PRÁCTICA DE LABORATORIO No.

MICROSCOPÍA

Realizar en orden y de forma detallada cada uno de los procedimientos marcados

desde el No. 1 hasta el No. 3. Conteste las preguntas que aparecen al final de los
procedimientos, siempre y cuando no requieran de la parte experimental.

TEMAS REVISAR

1. Diferentes tipos de microscopia óptica y sus ventajas

2. Fundamentos teóricos tanto de la teoría óptica como los fundamentos físicos de la óptica
aplicada a la microscopía.
3. El funcionamento del microscopio y conocimiento de sus partes.

OBJETIVOS:

 Señalar los componentes mecánicos y ópticos que constituyen el microscopio.

 Realizar montajes húmedos
 Determinar las propiedades que posee el microscopio.
 Realizar correctamente el manejo del microscopio óptico
 Calcular el diámetro del campo de visión
 Conocer los principios en que se basa la microscopía óptica.
 Desarrollar en trabajo colaborativo el informe de laboratorio

Aspectos a tener en cuenta

 Organice su sitio de trabajo para trabajar de forma rápida y eficiente.

 Lea cuidadosamente las instrucciones de la guía práctica
 Revise permanentemente durante la práctica su guía sobre Fundamentación Teórica sobre
Técnicas Microscópicas

Trabajo previo para realizar en casa

Llene los espacios donde aparecen las partes del microscopio y conteste las preguntas

i.1 En la siguiente representación gráfica de un microscopio, reconozca y ubique cada una de las siguientes
partes y su función

Tubo
Oculares
Brazo
Objetivos de 4x, 10x, 40x y 100x
 Platinappp
Condensador
Fuente de iluminación
Tornillo macrométrico y micrométrico
Pie
Ocular

Cabezal

Portaobjetos
brazo
Objetivo
Tornillo carro movil

Tornillo macrometrico platina

Tornillo micrometrico
diafragma
Tornillo condensado
condensador r
base

i.2 Clasifique en el cuadro las partes mecánicas y ópticas del microscopio.

Partes mecánicas Partes ópticas
Pie Objetivo
Vástago Ocular
Tornillo de ajuste Condensador
Tubo Fuente de luz
Platina
Subplatina

i3. ¿Con qué elementos del microscopio se hace la aproximación de una muestra para su enfoque?

Tornillo macrométrico

i4. ¿Cuáles la función de la platina?

Permite el paso de luz y un vernier que posibilita la relocalización de los detalles de interés

i5. ¿Cuál es la función del lente condensador?

Concentra la luz generada por la fuente de la iluminación hacia la preparación

i6. ¿Cuál es el mayor aumento que puede alcanzar un microscopio de luz en el cual se encuentra lentes

objetivo de 4X, 10X, 40X y1000X y lentes oculares de 10X o 12,5X?

i7. ¿Qué significa el valor de apertura numérica?

Relaciona el ángulo de apertura de los rayos de luz, que provienen de la muestra con el índice de refracción

i.8 ¿Qué función cumple el aceite de inmersión? ¿Con qué objetivo se utiliza?

Es utilizado en las observaciones microscópicas, ya que brinda la propiedad de concentrar la luz cuando esta

pasa a través del objetivo de 100X del microscopio, aumentando su poder de resolución.

i9. ¿Qué es índice de refracción?

El índice de refracción (n) de un medio se define como el valor de la velocidad de la luz en el vacío (c) dividido

entre la velocidad de transmisión de la luz en ese medio (V).

n = c / Vmedio

Por tanto, cuanto mayor sea el índice de refracción de un medio menor será la velocidad de la luz al atravesarlo.

i10. ¿Qué es distancia focal?

: es la distancia de la lente frontal al preparado colocada en la platina, cuando está enfocado.

Disminuye cuando aumenta la escala de reproducción del objetivo

i11. ¿Qué es distancia de trabajo?

es el espacio que existe entre la superficie de la lente del objetivo y la laminilla, una vez se encuentre enfocada

la preparación. A mayor aumento del objetivo la distancia de trabajo disminuye.

PARTE PRÁCTICA PARA REALIZAR EN LABORATORIO

PROCEDIMIENTO No. 1

Comprobación de los principios ópticos del microscopio

Observación de una letra asimétrica obtenida de un texto de periódico

Después de observar la letra asimétrica, Conteste las siguientes preguntas:

1.1. ¿Qué es un montaje húmedo? ¿Habría alguna diferencia en la imagen si se hiciera en seco?
 Son montajes generalmente húmedos. La muestra se observa sin modificar, diluida o concentrada. Permite

observar la movilidad de los microorganismos vivos. Se utiliza también para observar

procesos como la mitosis, meiosis, la formación de esporas.

1.2. ¿Qué debe hacerse para lograr una iluminación adecuada?

1.3. ¿Cómo se enfoca el microscopio al iniciar la observación?

Con el lente objetivo de menor aumento y se va aumentando (4x)

1.4. ¿Con qué objetivo se logra un campo de visión más grande?

1.5. ¿Con qué objetivo se observan mejor los detalles de una imagen?

Con el objetivo de 40x se ven mejor los detalles pero ya no se pueden ver los bordes de la letra a simple

vista

1.6. ¿Con el objetivo de mayor aumento se necesita menor o mayor iluminación de la que se necesita con el de

menor aumento?

1.7. ¿Cuál es el poder de aumento cuando se estén utilizando cada uno de los objetivos de 4X, 10X, 40X y el

ocular de 10X?

4X:40X: 100:1000X 40X:400X ocular 10x:100X

1.8. ¿Al observar la letra asimétrica: ¿Se ve invertida, o en la misma posición en que estaría si se viera a simple

vista? ¿Parece como si se viera por un espejo?

En el objetivo de 10x la letra “a” se ve invertida

1.9. Al mover la preparación hacia la derecha. ¿Hacia dónde se mueve la imagen?

1.10. ¿Al alejar (en sentido horizontal) el portaobjeto o la muestra de usted, hacia donde se mueve la imagen?
1.11. ¿Si la distancia focal es mayor el tamaño del objeto es mayor o menor?

Comprobación de los poderes o capacidades del microscopio óptico

1.12. Defina los siguientes poderes o capacidades del microscopio

a. Poder de Aumento
b. Poder de Definición
c. Poder de Resolución
d. Poder de Penetración de Foco o Campo

1.13. Calcule el aumento del tamaño del objeto observado para cada objetivo del microscopio con el cual le
correspondió trabajar.

1.14. ¿Cómo se manifiesta el poder de aumento al observar la letra?

PROCEDIMIENTO No. 2
Realice un montaje húmedo con un centímetro cuadrado de papel milimetrado y obsérvelo al microscopio

2.1 Calcule el diámetro del campo de visión para un aumento de 4x en un cuadrado de 1 cm de lado de papel
milimetrado.

Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que seguir los siguientes
pasos:

a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.

b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos

c) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la línea 0 mm quede en
el borde izquierdo del campo visual
d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la preparación quiere
decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observación nítida. Esta distancia se conoce como
distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo

e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel milimetrado con el borde del campo de
visión.

f) Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos líneas es un milímetro) y
estimar aproximadamente la fracción sobrante, si la hay. El resultado será el diámetro del campo visual para
ese aumento (objetivo x ocular).

g) Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores, hay que tener en cuenta que
cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es decir, se verá menos de la muestra que estemos
observando. De forma que, si el aumento es el doble, el campo será la mitad, si el aumento es el triple, el
diámetro será la tercera parte, etc. (inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar un sencillo
cálculo matemático para saber el nuevo diámetro.

Así se puede calcular los diámetros de objetos microscópicos, células, amibas, vistos.

2.2 Calcule el diámetro del campo de visión para aumentos de 10X, 40X del mismo cuadrado de 1 cm de lado
de papel milimetrado.

2.3 Compare la anchura del campo visual con cada uno de los tres objetivos
2.4 ¿Con cuál objetivo el campo de visión es mayor, con el de mayor o menor aumento?

Con el de menor aumento

PROCEDIMIENTO No. 3

3.1 Observe un pelo y realice el diagrama de menor) y mayor aumento (4x, 10X y 40x. Para cada uno haga la
descripción respectiva.

3,2 Realice un montaje seco con cristales de sal y elabore los diagramas respectivos para los objetivos de 4x,
10x y 40x.

3.3 Realice un montaje con los granos de polen de la flor que tienen a su disposición.

Material bibliográfico de referencia obtenido de: GUIAS PARA PRÁCTICAS DE

BIOLOGÍA GENERAL. YURBY SALAZAR NÚÑEZ, Tutora José Acevedo y Gómez
Complementación: BIBIANA ÁVILA GARCÍA, Tutora Cead Barranquilla CARMEN
EUGENIA PIÑA, Docente - Directora de curso

RECOMENDACIONES (leerlas detenidamente)

1. De la colocación de la muestra

a. La muestra se debe colocar sobre la lámina portaobjetos teniendo cuidado de evitar el

exceso de agua o fluidos, que al cubrirla con el cubreobjetos, puedan escurrirse sobre la
platina y no permita el movimiento libre del carro ya que se pega la muestra a esta
dificultando su desplazamiento.

b. La muestra no debe excederse en fluidos que puedan quedar en contacto con los lentes
de los objetivos ya que la visión se torna opaca y nos posible realizar una buena
observación. Este fenómeno sucede generalmente en los objetivos de mayor aumento (40x y
100x). Por eso revise que no se moje cuando pase a observar la muestra en dichos
aumentos.

2. De la limpieza de los lentes

Limpie los lentes con el líquido suministrado por las auxiliares utilizando para ello un pedazo
de gasa y evitar darle movimientos en diferentes direcciones porque se rayan. Déjelos secar
antes de realizar la observación.

3. Del enfoque
No olvidar que siempre que se realice un enfoque debe tenerse en cuenta que hay que
comenzar por los objetivos de menor aumento y pasar gradualmente hasta el siguiente una
vez haya logrado enfocar en el anterior.

4. Del informe

Entregar a las auxiliares o monitores los pre-informes de cada grupo de estudiantes y las
prácticas diligenciadas y deben firmar sobre la lista del grupo correspondiente.