GUÍAS DE

LABORATORIO
BIOLOGÍA GENERAL

Docente: Diana María Sánchez Santos

 LABORATORIO 1. Conocimientos básicos del microscopio y mediciones
microscópicas

PREINFORME

Los estudiantes deben realizar un diagrama de flujo del procedimiento

correspondiente a los tópicos expuestos en la guía de laboratorio.

MARCO CONCEPTUAL

El microscopio es un instrumento óptico básico en el estudio de la biología, el cual

permite mediante un conjunto de lentes aumentar el tamaño de los objetos bajo
estudio, demasiado pequeños para ser estudiados a simple vista. Existen distintos
tipos de microscopios, cada uno de ellos con un propósito particular, para nuestro
caso daremos uso del microscopio compuesto.

Dos principios están involucrados en el uso del microscopio: magnificación, la

capacidad de aumentar el tamaño de una imagen, y resolución, la capacidad de
producir una imagen nítida, la propiedad más importante de un microscopio es la
resolución pues el solo aumento de una imagen de una muestra no sirve de nada si
la imagen es borrosa (Lodish, et al., 2019).

Según Burbano, et al. (2017) el microscopio compuesto consta de tres sistemas:

1. Sistema mecánico: son todas las partes que sirven de soporte al microscopio:
brazo, pie o soporte, carro o platina, pinzas de sujeción, revólver, tornillos
micrométricos y macrométrico de enfoque.

2. Sistema de iluminación: fuentes de luz, condensador y espejo.

3. Sistema óptico: está constituido por oculares y objetivos; los oculares son dos, y
tienen generalmente un valor de 10X cada uno, y los objetivos son 4 de diferente
aumento (4X, 10X, 40x y 100X).

Para saber el tamaño de las muestras que observamos al microscopio debemos

de multiplicar el valor del ocular (10X) por el número del objetivo (4X, 10X, 40X
0 100X) que se esté usando.

Según Karp (2009) estos tres sistemas trabajan en conjunto para generar la imagen
que se observa de la siguiente manera:

− Una fuente de luz, que puede ser externa al microscopio o estar incluida en su
base, ilumina la muestra.
− La lente condensadora reúne los rayos difusos de la fuente de luz e ilumina el
espécimen con un pequeño cono de luz brillante que permite ver las partes muy
pequeñas del espécimen después de la magnificación.
− Los rayos de luz enfocados en la muestra por la lente condensadora se reciben
en la lente del objetivo del microscopio.
− La lente ocular, emplea la imagen formada por la lente del objetivo como objeto
para formar una imagen virtual y aumentada.
− Los lentes localizados en la parte frontal del ojo utilizan la imagen virtual
producida por la lente ocular como objetivo para producir una imagen real en la
retina.

Se deben considerar dos conjuntos de rayos lumínicos que entran a la lente del
objetivo: la luz proveniente del condensador que pasa en forma directa a la lente
del objetivo, y constituye la luz de fondo del campo visual, y la que es desviada al
encontrarse con la muestra. La lente del objetivo enfoca estos rayos de luz para
formar una imagen real y magnificada del objeto dentro de la columna del
microscopio (Karp, 2009).

Cuando el tornillo de enfoque del microscopio de luz se gira, la distancia relativa

entre la muestra y la lente del objetivo cambia, lo que permite que la imagen final
se enfoque con exactitud en el plano de la retina. La magnificación total obtenida
por el microscopio es el producto de las magnificaciones logradas por la lente del
objetivo y la lente del ocular (Karp, 2009).

Las unidades de medición microscópicas en biología son usadas para estimar el

tamaño de las células y sus estructuras al ser observadas al microscopio. A
continuación, se presentan los valores y conversiones de las unidades del sistema
métrico decimal usualmente utilizadas en observaciones microscópicas:

Unidad Símbolo Valor (mm) Valor (µm) Valor (nm)

Milímetro Mm 1 1000 1000000
Micrómetro µm 0.001 1 1000
Nanómetro Nm 0.000001 0.001 1

A través de las experiencias que se realicen en esta práctica los estudiantes

identificaran las partes y propiedades del microscopio, demás, de estimar la
superficie del campo visual de los diferentes aumentos y el tamaño de las células.

OBJETIVO GENERAL

Adquirir habilidad en el uso y manejo del microscopio óptico compuesto.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
− Identificar las partes del microscopio óptico compuesto y reconocer sus
funciones.
− Identificar las propiedades del microscopio óptico compuesto.
− Estimar las variaciones de la superficie del campo visual para los diferentes
objetivos (aumentos) del microscopio óptico compuesto.
− Estimar el tamaño de las células al observarlas en el microscópico óptico
compuesto.

MATERIALES Y EQUIPOS

Laboratorio:
− Microscopio óptico compuesto
− Portaobjetos y cubreobjetos
− Aceite de inmersión
− Micropipetas o pipetas Pasteur
− Escalpelos o bisturís
− Pinzas
− Vasos de precipitado
− Frasco lavador con agua destilada
− Cubeta de tinción
− Colorante azul de metileno

Estudiantes:
− Imagen impresa con las partes del microscopio compuesto
− Tijeras
− Papel milimetrado
− Papel impreso con letras
− Hebras de cabello
− Cebolla

PROCEDIMIENTO

PROCEDIMIENTO 1. Identificación de las partes del microscopio

De acuerdo con la imagen impresas del microscopio compuesto traída por cada
grupo de trabajo identifique sus partes a partir de los equipos asignados.

PROCEDIMIENTO 2. Análisis de la imagen dada por el microscopio

Según lo descrito por López (2017), se deben seguir los siguientes pasos:

1. Del papel impreso recorte la letra “A” más pequeña que encuentre, colóquela en
un portaobjeto limpio y agréguele dos gotas de agua, esto se llama montaje
húmedo. Espere a que el papel se moje totalmente.
Tome un cubreobjeto y ubíquelo sobre el portaobjeto en un ángulo de 45º, déjelo
caer suavemente sobre la muestra de manera que el agua quede distribuida
uniformemente. Realice una ligera presión sobre el cubreobjeto con el borrador de
un lápiz o algún material del estuche asignado (no use sus dedos para presionar)
para eliminar las burbujas de aire que pudieran haber quedado.

Coloque la lámina preparada sobre la platina de tal manera que la letra quede en
posición derecha de lectura y sujétela con las pinzas de ajuste.

Enfoque con el objetivo de menor aumento (4X). Teniendo en cuenta el sentido con
que usted colocó la letra para ser observada, describa como ve su imagen a través
del microscopio.

2. Mueva la platina hacia adelante ¿qué parece sucederle a la letra que usted
observa? Mueva la platina hacia la derecha, ¿En qué dirección se desplaza la imagen?

¿Qué puede deducir usted acerca de la posición relativa y del movimiento de los
objetos cuando éstos se ven a través del microscopio compuesto?

PROCEDIMIENTO 3. Profundidad del campo visual

Haga un montaje húmedo de dos hebras de cabello, dispuestas una sobre otra (en
forma de cruz).

Observe con el objetivo de menor aumento (4X) y dibuje. Ubique el portaobjeto de

manera que el cruzamiento de los cabellos quede en el centro del campo visual.

Agregue una gota de aceite de inmersión sobre el cubreobjetos, justo en punto de

intersección de las dos hebras de cabello, y gire el revólver hasta que el objetivo de
mayor aumento (100X) quede en posición de enfoque, si los cabellos no quedan
nítidamente enfocados, ajuste el enfoque con el tornillo micrométrico. ¿Puede usted
ver nítidamente ambos cabellos en el mismo nivel de enfoque?

PROCEDIMIENTO 4. Variación de la superficie del campo visual

Según lo adaptado de Burbano, et al. (2017) se deben seguir los siguientes pasos:

− Recorte un pedacito de papel milimetrado de 1 cm2y colóquelo sobre un

porta- objeto. Agregue una gota de agua y luego coloque el cubreobjeto.
− Enfoque con el objetivo de menor aumento (4X) y viendo las marcas de los
milimétricos determine el diámetro del campo visual. Ver figura 1.
 Figura 1. Diámetro del Campo Visual.

Sabiendo que la superficie del círculo del campo visual (S) es igual a Πr2, donde Π=
3.14 y r= ½ d. Calcule el valor de esta superficie para el objetivo de menor aumento.

Enfoque con el objetivo de mediano aumento (10X) y siguiendo el procedimiento

anterior calcule, para este objetivo, el diámetro y la superficie del círculo del campo
visual.

¿Cómo varía la superficie del campo visual cuando se pasa de un objetivo de menor
aumento a enfocar con otro de aumento mayor?

Sabiendo que el diámetro del campo visual es inversamente proporcional al poder

de aumento de los objetivos, se puede determinar el diámetro correspondiente a
los objetivos de mayor aumento mediante la siguiente fórmula:

(a1/ a2) = (d2/ d1); donde:

a1= Número de aumento del objetivo de menor aumento

a2= Número de aumento del objetivo de mayor aumento
d1= Diámetro del campo observado con menor aumento
d2= Diámetro del campo observado con mayor aumento

Calcule el diámetro y la superficie del círculo del campo visual para los objetivos de
40X y 100X de su microscopio.

Compare este valor con los anteriores obtenidos y saque conclusiones.

PROCEDIMIENTO 5. Observación de células epidérmicas de cebolla:

− Separar una de las hojas interna de la cebolla y desprender la tenue membrana

que está adherida por su cara inferior cóncava.
− Depositar el fragmento de membrana en un portaobjeto con unas gotas del
colorante azul de metileno. Si es preciso, estirar el trozo de epidermis.
− Dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente.
− Con una pipeta Pasteur bañar la epidermis con agua abundante hasta que no
suelte colorante.
− Colocar sobre la preparación un cubreobjetos evitando que se formen burbujas
y llevarla al microscopio.
− Observa la preparación en el aumento de 40X. Identifique la pared celular y los
núcleos de la célula.

Teniendo en cuenta los cálculos obtenidos para la superficie del campo visual realice
lo siguiente:
− Calcule cuantas células se observan longitudinalmente en el objetivo de 10X.
− Calcule cuantas células se observan verticalmente en el objetivo de 10X.
− Calcule la longitud y la altura de cada célula.
− Calcule el área de cada célula y determine cuántas caben en el área del campo
visual (asuma que la célula tiene una forma rectangular).

Teniendo en cuenta los diámetros de las siguientes células, calcule cuantas caben
en el campo visual (10X) de su microscopio:

− Glóbulo rojo: 6 μm
− Ameba: 800 μm
− Espermatozoide: 50 μm

Asuma que la célula tiene una forma circular.

BIBLIOGRAFIA

Burbano Rosero, E. M. et al. (2017). Manual de laboratorio de biología celular.

Editorial Universitaria- Universidad de Nariño.

Karp, G. (2009). Biología celular y molecular: conceptos y experimentos (quinta

edición). Editorial McGraw-Hill. 776 p.

Lodish, H., et al. (2019). Biología celular y molecular (séptima edición). Editorial
médica panamericana. 1220 p.

López Cobá, E. H. (2017). Manual de biología celular. Editorial Universitaria-

tecnológico nacional de México.