990). Otro ejemplo corresponde al caso del
formaldehído, un compuesto ampliamente usado en las industrias química, tex-
til y maderera, para el cual los investigadores encontraron que causa una
fuerte inhibición de la biomasa responsable de la digestión (Lu el a/.,
al., 1998).
Los compuestos citados se incluyen dentro de las sustancias xenobióticas cau-
santes de toxicidad en los sistemas anaerobios, junto con el formaldehído,
algunos antibióticos, hidrocarburos c1orados
clorados y algunos aromáticos. El efecto
de estos detergentes o surfactantes sobre los sistemas de tratamiento de aguas
se ha venido apreciando en varios casos; Austermann el a/.
al. (1998),
(1998), repor-
tan que durante la recuperación de la planta de tratamiento de aguas de una
cervecería alemana se hizo necesario sustituir algunos de los desinfectantes y
de los lubricantes de cadenas utilizados, así como la reducción en el uso de
agentes desinfectantes como el ácido etilendiamino triacético (EDTA),con el fin
de mejorar el nivel de tratamiento. García el a/.
al. (2000)
(2000) estudiaron el efecto
de varios surfactantes catiónicos comerciales (sales de amonio cuarternario)
sobre la degradación anaerobia y encontraron que uno de los tres compues-
tos evaluados (compuestos con dos grupos metilo sustituidos y unidos di-
rectamente al átomo de
de nitrógeno)
nitrógeno) resultaba tóxico para las bacterias en
concentraciones superiores
superiores a 64
64 mg/g de
de lodo; los demás surfactantes, en
los cuales los grupos hidrofóbicos
hidrofóbicos estaban unidos al nitrógeno por enlaces
éster,
éster, eran
eran tomados
tomados como
como nutrientes
nutrientes por parte de las bacterias. Wagener el
el
a/.
al. (1987)
(1987) reportan porcentajes de inhibición
inhibición del
del 80%
80% de
de la
la actividad
metanogénica con
con surfactantes
surfactantes aniónicos
aniónicos del
del tipo alquil-benceno-sulfonatos,
alquil-benceno-sulfonatos,
yy del
del 20%
20% para
para surfactantes
surfactantes no
no iónicos
iónicos como
como los
los alquil-fenol-etoxilatos.
alquil-fenol-etoxilatos.
 PUESTA
PUESTA EN
EN MARCHA
MARCHA Y OPERACiÓN
OPERACiÓN DE
DE REACTORES
REACTORES ANAEROBIOS
ANAEROBIOS [95]
[95]

Factores relativos a la calidad del lodo

TIPO
TIPO DE INÓCULO
DE INÓCULO

El tiempo para el arranque del reactor será corto si el lodo utilizado como inóculo
tiene una alta actividad metanogénica y está adaptado a los sustratos presentes
en el agua residual. En países donde la tecnología anaerobia es ampliamente
utilizada (Europa, USA,
USA,China),
China), la consecución de lodos como inóculos para las
plantas de tratamiento normalmente se realiza a partir de otros reactores o éstos
son suministrados por compañías privadas; sin embargo, en los países de Améri-
ca Latina que han venido utilizando esta tecnología, la consecución de lodos como
inóculos no es una labor fácil, ya que no existen suficientes reactores anaerobios
que suministren inóculos de calidad.
Frente a esta dificultad se viene trabajando en el acondicionamiento de
inóculos a partir de fuentes diferentes a los reactores anaerobios; por ejemplo, se
han explorado inóculos provenientes de lodos activados, lagunas de estabiliza-
ción, tanques de sedimentación y tanques sépticos, requiriéndose por lo tanto, la
adaptación de dichos inóculos al sustrato que se va a utilizar.
En este proceso de búsqueda de inóculos alternativos, la caracteriza-
ción microbiológica de los lodos se ha constituido en una herramienta funda-
mental de trabajo, toda vez que permite identificar y seleccionar potenciales
inóculos para reactores anaerobios. En la Tabla 4.2 se reportan las posibles
fuentes de inóculos de los reactores, así como los valores de actividad
metanogénica y el contenido de sólidos suspendidos volátiles (SSV) (Guyot,
1993; Ramírez, 1996).
En general, se recomienda una concentración mínima de 1OKgSSV/m33 y
un volumen no mayor del 60% del volumen total del reactor. Por otra parte, es
importante evitar el arrastre de las bacterias durante la fase de arranque y
controlar parámetros como la carga orgánica volumétrica, el tiempo de reten-
ción hidráulica (TRH) Y la concentración de AGV en el efluente del reactor
(Hulshoff-Pol,1987).
[96]
[96] D
DIGESTiÓN
I G E S T IÓN A
ANAEROBIA
N A E R O B I A

Tabla 4.2.
Tabla 4.2. Diferentes fuentes
Diferentes fuentes de
de inóculos
inóculos para
para reactores
reactores anaerobios
anaerobios

Tipo de
Tipo de inóculo
inóculo Actividad metanogénica
Actividad metanogénica Concentración
Concentración típica de
típica de
específica
específica SSV en
SSV en el
el lodo
lodo
gCH.-DaO/g
gCH.-DQO/g SSV.d
SSV.d gIl
gIl

Lodo granular
Lodo granular 0.5 -1.5
0.5 -1.5 -120
70 ·120
Biopelicula
Biopelfcula 0.4·1.2
0.4 - 1.2 ND
ND
Lodos domésticos
Lodos domésticos digeridos
digeridos 0.02 - 0.2
0.02 0.2 15 - 40
15·40

Estiércol digerido
Estiércol digerido 0.02 - 0.08
0.02·0.08 20 - 80
Lodo de
Lodo de fosa
fosa séptica
séptica 0.01·0.07
0.01 - 0.07 10·50
10 - 50
Laguna anaerobia
Laguna anaerobia 0.03
0.03 30

Estiércol fresco
Estiércol fresco 0.001 - 0.002
0.001 0.002 -140
30 -140
Sedimento laguna
Sedimento laguna 0.002 - 0.005
0.002 0.005 20 - 50
20·50

Fuenle: Fiekl.
Fuente: Field. 1987

d~
Los procesos anaerobios de segunda y tercera generación requieren dE
seé
biomasa con alta actividad metanogénica y que se mantenga en el reactor, ya sea
reacto·
por adherencia a un soporte como en el caso de los filtros anaerobios o los reacto
reactore~
res de lecho fluidizado, o por formación de gránulos como ocurre en los reactores
UASBde alta tasa. En la Tabla 4.3 se consigna un resumen de las principales carac-
terísticas de los lodos granulares presentes en reactores UASB
UASBde
de alta carga.

Tabla 4.3.
Tabla 4.3. Propiedades
Propiedades del
del lodo
lodo granular
granular

Característica
Característica Intervalo
Intervalo

Densidad ( kg/m
Densidad kg/m3)
3) 1028 a 1082
1028 1082
I
Relación SSV/SST
Relación SSV/SST 0.45 a 0.90
0.45 0.90

Velocidad media
Velocidad media sedimentación
sedimentación (m/h)
(mlh) 100
53 a 100
Diámetro medio
Diámetro medio de
de gránulos
gránulos (mm)
(mm) 0.8 a 2.2
0.8 2.2

Actividad metanogénica
Actividad metanogénica (gDQO-CH4/gSSV/d)
(gDOO-CH'/gSSV/d) 0.2 a 1.9
1.9
Fuente: Hulshoff- Poi,
Poi. 1989.
 P U E S T A E N e HH A
Re
M A R Y o PER
R A CiÓ
CiÓ N
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ascendente con
con manto
manto de lodo
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ascendente con
con manto
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[100] D,GESTiÓN
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 capítulo

c i n c o

CARACTERIZACIÓN
CARACTERIZACiÓN DE

LODOS ANAEROBIOS
LODOS ANAEROBIOS Y

AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES
EL ÉXITO O FRACASO DE UN SISTEMA ANAEROBIO DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES
FUNDAMENTALMENTE DE LA CALIDAD DE LA BIOMASA CONTENIDA EN EL REACTOR; POR
DEPENDE FUNDAMENTALMENTE

lo tanto, la caracterización de la biomasa permite entender el funcionamiento del

sistema, proyectar su desempeño futuro y definir la potencialidad de la biomasa
como fuente de inóculo para otros reactores.

ANAEROBIOS
LODOS ANAEROBIOS

Fisicoquimica
Caracterización Fisicoquimica
MUESTREO
MUESTREO

La toma de una muestra de lodo en reactores de lecho suspendido, por ejemplo

reactores UASB,se realiza extrayendo la cantidad de lodo necesaria mediante las
válvulas de drenaje del sistema. En los reactores de lecho fijo, por ejemplo los
filtros anaerobios, la toma de la muestra se lleva a cabo extrayendo una cantidad
suficiente del medio de soporte y raspando posteriormente la biomasa adherida.
La muestra de lodo se toma en recipientes limpios; dependiendo del objetivo
del estudio, se pueden tomar muestras puntuales de una o varias capas de lodos o
del medio de soporte. La otra alternativa consiste en tomar muestras compuestas a
partir de muestras individuales tomadas a diferentes alturas o alícuotas del manto
de lodo o del medio de soporte. Es importante tener en cuenta, que para obtener
una muestra representativa, debe descartarse el lodo almacenado en la válvula,
para lo cual se descarta el volumen inicial colectado. Generalmente se toma de uno
a dos litros de muestra y se recomienda llenar el recipiente hasta el borde superior
et al,
para minimizar la exposición al oxígeno (Wills el al., 2000).
2000).
Al tomar la muestra, se debe registrar información básica como el tipo de
reactor evaluado, los parámetros de operación y las características del afluente y
[104] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN AN"'EROBI'"
ANAEROBIA

el efluente del reactor. La muestra se debe transportar refrigerada, yy una vez

ingresa al laboratorio, se recomienda gasear la muestra con Nz2 por 10 a 15 minu-
tos yy luego refrigerar a 4°C hasta el momento de ser procesada.

SÓLIDOS
SÓLIDOS

FUNDAMENTO TEÓRICO.
FUNDAMENTO El material
TEÓRICO. El material suspendido
suspendido oo disuelto
disuelto presente
presente en
en el agua
agua resi-
resi-
dual se
dual se denomina
denomina 'sólidos',
'sólidos', yyen él se
en él se pueden
pueden distinguir
distinguir tres
tres categorías:
categorías: sólidos
sólidos
totales, sólidos
totales, sólidos suspendidos
suspendidos totales
totales yy sólidos
sólidos disueltos
disueltos totales.
totales. En
En cada
cada una
una de
de
estas tres
estas tres categorías
categorías también
también se
se hace
hace diferencia
diferencia entre
entre los
los sólidos
sólidos fijos
fijos yy los
los sóli-
sóli-
dos volátiles:
dos volátiles: los
los primeros
primeros son
son los
los sólidos
sólidos que
que permanecen
permanecen después
después de de incinerar
incinerar
lala muestra,
muestra, mientras
mientras que
que los
los segundos
segundos son
son los
los sólidos
sólidos oxidados
oxidados oo volatilizados
volatilizados alal
incinerar lala muestra.
incinerar muestra.
Cuando los
Cuando los lodos
lodos anaerobios
anaerobios presentan
presentan características
características sólidas
sólidas oo semi-só-
semi-só-
lidas, lala masa
lidas, masa de
de los
los sólidos
sólidos disueltos
disueltos es
es despreciable
despreciable comparada
comparada con con lala fracción
fracción
de sólidos
de sólidos suspendidos,
suspendidos, por
por lolo cual
cual nono es
es necesario
necesario filtrar
filtrar los
los lodos,
lodos, evitando
evitando así
así
las dificultades
las dificultades inherentes
inherentes aa filtrar
filtrar alal vacío
vacío una
una cantidad
cantidad apreciable
apreciable de de lodo.
lodo.
Encaso
En casodedeque
queelelcontenido
contenido líquido
líquido deldel lodo
lodo sea
seaimportante,
importante, debe
debe realizar-
realizar-
seelelfiltrado
se filtrado de
de los
los lodos
lodos para
para separar
separar lalafracción
fracción suspendida
suspendida dede laladisuelta;
disuelta; para
para
este caso
este caso se
se utilizó
utilizó elel método
método consignado
consignado enen los
los métodos
métodos normalizados
normalizados para
para elel
análisisde
análisis deaguas
aguas potables
potables yyresiduales
residuales (APHA,
(APHA,1998).
1998).
MATERIALES yyEQUIPOS.
MATERIALES EQUIPOS.
o • Cápsulas
Cápsulasde
deporcelana
porcelana
o • Balanza
Balanzaanalítica
analítica
o • Probeta
Probeta
o • Baño
BañoMaría
María
o • Estufa
Estufa
• • Mufla
Mufla
• • Pipetas
Pipetas
• • Pinzas
Pinzaspara
paramufla
mufla
Serecomienda
PROCEDIMIENTO. Se
PROCEDIMIENTO. recomiendatrabajar
trabajar por
portriplicado,
triplicado, así:
así:
• • Colocar
Colocar30
30mililitros
mililitrosdedelodo
lodoen
enuna
unacápsula
cápsuladedeporcelana
porcelanapreviamente
previamente incine-
incine-
raday ypesada,
rada pesada,(PJ
(PJ
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [105]
[105]

• Evaporar al baño María la humedad del Iodo.

• Secar en estufa a una temperatura entre 103°( Y 105°( durante 24 horas.
• (Pzl.
Transferir las cápsulas al desecador hasta que se enfríen y pesarlas, (PJ
• Incinerar la muestra en la mufla a 5500( 0
( ± 500( durante una hora.
0
(

• Transferir las cápsulas a la estufa durante 15 minutos.

• Posteriormente, colocar las cápsulas en el desecador y permitir que se enfríen.
• Pesar las cápsulas, (PJ
CÁLCULOS.
• Sólidos Suspendidos Volátiles (SSV):

SST (mg/l)
SST (mg/l) = (P
(Pr P)"'1.OOO/(30/1.000)
2-P)"'1.000/(30/1.000)

• Sólidos Suspendidos Totales (SST):

s V (mg/l) = (PrP)+1.OOO/(30/1.000)

íNDICE VOLUMÉTRICO DE LODOS Y VELOCIDAD DE SEDIMENTACiÓN

TEÓRIco' Los sistemas de tratamiento de aguas residuales por proce-

FUNDAMENTO TEÓRICO.
FUNDAMENTO
sos biológicos anaerobios se basan en la retención de grandes cantidades de
lodo en el sistema; con ello se logra que el tiempo de retención de lodos sea
mucho mayor que el tiempo de retención hidráulico; por lo tanto la velocidad de
sedimentación (VS) es una variable importante para mantener la biomasa dentro
del sistema. La velocidad de sedimentación indica la rapidez con la que sedimenta
el lodo y se expresa en m/h.
El índice Volumétrico de Lodos (IVL) es una prueba que evalúa la capaci-
dad de sedimentación y compactación de un lodo; se define como el volumen que
ocupa un gramo de lodo, después de sedimentar durante 30 minutos, sus unida-
des son ml/g.
MATERIALES y EQUIPOS.

• Probeta de vidrio de 1.000 mi

• (ronómetro
• Regla
• 200 mi de lodo sedimentado
[106] D,GESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

PROCEDIMIENTO.
PROCEDIMIENTO.

• Colocar los 200 mi de lodo sedimentado en la probeta y aforar a 1.000 mi con

efluente clarificado del propio reactor anaerobio o con agua destilada.
• Tapar la probeta con parafilm, homogenizar el lodo y el agua invirtiendo la
probeta tres veces.
• Colocar la probeta en una superficie plana y registrar el volumen de lodo sedi-
mentado por unidad de tiempo; generalmente se registra el volumen sedimen-
tado cada 30 segundos para los primeros 5 minutos y, posteriormente, cada 3
minutos hasta completar 30 minutos.
(ÁLCULOS.
CÁLCULOS.

• Se
Seconvierte el volumensedimentadoa altura equivalenteutilizandola
convierteelvolumensedimentadoa siguienteecua-
equivalenteutilizandolasiguienteecua-
ción h¡= (1.000 - V) * L /1.000, donde hes
hies la altura (cm) del borde superior de la
probeta al volumende lodo sedimentado para un tiempo t,
sedimentadopara ~,Vies
V¡es el volumen sedimen-
volumensedimen-
tado (mi) en un tiempo Ti
T¡yy L es la altura
a~ura (cm) de la probeta entre O y 1.000 mI.
• Se construye una gráfica de Ti(abcisas)
T¡(abcisas) contra h¡ (ordenadas), uniendo los pun-
tos manualmente, luego se traza una tangente a la zona de la curva con mayor
pendiente. La pendiente de esta recta corresponde a la velocidad máxima de
sedimentación (cm/min); utilizando el factor de conversión se calcula la velocidad
de sedimentación en m/h.
• El IVL se calcula aplicando la siguiente ecuación:
EIIVL

lVL = VJOmi.",,j(SST*F)

donde V30 . t es el volumen en mi, ocupado por el lodo a los 30 minutos de

minutos
30 mlnu os

iniciado el ensayo, los SSTson los sólidos suspendidos totales del lodo en gIL
gil y F
es el factor de dilución, que para este caso es 200/1.000=0.20 .

PERFIL
PERFIL DE LODOS
DE LODOS

FUNDAMENTO TEÓRICO. La concentración del lodo dentro del manto de lodo no es

FUNDAMENTO TEÓRIco'

uniforme, pues generalmente la concentración disminuye desde el fondo a la su-

perficie del reactor. La evaluación de esta variación se realiza determinando la
concentración del lodo a diferentes alturas, procedimiento denominado 'perfil de
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [107]
[107]

lodos', el cual permite estimar la cantidad de lodo existente en el reactor. Cono-

ciendo la biomasa presente y la actividad metanogénica del lodo, se puede prede-
cir la máxima carga orgánica que puede soportar el sistema.
El contenido y la actividad del lodo varían con el tiempo; se estima que el
reactor alcanza la estabilidad, la actividad metanogénica del lodo permanece cons-
tante y la cantidad del lodo aumenta a una tasa constante.
MATERIALES
MATERIALES y EQUIPOS.
EQUIPOS.

•
o Recipientes para toma de muestras.
•
o Materiales y equipos necesarios para determinar sólidos.
PROCEDIMIENTO.
PROCEDIMIENTO.

• Tomar aproximadamente 100 mi de lodo en cada punto de muestreo.

o

•
o Determinar los SSTy SSVen cada muestra de acuerdo con el método determi-
nación de sólidos.
(ÁLCULOS.
CALCULOS.

•
o Convertir la altura de toma de muestra a volumen de reactor utilizando la geo-
metría y dimensiones del reactor
•
o SSV(abscisas)
Construir sendas gráficas de las concentraciones de SSTo SSV (abscisas) con-
tra el volumen correspondiente de reactor (ordenadas): el área bajo las cur-
vas resultantes son las masas de SSTy SSVcontenidas en el reactor. El contenido
total de SST y SSVse calcula descomponiendo el área bajo la curva en figuras
geométricas, calculando el área para cada una de estas figuras y realizando la
suma de las áreas individuales.

GRANULDMETRíA
GRANULOMETRíA

FUNDAMENTO TEÓRICO. El tratamiento anaerobio de residuos líquidos en reactores

FUNDAMENTO TEÓRICO.

de lecho suspendido, tiene como fundamento el lograr la formación de gránulos

que tengan velocidad de sedimentación alta y actividad metanogénica notable.
Los gránulos evolucionan con el tiempo y dependen de la operación del reactor y
del estado en que se encuentre el mismo, es decir en la fase de arranque o en la
estable. La determinación del tamaño de los gránulos permite establecer sus cam-
bios durante un proceso de granulación y además, permite identificar la homoge-
neidad o heterogeneidad de los gránulos del lodo con respecto a su tamaño.
[108] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

MATERIALES y EQUIPOS.
MATERIALES EQUIPOS.
• Agar bacteriológico o gelatina sin sabor.
• Cajas de Petri.
• Microscopio óptico con ocular de Whipple.
PROCEDIMIENTO.
PROCEDIMIENTO.

• Preparar agar bacteriológico como lo recomienda la casa comercial; no

requiere su esterilización. Como alternativa se puede utilizar gelatina sin sal
sat
• En 5 cajas de Petri, colocar 1mi de lodo en el centro.
• Enseguida verter el agar aún tibio, procurando formar una película lo rr
delgada posible.
• Distribuir la muestra en el agar de manera uniforme, con movimientos circ
lares de la caja de Petri hacia la derecha y los mismos hacia la izquierc
formando ochos.
• Esperar a que se solidifique el agar.
• Observar en el microscopio óptico empleando un ocular de Whipple previamen
calibrado, determinando el tamaño de cada cuadrado del micrómetro ocular.
Para su lectura se debe tener en cuenta:
• Presencia de gránulos bien definidos y compactos.
• El valor del diámetro promedio se debe realizar sobre una muestra al azar (e
mínimo 100 gránulos.
• Para granos no esféricos se debe medir el diámetro mayor.
CALCULOS. Con los datos
CALCULOS. obtenidos de las mediciones de los gránulos se determin
la valor promedio de los gránulos.

ACTIVIDAD
ACTIVIDAD METANOGÉNICA
METANOGÉNICA ESPECíFICA
ESPECíFICA

Para evaluar la actividad metenogénica específica (AME) del lodo, se determina I

capacidad del consorcio microbiano para generar metano, lo cual se mide baj
condiciones controladas
controladas de temperatura. Se puede utilizar diferentes sustratos e
forma individual o mezclados, lo cual permitirá establecer
establecer la presencia y la activi
dad de los
los diferentes grupos metanogénicos.
TEÓRICO. La actividad
FUNDAMENTO TEÓRICO.
FUNDAMENTO actividad metanogénica es una característica que indica 1;l.
capacidad
capacidad de
de la biomasa para transformar
transformar la materia
materia orgánica en metano;
metano; SI
SI
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE
DE LODOS
LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS Y
Y AGUAS
AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [109]
[109]

define como la masa de sustrato en forma de DQO

DQOque
que es convertida a metano por
unidad de masa de biomasa y por unidad de tiempo, lo cual se expresa con las
siguientes unidades: gDQO-CHigSSV día.
La actividad metanogénica se mide bajo condiciones de saturación de sustrato;
por lo tanto, la concentración de ácidos grasos volátiles (AGV) deberá ser suficiente
para que su difusión en el lecho del lodo no constituya una limitante. Así por ejemplo,
en ensayos estáticos con frecuencia el lodo sedimenta y forma una capa que limita la
difusión del sustrato. Tambiénse
También se debe adicionar macro y micronutrientes, una solución
buffer para mantener el pH cercano a 7, mientras su incubación puede hacerse con o
sin agitación, a una temperatura entre 30°C y 35°(.
35°C. En estas condiciones ambientales
los microorganismos presentes en el lodo podrán llevar a cabo la transformación del
sustrato. Comoresultado,podrá
Comoresutado, podrá calcularselatasa
calcularse la tasa máximade producción de metano para
el lodo bajoestudio (Field, 1987). Enreactores
En reactores a escala
escalareal,
real, o en la naturaleza, latasa de
conversión de sustrato a metano es menor debido a que existen limitaciones
limitacionesen
en la canti-
dad de sustrato, en la cantidad de nutrientes y en las condiciones ambientales.
Para determinar la cantidad de lodo y de sustrato que se deben adicionar
en la prueba, se han hecho algunas recomendaciones (Field, 1987) las cuales se
consignan en la Tabla 5.1.

Tabla 5.1.
Tabla 5.1. Relaciones SSV/AGV
Relaciones SSV/AGV

Sistema
Sistema lodo SSV
lodo SSV (gil) AGV' DaD
AGV· (gil) DOO
Agitado 2.0 a 5.0
2.0 5.0 2.0 a 4.0
2.0 4.0
No agitado ";. 1.0 a 1.5 3.5 a 4.5
3.5 4.5

N3V del sustrato deben ser neutralizados a pH 7 usando NaOH; de lo contrario. la baja de pH y la
'Los KN la alta fracción de KN
AQJ no ionizados
causarán
causarán inhibkión severa de la metanogénesis.
inhibición severa metanogénesis.

Los sustratos más utilizados para este ensayo son una mezcla de H
Hz-eO
2-C02z

(80%-20%), ácidos grasos neutralizados solos o en mezclas, específicamente

los ácidos fórmico, acético, propiónico y butírico; también se utilizan alcoholes,
metanol, etanol y carbohidratos (glucosa).
La actividad metanogénica del lodo puede verse afectada por el tiempo
que el lodo requiere para adaptarse al sustrato, este período se denomina 'fase
[110] DIGESTiÓN ANAEROBIA

de adaptación' o 'fase lag'. Por esta razón, previamente a su determinación, se

hace una primera alimentación con el sustrato, de forma que la actividad se mide
durante la segunda alimentación.
METODOLOGíAS.
Existen diferentes metodologías para realizar el ensayo de activi-
dad metanogénica, las cuales se diferencian en la forma como se mide la cantidad
de CH44 producido y en la manera como se realiza la adición del sustrato.
Las metodologías básicas de medición de la producción de metano son
las siguientes:
• Medición de CH44 por desplazamiento de líquido, para lo cual se utilizan reci-
pientes de 0.5 litros o mayores y un sistema de desplazamiento de líquido
(Figura 5.1). El biogas producido se burbujea en una solución alcalina (gene-
ralmente de NaOH o KOH) con pH mayor que 12 en la cual el COzes adsorbido
y el volumen de gas metano desplazará un volumen igual de la solución alcalina;
esta metodología exige un montaje y seguimiento muy cuidadoso. El volumen
de líquido desplazado fuera de la botella de solución será equivalente al volu-
men de biogas generado por el sistema.

Solución
de NaOH
Siegas
Biogas

Figura
----.
Figura 5.1.
5.1. Medición
Medición de
Reactor

de la actividad
Válvula

actividad metanogénica por desplazamiento.

metanogénicapor desplazamiento.
Cilindro
graduado

• Medicióndel volumen de metano mediante la determinación de la concentración de

CH44 por cromatografía de gases en un sistema cerrado (Figura 5.2), mediante el
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [111]]
[111

uso de botellas serológicas de 60 o 120 mi, en las cuales la fase gaseosa corres-
ponde a 2/3 del volumen de la botella donde podrá acumularse el metano produ-
cido. Tanto en la preparación del medio de cultivo, como en la inoculación se debe
seguir los procedimientos recomendados para el manejo de microorganismos
anaerobios (evitar contaminación con oxígeno y mantener condiciones reductoras).
Aunque en este método la manipulación de las botellas es mucho más simple, los
requerimientos de equipos de cromatografía de gases limitan su uso.
Para la adición del sustrato se pueden utilizar dos métodos:
•
o Realizar dos alimentaciones, iniciando la segunda alimentación cuando se ha
logrado la conversión a metano de por lo menos el 80% del sustrato adiciona-
do en la primera alimentación.
•
o Realizar una activación inicial del lodo mediante la adición de 0.1-0.3 mi de
sustrato; al cabo de 12 horas se retira de la botella de ensayo todo el metano
producido durante este lapso de tiempo. En ese momento, se adiciona una
cantidad de sustrato tal, que se cumpla la relación SSV/AGVseleccionada y se
inicia la medición de metano a diferentes intervalos de tiempo hasta el momen-
to en que se alcanza la máxima producción (generalmente, 72 horas).

MEDICiÓN
MEDICiÓN DE METANO
DE METANO POR
POR DESPLAZAMIENTO
DESPLAZAMIENTO DE
DE LíQUIDO
LíQUIDO

Ver Figura 5.1.

MATERIALES y EQUIPOS.
MATERIALES EQUIPOS.
•
o Botellas de suero de 500 mI.
•
o Sistema de mangueras y agujas para comunicar la botella utilizada como reac-
tor con la botella utilizada para medir la producción de metano por desplaza-
miento de líquido.
•
o Cuarto caliente o baño María.
• Solución de NaOH con fenoftaleina como indicador de pH.
o

•
o Medio de cultivo (ver Anexo 1).
• Solución de nutrientes (ver Anexo 1).
o

PROCEDIMIENTO.
PROCEDIMIENTO.

• Adicionar 250 mi de agua destilada hervida así como los volúmenes de AGV y
o

de lodo. El volumen dependerá de si el sistema es estático o agitado.

[112]
[112] DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

• Cuando se sospecha una limitación de nutrientes y elementos traza se adiciona

la solución de nutrientes en una relación de 1mi /L. El extracto de levadura se
adicionan en una concentración de 0.2g/L.
• La temperatura de incubación es de 30°C a 35°C de acuerdo con las condicio-
nes que se fijen para el ensayo.
• En otra botella de suero se colocan 500ml de la solución de NaOH, se sella con
tapón de caucho el cual se perfora con dos agujas de jeringa. La botella con
NaOH se coloca boca abajo, y se conecta a la botella con el lodo (Figura 5.1).
NaOHse
La "T" de la manguera de conexión funciona como trampa para NaOH, e impi-
de la entrada de NaOH a la botella de lodo. La segunda aguja en el frasco con
NaOH permite la salida del líquido y medir el volumen de gas producido, el cual
NaOHpermite
es equivalente al volumen de NaOH desplazado y recogido en el cilindro gra-
duado.
• Determinar la producción diaria de metano a intervalos regulares de tiempo
para determinar el periodo de tiempo en el cual se obtiene la mayor produc-
ción de metano. Es importante agitar la botella que contiene el lodo antes de
realizar la lectura para liberar el gas del lodo y conseguir mayor contacto
y el Iodo.
entre el sustrato yellodo.
• Cada muestra se realiza por duplicado. Para cada serie de ensayos se incluye
un blanco que contiene agua destilada y un control al que no se le agrega
sustrato, a fin de corregir la producción endógena de gas, así como el volumen
desplazado por cambios de temperatura y presión atmosférica.

Medición de metano por cromatografía

Ver Figura 5.2.

MATERIALES y EQUIPOS.
MATERIALES EQUIPOS.
• Botellas serológicas de 60 mi, con tapón de caucho y sello de aluminio
• Cilindro de CH44 puro para elaborar curva de calibración
• Cromatógrafo de gases configurado para cuantificaciónde concentraciones
Cromatógrafode de CH44••
concentracionesde
• Cuarto caliente o baño María.
• Medio de cultivo, ver Anexo 1.
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [113]

Figura 5.2.
Figura 5.2. Cromatógrafo
Cromatógrafo de gasespara
de gases para medición
medición de
de metano.
metano.

PROCEDIMIENTO.
PROCEDIMIENTO.
• Por cromatografía de gases no sólo se puede determinar la producción de
metano sino las de alcoholes y ácidos grasos volátiles.
• Previa a la determinación de la actividad metanogénica es necesario contar
con una curva de calibración para cuantificar el volumen de metano producido
por cada muestra.
CALIBRACIÓN.
CURVA DE CALIBRACIÓN.
• La curva de calibración se construye rea-
lizando mediciones en 6 botellas
serológicas de 60 mi, a las cuales se les
agrega 20 mi de agua destilada. Las bo-
tellas se tapan y se sellan con sello de alu-
minio. Utilizando jeringa se inyectan los
----+--_ Aire + CH,
siguientes volúmenes de metano puro: 0.5,
siguientesvolúmenesde
1, 5, 10,20 Y 30 mililitros (Figura 5.3).
_-1-_-+ Agua
destilada • La curva de calibración se construye
graficando el volumen de metano inyec-
Figura 5.3.
Figura 5.3. Preparación de
Preparación de la
la curva
curva
de calibración
de calibración tado versus el área del cromatográma ob-
[114] DIGESTiÓN ANAEROBIA

tenido en el cromatógrafo de gases. La ecuación de la regresión lineal de 105

lo~
datos corresponde a la relación de calibración.

PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO PARA
PARA DETERMINAR
DETERMINAR LA
LA ACTIVIDAD
ACTIVIDAD METANOGÉNICA
METANOGÉNICA

• Se colocan 13 mi de medio de cultivo en botellas serológicas de 60 mi, 0.2 mi

de la solución de vitaminas diluida
diluída y 0.2 mi de la solución de NazS.En
Na2S. En la cámara
anaerobia o bajo flujo continuo de nitrógeno se adiciona el volumen de lodo
requerido para mantener la relación DQO/SSV seleccionada. Posteriormente,
se adiciona el volumen de sustrato requerido (generalmente se preparan solu-
ciones a una concentración suficiente para adicionar entre 1 a 2 mi) y se com-
pleta a un volumen total de 20 mi con el medio de cultivo.
• Adicionalmente, se debe preparar una botella sin sustrato con la cual, se eva-
luará la producción de metano residual del Iodo. Se recomienda hacer el ensa-
yo por triplicado para cada sustrato. La adición de las soluciones estériles
(vitamina y agente reductor) se lleva a cabo con jeringa estéril, purgadas con
N2z (filtro estéril de algodón en rama para el flujo de Nz2),), y se debe flamear el
tapón al realizar este procedimiento. La inoculación del [oda
lodo se puede realizar
con pipeta o con jeringa sin aguja, el lodo a utilizar debe en lo posible estar
estabilizado para eliminar la interferencia por producción de metano por sustrato
residual presente en ellodo.
el lodo.
• Para la preparación de la solución de sustrato se pueden utilizar los datos
para ácidos grasos volátiles que se presentan en la Tabla 5.2. La cantidad de
sustrato y de lodo a agregar se calculan utilizando las relaciones consignadas
en la misma Tabla 5.1.
• Para la incubación se colocan las botellas en posición invertida, lo cual contribuye
a crear un sello hidráulico. Las lecturas se realizarán a diferentes intervalos de
tiempo hasta cuando la producción de metano sea constante a través del tiempo
o hasta que el 80% del sustrato haya sido utilizado. Cuando se realiza una se-
gunda alimentación, se adiciona la misma concentración de AGVque la utilizada
en la primera alimentación, el control de la producción de metano se lleva a cabo
hasta que el 80% del sustrato haya sido consumido (Field, 1987).
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [11

5.2. Datos básicos de 105

Tabla 5.2. los ácidos grasos volátiles (AGV)

Formula Peso molecular Densidad DaD Producclon

Produccion
del leórica (g
teorica CH,
Acido Acido Sal ACldo
Acido Sal liquido(·)
hquido(*) DaO/ g9 teorica(mol
DaD/
(g/mi) acido)
acido] CH, / mol
acido)

Fórmico CH¿02
CH.02 CHO,Na
CH02Na 46.0
460 68.01
6801 1.22
1.22 0.348
0348 0.25
0.25

Acenco
Acetlco C 2H,02
C¡H.0 2 C 2H330¡Na.3H2
C¡H 0¿Na3H2 ° 61.07
6107 136.08
13608 1.05
105 1.067
1067 100
100

Proplómco
Prcpioruco C
C33HH602
602 C 3H5S02Na
C¡H 02Na 74.08
74.08 96.06
9606 0.99
0.99 1514
1514 175
175

8utJnco
Butlrico C 4Hg
C,H 02
s02 C,H702Na
C,H¡02Na 8811
88.11 1101
1101 0.96
0.96 1.818
1.818 2.50
250
---- ----
') Depende
\ •IDepende dd.e lacalidaddelreactivo.
la calidad del reacnvo

CALCULOS.
CALCULOS.
Se construye una gráfica colocando el volumen acumulado de metano en el ej~
Y,y el tiempo acumulado en horas en el eje X. Se selecciona la región de mayor
Y,y
pendiente de la curva, y se calcula el valor numérico de dicha pendiente, la cual
estará expresada en mililitros de CH/hora. El período de tiempo utilizado para
determinar la tasa de producción de metano, debe cubrir por lo menos el re-
querido para la utilización del 50%
50% de los AGV.La actividad metanogénica es-
pecífica (AME) se calcula mediante la siguiente ecuación:

.1M
:I/11E
1:' = (P·24)
(P*Z'¡'j /(FC·I'·SSI')
/(FC*I'*SSI')

Donde,
PP=
= Pendiente de la gráfica en mi/hora,
mi/hora.
FC = Factor de conversión de DQO a CH44,, en mi CH44/g
/g DQO (este valor depen-
de de la temperatura
temperatura y la presión,
presión. En la Tabla 5.3 se consigna este factor para
diferentes temperaturas).
=
V= Volumen de lodo utilizado en el ensayo en litros.
= Concentración de SSV en el Iodo.
SSV =
[116]
[116] DIGESTiÓN ANAEROBIA

Tabla 5.3.
Tabla 5.3. Factores
Factores de
de conversión
conversión de
de gramos
llramos de
de DQOa
DQOa mililitros de CH, bajo
de CH. bajo
diferentes temperaturas
diferentes temperaturas y a a una
una presión
presión de
de 1 atmósfera"
atmósfera"

de oao de oao
Temperatura (OC)
Temperatura (OC)
I CH, seco!
mi CH, seco! 9 de Daa
I CH, húmedo!
mi CH, húmedo! 9 de Daa

10
10 363
363 367
367
15
15 369
369 376
376
20
20 376
376 385
385
25
25 382
382 394
394
30
30 388
388 405
405

35
35 395
395 418
418

40
40 401
401 433
433

45
45 408
408 450
450
I
50
50 414
414 471
471

• Si la determinación
determinación de la actividad
actividad metanogénica
melanogénica se realiza
realiza en mayores
mayores altitudes
akiludes sobre
sobre el nivel del mar,
mar. se
se puede
puede corregir
corregir el factor
factor de
conversión reporlado para
conversión reportado para la presión
presión atmosférica,
atmosférica. así:
así:
Factorde
Factor conversión x 760 I presión
de conversión presión atmosférica
atmosférica del lugar (mm de mercurio).
mercurio).

Caracterización microbiológica
microbiológica
RELACIONES DE LOS MICROORGANISMOS CON 'EL
EL 'OXíGENO

naturaleza no existe
En la naturaleza existe una línea rígida
rígida de demarcación
demarcación entre los organismos
organismos
aerobios y anaerobios,
aerobios anaerobios, por lo que los microorganismos
microorganismos pueden
pueden ser divididos
divididos en
varios grupos
varios grupos de acuerdo relación con este parámetro;
acuerdo con su relación parámetro; la Figura
Figura 5.4 ilustra
ilustra
dicha situación.
dicha situación. Tomado
Tomado como
como criterio
criterio la relación
relación de las bacterias
bacterias con el oxígeno,
oxígeno,
éstas se puden
éstas puden clasificar
clasificar como
como aerobios
aerobios obligados,
obligados, anaerobios
anaerobios obligados,
obligados,
anaerobio aerotolerante, anaerobio
anaerobio aerotolerante, facultativo y rnicroaerófilo,
anaerobio facultativo microaerófilo.

I ANAEROBIOS
ANAEROBIOS
•Aerotolerantes
• Obligados

Fillura 5.4.
Figura 5.4. Relación de
Relación los microorganismos
de los microorllanismos con
con el oxigeno.
oxilleno.
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE
DE LODOS
LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS YY AGUAS
AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [117]

•• Aerobios
Aerobios obligados.
obligados. Son
Son bacterias
bacterias capaces
capaces de
de crecer
crecer con
con las
las concentraciones
concentraciones
de oxígeno
de oxígeno presentes
presentes en
en el
el aire
aire (21
(21%)
%) Yy muchos
muchos pueden
pueden tolerar
tolerar altas
altas concen-
concen-
traciones (hiperbáricos).
traciones (hiperbáricos).
•• Anaerobios
Anaerobios obligados.
obligados. Son
Son microorganismos
microorganismos que
que carecen
carecen del
del sistema
sistema respira-
respira-
torio
torio yy no
no pueden
pueden utilizar
utilizar el
el oxígeno
oxígeno como
como aceptar
aceptor final
final de
de electrones.
electrones. Estos
Estos
mueren
mueren en
en presencia de
de oxígeno,
oxígeno, probablemente por
por su
su incapacidad
incapacidad para
algunos de
detoxificar algunos de los productos
productos del oxígeno.
oxígeno. Cuando el
el oxígeno
oxígeno se
se reduce,
reduce,
algunos productos tóxicos como el el peróxido de
de hidrógeno
hidrógeno (HzOz)'el superóxido
(HzOz)'el superóxido
(O, ),), y elel radical hidroxilo
(Oz hidroxílo (OH') se producen. Muchos de los anaerobios
anaerobios obli-
son ricos en enzimas flavínicas
gados son flavínicas las cuales reaccionan espontáneamente
O, generando los productos tóxicos. Obtienen
con el 0z Obtienen energía mediante las vías
fermentativas,
fermentativas, en las que compuestos orgánicos como ácidos, alcoholes y otros
acepto res de electrones.
productos sirven como aceptares
•• Anaerobios
Anaerobios aerotolerantes.
aerotolerantes. Son bacterias que pueden tolerar el 0z
O, y crecer en
su presencia aún cuando no lo utilizan.
•• Anaerobios
Anaerobios facultativos.
facultativos. Son bacterias que crecen bajo condiciones anaerobias
anaerobias.
o aerobias determinadas. Usan el oxígeno como aceptor de electrones termi-
nal, con menos eficiencia; en condiciones anaerobias, tienen metabolismo
fermentativo produciendo Hzy COzY
COzy pueden crecer aeróbicamente por respi-
O, está presente, produce mayor cantidad
ración produciendo sólo COz.Si el 0z
O; y está
de ATP y mayor crecimiento de biomasa celular; pero si no hay 0z'
disponible una fuente de energía fermentable como la glucosa, se lleva a cabo
la fermentación, que produce menos crecimiento de la biomasa y elimna Hzy
COz.(Madigan et a/.,
COz.(Madiganet 1997).
al., 1997).
Microaerofílicos.En contraste a los anteriores existen algunos microorganismos
• Microaerofílicos.
aerobios que utilizan el oxígeno solo cuando esta presente en niveles muy
bajos, usualmente por su limitada capacidad para respirar o porque contienen
alguna molécula o enzima sensible al oxígeno.

FORMAS TÓXICAS DEL OXíGENO

Como se mencionó anteriormente, el oxígeno es un fuerte oxidante y un excelente

aceptor de electrones en la respiración. La presencia de oxígeno atmosférico in-
 Bl
[118]
[11 DIGESTiÓN
DIGESTION ANAEROBIA
ANAEROBIA

duce reacciones en la célula que conllevan a la producción del radical superóxido

(0-2), peróxido de hidrógeno (HPz)
de carga negativa (O-z)' (H202) y otros productos de
oxidoreducción tóxicos. Los dos primeros pueden reaccionar y producir radicales
hidroxilo (OH-) libres que constituyen los oxidantes biológicos más poderosos
conocidos. La enzima superóxido-dismutasa cataliza la conversión de radicales
superóxido a peróxido de hidrógeno y oxígeno molecular, mientras la catalasa
convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno.

TÉCNICAS PARA EL CULTIVO DE BACTERIAS

BACTERIAS ANAEROBIAS
ANAEROBIAS

Considerando las limitaciones y restricciones de crecimiento de los

microorganismos anaerobios, su aislamiento y cultivo requirió del desarrollo de
metodologías especiales, que sólo hasta hace menos de cuatro décadas fueron
incorporadas para su estudio. Los desarrollos de Hungate (1969), Wolfe (1976),
Bryant (1967) Y Mah (1980), permitieron avances significativos en el uso de
técnicas específicas para el estudio de bacterias anaerobias estrictas. Además,
estos avances permitieron conocer y entender la complejidad de las interacciones
microbiológicas y bioquímicas que ocurren durante la digestión anáerobia de la
materia orgánica.
JARRA DE
JARRA ANAEROBIOSIS.Son
DE ANAEROB/OS/S. recipientes sellados de policarbonato, en las cuales el
aire es reemplazado por una mezcla de Hz
H2 y COz'y
CO2, y con la presencia de un catali-
02 presentes en el vaso o en el medio de
zador químico se remueven las trazas de Oz
cultivo; de esta forma es posible obtener las condiciones anóxicas requeridas
(Figura 5.5). En estos sistemas también se puede crear las condiciones anaerobias
mediante el uso de klrspara
kitspara generar hidrógeno y dióxido de carbono (Gas PaK®,
H2 y COz'el
Gas Pack Plus®). Cuando se utilizan generadores de Hz CO2, el sobre del gene-
rador se abre y se coloca en la jarra, se adiciona 10 mi de agua destilada o
desionizada para permitir la generación de hidrógeno y dióxido de carbono e
inmediatamente se cierra la jarra.
jarra. En el sistema Gas Pack Plus®, el hidrógeno se
genera
genera a 'partir de las tabletas de borohidruro; una vez
vez que
que se adiciona agua, el
hidrógeno que se genera
genera se
se combina con el oxígeno presente en la
la jarra
jarra en pre-
sencia
sencia del catalizador de
de paladio para
para formar agua.
agua. El
El COzse
C02 se genera a partir del
del
bicarbonato
bicarbonato de
de sodio
sodio más la
la tableta de ácido
ácido cítrico. Con este
este sistema
sistema después
después de
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [1

30 minutos de incubación se observa la formación de gotas de condensación al

interior de la superficie de la cámara. Dentro de las dos horas siguientes a 35°C,
la concentración de COz suele superar el 4%, pero menor al 10%. Después de la
incubación, aire la jarra por 15 segundos, antes de retirar las cajas (Catálogo No.
4371040. Becton Dickinson®).

Figura5.5.
Figura 5.5. Jarras
Jarras de anaerobiosis.
anaerobiosis.

Elcatalizador que se utiliza está compuesto de bolitas de alúmina recubiertas

de paladio, que actúa removiendo las trazas de oxígeno y generando vapor de agua,
el cual puede ser inactivado por exposición a humedad y al HzS
HzSuu otros productos
volátiles de la bacteria. Las bolitas de alúmina pueden ser rejuvenecidas o restitui-
das a su total actividad mediante calentamiento en horno seco a 160-170 "C
oCduran-
duran-
te 2 horas. Luego se guardan a temperatura ambiente en un recipiente limpio y
seco, preferiblemente en un desecador, hasta el momento de ser usadas. Es impor-
tante cada vez que se usen las jarras, es preciso utilizar un catalizador activo e
indicador de la anaerobiosis. Las jarras de anaerobiosis no son utilizadas para el
aislamiento de bacterias anaerobias obligadas, por que la exposición al oxígeno no
puede ser evitada durante en la manipulación de los cultivos.
sistema evacuación-reemplazo
En el sistema evacuación-reemplazo el aire del frasco es extraído y reem-
Nz' 10% de Hz y 5% de COz;este sistema es
plazado por una mezcla de 85% de Nz'
más económico que el generador de gas y permite que las condiciones anaerobias
se establezcan rápidamente (Holdeman et al., 1977).
1977).
[120] DIGESTiÓN ANAEROBIA

CÁMARA ANAEROBIOSIS. Sistema anaeróbico autoabastecido que permite la mani-

(AMARA DE ANAEROB/OSIS.

pulación de bacterias por medio de dos guantes fijados herméticamente y propor-

ciona una atmósfera de gases controlada con 85% de Nz2,' 10% de H Hz2 y 5% de COz
C02
(Figura 5.6). El material se introduce o se retira de la cámara mediante un dispo-
sitivo de intercambio de gases que, por lo general, es un compartimiento anexo a
la cámara, de material rígido, con una puerta interior que comunica a la cámara y
una exterior. Las cámaras de anaerobiosis pueden contar con incubadora,
indicadores de potencial redox (azul de metileno, usualmente) y esterilizador de
asas por electricidad (ver Anexo 4).

Figura 5.6.
Figura 5.6. Cámara
Cámara de
de anaerobiosis.
anaerobiosis.

GASES
GASES LIBRES
LIBRES DE
DE OXIGENO

En los laboratorios
laboratorios de microbiología anaerobia se utiliza gases de alta pureza
pureza como:
NNz2,' Hz,
H2, COz'
C02, mezclas Nz-CO
N2-C0z2 (80-20%) yYHz-CO
H2-C0z2 (80
(80 -20%). El sistema de distribu-
ción
ción utilizado,
utilizado, que se
se ilustra
ilustra en la
la Figura
Figura 5.7, es el 'manifold' descrito por Ba/eh elet al.
por Ba/ch a/.
(1979). Los gases pueden contener algunas
algunas trazas de
de oxígeno
oxígeno las cuales pueden
pueden
ser
ser removidas
removidas haciendo fluir el gas
gas por una columna
columna de
de vidrio empacada
empacada con
con cobre
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [121 ]
[121

la cual es calentada a 35000(( con electricidad, las trazas de oxígeno se combina con
el cobre y este es oxidado tomando una coloración negra. El cobre puede ser rege-
H2, y 97% de
nerado haciendo pasar hidrógeno por unos pocos minutos (3% de Hz,
(Oz) a través de la columna de cobre calentada (Holdeman el al., 1977).
COz)a

Figura
Figura 5.7.
5.7. Sistema
Sistema de
de distribución
distribución de
de gases.
gases.

AGENTES
AGENTES REDUCTORES
REDUCTORES

Las bacterias
Las bacterias anaerobias
anaerobias estrictas,
estrictas, grupo
grupo alal que
que pertenecen
pertenecen las
las bacterias
bacterias
metanogénicas, requieren
metanogénicas, requieren de
de un
un ambiente
ambiente totalmente
totalmente exento
exento de
de oxígeno
oxígeno puesto
puesto
que elel este
que este gas
gas actúa
actúa como
como un
un tóxico
tóxico oo como
como un
un inhibidor
inhibidor del
del crecimiento
crecimiento del
del
grupo de
grupo de bacterias
bacterias anaerobias
anaerobias estrictas;
estrictas; de
de otro
otro lado
lado las
las bacterias
bacterias metanogénicas
metanogénicas
exigen
exigen también
también condiciones
condiciones reductoras
reductoras en
en elel medio( ~330 mv).
medio(~330 mv).
Estosrequerimientos
Estos requerimientos obligaron
obligaron aadesarrollar
desarrollar técnicas
técnicas especiales
especiales (Hungate,
(Hungate,
1969; Wolfe,
1969; Wolfe, 1976; Balch yy otros,
1976; Balch 1979), dichas
otros, 1979). dichas técnicas
técnicas se
se apoyan
apoyan en
en lala aplica-
aplica-
ción
ción de
de dos
dos principios
principios fundamentales:
fundamentales:
1.1. Exclusión
Exclusióntotal
total de
detrazas
trazas de
de oxígeno
oxígenoen preparación yy almacenamiento
en lalapreparación almacenamiento de
de los
los
medios
medios de
de cultivo.
cultivo.
2.2. Mantenimiento
Mantenimientode
de condiciones
condiciones reductoras
reductoras estrictas
estrictas en
en dichos
dichos medios
medios de
de cultivo.
cultivo.
[122] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

El método más simple para evitar la contaminación con oxígeno del me

de cultivo, consiste en hervir y enfriar el medio bajo un flujo de gas inerte como
o una mezcla Nz/COz;posteriormente se distribuye el medio en los viales, así m
Nz/COz;
mo en presencia de dichos gases. Una vez distribuido el medio se realiza el ca
bio de la fase gaseosa para asegurar que cualquier traza de oxígeno presente
la misma desaparezca; por último, la manipulación de los medios se realiza dent
de la cámara anaerobia o utilizando jeringas y agujas hipodérmicas previamen
purgadas con N z.
Nz.
La sola remoción de las trazas de oxígeno del medio de cultivo r
asegura las condiciones reductoras necesarias, por lo que se requiere ad
cionar al medio uno o varios compuestos reductores que permitan manten{
manten€
redox adecuado para el crecimiento de las poblaciones anaerobia
un potencial redox
(Tabla 5.4).
Generalmentese utilizan dos agentes reductores: la cisteína-HCI,que se agre
ga al preparar el medio, y el sulfuro de sodio, que se agrega a cada tubo o botell¡
botelk
antes de inocular para garantizar las condiciones de anaerobiosis adecuadas.

Tabla 5.4.
Tabla 5.4. Característícas de
Características de algunos
algunos compuestos
compuestos reductores
reductores

Compuesto
Compuesto Potencial redox
Potencial redox estándar
estándar (mV)
(mV) Concentración utilizada (%)

Thioglicolato
Thioglicolato de sodio
desodio -lOO
-100 0.05
005
----------------''--------------'
Cisteína-HCI
Cisleína-HCI I
-210
-210 0.05
0.05

Dithiothreitol
Dithiothreitol i -330
-330 0.05
0.05

Titanio 111ccitrato
Titanio111 itrato -480
-480 0.5 aa 2.0
0.5 2.0

N~S.9H20 -571
-571 0.05
0.05

INDICADORES
INDICADORES DE
DE ANAEROBIOSIS
ANAEROBIOSIS

Las condiciones de anaerobiosis se controlan

controlan mediante un agente
agente indicador de
de
oxido-reducción. Para
Para este propósito, se
se dispone
dispone en el comercio de tiras
tiras de
azul de
de metileno o también
también se puede
puede preparar una
una mezcla
mezcla de azul de
de metileno-
glucosa
glucosa (Anexo 4); el azul
azul de
de metileno
metileno (AM)
(AM) es azul
azul cuando está oxidado ee
incoloro
incoloro cuando
cuando está
está reducido.
reducido. Cuando
Cuando el
el azul
azul de
de metileno es
es incoloro el poten-
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [123]

redoxen este punto es cercano a -230mIJ.

cial redoxen -230m\'. A pH alcalino y a una temperatu-
3]OC, la glucosa reduce el azul de metileno a una forma transpa-
ra mayor de 3rC,
rente. (Holdeman et al., 1977)
el a/., 1977)

OH-
Azul de metileno
melileno + Glucosa - Azul de metileno
melileno + Ácido glucorónico
oxidado CALOR
CALOR reducido
(azul) (reductora) (incoloro)

Los indicadores generalmente se mantienen incoloros en condiciones

reductoras y se colorean en condiciones oxidantes. Otro indicador de uso general
en la preparación de medios de cultivos prereducidos es la resarzurina, la cual
presenta un color rosado a un Eh cercano de -80mV
-SOmV y es incolora a -1
-10m\'.
O mV.

Resarzurina
(azul/morado) --
Reducción
Reducción Resorufin
(rosado)
Reducción
Reducción

Oxidación
Oxidación
Oihidroresorulin
Oihidroresorufin
(transparente)

redox pueden ser tóxi-

Al igual que los agentes reductores, los indicadores redox
cos para algunas bacterias; por lo tanto, debe ser utilizado en concentraciones
muy bajas en los medios. La resarzurina se utiliza a una concentración aproxima-
da de 1mg/L .

MATERIAL
MATERIAL DE VIDRIO
DE VIDRIO

5.S;
La vidriería utilizada en microbiología anaerobia se ilustra en la Figura 5.8;
incluye botellas de suero de diferente volumen, tubos de alta presión y tubos
Hungate, los cuales tienen tapa rosca y un septo de caucho. El material de
vidrio se tapa con tapón de caucho de butyl y sello metálicos, de 20 mm de
diámetro; se utiliza la agrafadora y la desagrafadora para colocar y retirar los
sellos metálicos respectivamente.
[124]
[124] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

Figura 5.8. Material de vidrio: agrafador, desagrafador, tapones, agrapes y

viales de cultivo.

INOCULACiÓN y TRANSFERENCIA DE SOLUCIONES

Los tubos y botellas utilizados en la manipulación de bacterias anaerobias se

sellan con tapones de caucho, lo cual asegura las condiciones de anaerobiosis
y permite agregar soluciones e inocular utilizando jeringas estériles gaseadas
z. Para realizar la inoculación o transferencias de soluciones se utilizan
con N2•
generalmente jeringas de 1 mi tipo 'tuberculina'; antes de tomar cualquier líqui-
z' para lo cual se intro-
do, el aire contenido en la jeringa se debe purgar con N2,
duce la aguja de la jeringa dentro de otra aguja de diámetro mayor, previamente
Nz para desalojar el aire; posterior-
esterilizada, realizando varias succiones de Nz
mente, se toma la solución deseada. Al inocular o transferir soluciones se tienen
los cuidados normales para evitar la contaminación de estos medios (flamear
los tapones, agujas y trabajar cerca de la llama); la Figura 5.9 ilustra el proce-
dimiento de inoculación y transferencia de soluciones.
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE LODOS
LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS Y AGUAS
AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [125]
[125]

N2

Purgar la
Purgar la jeringa
jeringa
con N.
con N2
cerca de la
cerca de la llama
llama

Flamear el
Flamear tapón.
el tapón. Agua
Agua
Inocular
Inocular destilada
destilada
con Jeringa
con jeringa
cerca de
cerca de la
la llama.
llama.

-'
Tomado de Alazard
Tomado Alazard el al., 1997
B
Figura 5.9.
Figura 5.9. Inoculación y transferencia
Inoculación transferencia de soluciones.
de soluciones.

COLONIAS. El aislamiento de bacterias anaerobias estrictas re-

TRANSfERENCIA DE CDLONIAS,
TRANSfERENCIA
quiere de un manejo especial para evitar el contacto con el oxígeno; a tal fin se
realizan pases consecutivos de medio sólido a medio líquido hasta obtener un
cultivo puro.
Para la inoculación en medio sólido se utiliza la técnica del ro//-tube
(tubo rodado). Los viales que contienen el medio sólido se llevan a un baño
SOO(
serológico a 500( para evitar que se solidifiquen; con ayuda de una jeringa
hipodérmica y su aguja, se inocula 0.5
O.S mi de la dilución seleccionada del re-
cuento realizado inicialmente; es necesario evitar la formación de burbujas.Luego
el tubo es rodado lentamente hasta obtener una capa uniforme del medio sólido
sobre las paredes del tubo. Los tubos rodados son incubados en posición inver-
tida para que el agua de condensación pueda ser removida posteriormente.
Para la transferencia de las colonias, se seleccionan aquellas bien desa-
rrolladas sobre la superficie del medio en el ro//-tube, y son transferidas al
medio líquido con la mínima cantidad de agar alrededor de la colonia. Para ello,
y bajo condiciones asépticas, se remueve el agrafe y el tapón, se flamea la boca
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [125]
[125]

Purgar la jeringa
Purgar jeringa
con
con N22
cerca de
cerca de la llama
la llama

Flamear el tapón.
Flamear tapón. Agua
Agua
Inocular
Inocular destilada
destilada

-'
con jeringa
con jeringa
cerca
cerca dede la llama.
la llama.
~

Tomado de Alazard
AJazard el sl,
al, 1997
B
Figura 5.9.
Figura 5.9. Inoculación y transferencia
Inoculación transferencia de soluciones.
de soluciones.

TRANSFERENCIADE COLON/AS. El aislamiento de bacterias anaerobias estrictas re-

TRANSFERENCIA DE COLON/AS.

quiere de un manejo especial para evitar el contacto con el oxígeno; a tal fin se
realizan pases consecutivos de medio sólido a medio líquido hasta obtener un
cultivo puro.
Para la inoculación en medio sólido se utiliza la técnica del roü-tube
ro//-tube
(tubo rodado). Los viales que contienen el medio sólido se llevan a un baño
serológico a 500( para evitar que se solidifiquen; con ayuda de una jeringa
0
(

hipodérmica y su aguja, se inocula 0.5 mi de la dilución seleccionada del re-

cuento realizado inicialmente; es necesario evitar la formación de burbujas.Luego
el tubo es rodado lentamente hasta obtener una capa uniforme del medio sólido
sobre las paredes del tubo. Los tubos rodados son incubados en posición inver-
tida para que el agua de condensación pueda ser removida posteriormente.
Para la transferencia de las colonias, se seleccionan aquellas bien desa-
rrolladas sobre la superficie del medio en el ro//-tube,
roü-tube; y son transferidas al
medio líquido con la mínima cantidad de agar alrededor de la colonia. Para ello,
"" h"i" rnnriirinnpc;
h",i" rnnriirinnpc; rlséoticas. se remueve el agrafe y el tapón, se flamea la boca
aséoticas,
[126]
[126] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

del
del vial
vial ee inmediatamente
inmediatamente se
se inserta
inserta una
una aguja
aguja aa través
través de
de la
la cual
cual fluye
fluye el
el nitró-
nitró-
geno; la
geno; la aguja
aguja debe
debe estar
estar adaptada
adaptada aa una
una jeringa
jeringa empacada
empacada con
con fibra
fibra de
de vidrio
vidrio
estéril (Figura
estéril (Figura 5.10).
5.10).

N
N

FIBRA
FIBRA DE
DE VIDRIO
VIDRIO

Figura 5.10.
Figura 5.10. Jeringa empacada
Jeringa empacada con
con fibra
fibra de
de vidrio
vidrio para
para el
el saseo
saseo de
de los
los viales.
viales.

Usando
Usando una pipeta de Pasteur estéril, con su punta doblada y preferible-
mente gaseada con nitrógeno, y valiéndose de la ayuda de'una
de 'una chupeta, se toma
la colonia marcada sobre la superficie del vial
vial y se transfiere a un vial
vial con medio
líquido el cual ha sido conectado al sistema de gaseo con nitrógeno; inmediata-
mente después se tapa y agrafa, procedimiento que ilustra la Figura 5.11.
(Holdeman et
el al., 1977).

o O O

O
o
O
'-- __ O-----J O ..._,..
~
L.___-=-___.J

Tomadode
Tomado Espilia. 1999.
de Esp~ia. 1999.

Figura 5.11.
Figura 5.11. Transferencias de
Transferencias de colonias
colonias aa medio
medio liquido.
líquido.
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE
DE LODOS
LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS Y AGUAS
AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [12j
[12i

COMPOSICiÓN
COMPOSICiÓN MICROBIOLÓGICA
MICROBIOLÓGICA

Existen varios métodos para realizar la caracterización y la cuantificación de la

composición microbiológica de los lodos. Los métodos convencionales para la ca-
racterización del lodo se basan en el crecimiento de las diferentes poblaciones en
medios selectivos. En
En primer lugar está la técnica del Número Más Probable (NMP),
en la cual diluciones seriadas del lodo son inoculadas en medios selectivos; con este
método se maneja un intervalo de confianza del 95% y brinda información de la
proporción de cada población bacteriana presente en el lodo (Beliaeff y Mary, 1993).
Elanálisisde
Elanálisis de microscopíadirecta
microscopía directa ha sido utilizado durante la caracterización de
lodos, para determinar la estructura de los gránulos y las biopelículas.Algunas técnicas
permiten realizar la visualización directa, otras requieren de la fijación y teñido del lodo
previa al examen. Esta técnica presenta el inconveniente de basarse solamente en la
morfología, lo cual no siempre permite identificar las bacterias con exactitud. La
epifluorescencia permite identificar las bacterias metanogénicas gracias a la fluores-
cencia producida por el factor 420; sin embargo, tiene el inconveniente de que algunos
microorganismos metanógenos no exhiben fluorescencia (Doddema y Vogels, 1978).
Otro método es la determinación de la velocidad de conversión de sustratos
a metano (AME) el cual es frecuentemente utilizado para la caracterización de la
biomasa del lodo, ya que proporciona información sobre la máxima actividad
metabólica posible de los diferentes grupos microbianos presentes en el lodo; sin
embargo no ha sido utilizada para la identificación y cuantificación de los
microorganismos.
A pesar de las limitaciones de las técnicas convencionales descritas ante-
riormente, estas han sido utilizadas con éxito para la caracterización de las comu-
nidades microbianas de los lodos, han permitido un mayor entendimiento de las
diferentes reacciones metabólicas que se llevan a cabo entre las poblaciones den-
tro del reactor y, por lo tanto, contribuyen a mejorar el dominio de esta tecnología
(Zinder, 1998; Oude Elferink, 1994).
Los avances en las técnicas de caracterización microbiológica han permi-
tido disponer de diversos métodos como la inmunodetección (ELlSA),
(EUSA), los
biomarcadores (RNA ribosomal; amplificación de secuencias de la fracción 165
16S del
[128] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

rRNA mediante reacción en cadena de la polimerasa, PCR) y los análisis de

composición lipídica de las membranas, para llevar a cabo una identificación
recta de los microorganismos en los lodos (Oude Elferink, 1994). Cabe mencior
que, si bien estas técnicas permiten una rápida identificación de los representé
tes de las poblaciones microbianas presentes en el lodo, no evalúa la capacid
de estas poblaciones para producir metano a partir de diferentes sustratos. En
Tabla 5.5 se especifican las principales poblaciones microbianas que son cuant
cadas en los estudios de caracterización micr.obiológica de los lodos.
A través de los recuentos microbiológicos se realiza la estimación del to
de las poblaciones presentes y del número de representantes para cada pob
ción. Para ello se utilizan las siguientes técnicas:
• Recuento total de bacterias con naranja de acridina.
• Estimacióndel número más probable (NMP) de representantes de cada poblacic
poblack
• Recuento total de la población metanogénica por epifluorescencia (factor 42(

RECUENTO
RECUENTO MICROBIOLÓGICO
MICROBIOLÓGICO TOTAL
TOTAL

La metodología utilizada es la
Standar Methods
descrita en el Standar Methods
(1992). La población total se es-
tima a través de la extrapolación
del promedio de varios conteos
directos, realizados por mi-
croscopía de epifluorescencia
sobre unfiltro
un filtro de nucleopore (0.2
~m),
pm), en el cual previamente se
filtran la dilución del lodo selec-
cionada yy se colorea con naranja
de
de acridina (ver Anexo 2).

Figura 5.12.
Figura 5.12. Microscopio
Microscopiode
de
epifluorescencia.
epifluorescencia.
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE LODOS
LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS Y AGUAS
Y AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [129]

Tabla 5.5.
Tabla 5.5. Caracterización
Caracterización microbiológica
microbiológica de
de lodos
lodos utilizados en el
utilizados en el tratamiento
tratamiento de
de
diferentes
diferentes tipos
tipos de
de agua
agua residual
residual por
por la
la técnica
técnica del
del NMP
NMP

Grupos Doméstica
DoméstIca Matadero
Maladero Vinaza
VInaza Refineria de Reflneria
ReIIneria de Procesadora Palma
Palma Cerveceria
Cervecería
microbianos (Ramírezet
(Rllllirelllt (Ramirezel
(Ramirez el (Ramirezet
(Ramm lit azúcar azúcar
lZIic:ar de papa africana (Wuelal.
(Wuelal.
al. 1996)"
al. 1996)· al. 1996)"
1996)· al. 1996)"
,1.1996)· (Grotenhuis
(Grotenhuls (Ooflingel
(DoHIngel (Wu el al.
(Wuelal. (Espitia
(EspHlaelel 1993)···
1993)"""
el al.
elal. al. 1985)""
al. 1985)·· 1993)···
1993)""" ,1.1998)·
al. 1998)"
1991)··
1991)""

8acterias
Bacterias
fermentativas
(Glucosa) 2 x lO'
10' 3 Xx lO"
10" 33xlO'
x 10' 2.1 x 10"
2.1xl0" lO"
10" 2.7 x 10'
2.7xl0' 5x
5xl0'10' 1.9 X lO"
1.9xl0"
(Lactosa) 2x
2 x lO'
10' 5 x 10' 4 x 10' 5.6 x 10'
5.6xl0' 11 x 10'
l1xlO' 1.2 x lO"
1.2xl0 11

Bacterias
sulfato
reductoras
(Acetato) 1 x 10' 11xx 10' 2 x 10' 2 x 10' 3.4 X lO"
1010
(Lactato) 1xl0'
1 x 10' 33xx 10' 4 x 10' xxl0'
10' 6.8x
6.8xl0lO"
11

Bacterias
acetogénicas
Propionato tOO
2 x 10' 4 x 10' 2.4 x 10'
2.4xlO' lO'
lO' 6.6x
6.6 X lO"
1010 5 x 10'
Butirato
8ulimto 44xx lO'
lO' 2 x 10' lO'
lO' 4.2 XX lO"
1011 x 10'
Etanol 1.5 x 10'

Bacterias
metanogénicas
metanogénicas
Acetato 2 x lO'
10' 1 x 10' 22xx 10' 2.4 x 10' 10' 1.3
1.3 xX 10"
1012 33xlO'
x lO' 6.6 X lO"
6.6xl0 11
Hidrógeno 8 x 10' 2 x 10' 2 x 10' 9.0 x 10' 10' 3.5 xX 10"
1012 55xX lO'
lO' 1.3
1.3 xX 10"
1012
Formato
Rmnato 2.0 x 10' 2.0 xX 10"
1012 4.7 xX 10"
1012
Metanol 4.3 x 10' 3.1 xX lO"
1010

No.de bacteriasl 99 SSV

de baderiasl •••• No. bacteriaslmi
de baderiasl
No.de •••
••• No. bacterias! 9 SS
de baderiasl
No.de SS

El microscopio está dotado de un ocular micrométrico de 100 divisiones,

sobre el cual las bacterias coloreadas por el naranja de acridina toman una tona-
lidad verde-amarilla que presenta fluorescencia; se realizan varios conteos, cuyo
promedio se extrapola al área del filtro, dividiendo dicho resultado por la biomasa
filtrada; así, se obtiene el número total de bacterias por gramo de SSVde
SSV de lodo.

ESTIMACiÓN
ESTIMACiÓN DEL
DEL NÚMERO
NÚMERO DE
DE REPRESENTANTES
REPRESENTANTES DE
DE CADA
CADA POBLACiÓN
POBLACiÓN

Se realiza mediante la técnica del número

número más
más probable (NMP), descrita en el
Standar Methodsdiferenciando
5tandar Methods diferenciando los siguientes
siguientes grupos según los
los medios de cultivo
cultivo
utilizados para
para cada población:
Bacterias
Bacterias fermentativas
fermentativas (BF).
Bacterias
Bacterias sulfatoreductoras (BSR).
(BSR).
Bacterias
Bacterias sintróficas (BS).
(BS).
Bacterias
Bacterias metanogénicas
metanogénicas (BM).
(BM).
[130] DIGESTiÓN ANAEROBIA

A su vez, para cada póblación

población se cuantifican el número de representantes
con diferentes sustratos. La Tabla 5.6 resume los sustratos utilizados para cada
población, el periodo de incubación y los parámetros para detectar la positividad
de los tubos sembrados.
Se realizan diluciones seriadas del lodo en el medio correspondiente. La
dilución 10-11 de la muestra de lodo previamente mezclada y homogenizada (me-
diante un homogenizador de tejidos) se realiza en la cámara de anaerobiosis o
bajo una fuente de nitrógeno. Las demás diluciones se realizan fuera de la cámara
con jeringas gaseadas con nitrógeno. Se inoculan tres o cinco tubos por cada
dilución, adicionalmente se incuban para cada población tubos sin inóculo como
control del medio (ver Anexo 3).
Las concentraciones de sustratos recomendadas para las bacterias
metanogénicas fueron: formato de sodio 4g/L y metanol 4 ml/L para las bacterias
acetogénicas; etanoI20-30mM/L para las sulfato reductoras; propionato 1 mi de una
solución de ácido propiónico neutralizado, butirato, 1 mi de una solución neutralizada
de ácido butírico, el metanol y etanol 1 mi de una solución stock de 6M y 1M respecti-
vamente (Whitman, 1992; Widdel, 1992; Hickey 1991).

Tabla 5.6.
Tabla 5.6. Principales caracteristicas
Principales características de
de la
la determinación
determinación del
del NMP
NMPde acuerdo con
de acuerdo con el
el
metabolismo bacterial
metabolismo bacterial de
de los
los grupos
grupos relacionados
relacionados con
con la
la digestión
digestión anaerobia
anaerobia

Grupo
Grupo Sustrato
Sustrato Periodo de
Periodo de Incubación
Incubación Detección tubos
Detección tubos positivos
posHlvos
35'C (dias)
35'C (dias)

Baclerias fermentativas
Bacterias fermentativas de
de lala glucosa
glucosa (BFG)
(BFG)yy Glucosa
Glucosa 5a8
5a8 Acidificación dei
Acidificación del medio.
medio. cambio
cambio de
de
Lactosa (BFG)
Lactosa (BFG) color verde
color verde aa amarillo
amarillo

Bacterias fermentativas
Bacterias fermentativas del
del lactato
lactato (BFL)
(BFL) Lactosa
Lactosa 5a8
5a8 Acidificación del
Acidificación del medio.
medio, cambio
cambio de
de
color verde
color verde aa amarillo
amarillo

Bacterias sulfatoreductoras
8acterias sulfatoreductoras del
del lactato
lactato (BSRL)
(BSRL) Lactato
Lactato 77 aa 15
15 Producción de
Producción de feS,
feS, coloración
coloración negra
negra

Bacterias sulfatoreductoras
Bacterias sulfatoreductoras del
del acetato
acetato (BSRA)
(BSRA) Acetato
Acetato 77 aa 15
15 Producción de
Producción de FeS,
res, coloración
coloración negra
negra

Bacterias sintróficas
Bacterias sintróficas del
del propionato
propionato (BSP)
(BSP) Proplonato
Propionato 30aa 60
30 60 Detección de
Detección de metano
metano por
por
cromatografla
cromatografía

Bacterias sintróficas
Bacterias sintróficas del
del butirato
butirato (BSB)
(BSB) Butirato
Butirato 30 aa 60
30 60 Detección de
Detección de metano
metano por
por
cromatografía
cromatografía

Bacterias metanogénicas
Bacterias metanogénicas hidrogenofílicas
hldrogenofllicas (BMH)
(BMH) H,ICD,
H/eD, 15 aa 45
15 45 Detección de
Detección de metano
metano por
por
cromatografia
cromatografia

Bacterias metanogénicas
Bacterias metanogénicas acetoclásticas
acetociasucas (BMA)
(BMA) Acetato
Acetato 30 aa 60
30 60 Detección de
Detección de metano
metano por
por
cromatografía
cromatografía
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS Y AGUAS
AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [131
[131]]

metanogénica del Hz-e0

Para la estimación de la población metanogénica Hz-COz,
z' se realiza el
intercambio de gases con esta mezcla (80%-20%). Cada tres días se gasean los
tubos inoculados. Para la población fermentativa, sintrófica y metanogénica,
acetoclástica y sulfatorreductora,
sulfatorreductora, el intercambio de fase se realiza con mezcla
Nz-CO
Nz-COzz (80%-20%).
Para el aislamiento de bacterias de las diferentes poblaciones cuantifica-
das por la técnica del NMp, a partir de la última dilución donde todos los tubos
fueron positivos, se toma 0.2-0.5 mi y se inoculan medios de cultivo sólidos (agar-
agar 2% para bacterias mesofílicas o 3% para bacterias termofílicas) para cada
población y se aplica la técnica del tubo rodado, de tal forma que las colonias
crecen sobre el agar en las paredes del tubo.

AISLAMIENTO
AISLAMIENTO DE
DE BACTERIAS
BACTERIAS METANOGÉNICAS
METANOGÉNICAS

Para la inoculación de
Para de los medios
medios sólidos
sólidos se
se deben mantener aa 50°C en un
un baño
baño
serológico. AA esta
serológico. esta temperatura
temperatura adicionar las
adicionar las vitaminas,
vitaminas, agente
agente reductor
reductor ee inoculo
inoculo
, ,
en condiciones
en condiciones de
de esterilidad
esterilidad con
con jeringas
jeringas gaseadas
gaseadas con
con nitrógeno.
nitrógeno. Se homogeniza
homogeniza
suavemente yy se
suavemente se rodan
rodan bajo
bajo un
un chorro
chorro de
de agua
agua fría.
fría. Se
Se incuban
incuban en
en posición
posición inver-
inver-
tida por
tida por el
el tiempo
tiempo necesario
necesario para
para obtener
obtener colonias,
colonias, el
el agua
agua de
de condensación
condensación es
es
retirada con
retirada con una
una aguja
aguja gaseada
gaseada con
con nitrógeno.
nitrógeno. Las
Las colonias
colonias posteriormente
posteriormente son
son
transferidas, dentro
transferidas, dentro de
de la
la cámara
cámara de
de anaerobiosis
anaerobiosis oo bajo
bajo una
una fuente
fuente de
de nitrógeno
nitrógeno
con pipetas
con pipetas de
de Pasteur
Pasteur estériles
estériles dobladas
dobladas en
en la
la punta,
punta, aa medios
medios de
de cultivo
cultivo líquidos
líquidos
(el mismo
(el mismo medio
medio que
que se
se utilizó
utilizó para
para elel aislamiento).
aislamiento). Fuera
Fuera de
de lala cámara
cámara se
se realiza
realiza
intercambio de
intercambio de fase
fase con
con jeringas
jeringas empacadas
empacadas con
con fibra
fibra de vidrio yy estériles
de vidrio estériles para
para
evitar una
evitar una posible
posible contaminación.
contaminación. El
El aislamiento
aislamiento de
de las
las colonias
colonias se
se obtiene
obtiene me-
me-
diante
diante repiques
repiques sucesivos.
sucesivos.
La pureza
La pureza de
de los
los cultivos
cultivos es
es confirmada
confirmada inoculando
inoculando elel aislado
aislado en
en medio
medio
sólido donde
sólido donde se
se deben
deben obtener
obtener colonias
colonias de
de un
un solo
solo tipo,
tipo, también
también se
se chequea
chequea lala
ausencia de
ausencia de contaminantes
contaminantes aerobios
aerobios uu otro
otro tipo
tipo de
de anaerobios
anaerobios inoculándolo
inoculándolo en
en un
un
caldo nutritivo
caldo nutritivo donde
donde se
se inhiba
inhiba elel crecimiento
crecimiento de
de las
las bacterias
bacterias en estudio yy se
en estudio se
favorezca
favorezca elel crecimiento
crecimiento de
de los
los posibles
posibles contaminantes.
contaminantes.
Para elel aislamiento
Para aislamiento de
de bacterias
bacterias metanogénicas
metanogénicas es
es necesario
necesario utilizar
utilizar me-
me-
dios selectivos
dios selectivos que
que proporcionen
proporcionen las
lasfuentes
fuentes de carbono yy energía
de carbono energía que
que requiere
requiere lala
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE
DE LODOS
LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS YY AGUAS
AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [131
[131 ]]

Para
Para la
la estimación
estimación de
de la
la población
población metanogénica
metanogénica del
del HH22-C0
-C022,, se
se realiza
realiza el
el
intercambio
intercambio de
de gases
gases con
con esta
esta mezcla
mezcla (80%-20%).
(80%-20%). Cada
Cadatres
tres días
días se
se gasean
gasean los
los
tubos
tubos inoculados.
inoculados. Para
Para la
la población
población fermentativa, sintrófica yy metanogénica,
fermentativa, sintrófica metanogénica,
acetoclástica yy sulfatorreductora,
acetoclástica sulfatorreductora, el
el intercambio
intercambio de
de fase
fase se
se realiza
realiza con
con mezcla
mezcla
NN22-C0
-C022 (80%-20%).
(80%-20%).
Para
Para el
el aislamiento
aislamiento de
de bacterias
bacterias de
de las
las diferentes
diferentes poblaciones
poblaciones cuantifica-
cuantifica-
das
das por
por la
la técnica
técnica del
del NMp,
NMp, aa partir
partir de
de la
la última
última dilución
dilución donde
donde todos
todos los
los tubos
tubos
fueron
fueron positivos,
positivos, se toma
toma 0.2-0.5 mi yy se inoculan
0.2-0.5 mi inoculan medios de
de cultivo
cultivo sólidos
sólidos (agar-
agar
agar 2%
2% para
para bacterias
bacterias mesofílicas o 3%
3% para
para bacterias termofílicas)
termofílicas) para
para cada
cada
población yy se aplica
población aplica la técnica
técnica del tubo rodado, de
de tal
tal forma
forma que las colonias
colonias
crecen
crecen sobre
sobre el
el agar
agar en las paredes
paredes del
del tubo.
tubo.

AISLAMIENTO
AISLAMIENTO DE
DE BACTERIAS
BACTERIAS METANOGÉNICAS
METANOGÉNICAS

Para la
la inoculación de los medios sólidos se deben mantener a 50°C en un baño
serológico. A esta temperatura adicionar las vitaminas, agente reductor e inoculo
,,
en condiciones de esterilidad con jeringas gaseadas con nitrógeno. Se homogeniza
suavemente y se rodan bajo un chorro de agua fría. Se incuban en posición inver-
tida por el tiempo necesario para obtener colonias, el agua de condensación es
retirada con una aguja gaseada con nitrógeno. Las colonias posteriormente son
transferidas, dentro de la cámara de anaerobiosis o bajo una fuente de nitrógeno
con pipetas de Pasteur estériles dobladas en la punta, a medios de cultivo líquidos
(el mismo medio que se utilizó para el aislamiento). Fuera de la cámara se realiza
intercambio de fase con jeringas empacadas con fibra de vidrio y estériles para
evitar una posible contaminación. El aislamiento de las colonias se obtiene me-
diante repiques sucesivos.
La pureza de los cultivos es confirmada inoculando el aislado en medio
sólido donde se deben obtener colonias de un solo tipo, también se chequea la
ausencia de contaminantes aerobios u otro tipo de anaerobios inoculándolo en un
caldo nutritivo donde se inhiba el crecimiento de las bacterias en estudio y se
favorezca el crecimiento de los posibles contaminantes.
Para el aislamiento de bacterias metanogénicas es necesario utilizar me-
dios selectivos que proporcionen las fuentes de carbono y energía que requiere la
[132] DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

bacteria que se desea aislar; así, cuando se quiere aislar bacterias metanogénic.
hidrogenofílicas, se utiliza Hz/COzcomo
H2/C02 como fuente de carbono. Durante la incubació
el espacio de cabeza es analizado para determinar la producción de metano pi
cromatografía de gases. Cuando se obtiene un resultado positivo se examina
cultivo por epifluorescencia; si se observa una fluorescencia azul-verdosa, el
indica la presencia de bacterias metanogénicas (BM), pero es necesario tener e
cuenta que no todas las BM muestran esta fluorescencia. El uso de antibiótico
como kanamicina y vancomicina, entre otros, ayuda a reducir la contaminació
con bacterias no metanogénicas durante el aislamiento.

AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES

Muestreo
Muestreo
,,
La toma de muestras del residuo debe enmarcarse
enmarcarse en la metodología
metodología de carac-
terización de aguas residuales;
residuales; ésta consta generalmente
generalmente de cinco etapas
etapas (es-
tablecimiento
tablecimiento de objetivos, información
información básica,
básica, selección de sitios de aforo y
muestreo,
muestreo, programa
programa de aforo
aforo y muestro,
muestro, registro e interpretación
interpretación de resulta-
resulta-
dos),
dos), las cuales
cuales se especifican
especifican a continuación.
continuación.
Objetivo
Objetivo de la caracterización.
caracterización. En este caso,
caso, el objetivo
objetivo de la caracteriza-
caracteriza-
ción responde a obtener
obtener las características
características fundamentales
fundamentales del residuo
residuo antes
antes y
después del sistema
sistema anaerobio
anaerobio de tratamiento
tratamiento biológico.
biológico. De esta manera
manera se pue-
de
de evaluar
evaluar la eficiencia
eficiencia del sistema
sistema y realizar
realizar los balances
balances básicos
básicos de materia
materia
orgánica,
orgánica, sólidos
sólidos y nutrientes.
nutrientes. Debe
Debe incluirse
incluirse la medición
medición y caracterización
caracterización del
biogas
biogas generado
generado en el
el proceso.
proceso.
Información
Información básica
básica para
para la caracterización.
caracterización. La
La información
información básica
básica esta rela-
cionada
cionada con
con las características
características del
del sistema
sistema de
de tratamiento,
tratamiento, tales
tales como:
como: tipo de
de siste-
siste-
ma, cargas
cargas hidráulica
hidráulica yy orgánica,
orgánica, volumen
volumen y tiempo
tiempo de retención
retención hidráulico,
hidráulico, origen
origen
del
del residuo,
residuo, procesos
procesos preliminares
preliminares (rejas,
(rejas, desarenado,
desarenado, sedimentación
sedimentación primaria).
primaria).
Selección
Selección de
de sitios
sitios de
de aforo
aforo yy muestreo.
muestreo. Con el
el fin
fin de evaluar
evaluar la eficiencia
eficiencia
del
del sistema
sistema de
de tratamiento,
tratamiento, los
los sitios
sitios de
de aforo
aforo yy muestreo
muestreo se
se localizan
localizan al
al ingreso
ingreso
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [133]
[133]

del sistema y a la salida del mismo. Normalmente se cuenta con algún dispositivo
de aforo que permite determinar el caudal afluente y efluente del sistema. De
otro lado, en sistemas anaerobios de tratamiento de aguas residuales, la medi-
ción y caracterización del biogas generado en el proceso es fundamental para
realizar los balances de materia orgánica e identificar la eficiencia en su remo-
ción; por lo tanto, se debe prever dicha medición en el programa de caracteri-
zación del residuo.
Elaboración del programa de aforo y muestreo. En la etapa de planifica-
ción del muestreo se debe definir si se toman muestras puntuales o una mues-
tra compuesta; por lo general, cuando se quiere evaluar la calidad del residuo y
la eficiencia del sistema, se trabaja con muestras compuestas; esta muestra se
compone a partir de muestra puntuales, mezclándolas en forma proporcional al
flujo o al tiempo. La muestra debe tomarse en recipientes limpios y refrigerarse
a 4°C hasta su análisis, los parámetros más importantes a analizar son la De-
manda Química de Oxígeno (DQO), la Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO) y
los Sólidos Suspendidos (SST y SSV). La medición de biogas generalmente se
realiza con medidores continuos tipo gasómetro seco, como los utilizados en
las redes de gas natural.
Registro e interpretación de resultados. La calidad con que se realice todo
el proceso de caracterización del residuo influye directamente en los resultados
del mismo; así, los aspectos más sobresalientes para tener en cuenta son:
representatividad de la muestra, técnicas de muestreo apropiadas, adecuado
manejo y preservación de muestras y análisis de datos desde los aspectos más
relevantes. Generalmente, el análisis se fundamenta en determinar las cargas hi-
dráulica, orgánica y de sólidos que ingresan al sistema, así como en evaluar la
eficiencia del sistema para remover materia orgánica y sólidos. Otro aspecto im-
portante en el análisis es la estabilidad del pH en el sistema, así como la evolución
de los ácidos grasos volátiles (AGV). Dichos parámetros influyen directamente en
el desempeño del proceso de digestión anaerobia: la tasa de degradación
anaerobia es máxima en la faja neutra, cerca del pH = 7, pero si el pH toma
valores menores de 6.3 o mayores de 7.8, la tasa de metanogénesis disminuye
drásticamente (Van Handel v I f'ttin(1;¡
pttinn~ 11qq4
qqL1\\
[134] DIGESTiÓN ANAEROBIA

Demanda
Demanda Química de Oxígeno

La determinación de la DQO,tanto en el afluente como en el efluente del sistem¡

sistern.
permite evaluar la tasa de remoción de la materia orgánica. Para completar el CUé
CUé

dro de transformación de la materia orgánica en un reactor anaerobio, se requier

cuantificar y caracterizar el biogas generado en el proceso. Según las característiCé
característica
del residuo y el proceso de tratamiento, la DQOpuede presentarse de varias rnaru
man(
ras: soluble, insoluble, biodegradable y resistente. En el proceso de degradación,
DQO biodegradable está constituida por las fracciones acidificada, celular
metanogenizada. La suma de la DQOresistente y la acidificada en el efluente, repn
senta la DQO no removida; mientras que la sumatoria de la DQO celular y
metanogenizada conforma la DQOremovida. La Figura 5.1 3 representa esquemál
esquernáí
camente el balance de DQOen el proceso de degradación anaerobia.

DQOCH.
DOOCH, - DQO
000

Figura 5.13.
Figura 5.13. Balance de
Balance de DQOen el proceso
DQO en el proceso de
de degradación
degradación anaerobia.
anaerobia.

FUNDAMENTO
FUNDAMENTO TEÓRICO
TEÓRICO

La metodología para la determinación de la demanda de oxígeno se fundamen

en una oxidación de la materia orgánica presente en la muestra en medio ácid
para lo cual se utiliza una mezcla de dicromato de potasio en exceso y ácic
áci<
sulfúrico, en presencia de un catalizador y alta temperatura. Luego de la dige
tión, se valora el exceso de dicromato de potasio y por lo tanto se determina
cantidad de materia orgánica oxidada en términos de equivalentes de oxígeno.
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [135]

METODOLOGíAS
METODOLOGfAS

Con respecto a la forma en que se realiza la digestión y oxidación de la materia

reflujo abierto y
orgánica, los métodos de determinación se clasifican en aquellos de reflujoabierto
reflujo cerrado.
los de reflujo cerrado. Los primeros, referenciados bajo el método 5220B en los
Métodos normalizadospara
Métodos normalizados para el análisisde aguas potables
análisis de aguas potables y res/duales
residuales (APHA, 1998),
requieren de uná cantidad importante de muestra y de los compuestos químicos
utilizados en la determinación; además, para concentraciones bajas de DQO, no
reflujo cerrado,
presentan buena exactitud. El otro método es el de reflujo cerrado, más económico
en el uso de reactivos y con buena exactitud para concentraciones bajas de DQO,
siempre y cuando dichas concentraciones estén por encima de 50 mg/I.
mg/1.
Con relación al método de valoración del dicromato de potasio en exceso
se dispone de dos métodos: el tltutométnco
titulométrico y el colorimétrico.
colorimétrico. El primero,
referenciado como el método 5220C en los Métodos Normalizados para
Métodos Normalizados para el análisis
análisis
de aguas
aguas potables
potables y residuales
res/duales (APHA, 1998), consiste en una titulación del
dicromato de potasio en exceso en presencia de indicador de ferroína, utilizando
una solución valorada de sulfato ferroso amoniacal; por su parte, el método
colorimétrico, referenciado como 52200
5220D en el mismo manual de referencia, re-
quiere cantidades pequeñas de muestra y de reactivos, y para su implementación
debe usarse un espectrofotómetro y una curva de calibración que se obtiene a
partir de una solución estándar de ftalato hidrógeno de potasio.

Ácidos grasos
Ácidos grasos volátiles
volátiles
MÉTODO
MÉTODO 1.
1. ÁCIDOS
ÁCIDOS GRASOS
GRASOS VOLÁTILES
VOLÁTILES POR
POR TITULACiÓN
TITULACiÓN

La medición de los AGVtambién puede ser realizada por titulación, método por el
cual se determina el bicarbonato y los ácidos grasos volátiles en soluciones acuo-
sas. La muestra centrifugada o filtrada se lleva a pH 3.0 con HCI0.1 N; a este pH,
C02 y los AGVestarán presentes en solución en
el bicarbonato será convertido en COz
la forma no ionizada. Después de ebullir la solución bajo condensador, para remo-
COz'
ver el CO2, la solución se titula con NaOH 0.1 N hasta pH 6.5. Los AGV (y quizás
algunos otros ácidos orgánicos) serán convertidos ahora a su forma disociada.
[136] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

Los equivalentes de bicarbonato y AGVse pueden calcular a partir de los volúme-

volúme-
nes de ácido y base utilizados en la titulación. (Rojas, 1988).
Lasaguas
Las aguas residuales que contienen compuestos oscuros coloreados necesitan
ser evaluadas para corregir la acidez preexistente debida a ácidos orgánicos que no
son volátiles, generalmente ácidos húmicos y compuestos acaramelados. Una vez co-
nocida esta acidez, la concentración verdadera de AGVpuede ser calculada:

verdaderos/meq/l)
ACV verdaderos(meq/I) == ACV (meq/I)
(meq/I) - Acidez preexistente (meq/t)

El procedimiento se realiza de la siguiente manera: la muestra se centrifuga

por cinco minutos a 5000 rpm o se filtra a través de papel filtro, se deja decantar
yy el sobrenadante se lleva a un recipiente graduado. Posteriormente, se agrega
agua destilada hasta un volumen de 100 mi, cuando el pH es mayor de 6.5 se
añade ácido hasta lograr un pH de 6.5, enseguida
enseguida se titula con ácido clorhídrico
0.1
0.1 NN hasta pH 3.0 (el consumo
consumo se registra como
como A).
A).
Posteriormente la muestra se coloca
Posteriormente coloca en
en un balón de
de digestión
digestión con
con co-
co-
vidrio esmerilado,
nexiones de vidrio esmerilado, se
se añaden algunas perlas
perlas de
de vidrio
vidrio de
de ebullición
ebullición yy
se conecta
se conecta el
el balón
balón al
al condensado.
condensado. De
De esta
esta forma
forma se
se elimina
elimina por
por calentamiento
calentamiento el
el
bicarbonato como
bicarbonato como COz'
COz' mientras
mientras que
que se
se preservan
preservan los
los AGV
AGV que
que han
han sido
sido
volatilizados por
volatilizados por condensación.
condensación. Se
Se calienta
calienta el
el balón
balón hasta
hasta que
que el
el líquido
líquido empieza
empieza aa
ebullir yy se
ebullir se deja
deja así
así tres
tres (3)
(3) minutos.
minutos. Se
Se interrumpe
interrumpe el
el calentamiento
calentamiento yy se
se espera
espera
dos (2)
dos (2) minutos,
minutos, entonces
entonces se
se titula
titula inmediatamente
inmediatamente hasta
hasta lograr
lograr un
un pH
pH 6.5
6.5 con
con
NaOH 0.1NN (este
NaOH0.1 (este consumo
consumo se
se registra
registra como
como B).
B). No
No es
es necesario
necesario enfriar
enfriar el
el líquido
líquido
(Field, 1987).
(Field, 1987). Los
Los meq/I
rneq/l de
de AGVse
AGVse calculan
calculan de
de la
la siguiente,
siguiente. manera:
manera:

Volumen de base
Voltlmende basegastada (8) xx O.lmeq
gastada (B) O.lmeq == meq ACV
meq ACV
meq ACV
meq ACV // Volumen
Volumende
de muestra
muestra V(mt)
V(ml) xx 1000
1000 == meq/I ACV
meq/I ACV
Volttmellde
VoltJmellde ácido
ácidogastado
gastado (A)
(A) xx O.1meq = meq
0.1 meq = meq de
de Acidez
Acidez total
total
meq de
meq de Acidez
Acidez total/Volumen
total/Volumen de muestt'a
de muestra V(ml)
V(ml) xx 1000 = meq/I
1000 = meq/I Acidez
Acidez total
total
meq/I Acidez
meq/I Acidez total
total -- meq/I
meq/I ACV
ACV == meq/I
mcq/I bicarbonato.
bicarbonato.
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [13'

MÉTODO
MÉTODO 2. ÁCIDOS
ÁCIDOS GRASOS
GRASOS VOLÁTILES
VOLÁTILES POR CROMATOGRAFfA
POR CROMATOGRAFíA

Para la determinación de ácidos grasos volátiles, la muestra se toma asépticamente

del cultivo, se acidifica y extrae con éter; el extracto de éter es utilizado para la
lectura por cromatografía.
La sal a partir del ácido es soluble en agua pero no en éter. A bajo pH (por
ejemplo, pH 2.0) los ácidos se encuentran en la forma de ácido libre, la cual es
soluble en agua y éter. Por esta razón las muestras para el análisis cromatográfico
son acidificadas a pH 2.0 o menor con una solución acuosa de H22SO
S04 al 50%
previamente a la extracción.
Para su análisis la muestra (1 mi) se mezcla con 0.2 mi de H22S044 al 50%,
O.4g de NaO
NaClyy 1 mi de etil éter, mezclar, centrifugar y retirar la capa de éter, a esta
adicionar CaCL22para remover agua disuelta en el éter. Inyectar en el cromatografo el
extracto de éter para su análisis. Se utiliza un cromatógrafo de gases, equipado con
detector de conductividad térmica, columna de aluminio o acero inoxidable de 6 1/4
1/
4

de pulgada, empacada con Supelco 1OOO®,

1000®, o 5% de FFAPsobre Chromosorb-G® y
como gas de arrastre se utiliza helio.
La solución estándar de los ácidos grasos volátiles se prepara: 1meq de
Ca/1 OOmlde solución acuosa: ácido fórmico: 0.037ml, acético 0.057ml, propiónico
0.075mL y butírico 0.091 mi (Holdeman et
el a/.,
a/., 1977).
1977).

Biodegradabilidad del residuo

FUNDAMENTO
FUNDAMENTO TEÓRICO
TEÓRICO

Existen dos tipos de procesos para el tratamiento de aguas residuales: los

fisicoquímicos y los biológicos. Los primeros son aplicados a aguas con contami-
nantes inorgánicos o con materia orgánica no biodegradable. Los procesos bioló-
gicos aerobios y anaerobios son utilizados cuando los principales contaminantes
son biodegradables.
La prueba de biodegradabilidad anaerobia permite evaluar el potencial de
degradación de la materia contaminante en
en un agua residual hasta metano
metano (CH44))
yy dióxido
dióxido de carbono (C022).
). Con esta
esta prueba se puede determinar:
[138] DIGESTiÓN ANAEROBIA

• velocidad de reacción (tasa de biodegradabilidad).

La velocidad
• Porcentaje máximo de biodegradabilidad.
• El efecto de la carga orgánica.
• Detectar efectos inhibitorios.
El método se basa en medir a lo largo del tiempo (30-45 días) la produc-
batch con medio mineral, lodo
ción de metano generado dentro de un reactor batch
activo y la muestra problema. En esta prueba se puede determinar
metanogénico activo
si los microorganismos son capaces de llevar
llevar a cabo la degradación de la materia
orgánica, lo cual permite hacer una aproximación al comportamiento y la veloci-
veloci-
dad de reacción de las bacterias en un tratamiento continuo.

MATERIALES y EQUIPOS

• Botellas serológicas de 160ml con tapones de hule y sellos de aluminio.

• Lodo metanogénico activo.
activo.
• Cromatografía de gases equipado con columna para la determinación de metano.
• Análisis de OQO
DQO (ver sección respectiva).
• Análisis de ácidos grasos volátiles
volátiles (ver sección respectiva).
• Análisis de sólidos suspendidos volátiles
volátiles (ver sección respectiva).
• Incubadora a 35°(.
35°C.
• Medio mineral de Batch (Anexo 1).

REACTORES

Las pruebas de biodegradabilidad se realizan en botellas serológicas de 160 mi con

volumen de fase gaseosa del 30% del volumen
un volumen volumen total. El medio mineral se adiciona
para asegurar que no se presente limitación por nutrientes, las botellas con el medio
se esterilizan previo a la adición del lodo y del agua residual de prueba.

INÓCULO y ARRANQUE

El agua residual a estudiar se debe caracterizar mediante la determinación de

sólidos totales, volátiles
volátiles y fijos; en sus formas totales (ST), suspendidos (SS) y
disueltos (SO), Demanda Química de Oxígeno (DQO) total y soluble. Cuando el
agua residual tiene un pH ácido se debe neutralizar.
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [139]
[139]

Al lodo metanogénico activo que se va a utilizar como inóculo se le determi-

Aliado
nan los sólidos suspendidos volátiles. Estos datos, junto con la DQO del agua, son
necesarios para calcular las cargas orgánicas de prueba. Durante el ensayo se debe
montar una botella testigo (Iodo y medio mineral únicamente) para corregir la pro-
ducción de gas generada por el lodo solo y obtener la producción neta de metano.

PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO

Aunque depende
Aunque depende de
de la
la actividad
actividad metanogénica
metanogénica del
del lodo
lodo yy del
del volumen
volumen total
total de
de lala
fase líquida
fase líquida en
en elel vial
vial de
de ensayo,
ensayo, lala mayoría
mayoría de
de los
los autores
autores recomiendan
recomiendan utilizar
utilizar una
una
concentración de
concentración de lodo
lodo suficientemente
suficientemente alta
alta para
para mantener
mantener un
un exceso
exceso (5 gSSV/1),
(5 gSSV/1),
pero suficientemente
pero suficientemente baja
baja para
para que
que elel lodo
lodo no
no contribuya
contribuya con
con más
más del
del 20%
20% de
de lala
DQO.Sielel lodo
DQO.Si lodo tiene
tiene una
una alta
alta actividad
actividad metanogénica
metanogénica (>
(> 0.2
0.2 gDQO-CH/g
gDQO-CH/g SSV
SSVdía)
día)
sepuede
se puede usar
usar menor
menor cantidad
cantidad de
de lodo,
lodo, pero
pero no
no menos
menos de
de 1.5
1.5 gSSV/L.
gSSV/L. La
Laconcentra-
concentra-
ción de
ción de DQOdel
DQOdel agua
agua residual
residual debe
debe ser
ser suficientemente
suficientemente alta
alta que
que permita
permita medir
medir elel
metano yy los
metano los AGV
AGVen
en forma
forma precisa.
precisa. Generalmente
Generalmente se
se recomienda,
recomienda, utilizar
utilizar agua
agua
residual con
residual con una
unaconcentración
concentración de
de 55gDQO/L
gDQO/L (Field,
(Field, 1987).
1987).
Luego de
Luego de lala inoculación
inoculación los
los reactores
reactores son
son incubados
incubados aa 35°C,
35°C, elel ensayo
ensayo sese
debe realizar
debe realizar por
portriplicado,
triplicado, ya
yaque
quealaltiempo
tiempo cero
cero se
sesacrifica
sacrifica una
una botella
botella por
por cada
cada
carga que
carga que se
se va
va aa evaluar
evaluar para
para verificar
verificar pH
pH yy determinar
determinar DQODQOtotal
total yy soluble
soluble yy
ácidosgrasos
ácidos grasos volátiles.
volátiles. Durante
Durante lalaprueba
prueba se sedebe
debe medir
medir lalaproducción
producción dedemetano
metano
acumulada, lala presión
acumulada, presión de
de lala botella
botella con
con un
untransductor
transductor de
de presión,
presión, lalaconcentra-
concentra-
ción de
ción de AGV
AGVyy lala DQO
DQOfiltrada,
filtrada, tanto
tanto del
del lodo
lodo control
control como
como del
del tratamiento
tratamiento en
en
intervalos de
intervalos detiempo
tiempo de
detres
tres aacuatro
cuatro días.
días.
ElElvolumen
volumendedemedio
mediomineral
mineralde
deBalch
Balchen
enlas
lasbotellas,
botellas, puede
puedevariar,
variar,depen-
depen-
diendo del
diendo delagua
agua residual.
residual. Aguas
Aguasresiduales
residuales con
con una
unabaja
baja DQO
DQOsonson poco
poco adecua-
adecua-
das para
das para elel tratamiento
tratamiento anaerobio,
anaerobio, elel volumen
volumen de
de medio
medio mineral
mineral adicionado
adicionado aa
cadavial
cada vial puede
puede introducir
introducir una
una importante
importante dilución
dilución del
del agua
agua residual
residual aa probar,
probar,
dando resultados
dando resultados poco
pococonfiables
confiables
ElElperiodo
periodode
detiempo
tiempo requerido
requerido para
paraelelensayo
ensayodepende
depende del
deltiempo
tiempo permi-
permi-
tidopara
tido paraquequeocurra
ocurra laladigestión
digestiónyypor
porlolotanto
tantosiempre
siempresesedebe
debeinformar
informar elelnúme-
núme-
roro dededías
díasen
enque
quesesellevó
llevóaacabo
cabo elelexperimento
experimento para
para obtener
obtener resultados
resultados de
de
DQOBD
DQOBD (Díaz-Baez, 1994;
(Díaz-Baez, 1994; Field,
Field,1987).
1987).
[140] DIGESTiÓN ANAEROBIA

biodegradabilidad se da por terminada cuando deja de au-

La prueba de biodegradabilidad
mentar la presión interna de la botella y la producción de metano se hace nula;
DQO total
cuando esto sucede, se procede a abrir las botellas para determinar la OQO
(Díaz-Báez, 1994).
y soluble final, así como el pH y los SSV (Diaz-Báez,

CÁLCULOS
CÁLCULOS

A manera de ejemplo se realizará el cálculo del volumen de agua residual y de lodo a

biodegradación. En el caso que se quiera evaluar una relación
utilizar en un ensayo de biodegradación.
gDQO/gSSVcon un agua residual y un lodo con las siguientes características:
de 1 gOQO/gSSVcon características:

Agua residual
Agua residual Lodo de inóculo
Lodo inóculo
Q0Total = 81369
Q07O/nl 81369 mg/L
mg/I SST = 46850
SST 46850 mg/I
mg/I
QOSolublf
QOSolllblr = 77260 mg/I
77260 mg/I SSV
SSV = 32740 mg/I
32740 mg/I

Para los cálculos se debe trabajar en mg/ml, por lo que los anteriores valores
serían:

Agua residual
Agua residual Lodo de inácuio
Lodo inóculo
DQ07O/nl
DQ0Total = 81,369
= 81,369 mg/mL
mg/ml SSV
SSV = 46,850
46,850 mg/mL
mg/ml

El volumen de lodo adicionar a la botella de ensayo, teniendo en cuenta una con-

centración mínima de lodo 1.5 9 SSV/I (1.5mg/ml) y un volumen
volumen total de la fase
líquida del ensayo (por ejemplo 13 mi) será;

1.5 mg
mg '*' mi
,.. 13 mL
x = 1.5 mi
1 mI

x =
= 19.5
19.5 rng
mg

Como la concentración
concentración de sólidos del lodo es: 32.740 mg/ml,
1 mi
x 19.5mg '*'-----
19.5mg ,..-----
740mg
32. 740mg

x = 0.6 ml
mi de lodo
lodo

Para el cálculo del agua residual, por ejemplo para una carga de 1mg OQO/
DQO/
mgSSV,será:
mgSSV, será:
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES
RESIDUALES [141]]
[141
mgDQO/mgSS
1mgDQO/mgSS
1 V 32. 740mgSSV/ml
740mgSSV/mí
0.6mí
O.6ml x
x=
x= 19.6 DQO
19.6 mg DQO

La DQOTotal
del agua residual es de 81.369mg/ml:

= _1_9_.6_m¿g!...._D_:Q:::_O
1mII • _1_9_. __
6_m....::og~D....:Q::....O
x Iml ..
81.369 mgDQO
81.369 mgDQO
x =
= O.24 mí
O.24 mI de residuo.

Cuando el agua residual tenga más del 80% de la DQOtotal como DQOsoluble, se
tomará en cuenta la DQOsoluble para los cálculos, de lo contrario la DQO soluble
e insoluble( o DQO filtrada y DQOss) deberán ser separadas y estudiar la
biodegradabilidad para cada fracción (Field, 1987).
Con los datos experimentales obtenidos en la prueba de biodegradación
se realizan los siguientes cálculos:
CÁLCULO DE fA
CÁLCULODE lA DQO
DQO SOLUBLE DEL AGUA
SOLUBLE DEL RES/DUAL. La primera etapa del cálculo es con-
AGUA RESIDUAL.
vertir los datos de la producción acumulada de CH44 a mg de DQO-CH/L
DQO-CH4/L (DQO
convertida a metano), como sigue (Field, 1987):

1000 X (SCH
1000 (SCH44/FC)/V
/FC)/V

Donde,
S CH44:: Producción acumulada de CH44 (mi) producido después de un tiempo de
digestión.
FC: Factor de Conversión (mi de CH4/4/ gDQO). (ver
(ver Tabla 5.3.).
V: Volumen efectivo
efectivo (litros) del recipiente de digestión.
/000
1000 = mg/g
mg/g
El factor también puede ser calculado con base en la masa de metano
producida expresada como DQO, dividida sobre la masa de DQO removida. Si el
cálculo se hace sobre la fracción soluble, la producción que se considera es la
neta de metano; si es sobre la DQOtotal, se utiliza la producción bruta de metano.
Para el primer caso, es necesario lavar el lodo antes de inocular las botellas para
eliminar el sustrato soluble que pueda contener el inóculo.
[142] DIGESTiÓN
DIGESTiÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

MCHrDQO(g)
y

MCHrDQO(g) = rlCH
nCH44 netas
tletas (máximo) (16) (4) = gCHrDQO
(16) (4)
MCH44-DQO removida(g) = (DQOi - DQOj) (Volllmellfase
(VoLumenfase líquida)
Líquida)

Los valores de concentración de los ácidos grasos volátiles deberán ser

convertidos a mg DQO/L, en el caso que estén expresados meq/L. Los factores de
conversión son: para el ácido acético 64, para el propiónico 112 y para el butírico
160. Sin embargo, es necesario conocer la relación (2:(3:(4
C2:C3:C4 para poder calcular
el factor de conversión correcto. Estos pueden ser cuantificados por cromatografía
de gases.
(on los datos en mg DQO/L, es necesario corregir los datos de cada trata-
Con
miento, restándoles los valores obtenidos para el control. Los datos corregidos
se dividen por la concentración corregida de la DQO del agua residual al tiempo
cero (Field, 1987).
Para obtener los porcentajes de metanogénesis, el porcentaje de AGVpre-
sentes, el porcentaje de acidificación, y el porcentaje de DQO filtrada remanente,
se utilizan las siguientes ecuaciones:

% Metanogénesis: DQO- CH44// DQOt =0 x 100

DQOt=O
% Acidificación:
AcidificaciólI: DQO- acid / DQOt=O x 100
% ACV presentes: DQO - A.C. V / DQOt=O x 100
% DQO filtrada
fiLtrada remanente:
¡'emanente: DQO -filtr
-fiLtr / DQOt =O
Oxx 100

Después se calcula la DQOfiltrada removida (% DQOfiltrada

removida) o % R
DQOfi,trada
de la siguiente forma:

% R = 100 - % DQO ji/llotlo

jiltrodo

Los porcentajes de biodegradación del agua residual (% DQOBDo % BD) Y

las células producidas como una fracción de la DQOdel agua residual (% DQOcelo
% células) se calcula como sigue:
= %R
% BD = + %ACV
% ACV
éLuLas= % BD - % A o % Células
% Cél/ilas CéLtdas = % R - % M
 CARACTERIZACiÓN
CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS
ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [143]
[143]

El coeficiente de rendimiento celular (Y): 9 DQOcélu,as

/ 9 DQOBD
DQOcé'ulas

y = % células
células / % BD

CALCULODE
CALCULO LA MM/MA
DE LA MM/MA TASA
lASA DE B/ODEGRADAB/L/DAD.Indica
DE B/ODEGRADAB/L/DAD. la velocidad de utilización
del sustrato por los microorganismos, se calcula a través de la medición de
metano obtenida por unidad de SSVy por unidad de tiempo. Para ello se gráfica
las moles netas de metano producidas en función del tiempo, y se calcula la
pendiente máxima de producción de metano. El dato de la pendiente máxima de
la curva, se divide entre los SSV inoculados en la botella. Las moles de metano
expresadas en masa de DQO (g CH44-DQO), se obtienen multiplicando por el
peso molecular del metano (16g) por los gramos de Oz requeridos para oxidar
1 9 de CH44 a COzy HzÜ
HzO (4g). Las unidades obtenidas son 9 CH44-DQO/gSSV días
(Díaz-Báez, 1994).
La tasa máxima de biodegradabilidad será:

Pendientemáxima
Pendiente nCH 4
máxima nCH "<las x 16
netas X 16 xx 44 xx 1000
1000
-----------.:......:....-------
---------------- == mgCHPQO/mgSSVd
mgCHPQO/mgSSV.d
SS11*
SSV*
"La concentración
*La concentración mg/mJ
mg/ml xx volumen
volumen de
de lodo
lodo inoculado
inoculado

anaerobia
Toxicidad anaerobia
FUNDAMENTO
FUNDAMENTO TEÓRICO
TEÓRICO

En el
el tratamiento de aguas residuales, la toxicidad es observada cuando se pro-
duce
duce una reducción en
en la producción
producción de metano como consecuencia de la presen-
cia de
de uno
uno o varios compuestos tóxicos. El ensayo de toxicidad se basa en comparar
la
la reducción
reducción en
en la tasa
tasa de
de producción
producción de metano de
de un
un lodo expuesto aa una sus-
tancia tóxica frente aa un
un control que no
no tiene
tiene dicha sustancia (Figura
(Figura 5.14).
Generalmente la
la toxicidad
toxicidad es el resultado de
de la inhibición
inhibición de
de bacterias
bacterias
metanogénicas
metanogénicas y/o
y/o acetogénicas,
acetogénicas, sin embargo
embargo se
se puede presentar
presentar inhibición
inhibición de
de las
las
enzimas
enzimas extracelulares
extracelulares producidas
producidas por
por las
las bacterias
bacterias responsables
responsables de
de la
la hidrólisis
hidrólisis de
de
polisacáridos,
polisacáridos, proteínas
proteínas yy grasas.
grasas.
[144] DIGESTiÓN ANAEROBIA

CONTROL
CONTROL

M
E
T
A MÁS
MÁS COMPUESTO
COMPUESTO TÓXICO
TÓXICO
N
N
O

TIEMPO
TIEMPO

Figura 5.14.
Figura 5.14. Producción de metano
Producción metano en un ensayo
ensayo de toxicidad.
toxicidad.

MATERIALES
MATERIALES EQUIPOS
y EQUIPOS

• Botellas serológicas de 120ml, con tapón de caucho y sello de aluminio.

• Cilindro de CH44 puro para elaborar curva de calibración.
• Cromatógrafo de gases configurado para cuantificación de CH4.4
• Cuarto caliente o baño María.
• Medio de cultivo (ver Anexo 1).

PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO

El ensayo de toxicidad se realiza igual a una Actividad Metanogénica Específica,

AME (ver sección correspondiente) con la activación previa del lodo y la
cuantificación de la producción de metano mediante cromatografía de gases.
La prueba se hace por triplicado, debe incluir un control positivo con una
sustancia de referencia de toxicidad conocida, y un control negativo en el cual no se
le ha adicionado la
lasustanciao
sustancia o el agua residual potencialmente tóxica (Iodo + sustrato).
potencialmentetóxica
Se deben probar además diferentes concentraciones del tóxico o del agua residual
que se va a evaluar.
Luego de la activación del lodo, se adiciona el sustrato para control nega-
tivo, para cada uno de los tratamientos se adiciona el sustrato junto con el tóxico
o dilución a evaluar. Se incuban las botellas a 35°C, y se realiza la medición de la
producción de metano cada tres horas durante las primeras 24 horas del ensayo.
Posterior a este tiempo, se hacen mediciones dos veces al día durante los si-
 CARACTERIZACiÓN DE LODOS ANAEROBIOS Y AGUAS RESIDUALES [145]
[145]

guientes 5 días de exposición. Previo a iniciar el ensayo de toxicidad se establece

la tasa de producción de metano propia del lodo mediante un ensayo de actividad
metanogénica específica.

CÁLCULOS

Con los datos obtenidos, se construye una gráfica de volumen de metano produ-
cido en función del tiempo de prueba. Se calcula la pendiente obtenida para el
control negativo, el control positivo, y para cada uno de los tratamientos utiliza-
dos. Con los valores obtenidos, se calcula la actividad metanogénica de cada uno
de los tratamientos.
La inhibición de la actividad metanogénica para cada uno de los tratamien-
tos se calcula comparando el valor obtenido respecto al valor obtenido para el
control negativo. El porcentaje de actividad metanogénica (% ACT) comparada
con la del control será:

El porcentaje de inhibición (% 1)para cada tratamiento o concentración será:

%1 = 100 - %ACT
100 %ACT

El valor de la concentración a la que un compuesto o mezcla de compues-

tos (agua residual) produce una inhibición de la actividad en un 50%, se determi-
na graficando los % ACT obtenidos para cada tratamiento en función de la
concentración o dilución del tratamiento. La concentración a la cual se obtiene
CEsode
una inhibición del 50%, corresponderá a la CE 50 de la muestra.
[146] DIGESTiÓN ANAEROBIA

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(Balows, A., Truper, Dworkin, M., Harder,
Dworkin, M., Harder, W,
W., Schleifer, K.H, Eds]
Schleifer, K.H, Eds;

SpringerVerlag. NewYork
Springer Verlag. New (EUA), p. 719-167.
York (EUA), 719-167.
WILLS, B. et
WILLS,B. el al (2000). "Informe
a/(2000). final de
"Informe final de la investigación:
investigación: Optimización
Optimización de la etapa
etapa de arranqu(
arranque
de reactores
de reactores anaerobios,
anaerobios, mediante
mediante el mejoramiento
mejoramiento de la calidad
calidad de diferentes
diferentes semilla~
semillas
en condiciones
condiciones dinámicas de operación".
dinámicas de operación". Colciencias,contrato 178-96. Universidad
Colciencias, contrato 178-96. Universidad de
de
Antioquia, Facultad
Antioquia, Facultad de
de Ingeniería,
Ingeniería, Medellín
Medellín (Colombia).
(Colombia).

WOLFE,R.5.y
WOLFE, R.S. y Higgins, !.J. (1979). "Microbial
Higgins, I.J.(1979). "Microbial biochemistry
biochemistry of methane:
methane: a study contrats". Int.
study in contrats". /nt.
Rev. Biochem. 21:
Rev. Biochem. 21: 267-350.
267-350.
WU, W.M.; Thiele,
WU,WM.; J.H.; Jain,
Thiele, J.H.; M.K.; Pankratz,
Jain, M.K.; Pankralz, H.5.
H.5. y Hickey,
Hickey, R.F. (1993). "Comparison
R.F.(1993). "Comparison of Rod
Rod -

versus Filament type

versus Filament methanogenic granules:
type methanogenic Microbial population
granules: Microbial population and reactor
and reactor

performance". App!. Microbio!.

performance". App!. Biotechno!. 39:
Microbio!. Biotechno!. 39: 795-803.
795-80l

ZINDER, S.H.
lINDER, S.H. (1998).
(1998). "Methanogens",
"Methanogens", capítulo
capítulo 5. En:
En: Techniques
Techniques in Microbial Ecology (Burlage,
Microbial Ecology (Burlage,

R.5 et al,
R.5 el a/, eds.
eds. ) Oxford
Oxford University
University Press. New York
Press. New York (EUA), 113-135.
(EUA), p. 113-135.
ANEXOS
 ANEXO 1
MEDIOS DE CULTIVO y SOLUCIONES
ANAEROBIAS
ANAEROBIAS

A.
A. MEDIOS
MEDIOS DE CULTIVO
DE CULTIVO

ACTIVIDAD METANOGÉNlCA
Para 1000 mi

Solución mineral de Balch sin sulfatos 50 mi

Solución oligoelementos sin sulfatos 10 mi
KzHP04
KzHP04 0.3g
O.3g
Solución de resarzurina (0.1%)
(0.1 %) 1.0 mi
Extracto de levadura 0.1gg
0.1
Bio-tripcase (Peptona trípsica de caseína) 0.1gg
0.1

Se completa volumen a 11,

11,se
se ajusta pH a 7.0 con NaOH 1N, agregar 10% en
volumen de agua destilada adicional, hervir hasta llegar al volumen de 1 litro y enfriar bajo
Nz.
atmósfera de Nz.
Cuandoesté
Cuando esté a temperatura ambiente agregar:
NaHC033 2.0g
Cisteína 0.5g

Dosificar bajo corriente de nitrógeno. Se gasea el frasco donde se va a servir con Nz

Nz
y se agrega el medio. Servir 13 mL en botellas de 60 mL, hacer intercambio de fase Nz-Nz - COz
(80% - 20%) por un minuto, se debe retirar primero la aguja con la cual se está gaseando
para que no haya una sobre presión y luego la aguja de desalojo, llevar a autoclave durante
sobrepresión
15 minutos (121
(121°C
oC-- 15 psi), antes de utilizarlo agregar:
NazS(2.0%) 0.2 mL
Solucióndiluida
Solución diluida de vitaminas de Balch 0.2 mL
[152]
[152] D,GEST'ÓN
D,GEST'ÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

Nota. Elmedio para la realización de la prueba de Biodegradabilidad es este mismo suprimienc

Nofa. suprimien(
el extracto de levadura y Bio-tripticasa, estos compuestos aumentan la concentración de DQOf¡
un bajo porcentaje y finalmente la concentración real no es la misma que se va a evaluar.

RECUENTO DE
RECUENTO DE BACTERIASANAEROBIAS
BACTERIAS ANAEROBIAS ESTRICTAS (BAS)
ESTRICTAS(EAS)
Volumen 1 litro:

Solución mineral de 8alch

Ba/ch sin sulfatos 50ml
HP044
K2zHP0 0.30g
O (0.2%)
Fe(SOJ7HlzO 1.0ml
Solución de oligoelementos sin sulfatos 10.0ml
NiCll.
z·6H
6HpzO (O.5g/L)
(0.5g/L) 0.5ml
O.5ml
Azul de bromotimol (1.0%) 1.0ml
Extracto de levadura 2.0g
Bio trypcase (Peptona trípsica de caseína) 2.0g
Glucosa 10.0g

Se completa con agua destilada a 1OOOmL,se ajusta pH con NaOH 1N, agregar 1O~
en volumen de agua destilada, hervir hasta llegar al volumen de 1 litro y enfriar bajo atrnósft
atmósfl
ra de nitrógeno (NJ

Cuando esté a temperatura ambiente agregar

NaHC03J
NaHCO 5.0g
Cisteína
Cisteína 0.5g
O.5g

Servir 5mL en tubos Hungate, hacer cambio de fase N/COz

N/C02 (80%, 20%) durante u
minuto, llevar a autoclave durante 15 minutos (121°C - 15 psi). Antes de utilizarlo agregar
agregal
NazlS.9H
S.9H2z0O (2.0%) 0.05ml/5ml
Vitaminas diluidas de Balch 0.05ml/5ml

Después del autoclave el pH debe ser 7.1

 ANEXOS
ANEXOS [153]
[153]

RECUENTO BACTERIAS
RECUENTO BACTERIAS FERMENTADORAS
FERMENTADORAS DEL
DEL LACTATO
LACTATO Yy DE
DE LA
LA GLUCOSA
GLUCOSA (BFG
(BFG YYBFL)
BFL)
Volumen 11 litro:
Volumen litro:

Solución
Soluciónmineral
mineral de
de Balch
Balch sin
sin sulfatos
sulfatos 50ml
50ml
Oligoelementosde
Oligoelementos de Balch
Balch sin
sin sulfato
sulfato 10ml
10ml
KKzHP04
zHP04 0.30g
0.30g
Fe(SOJ7H zO (0.2%)
Fe(SOJ7HP (0.2%) 1.0m\
1.0ml
NiCl z.6 HzO(O.5g/L)
NiClz.6 HP (O.5g/L) 1.0ml
1.0ml
Azul
Azul de
de bromotimol
bromotimol (1.0%)
(1.0%) 1.0ml
1.0ml
Extracto de
Extracto de levadura 2.0g
2.0g
BIOtrypcase
BIO trypcase (Peptona
(Peptona trípsica
trípsica de
de caseína) 2.0g
2.0g
Selenito de
Selenito de sodio (1.73g/L)
(1.73g/L) 1.0ml
1.0ml

Para las
las BFGtomar 500mL del medio anterior
anterior y agregar 5g de glucosa. Ajustar pH a
7.1. Despuésde hervir enfriar bajo
bajo atmósfera de N/COz y agregar:
Cisteína- HCI 0.25g
NaHCO¡
NaHC03 (10%) 2.5g

Para las BFLtomar

BFL tomar los 500 mL de medio restantes y agregar 3.6 mL de lactato de
sodio (60% en peso) ó 2.8 mL de ácido láctico. Ajustar el pH a 7.25. Después de hervir,
enfriar bajo atmósfera de NzlCOz.
Nz/COz.

Cuandoestá a temperatura ambiente agregar:

Cisteína- HCI 0.25g
NaHCO¡
NaHC03 (10%) 2.5g

Servir 5mL en tubos Hungate, bajo atmósfera de nitrógeno.

nitrógeno, hao"r
hacer cambio de
fase Nz/CO z(80% / 20%) durante un minuto. Llevar al autoclave durante 15 minutos
Nz/COz(80%
(121°C - 15 psi).
Antes de utilizarlo agregar:
NazS.9H
NazS.9HpzO (2.0%) 0.05ml/5ml
0.05m1/5ml
Vitaminas diluidas de Balch 0.05ml/5ml
[154]
[154] D,GeST'ÓN
D,GEST'ÓN ANAeROBIA
ANAEROBIA

RECUENTO DE BACTERIASSULfATOREDUCTORASDEL
RECUENTODE BACTERIAS SULFATOREDUCTORAS DEL ACETATO
ACETATOYY LACTATO(BSRLAc
LACTATO (85RLAc y 85!
BSI
Volumen 1 litro:

KHlo4
KHlO4 0.2g
NH
NH4C1
4
CI 0.5g
O.5g
Na S04
NazS04
2
3.0g
3.0g
NaCl 1.2g
FeCI2AH20
FeClz.4HzO 0.36g
MgCl2·6H20
MgClz·6HzO OAg
0.4g
CaCl2·2H20
CaClz·2HzO 0.15g
Extracto de levadura 1.0g
P.w.sin
Oligoelementos P.w. sin sulfato 1.0ml
Solución de resarzurina (0.1 %) 1.0ml

Para las bacterias sulfato reductoras del acetato se toman 500mL del medio
y agregar 1. 5g de acetato de sodio. 3Hp Ajustar pH a 6.7.
2/C02 y agregar antes de ser
Después de hervir, enfriar bajo atmósfera de N
N/COz
NaHC0
NaHCO3J
Para las bacterias reductoras del lactato tomar los 500mL de medio re~
res
agregar 4.25ml de lactato de sodio (60%). Ajustar el pH a 6.8. Después de herv
bajo atmósfera de N/COz.
N/C02.
Cuando está a temperatura ambiente agregar antes de servir 2.5g
NaHC03J
NaHCO
Servir 5mL
5mLen
en tubos Hungate,bajo atmósfera de nitrógeno, hacer
hacercambiode
cambio de fa
(80% / 20%) durante un minuto, llevar al autoclave durante 15 minutos (121°C, 15 P
Antes de utilizarlo agregar:
Cisteína HCI (2.5%) 0.1 ml/5ml
Vitaminas P.W. diluidas
P.w. diluidas 0.05ml/5ml

BACTERIAS METANOGÉNlCAS HIDROGENOFÍllCAS. (BMH)

RECUENTO DE BACTERIASMETANOGÉNlCASH/DROGENOFIL/CAS.(BMHz)
RECUENTODE
Volumen 1 litro:

Solución mineral de Balch sin sulfatos 50ml

Solución oligoelementos de Balch sin sulfatos 10ml
 ANEXOS
ANEXOS [155]

K2HP04
KzHP04 0.30g
NiCI2. 6Hp (O.5g/L)
NiClz.6HzO (0.5g/L) O.5ml
0.5ml
Selenita
Selenito de sodio (1.73g/L)
(1. 73g/L) 1.0ml
FeCI 2.4H20 (0.2%)
FeClz.4HzO(0.2%) 1.0ml
Resarzurina (0.1 %) 1.0ml

El medio no contiene SO
SO44 con el fin de evitar el crecimiento de bacterias autotróficas,
cuando se requiere el medio para aislar bacterias hidrogenofilicas,
hidrogenofílicas, con el fin de evitar la
contaminación del cultivo, no se agregan vitaminas, extracto de levadura, Bio-trypcase , ni
jugo de rumen.

Cuandose requiere el medio para identificar crecimiento de bacterias hidrogenofílicas

se agregan:
Extracto de levadura 0.5g
Bio- trypcase 0.1g

Ajustar el pH a 7.2 - 7.4 con NaOH 1M, agregar 10% en volumen y hervir hasta
evaporar el exceso, enfriar bajo corriente de nitrógeno, cuando esté a temperatura am-
biente agregar:
Cisteína - HCI O.5g
0.5g
NaHCO
NaHC03J (10%) 5.Og
5.0g

Servir 5mL en tubos Hungate,bajo

Hungate, bajo atmósfera de nitrógeno,hacer
nitrógeno, hacer cambiode
cambio de fase H)C0
H/COz
2

(80% /20%) durante un minuto, llevar al autoclave durante 15 minutos (121

(80%/20%) °C_15
(121°C- 15 psi).
Renovar el cambio de fase
fase H)C0
H/COz2 cada 2 ó 3 dias
días después de inocular.
Antes de utilizarlo agregar:
Na S. 9H20 (2.0%)
NazS.9HzO
2
0.05ml/5ml
Vitaminas diluidas de Balch 0.05ml/5ml

RECUENTO
RECUENTO DE
DE BACTERIAS ACETOCLÁST/CAS(BMA)
METANOGÉNlCAS ACETOCI..ÁSTlCAS
BACTERIASMETANOGtNlCAS (BMA)
Volumen 11 litro:
litro:

Solución mineral
mineral de
de Balch sin
sin sulfatos
sulfatos 50ml
KKzHP04
2
HP04 0.30g
0.30g
[156] DIGE:ST/ÓN
D,GEST'ÓN ANAE:RDBIA
ANAEROBIA

Soluciónoligoelementosde Balchsin sulfatos 10.0ml

FeS04'
Fe S04' 7HzO(0.2%)
7HzO(0.2%) 1.0ml
Selenitode sodio (1.75g/L) 1.0ml
Extracto de levadura O.5g
0.5g
Bio - tripcase 0.19
Resarzurina (0.1%) 1.0ml
Acetato de sodio 8.0g

Para el aislamiento de bacterias metanogénicas del metanol, se utiliza este medio

adicionando 0.63mL de metanol a cambio del acetato.
Ajustar el pH a 7.1-7.2. Agregar 10% del volumen final de agua destilada, enfriar
NiC02 (80% - 20%), cuando esté a temperatura ambiente agregar:
bajo atmósfera de N/COz
Cisteina- HCI O.5g
0.5g
Na HC033 (10%) 5.0g

Ni
Servir 5mL en tubos Hungate, bajo atmósfera de nitrógeno, hacer cambio de fase N/
COz(80%
C02 (80% - 20%) durante un minuto, llevar al autoclave durante 15 minutos (121°C - 15 psi).
Antes de utilizarlo agregar:
Na zS.9H20
NazS. 9H20 (2.0%) 0.05ml/5ml
Vitaminasdiluidas de Balch 0.05ml/5ml

RECUENTODE
RECUENTO BACTERIASSINTRÓFICASDEL
DE BACTERIAS PROPIONATO// BUTlRATO
slNTRÓFlCAS DEL PROPIONATO BUTlRATO (BsP
(BSP y BsB)
BSB)
Volumen 11 litro:
litro:

Soluciónmineral
Soluciónmineral de Balch sin sulfatos 50ml
Soluciónoligoelementos
Soluciónoligoelementos de
de Balch
Balch sin
sin sulfatos 10ml
10ml
KKzHP04
zHP04 0.3g
Fe
FeS04'
S04' 7H zO(0.2%)
7HzO(0.2%) 1.0ml
1.0ml
Selenito
Selenitode
de sodio
sodio (1.75g/L)
(1.75g/L) 1.0ml
1.0ml
NiCl z(0.05%)
NiClz(0.05%) O.5ml
O.5ml
Extracto
Extracto de
de levadura
levadura 0.19
0.19
Bio
Bio -- tripcase
tripcase 0.19
0.19
Resarzurina(0.1%)
Resarzurina (0.1%) 1.0ml
1.0ml
 ANEXOS [157]
[157]

Setoman 500ml para preparar el medio de bacterias sintróficas del propionato, agre-
gando 0.5g de propionato de sodio (C33HsOzNa)
HsOzNa)
Los 500ml restantes se utilizan para el medio de bacterias sintróficas del butirato, se
agregan O.5g
0.5g de butirato de sodio (C44H7700zNa)
zNa) o 4.5ml de ácido butírico 1M.

Agregar 10% en volumen de agua destiladaen exceso,enfriar bajo atmósfera de N/COz

(80% - 20%) ,cuando esté a temperatura ambiente agregar:
Cisteína - HCI 0.5g
NaHC0
NaHCO3J (10%) 5.0g

Servir 5mL en tubos de Hungate, bajo atmósfera de nitrógeno, hacer cambio de fase Ni
N/
COz (80% - 20%) durante un minuto, llevar al autoclave durante 15 minutos (121°C - 15 psi).
COz(80%

Antes de utilizarlo agregar:

Naz2S.9H
S.9Hp
20 (2.0%) 0.05ml/5ml
Vitaminas diluidas de Balch 0.05ml/5ml

B.
B. PREPARACiÓN
PREPARACiÓN DE
DE SOLUCIONES
SOLUCIONES

SOLUc/ÓN MINERAL
SOLUCIÓN MINERAL DE
DE BALCH
BALCH
Con sulfatos sulfatos *
Sin suIfatos
KHl04 6.0g 6.0 99
6.0
(NH
(NH4 )2S04
4)zS04 6.0g
NH44C1 5.0 99
MgCl
MgCIz2•·6Hp
6H20 2.1
2.1 9
MgS0 4·7Hz2O
MgS04·7H 0 2.6g
2.6g
CaCl ·2H
CaCIz2·2Hp
z O 0.16g 0.16 9
0.16
NaCl
NaCl 12.0 99 12.0 99
12.0
** Para
Para evitar
evitar inhibición
inhibición por
por la
la presencia
presencia de
de bacterias
bacterias sulfato-reductoras.
sulfato-reductoras.
Diluir
Diluir en
en 1litro
1litro de
de agua
agua destilada.,
destilada., preparara
preparara en
en aerobiosis,
aerobiosis, almacenar
almacenar en
en refrigera-
refrigera-
dor
dor aa 4°(,
4°(.
[158]
[158] D,GéSTIÓN
D,GEST'ÓN ANAéROBIA
ANAEROBIA

SOLUaÓN OLlGOELEMENTOSSIN
SOLUCIÓN OLlGOELEMENTOS SIN SULFATOS
SULFATOS

Con sulfatos Sin sulfatos*

Ácido nitrilotriacético** 1.5g
1.5g 1.5 9
MgS04· 7H2zOO
MgS04· 3.0g
MgClz2·6H
MgCI ·6Hp2O 2.5 99
2.5
MnS04·H2zOO
MnS04·H 0.5g
MnClz.4HzO
MnClz.4HzO 0.6 9
NaCl
NaCI 1.0g 1.0 9
FeS04·7HzO
FeS04·7HzO 0.1g
FeClz.4HzO
FeClz.4HzO 0.1g
CoClz·6HzO
CoClz·6HzO 0.1g
CoS04·6HzO
CoS04·6HzO 0.1g
CaClz·2H2zOO
CaClz·2H 0.1g 0.1g
ZnClz
ZnClz 0.1g
ZnS04
ZnS04 0.1g
CuS04.5 H
CuS04.5 Hp20 0.01g
CuCV HzO
CuClz·2HzO 0.01g
ALK(S04)z 0.01g
ALCI
ALCI)J 0.01g
HJBOJJ
H)BO 0.01g 0.01 9
NaMo04.2 Hp
NaMo04·2 HzO 0.01g 0.01 9

* Para evitar inhibición por la presencia de bacterias sulfato reductoras.

**Se disuelven 1.5g de ácido nitrilotriacético con KOH 10N ó 1N hasta pH 6.5.

La solución se prepara en aerobiosis. Después de adicionar todo, ajustar el pH a

con KOH 1N, almacenar en el refrigerador a 4°(.
4°(,

SOLUaÓN DILUIDA DE VITAMINASDE

SOLUCIÓN DILUIDA VITAMINAS DE BALCH
BALCH
Volumen 1 litro:

Biotina (vitamina H) 2mg

Ácido p-aminobenzóico (PABA) 5mg
Cianocobalamina (vitamina B12) 0.1mg
 ANEXOS
ANEXOS [159]
[159]

Tiamina HCI(vitamina B1) 5.0mg

D.L.Pantotenato de Ca 5.0mg
Ácido nicotínico 5.0mg
Piridoxina - HCI (vitamina B6) 10.0mg
Acido fólico 2.0mg
Riboflavina (vitamina B2) 5.0mg
Ácido lipoico (thioico) 5.0mg

Esterilizar por filtración en membranas de 0.22mm en anaerobiosis

Almacenar protegido de la luz en refrigerador a 4°(.
4°(,
Se preparan en frascos de 60mL con cambio de fase de N/COz y estériles.

SOLUCIÓN MINERAL DE PEENNlG ET

SOLUCIÓNMINERALDE W/DDEL
ET WlOOEL (SIN
(SIN SULFATO)
SULFATO)

Volumen 1 litro:

KHl04
KHlO4 0.2g
NH44CL O.5g
0.5g
NaCl 1.2g
MgClz·6HzO
MgClz·6HzO OAg
OAg
CaClz·2HzO
CaClz·2HzO 0.15g
KCI O.5g
0.5g

SOLUCIÓNDE
SOLUCIÓN DE OL/GOELEMENTOSDE W/DDEL
OUGOELEMENTOS DE PFENNlG y WlOOEL

(MODIFICADO)
(MODIFICADO)

Volumen 1 litro:

HCLa 25% (6.75N)* 10ml

* Acidificar el hierro antes de disolverlo en el agua, los oligoelementos se disuelven en el
siguiente orden:
FeClzAHzO 1.5g
1.5g
H3B03
H3B03 60mg
MnClzAHp
MnClzAHzO 100mg
CoClz·6Hp
CoClz·6Hp 120mg
ZnClz·anhidro 70mg
[160]
[160] D,GEST'ÓN
D,GEST'ÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

NiCI22·6H
·6Hp20 25mg
CuCl
CuCVH·2H 0
2 202
15mg
AICI] anhidro
AICI) 50mg
Na22Mo044·2H
·2Hp
2
0 25mg
Na22SeO]
SeO) 3mg

SOLUCIÓNDE
SOLUCIÓN VITAMINASDE
DE VITAMINAS PFENNlG y
DE PFENNlG WlDDEL
WlDDEL
Volumen 1 litro:

Biotina (vitamina H) 1mg

Acido para-Amino benzoico (PABA) 5mg
Cyanocobalamina (vitamina B1212)) 5mg
Thiamina, HCI 10mg
DL panthotenato de Ca 5mg
Acido nicotínico 5mg
Pyridoxamina (Pyridoxina HCI) 10mg

Nota: Esterilizar por filtración, en anaerobiosis. Almacenar a 4 oCy protegido de la IL

h,

SOLUCIÓNDE
SOLUCIÓN REsARZURINA
DE RESARZURINA (0.1%)
Volumen 50 mi:
Resarzurina 0.05g
Se
Se disuelven
disuelven en 50 mL de agua destilada
Almacenar
Almacenar aa temperatura ambiente, proteger de la luz con papel
papel aluminio

SOLUCIÓNDE
SOLUCIÓN SULFITO DE
DE SULFITO SODIO (2.0%)
DE SODIO
Volumen
Volumen 20ml:
20ml:
Na22S.
Na S. 9 Hp
H20 O.4g
O.4g
Se
Se disuelven
disuelven en
en 20mL
20mL de
de agua
agua anóxica
anóxica
Realizar
Realizar el
el cambio
cambio de
de fase
fase N/C0
N/C022 yy después
después esterilizar
esterilizar
Se
Se almacena
almacena aa temperatura
temperatura ambiente
ambiente
[162] DIGESTiÓN
DIGE:ST/ÓN ANAEROBIA
ANAE:ROBIA

SOLUaÓN DE
SOLUCIÓN DE AZUL DE BROMor/MOL
AZUL DE BROMOTlMOL (1.0%)
Volumen 100ml:
Azul de bromotimol 1.0g
NaOH 1N 100ml
Se utiliza 1mi/litro
1mI/litro de medio

SOLUaÓN DE
SOLUCIÓN DE AGUA
AGUAREDUaDA
REDUCIDA
Volumen 1litro:
HP04
KK22HP 04 0.3g
O.3g
Solución mineral de Balch sin sulfato 50ml
Resarzurina 1ml

Se completa el volumen a un litro y agregar el 10% adicional de agua destila,

hervir hasta llegar al volumen de 1 litro y enfriar bajo atmósfera de nitrógeno.
Cuandoesté
Cuando esté a temperatura ambiente agregar:
NaHCO¡
NaHC03 5g
Cisteína. HCI 0.5g

Servir según necesidad 4.5ml , 9.0ml ó 13.5ml en tubos Hungate, hacer cambio de fase I
C022 (80%- 20%) por un minuto, llevar a autoclave durante 15 minutos (121°C, 15lb/pulg

Antes de usar agregar:

Na22S.9H
S.9Hp20 (2%) 0.05ml/5ml
0.05m1/5ml
 ANEXOS
ANEXOS [163]
[163]

ANEXO 2
RECUENTO TOTAL
TOTAL DE BACTERIAS
BACTERIAS

A.
A. PRINCIPIO
PRINCIPIO DEL
DEL MÉTODO
MÉTODO

Se filtra la dilución del lodo seleccionada en un filtro nucleopore de O.2Ilm, las bacterias son
O.2J.lm,las
retenidas por el filtro y son teñidas con una solución de naranja de acridina, con la luz de
epifluorescencia se realiza el conteo directo del número de bacterias por retícula en un campo
visual, este procedimiento se repite al menos tres veces, luego se promedia el resultado y
extrapolando el promedio al área total del filtro.

B.
B. REACTIVOS
REACTIVOS yy EQuIPOS
EQUIPOS

• Solución de Naranja de Acridina

Se prepara la solución A y B de la siguiente manera:
Solución A, disolver 2.76g de NaHl04.HzO
NaHl04.Hp en 1OOmlde agua destilada
Solución B, disolver 3.56g de Naz2HP04.H
HP04.H2z0en
Oen 1OOmlde agua destilada
Se disuelven 100mg de Naranja de Acridina en 28.25ml de la solución A y 21. 75ml de la
solución B, completando el volumen de esta mezcla a 100ml.
• Filtros
Se requiere de filtros Millipore de 0.451lm
0.45J.lm para filtrar el agua de preparación de la Na-
ranja de Acridina y el agua de lavado, la filtración de la muestra se realiza sobre un filtro
Nucleopore de O.2Ilm;
O.2J.lm; para realizar ambos procesos se utilizan soportes de filtración
que se
se unen a un erlenmeyer donde se aplica vacío.
Microscopio con luz de epifluorescencia

C.
C. PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO

• Filtrar
Filtrar el
el agua
agua de
de lavado en filtro
filtro Millipore
Millipore de
de 0.451lm
0.45J.lm
• Coloración
Coloración de
de las
las bacterias
bacterias con
con Naranja
Naranja de
de Acridina
Acridina
-- Colocar
Colocar el
el filtro
filtro sobre
sobre la
la filtra
filtra del
del portafiltro
portafiltro con el
el lado
lado brillante
brillante hacia
hacia arriba,
arriba, arman-
arman-
do
do elel equipo
equipo de
de filtración.
filtración.
[164]
[164] D,GEST'ÓN
D,GEST'ÓN ANAEROBIA
ANAEROBIA

10 3Jo
Tomar con jeringa 5ml de la dilución en estudio (generalmente 10- 0 10-4'

Nz y agitando muy bien el tubo antes de tomar la muestra

la jeringa con Nzy
Agregar los 5ml de muestra por las paredes del tubo de carga del sisterr
ción, filtrar en presencia de vacío.
dej,
Detener el vacío y agregar 1mi de la solución de Naranja de Acridina, de]
colorante durante 15 minutos en la oscuridad.
Eliminar el colorante lavando profusamente en presencia de vacío.
Retirar el filtro y colocarlo en una caja de petri, cubriéndola con papel alL
protegerla de la luz.
Conteo
Dividir el filtro en cuatro partes iguales, montar un cuarto de filtrc
portaobjetos, agregando una gota de aceite de inmersión y colocando el CL
La lectura se realiza con el objetivo 100X.
Se enciende la lampara de epifluorescencia.
pe
Secuentan las bacterias presentes en la retícula, las bacterias se identifican pr
un color verde fluorescente, se repite el conteo en varios campos visuales y e
El cálculo se realiza con la siguiente ecuación, teniendo en cuenta que la
0.0064mmZZy el área del filtro es de 227ml
microscopio tiene un área de O.0064mm 227mr

N. Bact./gSSV
N. Bact./gSSV = 35469
35469 x (Promedio
(Promedio de Losconteos/DiLución)/(5mL
Losconteos/DiLución)/(5mL x SS)
SS)
 ANEXOS [165]

ANEXO 3
RECUENTO DE LOS GRUPOS TRÓFICOS
LA TÉCNICA
POR LA TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS
PROBABLE (NMP)
PROBABLE

A. PRINCIPIO DEL MÉTODO

Se realizan diluciones seriadas del lodo en estudio, con las diluciones seleccionadas se inocu-
lan cinco tubos Hungate por dilución; se identifican los tubos positivos de acuerdo con las
características de cada grupo bacterial (Tabla 5.6) realizando los cálculos del número más
probable con base en la tabla 6.1

B. REACTIVOS y EQUIPOS

Medios de cultivo yagua reducida, según especificaciones del Anexo 1.

•
o Tubos Hungate
Cámara de anaerobiosis para realizar la primera dilución
Incubadora a 35°C.
• Cromatógrafo de gases para la detección de metano

C. PROCEDIMIENTO

La muestra de lodo se introduce en la cámara de anaerobiosis para realizar la primera

dilución, la muestra se homogeneiza utilizando un homogeneizador de tejidos estéril: se
diluye 1mi de lodo homogeneizado en 9ml de agua reducida.
Las diluciones seriadas se realizan fuera de la cámara de anaerobiosis, agregando 1mi
de la dilución anterior a 9ml de agua reducida utilizando una jeringa purgada con nitróge-
no previamente y trabajando con las normas de asepsia para evitar la contaminación de
las diluciones.
La inoculación de los tubos se realiza con jeringas, bajo flujo de nitrógeno, con los cuidados
necesarios, para evitar la contaminación de los medios flamear tapones y trabajar cerca de
la llama, los medios se inoculan con O.2ml por tubo de la dilución correspondiente, se inocu-
 [166]
[166] DIGESTiÓN
D,GEST'ÓN
ANAEROBIA
ANAEROBIA

lanlan cinco
cinco tubos
tubos porpor dilución,
dilución, exceptuando
exceptuando loslos gruposdede
grupos laslas bacterias
bacterias sintróficas
sintróficas para
para
cuales se inoculan tres tubos y dos controles (sin sustrato) por
cuales se inoculan tres tubos y dos controles (sin sustrato) por dilución.dilución.
LaLa incubación
incubación sese realiza
realiza a 35°(
a 35°( duranteel el
durante periodorecomendado
periodo recomendadopara
para cada
cada grupotróltró
grupo
(Tabla
(Tabla 5.6)
5.6)
El El Número
Número más
más Probablesese
Probable calcula
calcula utilizandola la
utilizando siguienteecuación:
siguiente ecuación:

MPlgSSV= o. o.
MP/gSSV= Bacterias
Bacterias (tabla
(tabla 6.1)
6.1) x xmáxima
máximadiluciónpositiva
diluciónpositivax x5000 I gSSV
5000/ gSSV

Cálculo
Cálculo deldel NMPsegún
NMP Mac
según Mac Grady
Grady para
para 5 tubosporpordilución
5 tubos dilución

Combinación de Númerode de
Número
Combinación
Combinación de de Númerode de
Número Combinación
Combinación de de Númerode de
Número
Combinación de
tubos positivos bacterias
bacterias tubos
tubos positivos
positivos bacteria.
bacterias tubos
tubos positivos
positivos bacteria.
bacterias
tubos positivos
para tres para
para trestres para
para trestres
para tres
diluciones diluciones
diluciones diluciones
diluciones
diluciones
consecutivas consecutivas
consecutivas consecutivas
consecutivas
consecutivas
000 0.000 231231 1.41.4 451451 55
000
001 0.20.2 240240 1.41.4 500500 2.52.5
001
002
002 0.40.4 300300 0.80.8 501501 33
010
010 0.20.2 301301 1.11.1 502502 44
011 0.40.4 302302 1.41.4 503503 66
011
012 0.60.6 310310 1.11.1 504504 7.57.5
012
020 0.40.4 311311 1.41.4 510510 3.53.5
020
021 0.60.6 312312 1.71.7 511511 4.54.5
021
030 0.60.6 313313 22 513513 8.58.5
030
100
100 0.20.2 320320 1.41.4 520520 5
101 0.4
0.4 321
321 1.7
1.7 521
521 77
101
102
102
0.6
0.6 322
322 22 522
522 9.59.5
103 0.8
0.8 330
330 1.7
1.7 523
523 1212
103
110 0.4
0.4 331
331 2 524
524 1515
110
111 0.6
0.6 340
340 2 525
525 17.5
17.5
111
112 0.8
0.8 341
341 2.5
2.5 530
530 88
112
120 0.6
0.6 400
400 1.3
1.3 531
531 1111
120
121 0.8
0.8 401
401 1.7
1.7 532
532 1414
121
122 11 402
402 22 533
533 17.5
17.5
122
130 0.8
0.8 403
403 2.5
2.5 534
534 2020
130
131 1 410
410 1.7
1.7 535
535 2525
131
140 1.1
1.1 411
411 22 540
540 1313
140
200 0.5
0.5 412
412 2.5
2.5 541
541 1717
200
201 0.7
0.7 420
420 22 542
542 2525
201
203 1.2
1.2 421
421 2.5
2.5 543
543 3030
203
210 0.7
0.7 422
422 23
23 544
544 3535
210
211 0.9 430
430 2.5
2.5 545
545 45
45
211 0.9
212 1.2
1.2 431
431 33 550
550 25
25
212
220 0.9
0.9 432
432 44 551
551 35
35
220
221 1.2
1.2 440
440 3.5
3.5 552
552 60
60
221
222 1.4
1.4 441
441 44 553
553 90
90
222
230 1.2
1.2 450
450 44 554
554 160
160
230
 ANEXOS
ANEXOS [167]
[167]

ANEXO 44
ANEXO

PREPARACiÓN
PREPARACiÓN AZUL
AZUL DE METILENO
METILENO

COMPOSICiÓN:
COMPOSICiÓN:

A.
A. Tris
Tris (tris-(hydroxymethyl)-amonimethane),
(tris-(hydroxymethyl)-amonimethane), 60%
60% en
en agua
agua hervida (para mantener
mantener la
la
alcalinidad del
del indicador)
indicador)
B. Glucosa(agenteque
B. Glucosa(agente que se
se reduce)
reduce) 4% en
en agua
C. Azul
C. Azul de metileno, 0.02% en agua.
agua.

Se iguales de A, B Y e aa temperatura ambiente, el pH de la solución

Se mezcla partes iguales
indicadora es
es de 12.
12. El
El indicador debe ser protegido de la luz y almacenado en refrigeración
Holdeman., et al., 1977. La solución es utilizable por dos semanas (Catálogo Cabina de
Anaerobiosis 1025 Forma Scientic).
Este libro
Este libro se
se terminó
terminó de
de imprimir
imprimir
en elel mes
en mes de
de agosto
agosto de
de 2002
2002

Universidad Nacional
Universidad Nacional de
de Colombia
Colombia
UNIBIBLOS
UNIBIBLOS
uniblblo@dnic.unal.edu.co
unibiblo@dnic.unal.edu.co

Bogotá, Colombia
Bogotá, Colombia