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Técnicas de propagación clonal in vitro de tejidos vegetales

Cultivo in vitro de frutos inmaduros de limón (Citrus limetta)

Peralta Janine 1, Sigüenza Sasha2
jbperalta@espe.edu.ec, svsiguenza@espe.edu.ec
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Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales
Entregado: 6 de agosto del 2018

Resumen

El cultivo de frutos nos ofrece una amplia gama de benéficos, entre ellos encontramos inducir
embriogénesis somática, reactivar las semillas que están en estado de latencia, producción de
monploides, entre otras. Además, se sabe que el cultivo de embriones inmaduros se origina de
semillas que no han acabado de madurar y de esta manera obtener una planta viable, por otro
lado, tenemos a los embriones maduros que son usados para eliminar la inhibición de la
germinación de semillas.

La finalidad de esta práctica fue obtener brotes mediante el cultivo in vitro por organogénesis
directa para ello se utilizó como explantes frutos inmaduros de limón (Citrus limetta), que
previamente se sometió a un proceso de desinfección para retirar toda la tierra e impurezas, para
lo cual se colaron los frutos en una solución de 150 ml con detergente al 2% y tres gotas de
tween durante 20 minutos con agitación constante, posteriormente se enjuagaron tres veces con
agua destilada, luego se sumergieron los frutos en cloro al 5% con tres gotas de tween 20 por 10
minutos. Después el proceso en cámara consistió en realizar tres lavados con agua estéril y
flamear el fruto por 20 segundos procurando no quemar el tejido, luego se colocó en la superficie
de la servilleta para cortarlo en la mitad y sacar todas las semillas para que estas sean vertidas en
medio MS enriquecido con KIN, AIA, vitaminas e hidratos de carbono (azúcar).

Dentro del cultivo in vitro de frutos inmaduros, generalmente el proceso de desinfección no

presenta ningún problema, ya que las semillas se encuentras protegidas por la testa, esta es una
de las razones por la cual el 67% de las semillas sembradas en los frascos no presentaron
contaminación con hongos, sin embargo, se debe cuidar la manipulación de material dentro de la
cámara para evitar la contaminación con baterías, ya que el aparecimiento de estas es por un
inadecuado manejo del operario.

A los 14 días de exposición de las semillas en el medio de cultivo se pudo observar el inicio de la
germinación, obteniendo 47% de brotes, en la mayoría de las semillas no hubo ningún cambio,
pero si existió la muerte de ciertos explantes ya que hubo cambio de color esto puede deberse por
compuestos fenólicos endógenos que posee la semilla produciendo oxidación, los resultados
fueron 3%(oxidación), 20% (muerte o necrosis) y 10% (cambio de color).

Palabras clave: KIN, AIA, frutos, MS, semillas, periodo de latencia, dormancia, oxidación