DETERMINACION DE LA VELOCIDAD DE CRECIMIENTO DE TRAMETES sp.

A DIFERENTES CONDICIONES: pH (ACIDO, DEL MEDIO Y BASICO), TEMPERATURA, Y MEDIO DE CULTIVO (PDA Y YPD).
DISEO DE EXPERIMENTOS

PRESENTAN:

NOMBRE Azpeitia Neri Jess Leyva Castro Rosalba Lpez Gutirrez Bihari Nathanael
Luna Ayala Miriam Ivette

1 90 95 100 85 100 85

2 95 90 100 90 90 90

3 100 90 95 90 90 85

4 95 90 100 90 90 85

5 95 80 95 85 95 85

6 100 75 100 70 90 85

PROMEDIO

95.83 86.66 98.33 85 92.5 85.83

FIRMA ENTERADO ENTERADA ENTERADO ENTERADA ENTERADO ENTERADO

Nava Garca Bernab Tovar Ziga Eliseo

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

Zempoala Hgo. A 27 de Julio de 2013 MARCO TEORICO 1. HONGOS Y ANTECEDENTES HISTORICOS Antes del desarrollo de los anlisis moleculares de ARN y su aplicacin en la dilucidacin de la filogenia del grupo, los taxnomos clasificaban a los hongos en el grupo de las plantas debido a la semejanza entre sus formas de vida (fundamentalmente, la ausencia de locomocin y una morfologa y ecologa similares). Como ellas, los hongos crecen en el suelo y, en el caso de las setas, forman cuerpos fructferos que en algunos casos guardan parecido con ejemplares de plantas, como los musgos.(1) Sin embargo, en 1969 Whitaker , fundament el nivel de organizacin celular y el tipo de nutricin de los seres vivos, sirviendo as al sistema sostenido por Nolan y Margoliash (1968), en el cual se contemplaban los cinco reinos en los que se clasificaran los seres vivos (Mnera, Protista, Fung, Plantae y Animalia), en donde los hongos fueron colocados en el reino Fung porque sus caractersticas morfolgicas, fisiolgicas y taxonmicas son diferentes a las

contempladas en el reino vegetal y animal. Por otro lado, los hongos se encuentran ampliamente distribuidos por toda la tierra y viven en cualquier sitio que presente materia orgnica, agua y temperaturas apropiadas, comprendidas generalmente entre 4 y 60C. Los hongos se encuentran clasificados como saprobios, parsitos y simbiontes.(3) Los saprobios utilizan sustancias orgnicas inertes, muchas de ellas en descomposicin, que pueden ser reservas de otros organismos, productos de excrecin y excrementos de los mismos, o restos de vegetales y animales. Los hongos parsitos se desarrollan en otros organismos vivos en los cuales son sus huspedes y se nutren de las sustancias que hay en sus clulas vivas. Por ltimo, los simbiontes se asocian con otros seres, prestndose mutua ayuda en sus funciones. En la clasificacin ms simple de los hongos se divide en micromicetos y macromicetos, estos ltimos se diferencian de los micromicetes por presentar cuerpos fructferos. Los hongos Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 2

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp producen micelio, el cual es un conjunto de filamentos, y cada filamento se denomina hifa. A veces las clulas que forman el micelio pueden parecer falsos tejidos. Las clulas de los hongos tienen una pared celular de quitina, sustancia propia de los animales artrpodos. Raramente acumulan tambin celulosa (1,2). Los hongos tienen alimentacin hetertrofa, puesto que no pueden realizar la fotosntesis porque no tienen clorofila. Tienen digestin externa, pues vierten al exterior enzimas digestivas, sustancias proteicas que actan sobre los alimentos dividindolos en molculas sencillas, que atacan a los alimentos. Los hongos absorben los alimentos despus de digerirlos. Su reproduccin puede ser asexual, por esporas, y sexual. Las hifas haploides pueden dar lugar por mitosis, es decir, asexualmente, a unas esporas llamadas conidios o conidiosporas. Las hifas diploides resultante de la unin de dos hifas haploides pueden dar lugar, por reproduccin sexual, a esporas en unas estructuras tipo asca o tipo basidio. Hay dos clases de hifas: hifas cenocticas, sin tabiques de separacin entre clulas, e hifas tabicadas, con ellos.(1,6)

Figura 1. A) Estructura plasmodial de hongos inferiores dentro de una clula hospedadora. B) hifas conociticas. C) Hifas septadas o tabicadas (1)

Los hongos se presentan bajo dos formas principales: hongos filamentosos (antiguamente llamados "mohos") y hongos levaduriformes. El cuerpo de un hongo filamentoso tiene dos porciones, una reproductiva y otra vegetativa. La parte vegetativa, que es haploide y generalmente no presenta coloracin, est compuesta por filamentos llamados hifas (usualmente Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 3

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp microscpicas); un conjunto de hifas conforma el micelio (usualmente visible). A menudo las hifas estn divididas por tabiques llamados septos.(5,8) CARACTERISTICAS PARTICULARES DE LOS HONGOS Los hongos en sentido estricto son unos organismos eucariotas hetertrofos (ya que carecen de clorofila), que tienen digestin externa con absorcin^ y que producen un micelio (salvo raras excepciones ya que algunos son unicelulares), formado por hifas septadas o sifonales cuyas paredes celulares estn revestidas por quitina y glucanos. Muchos se reproducen de forma sexual y asexual y sus clulas o compartimentos tienen por lo general varios ncleos haploides.(7)

Las levaduras, un grupo de hongos, presentan al menos una fase de su ciclo vital en forma unicelular; durante sta, se reproducen por gemacin o biparticin. Se denominan hongos dimrficos a las especies que alternan una fase unicelular (de levadura) con otra miceliar (con hifas).

La pared celular de los hongos se compone de glucanos y quitina; los primeros se presentan tambin en plantas, y los segundos, en el exoesqueleto de artrpodos; esta combinacin es nica. Adems, y a diferencia de las plantas y oomicetos, las paredes celulares de los hongos carecen de celulosa.

La mayora de los hongos carecen de un sistema eficiente de transporte a distancia de sustancias (estructuras que en plantas conforman el xilema y floema. Algunas especies, como Armillaria, desarrollan rizomorfos, estructuras que guardan una relacin funcional con las races de las plantas.

En cuanto a rutas metablicas, los hongos poseen algunas vas biosintticas comunes a las plantas, como la ruta de sntesis de terpenos a travs del cido mevalnico y elpirofosfato. No obstante, las plantas poseen una segunda va metablica para la produccin de estos isoprenoides que no se presenta en los hongos. Los metabolitos secundarios de los hongos son idnticos de o los muy semejantes que a los

vegetales. La secuencia de

aminocidos

pptidos

conforman

las enzimas involucradas en estas rutas biosintticas difieren no obstante de las de las plantas, sugiriendo un origen y evolucin distintos.

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

Carecen de fases mviles, tales como formas flageladas, con la excepcin de los gametos masculinos y las esporas de algunas formas filogenticamente primitivas (los Chytridiomycota).

No poseen plasmodesmos.

CONDICIONES DE CULTIVO Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos simples, una fuente de carbono orgnico, generalmente en azcar, y de nitrgeno suelen ser los elementos suficientes para obtener un buen crecimiento. Junto a ellos, un soporte slido, el agar, permite a los hongos filamentosos el desarrollo del micelio areo, donde se localizan las estructuras reproductoras y el desarrollo de colonias en el caso de las levaduras. El medio de cultivo ms utilizado para los hongos es el medio glucosado de Sabouraud. que rene estas caractersticas y un pH de 5'6, que dificulta el crecimiento bacteriano.(4,7) Los medios de cultivo despus de sembrados, se incuban en anaerobiosis y la temperatura ptima suele ser 25-30C para los agentes de micosis superficiales y los oportunistas y de 3537C para los que producen infecciones profundas. Los hongos levaduriformes dan lugar en 24-48 horas a colonias de aspecto y morfologa similar a las bacterianas. El desarrollo de las colonias de los hongos filamentosos es mucho ms variable: algunos crecen muy lentamente, pero sus colonias son muy caractersticas y en general se diferencian fcilmente de las levaduras. HONGOS FILAMENTOSOS Los hongos filamentosos, designados ms comnmente como mohos, han sido de gran importancia en la vida del gnero humano a lo largo de su historia, inicialmente en la parte gastronmica y, a partir de este siglo, en la industria farmacutica.(8) Los hongos filamentosos se dividen en inferiores y superiores segn las caractersticas de sus hifas. Los hongos inferiores poseen hifas anchas sin o con escasas tabicaciones, por lo que tiene muchos ncleos para una misma unidad citoplasmtica.

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp Los superiores estn formados por hifas compartimentadas por septos transversales que separan las clulas, pero que poseen poros que permiten una comunicacin del citoplasma Los hongos filamentosos se identifican a nivel de gnero especie por la morfologa del micelio, pero sobre todo por las caractersticas microscpicas de sus esporas asexuadas y los elementos que las originan. Para conseguir la produccin de esporas a veces se requieren medios de cultivo especiales que facilitan la esporulacin. Las estructuras reproductoras asexuadas (conidiforos) son muy frgiles y para poder observarlas al microscopio sin distorsionarlas o destruirlas se emplean tcnicas especiales (microcultivo). (3)

PASOS PARA LA IDENTIFICACION DE LOS HONGOS

Aspecto macroscpico de la colonia Tipo de hifa Colocacin del o los esporforos Presencia de esterigmatas (esporangiforo o conidiforo) y el orden que presentan Forma tamao y distribucin de las esporas Presencia o no de rizoides. Slo se presentan en hongos de hifa no septada. Por ejemplo: Rihizopus, Rhizomucor, Absidia

Practicar pruebas de identificacin bioqumica.(6)

IMPORTANCIA DE LOS HONGOS

Los hongos tienen una gran importancia econmica: las levaduras son las responsables de la fermentacin de la cerveza y el pan, y se da la recoleccin y el cultivo de setas como las trufas. Desde 1940 se han empleado para producir industrialmente antibiticos, as

como enzimas (especialmente proteasas). Algunas especies son agentes de biocontrol de plagas. Otras producen micotoxinas, compuestos bioactivos (como los alcaloides) que son txicos para humanos y otros animales. Las enfermedades fngicas afectan a humanos, otros animales y plantas; en estas ltimas, afecta a la seguridad alimentaria y al rendimiento de los cultivos.(1,3)

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp CLASIFICACION ACTUAL

Quitridiomicetes (divisin Chytridiomycota). Zigomicetes (divisin Zygomycota). Glomeromicetes (divisin Glomeromycota). Basidiomicetes (divisin Basidiomycota). Ascomicetes (divisin Ascomycota).(5)

BASIDIOMICETOS Los hongos basidiomicetos aparte de ser una extraordinaria fuente de protena y una excelente opcin para la alimentacin humana presentan caractersticas enzimticas nicas. Su compleja batera enzimtica extracelular es la principal responsable del proceso de degradacin y est compuesta por lignina peroxidasa (I.iP). Manganeso peroxidasa (MnP). Lacasa. y otras enzimas como glucosa oxidasa y glioxal oxidasa que generan el perxido necesario para la actividad cataltica de la LiP y MnP.(2,4) La clase de los basidiomicetos pertenecen a la divisin Eucomycota (hongos verdaderos con pared) en el reino Fung, estos incluyen a las setas y los hongos, que forman cuerpos fructferos en forma de repisas sobre la madera; estas caractersticas tambin incluyen produccin de esporas sexuales en una clula especial llamada basidio y la reproduccin asexual se realiza por conidios o esporas cuando existen estos dos tipos de estructuras. Los basidiomicetos a su vez se dividen en los siguientes rdenes: Auricular ales, Aphyllophorales, Agaricales y

Gasteromicetes.(4,5)

2. TRAMETES Trametes como un gnero representativo de Polycoracae fue establecido por Elas Magnus Fries in 1835.(9)

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Fig. 1. Cuerpo fructfero silvestre de Trametes sp CARACTERSTICAS El hongo Trametes sp, en la actualidad se le adscribe dentro de esta clase de los

basidiomicetos en el orden Aphyllophorales y la familia Polyporaceae. Una de las propiedades de los hongos del genero Trametes, es la degradacin de la lignina para facilitar la digestin de la celulosa y entre las enzimas que emplean estos hongos para ese fin se encuentran las llamadas lacasas. Porque tienen la capacidad de oxidar a la lignina por medio de la accin de diversos mediadores.(3) Este hongo se encuentra dentro de los macromicetes, y como todos los de su orden gozan de una mala reputacin, ya que son considerados como hongos parsitos o patognicos de los bosques; crecen atacando a varias especies de rboles. Son imputrescibles, conservando su integridad y algunos de ellos crecen en forma laminar sobre la madera, por lo cual son conocidos como repisas de la madera. En el gnero Trametes frecuentemente su receptculo es estacionario, la trama espesa y clara; los tubos huecos son de dimensiones considerables, frecuentemente lameladas, separados por tabiques algo espesos. Sus esporas son hialinas, lisas y sin cistides. Se pueden clasificar este gnero segn el color de su trama (3,4): Rojo, siendo caracterstico Trametes cinnabarium con los poros rojo bermelln, produce una podredumbre blanca sobre numerosos rboles frondosos.

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp Leonado, de olor anisado, principalmente el Trametes odorata, cuyo sombrero velloso, rojizo, pardo y con un margen de color vivo, este es de podredumbre parda, el cual destruye abetos y alerces de la montaa. Pardo-ocre, inodoro, involucra al Trametes trabea, con sombrero abollado y fomentoso, leonado con himenio color gamuza comn sobre todos los bosques muertos. Blanco, este se encuentra en numerosas especies, entre las cuales se encuentran: Trametes hispida con sombrero gris pardo, erizado, leonado, propio de Trametes gibosa, muy comn, el cual tiene sombrero blanquecinas, poros frecuentemente alargados. Trametes rubescens que tiene su sombrero menos espeso y oscuro, lo que permite que se distinga menos, se identifica bien por el color y la forma plana del sombrero con poros encarnados rosas o rojizos propiamente se encuentran sobre sauces y alisos. Los Lenzites son otro tipo de hongos que pertenecen a la familia de los polyporaceae y tienen la apariencia muy semejante a Trametes sp. Lencitas tricolor se encuentran sobre los cerezos, los poros son alargados, con desviaciones lamelados lineares, su sombrero es pardo prpura, frecuentemente con franjas ms claras y triple carcter (hymenia, palique y estacional) que lo distingue del Trametes rubescens, pero que muestra la proximidad estrecha al gnero Trametes. Lencitas zapeara cosmopolita y fuerte se encuentra comnmente en los bosques de confieras, producen una podredumbre parda y ceniza se reconoce por su bello color azafranado o leonado, marrn y su sombrero erizado con algunas zonas desnudas, en sus laminas rgidas, aserradas, dentadas, estriadas a lo ancho, azafranadas, su carne es bosques frondosos.

pubescente, con zonas

herrumbrosa, la distingue de su especie vecina L. abietina en las fructificaciones por otras partes menos vivas y coloreadas, por la ausencia de cistides emergentes y al parecer espesas que es lo ltimo que revela. El Trametes del roble (T. quercina) es una de los poli foros ms comunes en los robledales de Europa pero no daa los postes de las casas y los bosques. Son propios de los bosques muertos y el castaos, es reconocido por sus almohadillas espesas, distones ramificados y sus diversas formas, se puede colocar, ya sea en los Trametes o en los Lencitas.

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CONDICIONES DE CRECIMIENTO DE Trametes sp En cultivo lquido y slido, para la produccin de enzimas lignocelulolticas por el gnero Trametes, se ha estudiado principalmente el efecto de la fuente de nitrgeno y la fuente de carbono, pero hay poca informacin sobre el efecto de la temperatura en la produccin de sus enzimas dado que este gnero slo las produce a temperaturas entre 28 y 30 C. Levin y Forchiassin (1998) indicaron que la temperatura entre 30 y 37 C tiene poco efecto en la produccin de xilanasas en medio lquido por Trametes gallica, incluso por arriba de este intervalo, encontraron que el hongo fue incapaz de crecer y de producir enzimas.(10,11)

IMPORTANCIA BIOTECNOLOGICA Y APLICACIONES.

El gnero est ampliamente distribuido en la naturaleza y algunas especies de trametes han sido utilizadas en la medicina tradicional china. Sin embargo es difcil identificar muchas especies de trametes debido a sus similares caractersticas morfolgicas. Por esto trametes es considerado como uno de los ms confusos gneros de Polyporaceae. (5) El gnero trametes tiene 64 especies de las cuales se puede destacar las siguientes aplicaciones. Por ejemplo Trametes hirsuta cepa SKU804 es capaz de producir celulasa y tambin un mtodo de sacarificacin. Debido a que el mtodo puede garantizar un alto rendimiento de sacarificacin, las celulasas producidas a partir de la cepa, encuentran aplicaciones en diversas industrias, incluyendo la industria de la energa, la industria de la fibra, la industria de la fabricacin de papel, la industria de los forrajes y la industria alimentaria, donde se encuentran aplicaciones en la produccin de alimentos bajos en caloras bio-energa y la y la fermentacin de los residuos de alimentos. (6) En general Trametes, ya sea el organismo intacto o enzimas aisladas del mismo, puede tener una gran variedad de aplicaciones biotecnolgicas. Por sus propiedades catalticas de Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 10

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp oxidorreductasas lacasas purificadas, aplicaciones con bajos volmenes y de alto costo como el uso en biosensores se han desarrollado. (5,6) Otro campo de aplicacin es la bioremediacin o para el tratamiento de residuos. Sin duda, la presin para tratamientos de bajo costo es ms pronunciada en estas aplicaciones de gran volumen, lo que favorece el uso de todo el microorganismo o caldo de cultivo no purificado. Como se ha demostrado en varios artculos de opinin, el ataque concertado de enzimas ligninolticas Trametes puede manejar sustancias que de otra manera seran difciles de degradar. Es bastante razonable proponer que, en base a las numerosas propiedades catalticas de las enzimas descritas, muchas nuevas aplicaciones se pueden encontrar en el futuro prximo, poniendo de manifiesto un gnero verstil de los hongos de Trametes; Trametes pubescens MB89 ha sido estudiado por su produccin de lacasas, una enzima que puede ser utilizada en procesos de remediacin (Fig. 2). (7,8)

Fig.2. decoloracin de colorantes textiles por hongos basidiomicetos. Trametes sp., colorante verde placa control (A), y placa inoculada (B) con siete das de incubacin (42C); colorante amarillo placa control (C), y placa inoculada (D) con 15 dias de incubacin (42C).(9)

JUSTIFICACIN Actual mente existen un gran nmero de industrias textiles distribuidas por todo el mundo, estas fbricas generan un gran nmero de desechos, los cuales ocasionan un gran impacto ambiental, especficamente en los mantos acuferos. Por tal motivo se han llevado a cabo distintas

investigaciones que ayuden a la remediacin de agua con compuestos fenlicos. Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 11

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp Una manera de degradar los compuestos fenlicos es mediante el empleo de enzimas generadas por Trametes SP. Por lo cual se han evaluado su velocidad de crecimiento a diferentes condiciones como: pH: 3.5-del medio-8.5, Temperatura (28 y 37 C), Medio de cultivo (PDA y YPD)

OBJETIVO GENERAL Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp a diferentes condiciones (pH, Temperatura y medio de cultivo).

OBJETIVOS ESPECIFICOS Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28c, pH del medio en PDA Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28c, pH del medio en YPD Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28C Y 37C, pH 3.5 en PDA Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28C Y 37C, pH 8 en PDA Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp .a 28C Y 37C, pH 3.5 en YPD Determinar la velocidad de crecimiento de Trametes sp. a 28C Y 37C, pH 8 en YPD Comparar las velocidades de crecimiento de los diferentes tratamientos mediante pruebas estadsticas (ANOVA, ANOVA A 2 VIAS, TUKEY Y DMS) MATERIALES Y METODOS Manejo de cada tratamiento. Se realizaron tratamientos a el hongo filamentoso Trametes sp bajo diferentes condiciones para determinar su velocidad de crecimiento. Manejando los medio YPD constituido de 1% (masa / volumen) de extracto de levadura, 2% de peptona, 2% de glucosa / dextrosa, 2% de agar, con el resto siendo agua destilada; y medio PDA constituido de 39 g de polvo PDA Comercial. Se sometieron a temperaturas de 28C y 37C, ajustando a pH acido de 3.5, sin ajustar con pH del medio de cultivo y ajustando a un pH bsico de 8. Se midi el crecimiento en placa, tomando la longitud de expansin en del hongo en la placa, durante 5 das con dos mediciones por da. Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 12

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp El ajuste de pH en los tratamientos se hizo con soluciones de acido clorhdrico y Hidrxido de Sodio, Agregndole HCl para acidificar el medio a pH 3.5 y monitoreando constantemente con un potencimetro. Para alcanzar pH de 8 de uso la solucin de NaOH de igual manera con ayuda de potencimetro. Materiales y equipos Se utilizaron cajas Petri y material para prepara medios de cultivo( bascula analtica, probeta, esptula y vaso de precipitado) para los inoculo, potencimetro para ajustar pH, y olla de precio para la esterilizacin de cajas Petri y medios de cultivo. Diseo experimental y anlisis estadstico. El experimento fue realizado con 5 repeticiones (inoculos) por cada tratamiento, y el tiempo de de monitoreo del crecimiento fue de 5 das. Al final de cada tratamiento se calculaba la media aritmtica y la desviacin estndar de las cinco cajas del crecimiento de expansin en placa por un intervalo de tiempo. Despus de los 5 das y teniendo por lo menos 5 medias aritmticas de diferentes intervalos de tiempo se armo una regresin lineal, calculando la pendiente de la recta generada, siendo esta la velocidad de crecimiento del tratamiento. Los factores fueron: el medio de cultivo(dos niveles: YPD y PDA), el pH (tres niveles: pH 3.5, pH del medio, pH 8) y Temperatura (dos niveles: 28C y 37C). Los datos se analizaron con el mtodo de anlisis de varianza ANOVA para aceptar o rechazar hiptesis estadsticas. Las medias de velocidad de crecimiento por placa se utilizaron para la comparacin por la prueba Tukey, DMS y anlisis factorial [12].

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ESQUEMA

Preparar medio de cultivo PDA o YPD segn el tratamiento

Ajustar o medir el pH, segn sea el caso: pH del medio pH acido: 3.5 pH bsico: 8

Esperar a que baje la temperatura del medio, vaciar en cajas (20 mL aprox.) y esperar

gelificacin Esterilizar cajas Petri y medio de cultivo

Despus de 24 horas monitorear crecimiento por lo menos 2 veces al da, hasta obtener por lo menos 5 sembrar por picadura e incubar segn sea el tratamiento (28C o 37C) Universidad Politcnica de Pachuca datos y determinar velocidad de crecimiento mediante la graficacion de los datos Pgina 14

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp RESULTADOS Y DISCUCIONES A continuacin presentamos las regresiones generadas a partir de cada tratamiento y los obtenidos. Medio de cultivo PDA a 28C

Tabla 1. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviacin CRECIMIENTO (cm) TIEMPO (h) caja 1 caja 2 caja 3 caja 4 caja 5 MEDIA DESV ESTANDAR 0 0 0 0 0 0 0 0 0.7 0.7 1.1 0.9 1 0.85072428 0.178885438 27 2 1.5 1.3 1.4 1.4 1.5 1.41597510 0.083666003 43 4 1.7 1.6 1.6 1.9 1.9 1.72958500 0.151657509 48.5 7 2.1 2.1 1.7 1.8 1.9 1.90658671 0.178885438 71 4 3.1 2.9 2.8 2.8 2.9 2.89599631 0.122474487 93 8 3.1 3.1 2.9 3.1 3 3.03784636 0.089442719 97 2 PENDIENT 0.0302335 3 E

Tabla 2. Velocidad de crecimiento de Medio de cultivo PDA a 28C VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) 1 2 3 4 5 0 0 0 0 0 0.01920424 0.03203915 0.03524787 0.04166533 0.01920424 0.02883042 0.03364351 0.04166533 0.02562169 0.03043478 0.03364351 0.03524787 0.02241296 0.03043478 0.0384566 0.03685224 0.02401733 0.03203915 0.0384566 0.0384566

MEDIA 0 0.02209209 0.03075566 0.03588962 0.03877747 Pgina 15

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp 0.05770897 0.05770897 0.05450024 0.05770897 0.05289588 0.05450024 0.05289588 0.05770897 0.05450024 0.0561046 0.05450024 0.05674635

Tabla 3. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviacin estndar del hongo trametes sp en condiciones de: YPD, 28C, Ph del medio CRECIMIENTO (cm) CAJA2 CAJA3 CAJA4 CAJA5 MEDIA 0 0 0 0 0 0 0 0.2 0 0.08 1.2 1.4 1.5 1.7 2.3 1.4 1.7 1.7 1.8 2.3 1.2 1.2 1.6 1.7 2.5 1.3 1.6 1.8 1.9 2.8 1.26 1.48 1.64 1.78 2.46

TIEMPO 0 28 47 51 66 70 96.5 PENDIENT E

CAJA1 0 0.2 1.2 1.5 1.6 1.8 2.4 0.02785379

S 0 0.1095445 1 0.0894427 2 0.1923538 4 0.1140175 4 0.083666 0.2073644 1

Figura 1. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones de: medio de cultivo PDA, pH del medio y 28 C
3.5 3 2.5 y = 0.6233x - 0.497 R = 0.9778

2
CRECIMIENTO (cm) 1.5 1

0.5 0 0 27 43 71 93 97

-0.5 -1 -1.5 TIEMPO (h)

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

1 0 0.01383342 0.03892122 0.04644757 0.04895635 0.05397391 0.06902659

Tabla 4. Velocidad de crecimiento Medio en YPD a 28C. VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) 2 3 4 5 0 0 0 0 0.00881586 0.00881586 0.01383342 0.00881586 0.03892122 0.04393879 0.03892122 0.04143001 0.04393879 0.05146513 0.03892122 0.04895635 0.04644757 0.05146513 0.04895635 0.05397391 0.05146513 0.05397391 0.05146513 0.05648269 0.06651781 0.06651781 0.07153537 0.07906172

MEDIA 0 0.01082288 0.04042649 0.04594581 0.04995986 0.05347215 0.07053186

3 CRECIMIENTO (cm) 2 1 0

Figura 2. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones de: medio de cultivo YPD, pH del medio y 28 C

0 -1 -2

28

47

51

66

70

96.5

y = 0.3986x - 0.3514 R = 0.9113 TIEMPO(h)

Medio PDA, 28, pH 3.5. Tabla 5.- valores de crecimiento con respecto al tiempo (h), y valores de media y desviacin estndar del hongo Trametes sp en condiciones de: PDA, 28, pH 3.5. CRECIMIENTO (cm) 1 2 3 4 5 VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) 1 2 3 4 5 Medi a 0 0.017 5889 0 0.017 5889 0 0.017 5889 0 0.017 5889 0 0.017 5889 0 0.017 5889

tiem po (t) 0 25

Me dia 0 0

0 0

0 0

0 0

0 0

0 0

0 0

Universidad Politcnica de Pachuca

Pgina 17

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp 4 0.022 7298 0.033 0115 2 0.038 1523 8 0.068 9975 3 4 0.023 7579 7 0.038 1523 8 0.053 5749 5 0.068 9975 3 4 0.023 7579 7 0.043 2932 3 0.045 3495 8 0.068 9975 3 4 0.026 8424 8 0.033 0115 2 0.042 2650 6 0.068 9975 3 4 0.024 7861 4 0.038 1523 8 0.042 2650 6 0.068 9975 3 4 0.024 3748 7 0.037 1242 0.044 3214 1 0.068 9975 3

51

0.5 0. 6 1.5 2

0. 6 2. 5 2. 7 5

0.9

0.7

0.6 6 1.9

69

1.5

0.15 1657 5 0.41 833 0.56 1248 6 0

76

3. 5 5

2.4

2.4

2.6

194

Pendi ente

0.02 774
Figura 3. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 3.5 y 28 C

6 5 4 3 2 1 0 -1 -2

y = 0.9726x - 1.7107 R = 0.8899

CRECIMIENTO (cm)

00:00

25

51 TIEMPO(h)

69

76

194

Medio PDA, 37C, pH 3.5. Tabla 6.- valores de crecimiento con respecto al tiempo (h), y valores de media y desviacin estndar del hongo Trametes sp en condiciones de: PDA, 37C, pH 3.5 CRECIMIENTO VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) (cm) tiemp 1 2 3 4 5 me s 1 2 3 4 5 Media o (h) dia 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.6 0 0 0 0 0.6 0.1303 0.015 0.0161 0.016 0.0168 0.0147 0.0160 25 . . . . 8 8405 4654 4295 8205 2046 8794 0745 7 8 8 5 3.4 3 2 3 2 3.0 0.4438 0.034 0.0337 0.031 0.0330 0.0269 0.0318 56 . . . . 2 4682 4356 5813 0481 8062 8306 6111 3 9 2 3 Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 18

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp 69 76 5 5 4 5 4 4.6 0.5477 2256 5.4 0.6387 4 4878 0.045 2757 0.048 6633 0.0452 7575 0.0479 8577 0.038 5007 0.054 0833 0.0452 7575 0.0486 6328 0.0385 0.0425 0068 6572 0.0418 0.0482 8821 5678

5.5 5 6 5 4 . . . . 4 3 5 5 6.8 9 7 6 6 99 . . 5 5 Pendi 0.076 0168 ente

7.1 1.1631 0.057 6 8528 4709

0.0723 0.062 7602 2134

0.0554 0.0520 0.0599 3835 5081 0989

Figura 4. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 3.5 y 37 C
10 CRECIMIENTO (cm) 8 6 4 2 0 0 25 56 TIEMPO (h) 69 76 99

y = 1.476x - 1.6827 R = 0.9826

-2

Medio en PDA a 28C, pH 8

Tabla 7. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviacin estndar del hongo Trametes sp en condiciones de: PDA, 28C, pH 8 CRECIMIENTO (cm) VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) tiemp 1 2 3 4 5 s 1 2 3 4 5 x o (h) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.2 0.2 0.3 0.18 0.109 0.015 0.013 0.015 0.015 0.017 0.015 23 0.2 5445 9620 2520 9620 9620 3170 6910 1 6 3 6 6 7 6 1 1.28 0.268 0.036 0.030 0.028 0.030 0.026 0.030 53 1.7 1.3 1.1 1.3 3281 2872 8672 1571 8672 8021 5962 6 6 1 8 1 7 1 1.9 2.1 1.7 2 1.7 1.8 0.178 0.038 0.041 0.036 0.040 0.036 0.038 84 8 8854 9972 7073 2872 3523 2872 7262 4 9 2 6 6 9 3 2.5 3.4 2.8 2.84 0.378 0.047 0.053 0.047 0.059 0.051 0.051 118 2.5 Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 19

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp 1534 1 1273 7 9024 4 1273 7 3224 9 1924 1 7344 2

Figura 5. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de Trametes Sp. a condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 8 y 28 C
4 CRECIMIENTO (cm) 3 2 1 0 -1 -2 0 23 53 84 118 y = 0.738x - 0.978 R = 0.967

tiempo (h)

Medio PDA, 37C, PH 8

Tabla 8. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviacin estndar del hongo Trametes Sp en condiciones de: PDA, 37C, pH 8 CRECIMIENTO (cm) VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) tiem 1 2 3 4 5 X s 1 2 3 4 5 X po (h) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 23 1.6 1.2 1.2 1.4 2 1.4 0.334 0.017 0.015 0.015 0.016 0.019 0.016 8 6640 5587 5158 5158 5372 6016 9458 1 3 3 3 8 3 6 53 4.7 4.9 5.3 5.1 5.3 5.0 0.260 0.033 0.034 0.036 0.035 0.036 0.035 6 7681 3912 4126 4555 4341 4555 2298 2 7 7 2 7 3 84 6.1 5.7 6.5 6.4 6.4 6.2 0.327 0.040 0.038 0.042 0.042 0.042 0.041 2 1085 5413 4984 5842 0735 0735 1542 4 7 7 7 4 4 4 Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 20

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp 118 6.8 6.4 7.4 8.1 8.4 7.4 0.843 0.044 0.042 0.047 0.050 0.052 0.047 2 8009 1164 0735 1808 7558 2880 2829 2 5 4 7 5 4

PEN DIEN TE

0.065 2566 2

Figura 6. Evaluacin de la velocidad de crecimiento de Trametes Sp. a condiciones de: medio de cultivo PDA, pH 8 y 37 C
10 8 CRECIMIENTO (cm)

6
4 2 0 0 -2

y = 1.958x - 1.838 R = 0.9562

23

53 tiempo (h)

84

118

Medio YPD, 28C, pH 3.5 Tabla 9. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviacion estandar del hongo trametes sp en condicions de: YPD, 28C, pH 3.5 CRECIMIENTO (cm) VELOCIAD DE CRECIMIENTO (mm/h) tiem 1 2 3 4 5 ME s 1 2 3 4 5 MEDI po DI A (h) A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 21 0.5 0.3 0.5 0.7 0.5 0.5 0.141 0.017 0.014 0.017 0.019 0.017 0.017 4213 1058 7529 1058 4588 1058 1058 6 8 4 8 2 8 8 51 1.4 1.9 2.3 1.5 1.3 1.6 0.414 0.027 0.033 0.038 0.028 0.026 0.030 8 7288 6941 5764 2823 8705 5176 9882 3 2 7 5 9 5 4 1.7 2.7 3.3 2.7 2.6 2.6 0.574 0.031 0.042 0.050 0.042 0.041 0.041 105 4562 2235 9882 0470 9882 8117 8117 6 3 4 6 4 6 6 Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 21

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp 120 2.6 3.6 3.6 3.2 3 3.2 0.424 0.041 0.053 0.053 0.048 0.046 0.048 2640 8117 5764 5764 8705 5176 8705 7 6 7 7 9 5 9

PEN DIEN TE

0.025 7887 2
Figura 7. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones de: medio de cultivo YPD, pH 3.5 y 28 C
4 y = 0.85x - 0.954 R = 0.9848

CRECIMIENTO (cm)

3 2 1

0
-1 -2 0 21 51 105 120

tiempo (h)

Medio YPD, 37C, pH 3.5 Tabla 10. Valores de crecimiento con respecto al tiempo(h), y valores de media y desviacin estndar del hongo trametes sp en condicions de: YPD, 37C, pH 3.5 CRECIMIENTO (cm) VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) tiem 1 2 3 4 5 ME s 1 2 3 4 5 MEDI po DI A (h) A 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 21 2 1.4 1.8 1.6 1.8 1.7 0.228 0.028 0.021 0.025 0.023 0.025 0.025 2 0350 1677 4110 9155 6632 9155 0146 9 9 4 4 9 4 4 45 2.4 2.2 2.2 2.6 2 2.2 0.228 0.032 0.030 0.030 0.034 0.028 0.031 8 0350 6723 4200 4200 9245 1677 3209 9 5 5 5 9 5 51 3.3 2.5 2.8 3 3 2.9 0.294 0.042 0.033 0.037 0.039 0.039 0.038 2 9576 8074 7984 1768 4290 4290 5281 2 3 2 5 5 5 66 4.1 3.7 4.2 3.9 4.1 4 0.2 0.051 0.047 0.052 0.049 0.051 0.050 8164 3119 9425 5641 8164 6903 4 4 7 9 4 2 71 4.7 4.3 4.9 4.8 4.9 4.7 0.248 0.058 0.054 0.060 0.059 0.060 0.058 Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 22

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp 2 PEN 0.06 DIEN 0535 TE 3

Figura 8. Evaluacion de la velocidad de crecimiento de trametes sp a condiciones de: medio de cultivo YPD, pH 3.5 y 37 C
6 5 4 CRECIMIENTO (cm) 3 2 1 0 0 -1 -2 tiempo (h) 21 45 51 66 71 y = 0.888x - 0.5013 R = 0.9723

9979 9

5732

0686 9

8254 5

6993 2

8254 5

7984 2

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

ANALISIS DE VARIANZA ANOVA A continuacin presentamos anlisis de varianza entre los tratamientos del experimento: ANOVA 1 Se realiz ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de Trametes sp a condiciones de: pH de medio y 28C Tabla 11.- Anova de tratamientos con pH del medio a 28C Fuente de variacin Tratamientos Error Total Ho:Hi= Ha Regla decisin Suma de cuadrados 0.000075 0.005961 0.006036 2 Se acepta de No se rechaza si Fexp 4.75 Se rechaza si Fexp > 4.75 1 12 13 3 4 5 Grados de libertad Cuadrados medios 0.000075 0.00049675 0.150928 Valor F

Conclusin con Se acepta Ho debido a que .150928 < 4.75 a un L.C 95%. La respecto a F velocidad de crecimiento no se se ve afectado por el medio de cultivo.

Discusin de ANOVA1

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp En anova realizada a dos tratamientos diferentes para ver el efecto que logran tener en la velocidad de crecimiento de Trametes sp utilizando medios PDA a 28C cuando la temperatura aumenta, las velocidades de las reacciones qumicas, que ocurren en el interior de las clulas de los microorganismos, se vuelven cada vez ms rpidas, podemos ver que en nuestras mediciones existe una variacin no muy considerable en cuanto al crecimiento es algo ms constante en el cual es un poco ms inestable, se puede notar que en un comienzo el crecimiento es menos por la temperatura pero posteriormente este aumenta su tamao considerablemente esto podra darse por que el medio le es ms favorable ya que la temperatura est dentro de sus estndares al crecimiento o su adaptacin a este es mejor.[13,14]

Conclusiones ANOVA 1 En la anova realizada a este dos diferente tratamiento pudimos darnos cuenta que el desarrollo de Trametes sp no se ve afectado totalmente ya que en ambos medios su desarrollo es ptimo en ninguno de los medios se puede decir que no hubo variacin de crecimiento ambos crecieron de forma normal a que el pH del cultivo slido est por abajo de 5 por arriba de 7 y esto lo podemos corroborar con los datos de nuestra anova ya que nuestras hiptesis son aceptadas al ver que nuestro valor de F experimental es menor que al F de tablas a un L.C de 95% teniendo en cuenta todas estas variables descritas en la anova podemos concluir que la velocidad de crecimiento de Trametes sp no se ve afectado drsticamente cuando el pH es acido del medio de cultivo en el que se desarrolla.[15] ANOVA 2 Se realizo ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de Trametes sp a condiciones de: pH 3.5, en medio PDA. Tabla 11. Velocidad de crecimiento con respecto a su temperatura. Velocidad de crecimiento (mm/h). 28 0 Velocidad de crecimiento (mm/h). 37 0

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp 0.01758894 0.02437487 0.0371242 0.04432141 0.06899753 0.01600745 0.03186111 0.04256572 0.04825678 0.05990989

Tabla 12. Tabla de ANOVA de los tratamientos a pH 3.5, en medio PDA. Fuente de variacin Tratamientos Error Total Ho: Ha: Regla de decisin : Suma de cuadrados 0.000003 0.005264 0.005267 Grados de libertad 1 10 11 1=2 Todas son diferentes Si F experimental F tablas, no se rechaza la Ho Si F experimental>F tablas, se rechaza la Ho Conclusin con respecto a F experimental: No se rechaza Ho ya que el valor de F experimental es menor 0.00607 a F de tablas de 4.96 teniendo un lmite de confianza del 95% es entonces que en el medio de PDA no presenta diferencia en las temperaturas de 28C y 37C sobre la velocidad de Cuadrados medios 0.000003 0.0005264 0.00607 Valor F

crecimiento son diferentes.

Discusin ANOVA 2 Con respecto en los datos se muestra que en las temperaturas de 28C y 37C, se tiene que en los dos tratamientos presentan y se observa un efecto en la velocidad de crecimiento de Trametes sp a condiciones de: pH 3.5, en medio PDA. En el desarrollo de las anovas con respecto a la temperatura como anlisis de varianza la utilizamos para comprobar si existe o tenemos Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 26

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp estadsticamente alguna diferencia significativa caracterstica para tener entre las medias

obtenidas las cuales son de (F experimental de 0.00607 mientras que en F de tablas se obtiene un valor de 4.96) esto se determina cuando en el anlisis experimental se cuenta con dos o ms tratamientos [6]. Es entonces que para el desarrollo de esta ANOVA teniendo como variable las diferentes temperaturas que se estn utilizando las cuales son de 28C y 37C en medio de cultivo PDA con un pH de 3.5 la ANOVA obtenida anteriormente se muestra que la Ho no se rechaza porque tenemos una diferencia de medias obtenidas en el anlisis experimental que se realizo en la anova anterior y que empleando las medias obtenidas de los resultados en los tratamientos, es por esta razn que al analizar los tratamientos no se afecta su crecimiento pero el crecimiento en cada temperatura es diferente significativamente en el medio de cultivo PDA y nuestro hongo Trametes sp presenta un mejor crecimiento en pH de 3.5, en medio PDA a 37C que se considera que son condiciones optimas para su crecimiento[16,17]. Conclusin ANOVA 2 La anova nos hace concluir que a pH 3.5 en medio PDA, la temperatura no es un factor que afecte significativamente el crecimiento del hongo Trametes sp. ANOVA 3 Se realiz la ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de Trametes Sp a condiciones de: pH 8 y PDA.

Tabla 13.- Velocidad de crecimiento de los tratamientos a pH 8 en medio PDA. VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) 28C 0 0.01569106 0.03059621 0.03872629 0.05173442 Universidad Politcnica de Pachuca 37C 0 0.01694586 0.03522983 0.04115424 0.04728294 Pgina 27

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

Tabla 14.- ANOVA 3 entre tratamientos a pH 8 en medio PDA Fuente de variacin Tratamientos Error Total Ho:Hi= Ha 0.000001 0.003122 0.003123 1=2=3=4=5 Los tratamientos no son iguales Regla de decisin Conclusin con respecto a F No rechazar HO si Fexp 0.003828 Rechazar s Fexp >0.003828 La H no se rechaza porque Fexp Suma de cuadrados Grados de libertad 1 8 9 Cuadrados medios 0.000001 0.00039025 0.003828 Valor F

Discusiones ANOVA 3 La velocidad de crecimiento a temperatura de 37C es ms elevada que a 28 C, pues presenta un buen crecimiento a esta temperatura con respecto al tiempo por lo cual se establece que el hongo Trametes Sp bajo estas condiciones presenta una buena velocidad de crecimiento en el medio de cultivo PDA. Se realizaron mediciones dos veces al da durante una semana en los tratamientos y se concluye que son diferentes, por lo cual se pudo observar la diferencia en el crecimiento del hongo Trametes sp a las temperaturas de 28 C y 37 C. Favoreciendo el crecimiento a Trametes Sp

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp a 28 C ya que no se ve afectada puesto que se encuentra en el intervalo de su temperatura ptima de entre los 28 y 30 C para favorecer su crecimiento. Conclusin ANOVA 3 La Anova nos permite concluir que a pH 8 en medio PDA, la temperatura no es un factor que haga variar significativamente la velocidad de crecimiento de Trametes sp. ANOVA 4 Se realizo ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de Trametes sp a condiciones de: pH 3.5 y YPD Tabla 15. Velocidades de crecimiento en los dos tratamientos a pH 3.5 en medio YPD. VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) 28C 0 0.01710588 0.03098824 0.04181176 0.04887059 37C 0 0.02501464 0.03132095 0.03852815 0.05069032 0.05879842

Fuente de variacin Tratamientos Error Total Ho:Hi= Ha Regla de decisin

Tabla 16.- ANOVA tratamientos a pH 3.5 en medio YPD. Suma de cuadrados Grados de libertad Cuadrados medios 0.000108 0.003696 0.003804 1 9 10 1=2 Todas son diferentes Si F experimental F tablas, no se rechaza la Ho Si F experimental >F tablas, se rechaza la Ho 0.000108 0.000410667

Valor F 0.263903

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

Conclusin con respecto a F

la Ho se rechaza porque el valor de f experimental (0.263903) es menor al de f de tablas (F= 5.12) con un intervalo de confianza de 95%

DISCUSIN Los Medios de cultivo afectarn la morfologa de la colonia y el color, pueden afectar incluso el crecimiento del hongo en el cultivo, la mayora de los hongos crecen en agar de dextrosa de papa (PDA), pero esta puede ser demasiado rica para muchos hongos. Otro aspecto que puede crear un ambiente desfavorable en el medio de aislamiento, es un pH elevado e incluso la temperatura.[20] Al comparar dos tratamientos para determinar la velocidad de crecimiento del hongo trametes sp. Se puede apreciar en la tabla 1, que la velocidad de crecimiento fue mayor a una temperatura de 37C: pH 3.5 y medio de cultivo YPD. Aun as no son las condiciones ptimas para el desarrollo del hongo, por lo tanto no tubo diferencias significativas es decir que la temperatura no influye de manera muy notable en el crecimiento de este hongo en un medio de cultivo YPD. Con el anlisis de varianza (ANOVA) comprobamos si existe una diferencia estadsticamente significativa entre tratamientos.[24] Para el desarrollo de esta ANOVA se tuvieron coma variables en un medio de cultivo YPD, la temperatura, PH 3.5. se pudo determinar que la velocidad de crecimiento es favorable en una temperatura de 37C, para poder tener las condiciones ptimas de crecimiento es necesario realizar el monitoreo del crecimiento en el medio de cultivo PDA.[23] CONCLUCIN Al trabajar y comparar los tratamientos realizados : (pH 3.5, YPD, 28C y 37C) se lleg a la conclusin de que el hongo Trametes sp tiene mayor desarrollo bajo las circunstancias de pH cido (3.5) con una temperatura de 37C en un medio de cultivo solido (PDA), porque estas condiciones son ptimas para el desarrollo del hongo, se estima que tiene un crecimiento Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 30

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp prolongado en pocos das, el motivo de por qu se menciona su pH es porque acta con su acidez o alcalinidad del medio [23, 24]. La Ho se acepta porque el valor de f experimental es menor al de f de tablas con un intervalo de confianza de 95%. [20]

ANOVA 5 Se realizo ANOVA a los tratamientos para ver efectos en la velocidad de crecimiento de Trametes sp a condiciones de temperatura de 28C. Tabla17.-Tratamientos a 28C VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) YPD PDA pH 3.5 PDA pH 8 YPD pH 3.5 0 0 0 0 0.01082288 0.01758894 0.01569106 0.01710588 0.04042649 0.02437487 0.03059621 0.03098824 0.04594581 0.0371242 0.03872629 0.04181176 0.04995986 0.04432141 0.05173442 0.04887059 0.05347215 0.06899753 0.07053186

PDA 0 0.02209209 0.03075566 0.03588962 0.03877747 0.05450024 0.05674635

Tabla 18.- ANOVA de tratamientos a 28C Fuente de variacin Tratamientos Error Total Ho:Hi= Ha Regla de decisin Suma de cuadrados 0.000536 0.011954 0.01249 Grados de libertad 4 25 29 Cuadrados medios 0.000134 0.00047816 0.28049 Valor F

PDA =YPD =PDA pH 3.5 =PDA pH 8= YPD pH 3.5 Son diferentes todos los tratamientos No rechazar si F experimenta </= 2.74* Rechazar si F experimental >2.74 Pgina 31

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp Conclusion con respecto a F Ya que el valor de F experimental es menor a F de tablas (2.74) teniendo un lmite de confianza del 95% es entonces que no hay diferencia entre los tratamientos.

Discusin ANOVA 5 Los medios de cultivo generalmente contienen una fuente de carbono, nitrgeno y vitaminas. La glucosa (dextrosa) es la fuente de carbono ms ampliamente utilizable, y por lo tanto es el ms comnmente utilizado en los medios de crecimiento [18]. Ambos medios de cultivo utilizados en los tratamientos tienen como fuente de carbono la dextrosa. As se explica que el crecimiento sea similar en los tratamientos a la temperatura de 28C. El pH puede ser inhibidor de otros microorganismos que compitan con el hongo Trametes sp [19]. Por lo que el pH acido y bsico puede que sea beneficioso en algunos casos, siendo as que no se note una diferencia significativa entre la velocidad de crecimiento a pH del medio de un pH bsico o acido, todo eso en la temperatura 28C. Conclusin ANOVA 5: Nuestro anlisis de varianza indica que son similares nuestros tratamientos a 28C por lo que el pH del medio y el medio de cultivo no son factores que causen diferencias significativas en el crecimiento de Trametes sp. ANOVA 6 Se realizo ANOVA a dos tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de Trametes sp a condiciones de: temperatura 37C.

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp Tabla 20.- Tratamientos a temperatura de 37C VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) PDA pH 8 YPD pH 3.5 0 0 0.01694586 0.01600745 0.03522983 0.03186111 0.04115424 0.04256572 0.04728294 0.04825678 0.05990989

PDA pH 3.5

0 0.02501464 0.03132095 0.03852815 0.05069032 0.05879842

Tabla 20.- ANOVA de los tratamientos a 37C.

Fuente de variacin Tratamientos Error Total Ho:Hi= Ha Regla de decisin Conclusin con respecto a F Suma de cuadrados 0.000108 0.006089 0.006197 Grados de libertad 2 14 16 Cuadrados medios 0.000054 0.000434929 Valor F 0.123999

PDA pH 3.5 = PDA pH8 = YPD pH 3.5 Son diferentes No rechazar si F experimenta </= 3.81 Rechazar si F experimental >3.81 Ya que el valor de F experimental es menor a F de tablas (3.81) teniendo un lmite de confianza del 95% es entonces que no hay diferencia entre los tratamientos.

Discusin ANOVA 6. El pH ha de ser ligeramente cido para facilitar el crecimiento de los hongos e inhibir al mismo tiempo el desarrollo de otros microorganismos.[20] Pero en nuestra anova observamos que no hay diferencias significativas entre medio y pH usando una misma temperatura de 37C. Asi Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 33

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp podemos observar que Trametes sp. Se adapta bien al pH de 3.5 y el de 8, adems que el cambio de cultivo no afecta considerablemente. Conclusiones ANOVA 6. La anova muestra que no hay diferencias significativas entre usar un pH de 3.5, pH del medio o usar pH 8 cuando se tiene una temperatura de 37C. y que tampoco el factor del medio afecta significativamente la velocidad de crecimiento de Trametes sp.

ANOVA 7 Se realizo ANOVA a los tratamientos para ver si tienen efecto en la velocidad de crecimiento de Trametes sp a condiciones de las variables: temperatura, pH, medio de cultivo.

Tabla 21. Medias con respecto a la velocidad de crecimiento en los Trametes sp VELOCIDAD DE CRECIMIENTO (mm/h) PDA 28C YPD 28C PDA, pH PDA, pH 8, YPD, pH PDA, pH 3.5, 28C 28C 3.5, 28C 3.5, 37C 0 0 0 0 0 0 0.022092 0.010822 0.0175889 0.0156910 0.0171058 0.0160074 09 88 4 6 8 5 0.030755 0.040426 0.0243748 0.0305962 0.0309882 0.0318611 66 49 7 1 4 1 0.035889 0.045945 0.0371242 0.0387262 0.0418117 0.0425657 62 81 9 6 2 0.038777 0.049959 0.0443214 0.0517344 0.0488705 0.0482567 47 86 1 2 9 8 0.054500 0.053472 0.0689975 0.0599098 24 15 3 9 0.056746 0.070531 35 86

tratamientos del hongo

PDA, pH 8, 37C 0 0.0169458 6 0.0352298 3 0.0411542 4 0.0472829 4

YPD, pH 3.5, 37C 0 0.0250146 4 0.0313209 5 0.0385281 5 0.0506903 2 0.0587984 2

Tabla 22. ANOVA 7 de todos los tratamientos. Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 34

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

Fuente de variacin Tratamientos Error Total

Suma de cuadrados

Grados de libertad

Cuadrados medios

Valor F

0.000648 0.018042 0.01869 Ho: Ha:

7 39 46

9.25714x10-5 0.000462615 0.200254

1=2=3 Todas son diferentes Si F experimental F tablas, no se rechaza la Ho Si F experimental >F tablas, se rechaza la Ho

Regla de decisin :

Conclusin con respecto a F experimental:

Se acepta la Ho porque en el anlisis estadstico tenemos que F experimental F tablas, no se rechaza la Ho, porque en la F experimental es de 0.200254 y F de tablas es de 2.25 en el anlisis estadstico se encuentra que en los medios YPD, PDA a los diferentes factores pH, temperatura y medios de cultivo son diferentes

significativamente.

Discusin En los tratamientos que analizan de acuerdo a las medias obtenidas y utilizando como variables al medio de cultivo, pH y temperatura para la determinacin de velocidad de crecimiento con respecto a los datos obtenidos en el hongo Trametes sp. Se realiza un anlisis de varianza en tratamientos (mostrados en la tabla 22). Y se tiene que (F experimental es de 0.200254 y F de tablas es de 2.25) Con respecto a los anlisis obtenidos se muestra que las variables (medio de cultivo YPD, PDA, pH, temperatura), que son las determinantes para el crecimiento con respecto al tiempo de incubacin son diferentes entre s porque se muestran que en los medios de cultivo YPD y PDA con respecto a una temperatura de 37C con un pH de 3.5 son similares a diferencia del resto de los tratamientos donde varia su velocidad de crecimiento demostrando que en su Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 35

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp anlisis de varianza el crecimiento del hongo Trametes sp es mas favorecedor con las condiciones optimas que ya se establecieron anteriormente en la (tabla 22). Los hongos crecen muy rpido en ocasiones va de 2 a 3 das y conforme van creciendo llegan a cubrir en las cajas petri donde se encuentran inoculados es cuando estos crecen, as se puede realizar la

determinacin de la velocidad de crecimiento, puede ser la medida ms til cuando se examina el cultivo del hongo pero es posible que tenga un valor limitado por que la velocidad de

crecimiento de ciertos hongos varan en funcin de la cantidad de medio de cultivo en donde se encuentran (PDA, YPD). En resultado, la velocidad de crecimiento de un hongo es importante pero debe utilizarse junto con otras caractersticas o registros en el monitoreo de su crecimiento que se realiza por el tiempo que se desee antes de realizar una identificacin definitiva, es por eso que el hongo Trametes sp. Se someter a diferentes tratamientos, para identificar como es el comportamiento en cada uno de ellos [14,21]. Conclusiones Al trabajar con los tratamientos realizados que fueron sometidos a un anlisis estadstico se concluye que el hongo Trametes sp tiene mayor efecto cuando se localiza a circunstancias de pH cido (3.5) con una temperatura de 37C en un medio de cultivo solido agar de dextrosa y papa (PDA). El agar de dextrosa y papa es un medio utilizado para el cultivo de hongos y levaduras a partir de muestras de alimentos, derivados de leche y productos cosmticos [22].

El agar de dextrosa y papa puede ser suplementado con antibiticos o cidos para inhibir el crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el recuento colonial. Tambin puede ser utilizado para promover el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clnica. La base del medio es altamente nutritiva y permite la esporulacin y la produccin de pigmentos en algunos dermatofitos. Algunas ocasiones es recomendable disminuir el pH del medio a 3.5 0.1 con cido tartrico al 10 %, para inhibir el crecimiento bacteriano. La infusin de papa promueve un crecimiento abundante de los hongos y levaduras y el medio de cultivo (PDA) agar de dextrosa y papa es adicionado como agente solidificarte. Una de las propiedades de los hongos del genero Trametes sp es la degradacin de la lignina para facilitar la digestin de la celulosa y entre las enzimas que emplean estos hongos para ese fin se encuentran las llamadas Universidad Politcnica de Pachuca Pgina 36

Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp lacasas; estas son glicoprotenas producidas por algunos hongos y bacterias, que catalizan la oxidacin de diferentes compuestos fenlicos. Son enzimas excepcionalmente verstiles, que pueden ser empleadas en diversos procesos industriales (bioblanqueo y depuracin de los efluentes de industrias papeleras, degradacin de compuestos fenlicos contaminantes, etc.). Porque tienen la capacidad de oxidar a la lignina por medio de la accin de diversos mediadores, porque bajo estas condiciones optimas dicho hongo tiene una mayor actividad y se estima que tiene un crecimiento prolongado en pocos das y es as como se puede utilizar para las perspectivas que se propongan en el uso del hongo filamentoso Trametes sp por tal motivo se menciona que con respecto a su pH es porque acta con su acidez o alcalinidad del medio que lo contiene y es como acta en donde se cuenta con poblaciones de microorganismo para que el hongo crezca en el medio de cultivo adecuadamente debe contar con algunas condiciones como son temperatura, pH, la humedad la presencia de O2 en este la concentracin de iones hidrgeno afecta directamente a los microorganismos que influyen en la disociacin y solubilidad de molculas que requiera de agente como pH es por eso que algunos microorganismos se han adaptado a las diferentes condiciones de alcalinidad y acidez, como Trametes sp que crece a pH cidos cada microorganismo tiene un rango de temperatura y pH en el cual pueden crecer, de tal manera que al modificarse estos factores se puede alterar la velocidad de crecimiento y en algunas ocasiones causar la muerte de los mismos, por lo que se puede utilizar como factores de control de crecimiento en el hongo Trametes sp para su disposicin de N2, P, Ca y Mg [16, 17,18]. PRUEBA TUKEY Y DMS Se realizo prueba Tukey y DMS [12] entre los tratamientos para observar que tratamientos eran similares y cuales tenan diferencias significativas. El anlisis se hizo a partir de las velocidades de crecimiento de cada caja de cada uno de los tratamientos. Se obtuvo la siguiente tabla:
Tabla 23.- Velocidades de crecimiento por caja para prueba Tukey y DMS. 28 C 37C PDA YPD PDA 3.5 PDA8 YPD 3.5 PDA 3.5 PDA 8 0.03253 361 0.03187 058 0.02691 1 0.02635 577 0.02769 353 0.02806 145 0.02245 971 0.02747 483 0.01885 6 0.02898 792 0.07511 355 0.08948 651 0.06017 018 0.05748 431

Unidad Experimental Caja 1 Caja 2

YPD 3.5 0.06038 261 0.05617 927

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

Caja 3 Caja 4 Caja 5 MEDIAS 0.02769 117 0.02956 433 0.02922 036 0.03017 601 0.02703 288 0.02737 883 0.03159 048 0.02785 379 0.02781 69 0.02749 378 0.02765 02 0.02774 317 0.02199 476 0.02923 532 0.02376 879 0.02498 668 0.03049 551 0.02564 017 0.02496 397 0.02578 872 0.07931 176 0.07208 807 0.06408 427 0.07601 683 0.06697 287 0.07090 462 0.07075 114 0.06525 662 0.06240 345 0.06162 206 0.06208 91 0.06053 53

A partir de los datos de la tabla 23 obtuvimos los valores tericos de comparacin para los tratamientos:
Tabla 24.- Datos tericos calculados para prueba Tukey y DMS nc= 28 R= 5 CME= 0.000021 T= 4.58 DMS= 2.037 T= 0.00938621 DMS= 0.00590379

A partir de los datos de la tabla 24 se genero la siguiente tabla de comparacin entre los tratamientos:
Tabla 25.- Tabla de comparacin con los mtodos Tukey y DMS de los tratamientos del experimento. Comparacin Diferencia TUKEY DMS X1-X2= 0.00232222 A A X1-X3= 0.00243284 A A X1-X4= 0.00518933 A A X1-X5= 0.0043873 A A X1-X6= 0.04584082 R R X1-X7= 0.03508061 R R X1-X8= 0.03035929 R R X2-X3= 0.00011062 A A X2-X3= 0.00286711 A A X2-X5= 0.00206508 A A X2-X6= 0.04816304 R A X2-X7= 0.03740283 R R

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X2-X8= 0.03268151 R X3-X4= 0.00275649 A X3-X5= 0.00195446 A X3-X6= 0.04827366 R X3-X7= 0.03751345 R X3-X8= 0.03279213 R X4-X5= 0.00080203 A X4-X6= 0.05103015 R X4-X7= 0.04026994 R X4-X8= 0.03554861 R X5-X6= 0.05022812 R X5-X7= 0.03946791 R X5-X8= 0.03474658 R X6-X7= 0.01076021 R X6-X8= 0.01548153 R X7-X8= 0.00472133 A *A= comparacin aceptada por el mtodo. R=comparacin rechazada por el mtodo. R A A R R R A R R R R R R R R A

ANALISIS FACTORIAL. Se realizo anlisis factoriales comparando lo siguiente:

Tabla 26. Velocidades de crecimiento por placa de cada tratamiento par anlisis factorial con factor A (pH) y factor B (temperatura). FACTOR A (Ph 3.5) PDA 3.5 YPD 3.5 0.02769353 0.018856 0.02806145 0.02898792 0.0278169 0.03049551 0.02749378 0.02564017 0.0276502 0.02496397 MEDIAS 0.02774317 0.02578872 PDA 3.5 YPD 3.5 0.07511355 0.06038261 0.08948651 0.05617927 0.07931176 0.06240345 0.07208807 0.06162206 0.06408427 0.0620891 MEDIAS 0.07601683 0.0605353

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FACTOR B (T 28C) FACTOR B (T 37C)

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Figura 9. Grafico del anlisis factorial de pH y Temperatura.

Analisis Factorial
0.08
0.07 0.06 0.05 MEDIAS 0.04 0.03 0.02 0.01 0 1 FACTOR A 2 FACTOR B (37C) FACTOR B (28C)

Tabla 27.- Velocidades de crecimiento por placa de cada tratamiento par anlisis factorial con factor A (pH) y factor B (temperatura) FACTOR A PH YPD PDA 3.5 PDA8 YPD 3.5 PDA 0.026911 0.02769353 0.02245971 0.018856 0.03253361 0.02635577 0.02806145 0.02747483 0.02898792 0.03187058 0.02703288 0.0278169 0.02199476 0.03049551 0.02769117 0.02737883 0.02749378 0.02923532 0.02564017 0.02956433 0.03159048 0.0276502 0.02376879 0.02496397 0.02922036 MEDIAS 0.02785379 0.02774317 0.02498668 0.02578872 0.03017601 PDA 3.5 PDA 8 YPD 3.5 0.07511355 0.06017018 0.06038261

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FACTOR B (T 28C)

37C) R B (T FACTO

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Determinacin de la velocidad de crecimiento de Trametes sp

0.08948651 0.07931176 0.07208807 0.06408427 0.07601683 0.05748431 0.06697287 0.07090462 0.07075114 0.06525662 0.05617927 0.06240345 0.06162206 0.0620891 0.0605353

MEDIAS

Figura 11. Grafico del anlisis factorial de la tabla 27

Analisis Factorial
0.08 0.07 0.06 MEDIAS 0.05 0.04 0.03 0.02 0.01 0 1 2 3 FACTOR A 4 5 FACTOR B (28C) FACTOR B (37C)

Conclusin del anlisis factorial. A partir del anlisis factorial podemos ver que los tratamientos a 28C y 37C son diferentes. PERSAPECTIVAS Es as como con el estudio de dichos hongos si se establece las condiciones de crecimiento es posible tener una relacin de que nos indique cuales son los niveles de produccin de enzimas producidas por el hongo Trametes sp. De acuerdo al estudio que se ha realizado a los hongos filamentosos y estos por lo normal son degradadores de la madera Trametes sp es capaz de degradar la lignina y se puede emplear para el uso de fabricas textiles para la pigmentacin del algodn, hilo, telas para el desarrollo de prendas de vestir o colores verstiles empleados en las pinturas textiles utilizadas en la comunidad para el arte de pintar la ropa en el hogar o lugares de manejo industrial.

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