UVM Campus Toluca Escuela de Ciencias de la Salud

Práctica número 7: “FRACCIONAMIENTO CELULAR ”

Integrantes: Aguilar Toledano Lizbeth Sarahi, Diaz Arizmendi Judith Montserrat,

Frieven Posada Martha Jackelyne, Reyes Garcia Nancy, Tenorio Gonzales Juan
Antonio, Torres Valdez Jenifer Abigail.

Asignatura:Introducción a las ciencias biotecnológicas

Licenciatura QFBT
Periodo 2020 – 1
Fecha de entrega: 01 de diciembre 2020
Docente: Araceli Alvarez Cruz

1) Investiga las técnicas de lisis celular y su fundamento.

De acuerdo con Huerta (s.f.); Karki (2020) y Thermo Fisher Scientific (s.f.) los métodos de
ruptura o lisis celular se pueden clasificar como mecánicos y no mecánicos; al igual que se
clasifican como químicos, físicos y biológicos de acuerdo al fundamento en el que se basa la
técnica; la siguiente tabla enlista los métodos de ruptura celular más utilizados en la Biología
Molecular y Celular:

Métodos de ruptura celular

Método Fundamento

Choque osmótico Ruptura osmótica de la membrana celular.

Disolución lipídica Solventes orgánicos actúan sobre la pared

celular y la desestabilizan.

Tratamiento alcalino La saponificación de lípidos solubiliza la

membrana.

Digestión enzimática Rompimiento por digestión de la pared

celular al hidrolizarla.

Solubilización Los detergentes solubilizan la membrana

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celular.

Permeabilización enzimática Las enzimas permeabiliza la membrana

ocasionando la ruptura de la célula.

Permeabilización Química Productos químicos como el tolueno, el éter,

el feniletilalcohol, el benceno, el metanol, el
cloroformo, etc. forman un canal en la
membrana celular. Además, son
solubilizadores de lípidos, que forman poros
a través de los cuales el contenido celular se
libera.

Medicamentos antibióticos Algunos medicamentos son inhibidores de

la membrana celular y destruyen la
formación de está causando la liberación de
contenido celular.

Peróxido e hipocloruro: HClO y H2O2 son agentes que oxidan la

estructura celular.
El HClO daña la bicapa lipídica e inhibe el
grupo de proteínas -SH.
La oxidación de la membrana celular causa
la ruptura de la célula y así se liberan los
componentes celulares.

Descompresión Este método utiliza grandes cantidades de

Nitrógeno gaseoso (𝑁 2 (𝑔)) a presiones
altas de ∼ 25000 𝑃𝑠𝑖. Este gas sale de la
célula formando burbujas de gas y estalla
causando la ruptura de la célula.

Termolisis
El calor alto inactiva la célula al romper la
pared celular y liberar productos
intracelulares.
El efecto del calor depende de varios
factores como pH, temperatura, agente
quelante, fuerza iónica, presencia de
enzimas (proteolíticas e hidrolíticas),
tiempo, etc.

Congelación-deshielo En este método, la suspensión celular se

congela en hielo seco con etanol o con un
congelador y luego se descongela la
suspensión a temperatura ambiente (37°C).
Esta congelación y descongelación continua
y repetida hace que las células se hinchen y
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se rompan.

Disecación En este método, la suspensión celular se

seca por secado al aire o secado al vacío.
Después de la disecación, la célula se
encoge y posteriormente se proporciona
exceso de agua, y así la célula estalla.
Este proceso se repite durante varias veces.

Electroporación Cuando una célula se pone en un medio con

un campo eléctrico de una intensidad
definida, se forma un nanoporo en la
membrana celular, es de este espacio por el
que se vacía el contenido celular.

Ultrasonificación Las células se rompen por cavitación

ultrasónica. Se utilizan frecuencias
≥ 20 𝐾𝐻𝑧.

Molienda Las células se rompen por medio de una

molienda con abrasivos

Homogeneizador de cuchillos o de tipo Las células se rompen en un mezclador o

navaja licuadora especializados.

Homogeneizador de alta presión Las células son forzadas a pasar a través de

un pequeño orificio, produciendo su ruptura
por el esfuerzo de corte.

Molino de perlas Las células son trituradas con perlas de

acero o vidrio

Fagos Los fagos penetran y se multiplican dentro

de las células bacterianas y luego causan la
lisis de la célula mediante la producción de
enzimas como la endolisina y la hidrolasa
de mureína.

2) ¿Qué es el fraccionamiento celular?

Según Calvo (2015) el fraccionamiento celular es una técnica de laboratorio que
permite aislar organelos de acuerdo con su velocidad de sedimentación en la
centrifugación.
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3) ¿Qué es la centrifugación diferencial?

El principio de separación se basa en la diferente velocidad de sedimentación de las

partículas en función de su tamaño y densidad. En un tubo, los diferentes tipos de
partículas se encuentran distribuidos uniformemente, pero, al someterlas a un campo
centrífugo, las moléculas sedimentaron a distintas velocidades, por tiempos del
proceso de separación por lo que se irán separando a lo largo del proceso de
centrifugación. La centrifugación diferencial es de tres tipos: Un ejemplo de
aplicación de este tipo de centrifugación lo constituye la separación de los diferentes
orgánulos de una célula. A partir de una homogeneización de un tejido, utilizando
diferentes etapas con campos centrífugos crecientes pueden separarse de manera
diferencial los distintos orgánulos de la célula.(Roca, 2004).

4) ¿Cuál es la diferencia entre rpm y fuerzas g?

La fuerza centrífuga relativa o fuerza g (RCF) es la cantidad de aceleración que se

aplicará a la muestra. Depende de las revoluciones por minuto (rpm) y del radio del
rotor. Es relativo a la fuerza de la gravedad de la Tierra.(Rojas, 2020)

El término revoluciones por minuto se utiliza al indicar el número de veces que algo
gira durante un minuto (Cambridge Advanced Learner's Dictionary & Thesaurus, s.f.)

5) Explique por qué en términos de centrifugación no es correcto indicar rpm's

sino más bien g's

Un protocolo o método bien redactado deberá indicar que al momento de usar una
centrífuga debe hacerlo usando fuerza g en lugar de las rpm porque el tamaño de los
rotores será diferente dependiendo la marca y por lo tanto la fuerza g será diferente.
Desafortunadamente, no todos los protocolos están escritos de manera precisa y las
instrucciones se dan de manera incorrecta usando rpm. Por lo tanto, uno tiene que
convertir la fuerza g (RCF) en revoluciones por minuto (rpm) y viceversa. (Rojas,
2020)
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Referencias

Calvo, A. (2015). Fraccionamiento celular [Libro electrónico]. En Biología Celular

Biomédica (Vol. I). ELSEVIER ESPAÑA.

Cambridge Advanced Learner's Dictionary & Thesaurus (s.f.) Definición de rpm en:
https://dictionary.cambridge.org/es-LA/dictionary/english/rpm

Huerta, S. O. (s.f.). Rompimiento celular [Archivo PDF]. Obtenido de Planta Piloto de

Fermentaciones, Departamento de Biotecnología UAM: Microsoft PowerPoint

- Ruptura celular [Modo de compatibilidad] (uam.mx)

Karbi, G. (2020). Methods of cell disruption: Cell lysis methods. Obtenido de Online

Biology Notes: Methods of Cell disruption: Cell lysis methods - Online

Biology Notes

Roca, P. (2004). Bioquímica: técnicas y métodos. Editorial Hélice.

https://elibro.net/es/ereader/uvm/59642?page=255

Rojas, A. (10 de febrero, 2020) Método: Conversión de fuerzas g (RCF) a

revoluciones por minuto (rpm) y equilibrio del rotor. Disponible en:
http://conogasi.org/articulos/metodo-conversion-de-las-fuerzas-g-rcf-a-revoluc
iones-por-minuto-rpm-y-equilibrio-del-rotor/#:~:text=Descripci%C3%B3n-,L
a%20fuerza%20centr%C3%ADfuga%20relativa%20o%20fuerza%20g%20(R
CF)%20es%20la,y%20del%20radio%20del%20rotor.&text=Por%20lo%20tan
to%2C%20uno%20tiene,minuto%20(rpm)%20y%20viceversa.

Thermo Fisher Scientific. (s.f.). Traditional methods of cell lysis. Obtenido de Thermo

Fisher Scientific: Traditional Methods of Cell Lysis | Thermo Fisher Scientific

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