INSTITUTO TECNOLOGICO

SUPERIOR DE MISANTLA

CARRERA:
INGENIERIA BIOQUÍMICA
MATERIA:
BIOQUIMICA DEL NITROGENO Y
REGULACION GENETICA

ASUNTO:
ENSAYO. - LA REPLICACIÓN DEL ADN EN
ESCHERICHIA COLI * POR MATTHEW MESELSON Y
FRANKLIN W. STAHL

PRESENTA:
JESSICA LIZBETH ENCARNACION AGUILAR

PROFESOR:
DR. MARIA CRISTINA LOPEZ MENDEZ
GRUPO: 505” A”

MISANTLA, VER. 2020

La replicación del ADN en Escherichia Coli *Por Matthew Meselson y franklin w.
Stahl

Como se ha descubierto, el ADN es una macromolécula de poli nucleótidos que

puede trasmitir y transportar información hereditaria para realizar su propia
replicación, en el presente trabajo se hablara sobre un estudio de las densidades
del ADN, el objeto de estudio fue un crecimiento de la bacteria Escherichia Coli, la
cual se le proporciono sales de amonio para su crecimiento a 360°C con aireación,
en este trabajo se desarrolló un método para la detección de pequeñas diferencias
de densidad entre las moléculas de ADN, observando una distribución del isotopo
N15 entre las moléculas de ADN después de la transferencia de una población
bacteriana marcada con N15 que crece bajo un medio con el isotopo ordinario
N14. Encontrándose una que las macromoléculas de ADN en un gradiente de
densidad son impulsadas por un campo centrifugo en la región donde la densidad
de la solución es igual a su propia densidad flotante, obteniéndose así que el
equilibrio se distribuye a una sola especie de ADN sobre una banda en donde su
ancho está relacionado con el peso molecular de la macromolécula ADN.

Como primer paso se cultivaron bacterias con N15H4Cl de pureza isotópica

96,5%, luego de cambiaron de medio a uno con un exceso de 10 veces N14H4Cl
junto con ribosidos de adenina y uracilo en un experimento 1, en el experimento 2
se agregaron ribosidos de adenina, guanina, uracilo y citosina. Durante el
crecimiento posterior se le adiciono medio N14 fresco que contenía ribosidos; se
extrajeron muestras que contenían 4x109 bacterias del cultivo, cada nuestra se
enfrió y se centrifugó por 5 minutos, después de una resuspensión en 0.4 ml de
una solución fría de NaCl a 0.01 M y 0.01 ml de EDTA a pH 6 las células se lisaron
por adición de 0,10 ml de docecilsulfato de sodio al 15%, añadiendo 0.70 % de
CsCl tamponada a pH 8.5 con 0.1 M de TRIS (Hidroximetil) aminometano,
obteniendo una densidad de 1.71 gcm -3, esta solución de centrifugo a 44.77 rpm
durante 20 horas, momento en el cual el ADN alcanzó una sedimentación en
equilibrio. En los resultados experimentales se observó que la mitad de las
moléculas marcadas se acumulan, mientras que el ADN que está completamente
marcado se agota, por lo que se observó que solo el ADN no etiquetado y el ADN
medio etiquetado fueron los que se encontraron. Otra de las observaciones fue
que al pasar un tiempo de generación después de la adición del N14, el ADN
medio arcado y el ADN no marcado esta presentes en cantidades iguales.

Por lo tanto, en el experimento uno, se llegó a la conclusión de que el nitrógeno de

una molécula de ADN se divide igualmente entre dos subunidades, lo que muestra
que el número de subunidades parentales supervivientes es dos veces el número
de moléculas parentales inicialmente parentales, es decir, las subunidades son
conservadas. En el experimento dos, se observó que después de la replicación,
cada molécula hija recibe una subunidad parental, por lo que el hallazgo de que
todas las moléculas de ADN están medio etiquetadas una generación después de
la adición de N14, muestra que cada molécula hija recibe una subunidad.

En base al modelo del ADN propuesto por Watson-Crick sobre que el ADN consta
de dos cadenas de polinucleótidos unidas entre sí y enrolladas helicoidalmente
alrededor de un mismo eje, estando en cada nivel adenia, timina, guanina y
citosina que a su vez se unen con la base de su mismo nivel en la cadena, siendo
la unión entre adenina y timina, y la guanina con la citosina, por lo que, cada
cadena sirve como plantilla para la síntesis de su complemento, en consecuencia,
cada hija contiene una de las cadenas parentales emparejada con una cadena
recién sintetizada. En cuanto a los resultados obtenidos en ese experimento
concuerdan con las expectativas del modelo de Watson-Crick para la duplicación
del ADN; sin embargo, no se ha demostrado que las subunidades encontradas en
el experimento sean cadenas de polinucleótidos simples.

En conclusión, se encontró que el nitrógeno de una molécula de ADN se divide en

partes iguales entre dos subunidades continuas, que d3spues de la duplicación
cada molécula hija recibe uno de estos, así como también, que las subunidades se
conservan a través de muchas duplicaciones, por lo que el experimento
empleando la bacteria E, coli y haciéndola crecer en medio con N15H4Cl y
después sustituido este medio por el N14H4C, se logra desmostar el modelo de
Watson-Crick.
Bibliografía

Matthew Meselson And Franklin W. Stahl. (Mayo 14 1958). La replicación del ADN
en Escherichia Coli . BIOLOGÍA QUÍMICA, INSTITUTO DE TECNOLOGÍA DE
CALIFORNIA, PASADENA, CALIFORNIA, 44, 671-681.