La próxima generación de tecnologías

y aplicaciones CRISPR – Cas

El sistema de edición genómico por CRISPR-Cas proveniente de
procariotas, ha permitido detectar y captar secuencias especificas tanto de
ADN como de ARN de diferentes tipos de celulas, esta técnica a
evolucionado la edición del genoma utilizando la manipulación de ácidos
nucleicos como los otorgolos Cas9, Cas12, Cascade y Cas13. Se utilizan la
unión de los extremos no homólogos o NHEJ y de la reparación que va
dirigida por homólogos o HDR para la restauración del ADN que son
usados mediante la edición del genoma por parte de las CRISPR-Cas; las
proteínas Cas inactivada de nucleasas son dirigidas al ARN que sirven
como un medio de regulación génica.

El sistema CRISPR-Cas se Este sistema es basado

considera como un mecanismo principalmente en ARNcr o
de inmunidad adaptativa de forma experimental como
procariota que es utilizado CRISPR-Cas9 en un ARN
como un editor y reparador de guía, después de esto ocurre
ácidos nucleicos invasores, una hibridación de la parte
existen diferentes tipos en mas espaciadora del ARNcr
varias bacterias y en varias a una secuencia diana que
arqueas; existen entre 6 tipos se pone al lado de un PAM
de CRISPR-Cas y ademas 29 o PFS, después de esto las
subtipos como por ejemplo nucleasas Cas alteran el
CRISPR-Cas de clase 1son acido nucleico de la célula
complejos que funcionan como diana, esto permite que los
efectores de proteínas sitios donde contienen PAM
múltiples, en cambio la de tipo o PFS en cualquier locus
dos solamente tiene una como donde ocurra una escisión
proteína efectora. Estos especifica.
CRISPR-Cas son proteínas que
modulan la unión de ADN y
ARN modificable para que
estos se unan a secuencias
especificas mediante la
formación y diseño de ARNcr o
ARNg que contienen
espaciadores que funcionan
como complemento de las
secuencias de las celulas
dianas para unirse a las
secuencias de los ácidos
nucleicos que son específicos,
ademas también pueden servir
como nucleasas funcionando,
así como un medio programable
de edición genómica.
 Las CRISPR-Cas9
pertenecen al grupo de
clase 2, este es actualmente
el mas utilizado como una
herramienta de edición
genómica, ya que este se
encuentra en la bacteria
Streptococcus pyogenes
Cas9, este genera una
ruptura en la doble hebra
entre 20 nucleótidos y en la
parte del PAM 5'-NGG, este
reconocimiento de esta
sección puede funcionar
como un limitador de la
disponibilidad en el genoma
humano; estos son dirigidos
a través de ARNcr ya que
este tiene como
especialidad el
reconocimiento del ADN
especifico que se quiera
modificar ademas de la
función de formar complejos
de Cas9. Se han
desarrollado y descubierto
ortólogos de Cas9 que
reconocen diferentes
regiones de secuencias de
PAM, son muy
caracterizados gracias a su
pequeño tamaño.
La CRISPR-Cas12 es otra
endonucleasa impulsada
por la ARN de clase II que
se ha reprogramado para la
modificación del gen en las
células humanas es
CAS12A. Como sistema tipo
V CAS12A genera un corte
graduado con una salida de
5 'en los sitios ADN objetivo
y no usa un tren de ARN ,
en contraste con la
generación de Rull End por
CAS9,
la producción de
extremidades escalonadas
por CAS12A puede ser
ventajosa para aplicaciones,
como la integración de
secuencias de ADN en una
orientación precisa.
Además, CAS12A puede
dividir las matrices para
generar su propia
tripulación. Esta capacidad
de procesamiento de
CRNTA facilita el uso de
una sola matriz de CRNA
personalizada para la
edición simplificada del
genoma multiplex. El
CRISPR-Cas12 de
acidaminococcus spp. y
lachnospiraceae spp son los
primeros ortologos de
CAS12A que han
demostrado tener
actividades en células de
mamíferos, reconocen la
secuencia actual de PAM 5'-
TTT corriente arriba de la
secuencia de destino.
Para mejorar la actividad de
modificación del genoma, se
ha diseñado una variante
mejorada de ASCAS12A
para aumentar el rango de
la orientación de CAS12A,
las variantes ASCAS12A
han sido diseñadas
recientemente para
reconocer PAM 5'-TYCV y 5
'-TATV 36 o PAM 5' -VTTV,
5'-TTTTTTTT, 5'-TTCN y 5'-
TATV.
Las características únicas y
el mecanismo de corte
CAS12A proporcionan una
herramienta para editar el
genoma que extiende la caja
de herramientas CRISPR.
 Los sistemas de tipo
CASCADE y CAS3 de tipo I
de la categoría de Clase 1
son el tipo más común de
sistemas de CRISPR-CAS
en la naturaleza, e incluyen
un complejo de dirección de
ADN multimedia llamada
CASCADE y
ENDONUCLEASE CAS3 ,
antes de reclutar CAS3 para
una secuencia de ADN
objetivo, la cascada debe
adherirse primero al ADN a
través de PAM y
reconocimiento espaciador
;en cambio Cascade ofrece
una mayor flexibilidad del
sitio de destino debido a su
reconocimiento promiscuo
de las secuencias PAM 43.
El reclutamiento de CAS3
genera una marca de
cadena única seguida de la
degradación del ADN
objetivo a través de la
actividad de exupulución de
3 'a 5'. Tanto la actividad
ninja que el HelicA de
CAS3 es esencial para la
degradación del ADN
extraño en los Proyotes. El
exclusivo mecanismo de
corte de CAS3 está
aprovechando un
instrumento antimicrobiano
cuando los sistemas nativos
o exógenos se dirigen I para
genomas bacterianos para
su degradación. y la muerte
celular posterior, la
exploración para reutilizar
las actividades de NICASA,
la exonucleasa helicoidal y
del CAS3 puede llevar a
nuevas aplicaciones en las
células de los mamíferos.
La reutilización de estos
sistemas para el uso en
células eucariotas ha
revolucionado el dominio de
la ingeniería del genoma.
Incluso con el uso en
profundidad de los sistemas
CASP-CASE de tipo II, el
descubrimiento y el
desarrollo continuo de
sistemas de crisis de especies
procariotas han resultado en
nuevas tecnologías
beneficiarias, como las
herramientas de selección de
ARN CAS13A. La fusión de
DCAS9 con el archivo de
efectos continuará ampliando
las posibilidades de
modulación epigenética
dirigida.
La facilidad de generación de
la biblioteca de la TRNA
para la orientación de CAS9
a gran escala, así como el
progreso en la secuenciación
de la nueva generación, han
hecho que las pantallas
genéticas y epigenéticas
todos los genomas están
disponibles. La perturbación
de esta magnitud aconsejará
nuestra comprensión de los
mecanismos biológicos y
ayudará a descubrir nuevos
objetivos terapéuticos.
Además, el potencial de
enfoque multiplexado de los
sistemas CASP-Case
permitirá un manejo más
complejo y sofisticado de
procesos celulares.