UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS

BIOQUÍMICA
TALLER:# __7__. SEPARACIÓN DE PROTEÍNAS y PUNTO ISOELÉCTRICO
DOCENTE: Adis Ayala Fajardo
50 PUNTOS. GRUPO #7

1 _ JAVIER ANDRES CUADRADO TRUJILLO ___ CÓDIGO ___20152150074__

2 ___LAURA JULIANA RAMON JARA _________ CÓDIGO ___20161150040__

3 ___BRENDA CAMACHO DÍAZ _____________ CÓDIGO ___20161150075__

4 ___HAMILTON RAMIREZ ZAPATA_________ CÓDIGO ___20151150012__

Realizar los ejercicios planteados en estricto orden en el formato Word dado, una vez resuelto
escanear y subir el ejercicio en formato PDF. No utilizar más hojas de las dadas y no cambiar la
orientación de las hojas.

A. Se envía una mezcla de proteínas desconocidas y al ser separadas en una electroforesis SDS-
PAGE al 10 % estas migran a una distancia de 2.7 cm, 4.6 cm, 6.6 cm, 8.1 cm y 8.8 cm a
partir del punto de siembra (parte superior); se utilizó un patrón de proteínas comercial de amplio
rango que poseía las siguientes masas moleculares en Daltons: 205.000, 116.000, 97.000, 84.000,
66.000, 55.000, 45.000 y 36.000, estas migraron respectivamente una distancia de:
Patrón Distancia
proteínas migrada en
MW cm
205.000 1.9
116.000 3.8
97.000 4.2
84.000 4.5
66.000 5.9
55.000 7.2
45.000 8.1
36.000 9.2
B.
1) Realice la regresión lineal y calcule a ; b y r (5)

Distancia
migrada en Log Mr
cm
X Y

1 1,9 5,311753861

2 3,8 5,064457989

3 4,2 4,986771734

4 4,5 4,924279286

5 5,9 4,819543936 A= 5,3207

6 7,2 4,740362689 B= -0,0975

7 8,1 4,653212514 R2=0,966

8 9,1 4,556302501
2) Grafique la curva de calibración en papel milimetrado e interpole las proteínas problemas con
color rojo.(5)

3) Calcule el peso molecular en Daltons de las proteínas desconocidas.(5)

Distancia
migrada en
cm Dalton
X

Desconocidas 1 2.7 112201,1885

Desconocidas 2 4.6 74507,50146

Desconocidas 3 6.6 47555,41763

Desconocidas 4 8.1 33958,6174

Desconocidas 5 8.8 29020,17319

4) Si usted tiene lactato deshidrogenasa y se corre en electroforesis con estos patrones de proteínas
a qué distancia debería(n) migrar en esta electroforesis ____1.79cm_______(5)
Mr LDH: 140.000
LogMr: 5.146
𝑦−𝑎 5.146−5.3207
𝑥= 𝑥= = 1.79 cm
𝑏 −0.0975

5) Elabore un gráfico que describa cómo se visualizarían la separación de las distintas bandas en
el gel vertical SDS- PAGE al 12 %,a un pH 8.8. para: el marcador de peso de proteínas,
proteínas desconocidas; lactato deshidrogenasa (LDH). Indique también la distancia en cm de la
banda e identifique el cátodo y el ánodo en los recuadros dados. (tenga presente que la parte
superior es el origen o punto de siembra).(10)
CATODO

Cm marcador de desconocidas LDH

proteína

1.79-------

1,9 205.000

2.7 --------

3.8 116.000

4.2 97.000

4.5 84.000

4.6--------

5.9 66.000

6.6---------

7.2 55.000

8.1 45.000 8.1------

8.8------

9.2 36.000
ANODO
6) Si se realiza una cromatografía de exclusión molecular con Shephadex G 100 para las
proteínas desconocidas descritas en el numeral A (3 9 ¿Cuál sería el orden de elusión en
relación a la primera proteína que se eluye y la última que sale. Dibuje la columna con las
proteínas en color para ayudarse en que fracción salen. (5).

Elusión Dalton
1
112201,1885

5
29020,17319

7) Se tiene una columna de intercambio aniónica , que se utiliza con un gradiente de pH 2 → 14

para separar la mezcla de péptidos A,B,C,D prediga el pH en el cual se encuentran unidos,
como también el pH y el orden de elusión columna:
___A______;______C_____;___D______;__B_____ (5) (LETRAS)

Kda P.I pH en que pH de

se Elusión y
encuentran carga del
unidos péptido
peptido la (+ )
columna
A 80 4.7 5.2 4.2
B 260 7.2 7.7 6.7
C 145 5.0 5.5 4.5
 D 350 6.4 6.9 5.9

8) Con relación al numeral anterior indique el orden de separación de los péptidos en los tubos si
realiza isoelectroenfoque, si se utiliza un gradiente pH de 9 → 2 con anfolitos.
_____B______; ____D______; ____C___ ; ____A______(5) (LETRAS)

9) Se tiene una mezcla de aminoácidos A,R,H,S,F,C,T,E,Y,K,Q,V que se somete a una

cromatografía de intercambio catiónica ayudándose del concepto de punto isoeléctrico (y tabla P.I)
y de cómo se cargan los aminoácidos, determine cuál es el orden de elusión o salida de cada
aminoácido si esta mezcla se somete a un gradiente de pH de 1 → 14 . Coloque el código de una
letra en la escala del pH y procese la tabla. (10)

1 2 3 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

aa. P.I p.H en el cual

Código sale de la
de una columna y
letra carga (- ) aa
A 6.01 6.51
R 10.76 11.26
H 7.59 8.09
S 5.68 6.18
F 5.48 5.98
C 5.07 5.57
T 5.87 6.37
E 3.22 3.72
Y 5.66 6.16
K 9.74 10.24
Q 5.65 6.15
V 5.97 6.47
Orden de aa.
elución Código
de una
letra
1 E
2 C
3 F
4 Q
5 Y
6 S
7 T
8 V
9 A
10 H
11 K
12 R