Cuestionario:
1.- Identifique las partes de los microscopios en la figura.
2.- ¿Cuáles son los cuidados que debemos tener con el microscopio óptico?
1.-Quitar la funda protectora del microscopio.
2.-Enchufar o encender el microscopio.
3.-Colocar en primera instancia el objetivo de menor aumento para lograr un enfoque
correcto. Este paso en muy importante y se debe realizar siempre, ya que permitirá la
observación de una panorámica del preparado y la ubicación de áreas de interés para su
análisis posterior.
4.-Subir el condensador utilizando el tornillo correspondiente.
5.-Colocar el preparado sobre la platina, con el cubre-objetos hacia arriba y sujetándola
con las pinzas/guías.
6.-Enfoque el preparado mirando a través del ocular y lentamente mueva el tornillo
macrométrico.
7.-Recorra todo el preparado y haga sus observaciones. Elija el sitio donde debe seguir
observando a mayor aumento.
8.-Cambie al objetivo de mediano aumento (20 X) y para lograr el enfoque siga
moviendo lentamente el tormillo macrométrico. Al cambiar de objetivo, la imagen debe
estar ligeramente enfocada gracias a que la mayoría de microscopios son parafocales, es
decir, una vez logrado el primer enfoque, al pasar al objetivo de aumento inmediato
superior la imagen queda en un foco aproximado y solo se debe realizar un ajuste.
9.-Realice la observación y haga sus anotaciones. Determine cuál es la estructura que va
a observar a mayor aumento y colóquela en el centro del campo.
10.-Cambie al objetivo de mayor aumento. Si realizó el enfoque de manera correcta con
el objetivo anterior, al colocar el objetivo de mayor aumento la imagen solo se debe
enfocar girando única y lentamente el tornillo MICROMÉTRICO. NUNCA se debe
utilizar el tornillo macrométrico con los objetivos de mayor aumento, pues al estar éste
muy cerca del preparado, se corre el riesgo de partirlo.
11.-Al lograr el enfoque con el objetivo de mayor aumento debe realizar la observación
moviendo constantemente el tornillo micrométrico para variar los planos de enfoque. De
igual manera, abra o cierre el diafragma para regular la intensidad de la luz y mejorar el
contraste. Haga sus observaciones.
12.-Una vez finalizada la observación, aleje la platina y coloque nuevamente el objetivo
de menor aumento.
13.-Retire la muestra.
14.-Limpie la lente objetivo si usó medio de inmersión, apague la/s lámpara/s. 15.-
Cubra el microscopio con la funda protectora.
Recomendaciones:
NUNCA dañar, rayar, dejar caer las lentes u otros componentes ópticos.
NUNCA forzar los controles de foco.
NUNCA tocar las superficies ópticas.
3.- ¿Cuáles son los tipos de preparados (p. en seco y fresco)? Menciona y
Describe.
Preparados en fresco y en seco:
Preparación en fresco: La preparación en fresco es ideal para la observación de
microorganismos o de tejidos biológicos que requieren ser hidratados.
Si la muestra es líquida colocamos unas gotas de la muestra en el centro del
portaobjetos con la ayuda de una pipeta.
Si la muestra es sólida colocamos primero unas gotas de agua destilada o de solución
salina sobre el portaobjetos y a continuación un fragmento de la muestra con la ayuda
de unas pinzas.
Sujetando el cubreobjetos por dos de sus lados, apoyamos otro de sus lados sobre el
portaobjetos de modo que forme un ángulo de aproximadamente 45 grados.
A continuación podemos soltar con cuidado el cubreobjetos de modo que quede
colocado sobre el líquido que hemos depositado anteriormente. (Mediante este
procedimiento se evita la formación de burbujas dentro de la muestra. En caso de que
hayan aparecido burbujas entre el portaobjetos y el cubreobjetos será necesario repetir el
procedimiento anterior.)
En caso de que haya un exceso de líquido alrededor del cubreobjetos podemos
eliminarlo mediante papel absorbente.
Las preparaciones en fresco mantienen la hidratación durante un periodo de
aproximadamente 30 minutos.
Si se requiere mantener la muestra hidratada durante un espacio de tiempo más largo
pueden sellarse los bordes del cubreobjetos con vaselina. En este caso se evita la
evaporación del líquido durante unas horas o incluso unos días.
Preparación en seco: La preparación en seco es ideal para muestras que no necesitan
hidratación. Esto incluye, por ejemplo, un cabello, granos de polen, esporas, muestras
de plantas, insectos, etc.
1. Si la muestra es totalmente opaca el primer paso consistirá en cortar primero
una sección muy fina de la muestra. Esto permitirá observarla en el microscopio
mediante luz transmitida.
2. Colocamos la sección que hemos cortado en el centro del portaobjetos con la
ayuda de unas pinzas. Si la muestra tiene un cierto volumen es recomendable
utilizar un portaobjetos con una cavidad cóncava.
3. Para mantener la muestra fija en su sitio la cubrimos con un cubreobjetos. Esto
evita también que el objetivo llegue a tocar la muestra en caso de cometer algún
error durante la manipulación del microscopio.
La ventaja de las muestras en seco es que no tienen problemas de deshidratación y
pueden mantenerse preparadas para una observación posterior.
4.- ¿Qué procedimiento seguiría usted para el uso del objetivo de mayor aumento (el de
100x)?
Comience la observación con el objetivo de 4x o 10x.
Tome el diafragma y déjelo casi cerrado (con poca luz).
Suba la muestra problema (espécimen) que se encuentra en la platina con ayuda del
tornillo micrométrico y acérquelo al máximo del lente del objetivo. Esto debe hacerse
mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el
objetivo en la preparación.
Separe lentamente el objetivo de la preparación con el tornillo macrométrico mientras
va mirando a través del lente ocular; cuando observe nitidez en la muestra, gire el
tornillo micrométrico hasta obtener un enfoque fino (la muestra problema está
enfocada).
Al pasar al siguiente objetivo (sea 10X o 40X, depende donde inició su observación),
la imagen ya debe estar enfocada y solo basta con mover un poco el tornillo
micrométrico, para obtener una visión más fina. Si al cambiar de lente objetivo se
desenfoca la imagen, es recomendado volver al objetivo anterior y repetir de nuevo el
paso anterior.
A medida que se va aumentando el poder de magnificación, la cantidad de luz que
entra debe regularse con el diafragma. Si se utiliza un objetivo de baja magnificación
como 4x o 10x el diafragma debe ir casi cerrad), si se usa el objetivo de 40x debe ir en
la mitad y si se usa máxima magnificación, es decir 100x, debe ir totalmente abierto
(máximo de luz).
Para enfocar en 100x, es necesario el uso del aceite de inmersión, y se debe colocar de
la siguiente manera:
Enfocar la muestra problema en 40x.
Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica
la zona que se va a visualizar y donde habrá que colocar el aceite.
Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión (100x) dejándolo a medio camino
entre éste y el de 40x.
Colocar una gota de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión
(100x).
Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente (con el tornillo
micrométrico) hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si
la gota ascendiera y se adosara a la lente.
Enfocar cuidadosamente con el tornillo micrométrico. La distancia de trabajo entre el
objetivo de inmersión y la preparación es mínima.
Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede
volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, ya que éste se mancharía de aceite.
Una vez finalizada la observación de la muestra problema se baja la platina y se
coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede
retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en
posición de observación.
Después de usar el microscopio
Al finalizar el trabajo, se debe limpiar el objetivo de inmersión (100X) con cuidado
empleando un papel especial para óptica (papel de arroz). Comprobar también que el
objetivo 40x está perfectamente limpio.
Para entregar el equipo: debe el revólver en el objetivo de menor aumento (4X) en
posición de observación, baje completamente la platina, deje la intensidad de la luz al
mínimo, y asegúrese que la pinza no sobresalga del borde de la platina.
5. ¿Cómo ajustaría la luz para obtener una buena imagen?
Para obtener la imagen de mayor aumento, más nítida y con mayor poder de resolución
se debe:
• Disponer de lentes de óptima calidad.
Disponer de oculares de gran aumento.
• Trabajar con el objetivo de inmersión.
• Utilizar aceite de inmersión de buena calidad.
6. ¿Diga los tipos de colorantes usados en la preparación de muestras. (Colorante
Ácidos, básicos y neutros. Colorantes naturales y artificiales)
Ácidos: son sales con el anión coloreado y la base incolora. Son derivados de grupos
sulfónicos, carboxilos o hidroxilos fenólicos. Tienen apetencia por sustancias básicas,
sobre todo estructuras proteicas localizadas en el citoplasma celular y también por el
colágeno de la matriz extracelular. La unión es por atracción eléctrica. Ejemplos de
colorantes ácidos son la fucsina ácida, verde rápido, naranja G o la eosina.
Básicos: son sales en las que la base, normalmente una amina, aporta el color, mientras
que la parte ácida es incolora. Es decir, son colorantes catiónicos. Tienen apetencia por
sustancias ácidas del tejido como el ADN o ciertos componentes de la matriz
extracelular como los glicosaminoglicanos. La unión es por atracción eléctrica. Así,
ponen de manifiesto el núcleo y el ARN, sobre todo el ARNr presente en los ribosomas
por ser muy abundante, así como ciertas matrices extracelulares ricas en componentes
ácidos. Ejemplos de colorantes básicos son la tionina, safranina, azul de toluidina, el
azul de metileno o la hematoxilina.
Neutros: poseen una porción ácida y otra básica, ambas con capacidad para aportar
color. Por tanto un mismo colorante puede teñir tanto las partes básicas como las
ácidas de los tejidos. Por ejemplo, el eosinato de azul de metileno.
