Biología Molecular

"Identificación de las estructuras proteínas y función, Purificación de Ácidos

Nucleicos, Fraccionamiento de ácidos nucleicos, Síntesis química de DNA,
Hibridación de ácidos nucleicos"
Estructuras de las proteínas

ESTRUCTURA PRIMARIA

• Secuencia de varios aminoácidos

unidos por enlaces covalentes
peptídicos.
• Los enlaces peptídicos forman el
esqueleto de la proteína, del que
emergen las cadenas laterales de los
aminoácidos (Cardenas, 2017).
Estructura Secundaria

• Plegamiento que la cadena

polipeptídica adopta gracias a la
formación de puentes de hidrógeno
entre los átomos que forman el enlace
peptídico.
• Los puentes de hidrógeno se establecen
entre los grupos -CO- y -NH- del enlace
peptídico (Fernandez, 2004).
Hélice alfa (α)

• En esta cadena adopta una estructura

helicoidal, que se mantiene mediante
puentes de hidrógeno, con los grupos
R orientados hacia el exterior.
• Esta estructura es muy estable porque
da lugar a un máximo número de
interacciones.
Hojas beta plegadas

• Cuando la cadena principal de un

polipéptido se estira al máximo que
permiten sus enlaces covalentes se
adopta una configuración espacial
denominada estructura β.
• Hojas plisadas el esqueleto de la
cadena polipeptídica se extiende en
forma de zig-zag.
• Las cadenas de los polipéptidos
adyacentes pueden ser paralelas o
antiparalelas (Victoria & Guillen, )
 Estructura Terciaria

La estructura terciaria se genera del

plegamiento de si misma de la
estructura secundaria. Esta
estructura es la encargada en la
función de la proteína por lo cual si
existe algún cambio en esta
estructura existirá un cambio en la
actividad Biológica (Victoria &
Guillen, 2015).
Tipos de enlaces de la estructura terciaria

• Puentes disulfuro.
• Fuerzas electrostáticas.
• Puentes de hidrógeno.
• Fuerzas de Van der Waals
e interacciones
hidrofóbicas.
 • Esta estructura tiene como función de unir
Estructura por medio de enlaces débiles o no
Cuaternaria covalentes con lo cual con lleva a formar
un complejo proteico.
 • Función Estructural
Función • Función Enzimática
de las • Función Hormonal
• Función Reguladora
proteínas
Purificación de ácidos nucleicos

• La purificación es la separación de
los ácidos nucleicos del resto de
componentes celulares, pues se basa
en las características fisicoquímicas
de la molécula.
• El ADN está constituido por dos
cadenas de nucleótidos unidas entre
sí formando una doble hélice. Los
nucleótidos están integrados por un
azúcar (desoxirribosa), un grupo
fosfato y una base nitrogenada.
(Tammelleo, 1995)
Purificación de ácidos nucleicos
• Separación de ADN
• De proteínas solubles
• Otros ADN no deseados
• Lípidos, carbohidratos
• Sales y otros compuestos
orgánicos
En los años 50, se desarrollaron metodologías tradicionales con el uso de solventes
orgánicos para separar las proteínas del ADN.
Los protocolos tradicionales consisten de cuatro etapas principales:

(CÁRDENAS, 2017)
Métodos de
purificación
• Los métodos empleados para
purificación de ADN de extractos
celulares suelen ser combinaciones
de dos o más técnicas como las
siguientes:

(Burgot, 2020)
 • MÉTODO DE • MÉTODO DE LA
SÍNTESIS DESDOBLAMIENTO FOSFORAMIDITA
QUÍMICO
QUÍMICA Las hebras de ADN se
En este mètodo cada una de
las bases nnitrogenas se
DEL DNA desdoblan mediante la
utilización de sustancias
emarejan con los derivados
de las fosformiditas para
químicas, este método se basa proteger cada grupo
en cuatro procesos. participante. Este metodo se
cumple en 3 ciclos.
 SÍNTESIS
QUÍMICA DEL
ADN
Se conoce que la síntesis de ADN
es la creación o elaboración de
ADN a partir de la unión de
nucleótidos que a su vez están
unidos mediante enlaces covalente
y puentes de
hidrógeno. (Gallardo, C. & Van
Wely, K.(2019)
Método de desdoblamiento químico

(Ortiz, 2018)
 Marcaje con Fósforo 32
• Generar extremos 5`
sobresalientes.
• Retiro del grupo
Fosfato.
• Marcaje de la hebra con
Fósforo 32.
• Desnaturalización de la
cadena bicatenaria.
(Ortiz, 2018)
Escisión química controlada
Cortes de bases nitrogenadas específicas.

Escisión de
Guanina

Escisión de Escisión de
Citosina Adenina

Escisión de
Timina
Corte G Corte C + T

Corte A + G Corte C

(Ortiz, 2018)
Comprobación por electroforesis

(Ortiz, 2018)
 METODO DE
FOSFORAMIDITA

Destritilacion

(Espariz,M.2018)
 METODO DE
FOSFORAMIDITA

Activación y
acoplamiento

(Espariz,M.2018)
 Oxidación

METODO DE
FOSFORAMIDITA

(Espariz,M.2018)
Fraccionamiento
de Ácidos
El fraccionamiento o fragmentación de una
nucleicos muestra de ADN genómico puede llevarse a
cabo por métodos químicos(Karp, 2006).
Características
• Diferir entre sí en tamaño global(Karp,
de los Ácidos 2006).
Nucleicos • Composición de bases(Karp, 2006).
• Topología(Karp, 2006).
• Secuencia de los nucleótidos(Karp, 2006).
 La rapidez con que una molécula dada se mueve en respuesta a la fuerza
Sedimentación por centrífuga.

velocidad Las moléculas de ácido nucleico se separan según la longitud del Nucleótido.
A mayor coeficiente de sedimentación, más lejos se mueve la molécula en un
periodo determinado de centrifugación (Karp, 2010).

(Karp, 2006).
Centrifugación de equilibrio
Las moléculas de ácido nucleico se separan según su
densidad de flotación.
El análisis se inicia con la mezcla del DNA con la
solución de cloruro de cesio o sulfato de cesio en el
tubo de la centrífuga para luego someter el tubo a
centrifugación prolongada.
Las moléculas individuales de DNA se impulsan hacia
abajo o se mueven por flotación hacia arriba en el
tubo, hasta que llegan a una posición con una densidad
de flotación (Karp,2010 ) (Karp, 2006).
Separación de ácidos nucleicos
por centrifugación

• La centrifugación se realiza en un ambiente casi de vacío para minimizar la

resistencia por fricción(Karp, 2006).
• El desarrollo de las ultracentrífugas permitió generar fuerzas centrífugas de
hasta 500 000 veces la fuerza de la gravedad, que son lo bastante grandes
para contrarrestar los efectos de la difusión(Karp, 2006).
Electroforesis en gel de
poliacrilamida

• El movimiento relativo del DNA depende de la densidad de

carga de las moléculas. Mientras mayor sea la densidad de carga,
la proteína se impulsa con más fuerza por el gel y por tanto la
migración es más rápida(Karp, 2006).
• Los fragmentos de DNA en el gel se visualizan empapando el
gel en una solución de colorante de bromuro de etidio
(Karp, 2006).

(Karp, 2006).
BIBLIOGRAFÍA
• Burgot, J. (2020). The Citric Acid Cycle. Thermodynamics in Bioenergetics, 247–254.
https://doi.org/10.1201/9781351034227-35
• CÁRDENAS, J. (2017). Universidad Politécnica Salesiana Sede Quito. Tesis, 1–100.
http://dspace.ups.edu.ec/bitstream/123456789/5081/1/UPS-CYT00109.pdf
• Gallardo, C. M. y Van Wely, K. H. M. (2019). El ADN. Editorial CSIC Consejo Superior de
Investigaciones Científicas. https://elibro.net/es/lc/uta/titulos/120676
• Espariz, M. (2018). Sintesis Quimica, Amplificacion y Secuenciacion del ADN . Obtenido de Bioquimca de los Alimentos
: https://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/170787/mod_resource/content/3/1.%20Sintesis%20quimica%2C%
20amplificacion%20y%20secuenciacion%20del%20ADN.pdf
• Karp, G. (2006). Biología celular y molecular. México: McGRAW-HILL
• Karp, G. (2010). Biología celular y molecular. México: McGRAW-HILL
• Ortiz, B. (26 de 02 de 2018). Secuenciación Maxam-Gilbert: Conceptos Básicos. Obtenido de
https://www.youtube.com/watch?v=gP0uDYjA6jI
• Tammelleo, A. D. (1995). MI: independent living home pt. drowns: failure to follow nursing care plan. The Regan Report on Nursing Law,
36(4), 3.