“AÑO DEL BUEN SERICIO AL CIUDADANO”

Tema : Análisis microbiológicos de los hongos

Facultad : Medicina Humana

Escuela : Enfermería

Asignatura: Microbiología y Parasitología

Profesor : Adelmo Goñi Salazar

Ciclo : II

Alumno (a) : URBANO CASTILLO, Silvia Milagros.

HUACHO-PERÚ

2017
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 ÍNDICE

1. Introducción.........................................................................................................03

2. Fundamentos teóricos..........................................................................................04

3. Experimento.........................................................................................................07
......................................................................................................................................
4. Conclusiones.......................................................................................................09

5. Recomendaciones................................................................................................10

6. Referencias bibliográficas...................................................................................11

7. Anexos………………………………………………………………………….12

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 INTRODUCCIÓN
Frecuentemente pueden observarse crecimiento de hongos sobre los alimentos y
otros materiales. Se examinan estos sustratos con un lente simple pueden
distinguirse el cuerpo vegetativo formado por una masa de filamentos ramificados e
entrelazados denominada Micelio. Cada filamento de micelio constituye una Hifa.

En algunos hongos, el protoplasma recorre las hifas en forma interrumpida,

constituyendo hifas Aceptadas o Cenocíticas. Las hifas de otros hongos tienen
paredes transversales llamadas septos con uno o varios poros que permiten el paso
del protoplasma. A este tipo de hifas se les denomina Septadas. Los hongos se
reproducen asexualmente a través esporas asexuales desarrolladas dentro de un
esporangio, se denominan Esporangiosporas. Si las esporas se reproducen
libremente en el extremo o al lado de las hifas, se denominan Conidiosporas.
Existen hongos unicelulares que no forman estructuras filamentosas, estos reciben el
nombre de levaduras y pueden distinguirse de las bacterias por su mayor tamaño y
por la presencia de un núcleo simple.

Ocasionalmente pueden observarse el desarrollo de estructuras conspicuas

denominadas Cuerpos Fructíferos los cuales portan las esporas sexuales de
reproducción. Estas estructuras se utilizan como base de la clasificación natural de
los hongos. De esta manera se definen tres divisiones: Zygomicota, Ascomicota y
Basidiomycota.

El micelio de los Zygomicota es aceptado excepto en las estructuras de

reproducción. Los miembros de esta división forman esporas asexuales de tipo
esporangiosporas.

Las esporas sexuales son las denominadas Zigosporas que desarrollan en ausencia
de un cuerpo fructífera. Los hongos al igual que la mayoría de las bacterias son
heterótrofos, ningún hongo es capaz de crecer bien en ausencia de sustancias
alimenticias orgánicas. Ningún hongo posee pigmentos fotosintetizantes y ninguno
es capaz de utilizar el dióxido de carbono. Sin embargo, en presencia de un
suministro exterior de azucares de otro alimento orgánico, muchos hongos exhiben
una sorprendente capacidad de síntesis produce una gran variedad de sustancias
orgánicas complejas. La mayor parte de hongos son filamentosos. Los filamentos
conocidos por hilos están ordinariamente muy ramificado y forman colectivamente
el tallo vegetativo o micelio. En los hongos superiores las hifas pueden agregarse
para formar estructuras solidas complejas que en algunas especies pueden considerar
un tamaño muy considerado. Los Ascomycotas tienen micelio septado. La
reproducción asexual es muy variada involucrando procesos de fisión, gemación,
fragmentación, formación de Clamidiosporas o formación de conidios, dependiendo
de las especies y de las condiciones ambientales.

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 FUNDAMENTOS TEÓRICO
HONGOS:

Los hongos son un reino de seres vivos unicelulares o pluricelulares que no

forman tejidos y cuyas células se agrupan formando un cuerpo filamentoso muy
ramificado.

El conjunto de filamentos de un hongo se llama micelio, y cada filamento se

denomina hifa. A veces las células que forman el micelio pueden parecer falsos
tejidos. Las células de los hongos tienen una pared celular de quitina,
sustancia propia de los animales artrópodos. Raramente acumulan también
celulosa.

Los hongos tienen alimentación heterótrofa, puesto que no pueden realizar la

fotosíntesis porque no tienen clorofila. Tienen digestión externa, pues vierten al
exterior enzimas digestivas, sustancias proteicas que actúan sobre los
alimentos dividiéndolos en moléculas sencillas, que atacan a los alimentos. Los
hongos absorben los alimentos después de digerirlos.

Según su tipo de vida, los hongos pueden ser saprofitos, parásitos y

simbiontes. Los hongos saprofitos, como el champiñón o la trufa, se alimentan
de sustancias en descomposición. Los hongos parásitos se alimentan de los
líquidos internos de otros seres vivos. Los hongos simbiontes se asocian con
otros organismos y se benefician mutuamente.

Los hongos viven en lugares húmedos, con abundante materia orgánica en

descomposición y ocultos a la luz del sol. También pueden habitar medios
acuáticos o vivir en el interior de ciertos seres vivos parasitándolos.

La reproducción de los hongos puede ser asexual, por esporas, y sexual. Las
hifas haploides pueden dar lugar por mitosis, es decir, asexualmente, a unas
esporas llamadas conidios o conidiosporas. Las hifas diploides resultantes de
la unión de dos hifas haploides pueden dar lugar, por reproducción sexual, a
esporas en unas estructuras tipo asca o tipo basidio. Hay dos clases de hifas:
hifas cenocíticas, sin tabiques de separación entre células, e hifas tabicadas,
con ellos.

Se incluyen ciertos parásitos de las patatas y de la vid entre los eumicetes;

mohos y pestes de moscas y orugas entre los zigomicetes; muchos parásitos,
mohos, trufas, colmenillas y levaduras entre los ascomicetes; tizón y roña, y la
mayoría de las especies comestibles, entre los blasidiomicetes. Según las

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localidades varía el sentido y extensión del significado de los nombres hongo o
seta.

AGAR NUTRITIVO:

El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para el

desarrollo de todo tipo de microorganismos. Es muy útil porque permanece
sólido incluso a relativamente altas temperaturas. Además, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor
las colonias pequeñas.

El empleo de este medio es de acuerdo al tipo de estudio por realizar

En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una
sustancia espesa, con colonias difícilmente observables.
El agar nutritivo contiene normalmente (p/v):

 0,5% de peptona;
 0,3% de extracto de carne/extracto de levadura;
 1,5% de agar;
 0,5% de cloruro de sodio;
 agua destilada;
 pH casi neutro (6,8) a 25 °C.

El extracto de carne proporciona al medio fuente de carbohidratos, de nitrógeno

y vitaminas.

AGUA PEPTONADA:

Medio usado como diluyente y para enriquecimiento bacteriano a partir de

alimentos y otros materiales de interés sanitario.

Es un medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado para ser utilizado

en lugar de solución fisiológica para recuperar células de entero bacterias
dañadas por procesos fisicoquímicos, a los que ha sido sometido el alimento.
Si es utilizado como medio base para la fermentación de hidratos de carbono.

PEPTONA:

Son mezclas de aminoácidos (moléculas y compuestos químicos que

provienen de las proteínas) y de polipéptidos (una cadena de aminoácidos
ligados por péptidos). Provienen de la acción de una enzima proteolítico (es
decir, capaz de deshacer las proteínas) sobre una sustancia que contiene

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numerosas proteínas. Son la principal fuente de nitrógeno en el medio orgánico
para el cultivo de bacterias. Contienen aminoácidos libres y cadenas cortas
de péptidos, y a veces carbohidratos. Es soluble en agua e insoluble en etanol
y éter.

Para uso en laboratorio, la peptona se presenta como un polvo amorfo, o bien

como escamas o masas irregulares, esponjosas, de color blanco amarillento o
amarillo parduzco; con olor característico que recuerda al de la carne asada; de
sabor amargo (peptona pancreática) o amargo y salado (peptona pépsica). Es
muy higroscópica y por tanto se altera con facilidad en contacto con aire
húmedo.

Existen dos tipos de peptona:

 Peptona pépsica, obtenida a pH 2 por acción de la pepsina.

 Peptona pancreática, obtenida a pH 8 por acción de la pancreatina.

Las peptonas suelen utilizarse en medios como Bordet-Gengou, desplazado

ahora por el medio de Regan-Lowe, que son adicionados con
peptonas, glicerol y sangre de caballo. Estos medios se emplean para el cultivo
de Bordetella pertussis.

CULTIVO EN CAMARA HUMEDA:

Un dispositivo para cultivo en cámara húmeda es un sistema que consta de
una placa Petri conteniendo un disco de papel filtro y una varilla de vidrio de “U”
que soporta dos láminas porta y cubre objetos. Asépticamente se selecciona
una pequeña porción de medio de cultivo estéril (Agar Saborado), y se coloca
sobre la lámina portaobjeto. Realizada la siembra del hongo en estudio, la
preparación se cubre con la otra lamina y el papel filtro humedece conservando
la asepsia. La placa es incubada a temperatura ambiente (20-25°C) por 4 a 5
días.

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 EXPERIMENTO
HONGOS

1. Envolver todos los materiales en papel Graf y meterlos en la autoclave.

2. Pesar 2 gr. de agar agar y echarlo en el Erlenmeyer, que previamente ha
sido esterilizado.
3. Pesar 1.5 gr. de saborado y echarlo en el mismo Erlenmeyer donde se
encuentra el agar agar.
4. Medir 50 ml. De agua destilada en la probeta y echarlo en el Erlenmeyer
donde está el agar.
5. Tapar el Erlenmeyer con algodón y papel Graf para que no haya
contaminación.
6. Una vez hecho esto disolver el agar hasta que no haya grumos.
7. Llevar el Erlenmeyer a baño maría, seguidamente a la autoclave.
8. Dejar enfriar el agar
9. Encender el mechero
10. Esterilizar el Erlenmeyer y flaquear la placa Petri en el mechero, echarle
el agar. Repetir este proceso con otra placa Petri.
11. Esterilizar el Erlenmeyer y flaquear el tubo de ensayo, y echarle el agar.
12. Una vez que el agar de la placa Petri se hizo gelatina llevarlo al medio
ambiente, para que así pueda coger microorganismos.
13. Esterilizar el asa colle para poder sacar hongos de otro tubo de ensayo y
sembrarlo en el tubo con agar, previamente ya echo gelatina.
14. Envolver los tubos de ensayo con papel Graf y ponerlos en la
incubadora.
15. Envolver la placa Petri con papel Graf y ponerlo en la incubadora.
16. Incubar a 30°C por 47 a 5 días.
17. Echar una gota de azul de metileno en una lámina portaobjeto.
18. Esterilizar el asa cole y sacar una muestra de la placa Petri, ponerlo en
el portaobjeto con azul de metileno y luego encima el cubre objeto.
19. Observarlo en el microscopio a 40x o 60x.

CÁMARA HÚMEDA:

1. Pesar 1 gr. de agar agar

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2. Pesar 1 gr. de saborado
3. Medir 30 ml. De agua destilada en una probeta, echarlo en el
Erlenmeyer
4. Echar el agar agar y el saborado en el Erlenmeyer con agua, taparlo con
algodón y papel Graf.
5. Llevarlo a la cocina hasta que el agar se disuelva.
6. Una vez que este disuelto, dejar enfriar
7. Prender el mechero
8. En una placa Petri al fuego echar el agar
9. Dejar que el agar de la placa Petri se haga gelatina
10. En la placa Petri que tenía el cultivo, marcarlo por encima con un
plumón, haciendo varios cuadrados pequeños.
11. Prender el mechero, esterilizar el Gillette
12. Con el Gillette cortar uno de los cuadrados del agar que está hecho
gelatina y ponerlo en la lámina portaobjeto. El cuadrado cortado tiene
que salir entero.
13. Sacar una muestra de hongo y ponerlo encima de la lámina portaobjeto
que tiene el agar y cubrirlo.
14. Poner la lámina con la muestra en la placa Petri, que ya tiene el papel
filtro.
15. Humedecer el papel filtro.
16. Envolver la placa Petri con papel Graf y llevarlo a la incubadora.
17. Incubar a 30°C por 4 o 5 días.

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 CONCLUSIÓN
 Se logró aislar a los hongos de las muestras y sembrarlas en placas con
cultivos diferentes para que puedan desarrollarse. Pasado unos días de haber
sembrado correctamente nuestras muestras de hongos en placas, observamos
a las colonias que se formaron en las placas, caracterizándolas en sus
diferentes aspectos. Esto nos ayudó a conocer a las diferentes: coloraciones,
aspectos y consistencia que tienen los hongos, relacionados con el origen de
sus muestras biológicas y ambientales. Con ayuda de asas de siembras
logramos obtener pequeñísimas muestras de hongos y posteriormente
adicionándole azul de metileno a cada muestra pudimos observarlas
correctamente.

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 RECOMENDACIONES
 Usar los materiales con mucho cuidado, ya que podrían quebrarse
 Para enfriar el agar no se debe acelerar el proceso, debemos esperar con
calma a que eso suceda solo
 Tener mucho cuidado al momento de usar el mechero
 Al momento de calentar el agar se debe de estar moviendo
constantemente
 Cuando vamos a estar moviendo el agar se debe de agarrar con un trapo
para así poder evitar accidentes
 Para utilizar el asa debemos de esterilizar en el mechero.
 Al flamear los materiales para poder hacer los cultivos se tiene que tapar
con algodón, para que el proceso pueda transcurrir de una manera
adecuada
 Cuando vamos hacer los cultivos debemos de tener mucho cuidado, se
tiene que sacar con mucho cuidado
 No abrir los cultivos de hongos ya que se podrían contaminar, observarlos
solo por encima
 Para sacar los materiales del autoclave se deben de hacer con mucho
cuidado ya que podría haber accidentes
 Para poner los cultivos en la incubadora, previamente se tiene que
envolver con papel Graf y amarrar bien con una pita.
 Al usar el Gillette, hacerlo con mucho cuidado.
 Al momento de cortar el agar con el Gillette, se debe hacer con cuidado y
paciencia para que pueda salir entero.

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 REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS
 https://es.wikipedia.org/wiki/Agar_nutritivo
 http://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-
reactivos/agar-nutritivo/
 https://www.clubensayos.com/Ciencia/Agua-Peptonada-
Microbiologia/1671767.html
 https://es.wikipedia.org/wiki/Peptona
 http://salud.ccm.net/faq/20603-peptona-definicion

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 ANEXOS
HONGOS

Hongos del servicio Hongos del servicio

higiénico de los varones higiénico de las mujeres

HOMBRES MUJERES: Streptococcus (Gram +)

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CÁMARA HÚMEDA

HOMBRES MUJERES

Después de estar en la incubadora x 4 días:

Los cultivos se desarrollaron

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