INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

BIOQUIMICA GENERAL
Nombre de la práctica: Efecto de la concentración de sustrato sobre la velocidad de la
reacción. Medina Zúñiga Braulio Isaac, Pérez Rodarte Mariela Grupo: 3OV4

Objetivos:
Analizar el efecto de la concentración
del sustrato sobre la velocidad de la
reacción enzimática.
Determinar la constante de Michaelis-
Menten (Km) de forma gráfica por los
métodos de Michaelis-Menten y
Lineweaver-Burk.

Resultados:
Tabla 1. Resultados sobre la concentración
Figura 2. Gráfica que linealiza la ecuación de
de sustrato en la actividad enzimática de la
Michaelis-Menten.
invertasa
Vol de Concentr Azúcar
sacar ación de
Abs
reductor Velocid Cálculo de la Vmax
540
osa sustrato (µmoles ad (UI)
nm 1
0.2M [S][M] ) = 0.5452
0 0 0 0 0 𝑉𝑚𝑎𝑥
0.6 5.51331 0.55133 1
𝑉𝑚𝑎𝑥 =
0.1 0.01 6 719 172 0.5452
0.9 8.16061 0.81606 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 1.8341 𝑈𝐼
0.2 0.02 88 34 134 Cálculo de Km
1.3 10.8321 1.08321 𝐾𝑚
0.3 0.03 19 227 227 𝑚=
𝑉𝑚𝑎𝑥
1.3 10.7029 1.07029 𝐾𝑚 = 𝑚 ∗ 𝑉𝑚𝑎𝑥
0.5 0.05 03 863 863
𝐾𝑚 = 0.0134 ∗ 1.8341
1.2 10.0088 1.00088
0.8 0.08 17 781 781 𝐾𝑚 = 0.024578 𝑚𝑀
1.2 10.6142 1.06142
1 0.1 92 05 05 Discusión:
Para poder calcular la Vmax de la
invertasa primero se obtuvieron los
dobles recíprocos de la concentración
de sustrato y de la velocidad (UI), a
partir de esto se pudo construir la
gráfica de Lineweaver-Burk. Con esta
gráfica se hizo una regresión lineal y
se consiguió la ecuación de la recta.
Como la ordenada al origen (b) tuvo un
valor de 0.5452, simplemente se
despejó este valor para conseguir la
Figura 1. Gráfica que explica la velocidad de
reacción en función de la concentración de Vmax, la cual fue de 1.8341 UI.
sustrato. Nuestro valor obtenido está 0.607 por
arriba del registrado por Romero
Vargas en 2019, el cual fue de 1.2271
UI/mg enzima

Por otro lado, la constante de
Michaelis-Mente (Km) de la invertasa
obtenida en este trabajo fue de
0.024578 mM; este valor estuvo por
debajo de la Km obtenida por Limón
en 2007, el cual fue de 0.0378 mM
de la hidrólisis de sacarosa con
invertasa libre e inmovilizada
[Proyecto de investigación para
obtener el Título de Ingeniero
Biotecnólogo]. Instituto
Politécnico Nacional.

Conclusiones:
La invertasa, al igual que otras
enzimas, es afectada por la
concentración del sustrato,
aumentando su velocidad de reacción
hasta el punto donde la enzima se ve
saturada por el sustrato. Tiene su
velocidad máxima en 1.8341 UI y una
Km de 0.024578 mM.

En el experimento realizado
empíricamente en casa se visualizó
que a partir de la concentración 7 es
donde se alcanza la saturación de la
enzima.

Bibliografía:
 Romero Vargas, G. A., & Reyes
Cuellar, J. C. (2019). Hidrólisis
de sacarosa por invertasa de
Saccharomyces cerevisiae
inmovilizada sobre
nanopartículas magnéticas de
ferrita de cobalto. Acta
Agronómica, 68(2), 115–125.
https://doi.org/10.15446/acag.v
68n2.78340
 Martínez, J.L., & Morales, G. F.
(2007). Caracterización cinética