Extracción sólido-líquido de colorantes vegetales

Ante la necesidad que presenta la sociedad de reemplazar los productos químicos como por ejemplo,
colorantes sintéticos, por productos orgánicos o naturales, es importante la extracción de colorantes
naturales a partir de diferentes extractos vegetales. Existen muchos métodos de obtención de extractos
vegetales, en esta práctica se explicará el uso básicamente de una extracción sólido-líquido usando un equipo
Soxhlet, la cual es una operación importante en todos los procesos tecnológicos relacionados con la industria
agroalimentaria, química y agroquímica, entre otros.

Extracción Soxhlet: La extracción de muestras sólidas con solventes, generalmente conocida como extracción
sólido-líquido o lixiviación, o extracción Soxhlet, es un método muy utilizado en la separación de analitos de
muestras sólidas y corresponde a una extracción continua, debido a que, el solvente pasa repetidas veces
sobre el material sólido al que se le desea extraer los compuestos de interés. Así, se trata de la extracción
continua de un compuesto orgánico soluble en el solvente usado, a partir de una mezcla sólida (puede ser
material vegetal) y debe usarse un montaje Soxhlet

Los métodos tradicionales de extracción sólido-líquido pueden dividirse en dos grandes grupos:

 Métodos que necesitan un aporte de calor, Soxhlet. Soxtec® System HT y extracción soxhlet asistida por
microondas.

 Métodos que no requieren un aporte de calor: agitación con ultrasonidos y agitación simple.

La extracción Soxhlet ha sido (y en muchos casos, continua siendo) el método estándar de extracción de
muestras sólidas más utilizado desde su diseño en el siglo pasado, y actualmente, es el principal método de
referencia con el que se comparan otros métodos de extracción.

Etapas de la extracción Soxhlet: El aparato usado para realizar la extracción Soxhlet se compone de tres
cuerpos unidos entre sí por uniones esmeriladas. La extracción se fundamenta en las siguientes etapas:

 El material sólido se coloca en una copa porosa o dentro de un dedal hecho de papel filtro.
 El dedal se coloca dentro del tubo interno del extractor.
 En la parte inferior del aparato se encuentra el balón de fondo redondo que contiene el solvente de bajo
punto de ebullición, por ejemplo éter etílico o alcohol etílico, el cual se evapora, mediante calentamiento
usando un mechero o una manta de calentamiento (preferiblemente). Los vapores suben por el lado
izquierdo hacia el condensador.
 En la parte media va el extractor donde se encuentra el material sólido, con los compuestos orgánicos de
interés a extraer.
 En la parte superior va un condensador recto o de bolas que permite el reflujo del solvente,
condensándolo y poniéndolo en contacto con el material sólido.
 El solvente caliente empieza a llenar el dedal y extrae el compuesto deseado a partir del material sólido.
 Una vez el dedal se llena con el solvente, el brazo de la derecha actúa como un sifón, y el solvente, el cual
contiene el compuesto deseado disuelto, se regresa dentro del balón de destilación.

De esta manera la concentración de los compuestos orgánicos extraídos va haciéndose mayor cada vez que
se completa el ciclo (evaporación-condensación- extracción-evacuación). A este tipo de extracción se le
denomina extracción por agotamiento.
 Montaje para realizar una extracción soxhlet

Algunas ventajas de la extracción Soxhlet

 La muestra está en contacto repetidas veces con porciones frescas de solvente.
 La extracción se realiza con el solvente caliente, así se favorece la solubilidad de los analitos.
 No es necesaria la filtración después de la extracción.
 La metodología empleada es muy simple.
 Es un método que no depende de la matriz.
 Se obtienen excelentes recuperaciones, existiendo gran variedad de métodos oficiales cuya etapa de
preparación de muestra se basa en la extracción con Soxhlet.


Algunas desventajas de la extracción Soxhlet

 El tiempo requerido para realizar una extracción eficiente puede tomar entre 6 a 24 horas.
 El gran volumen de solvente orgánico utilizado para la extracción (50-300 mL).
 La descomposición térmica de los analitos termolábiles, ya que la temperatura del solvente orgánico
está próxima a su punto de ebullición.
 No es posible la agitación del sistema, la cual podría acelerar el proceso de extracción.
 Es necesaria una etapa final de evaporación del disolvente para la concentración de los analitos.
 Esta técnica no es fácilmente automatizable

Algunas aplicaciones de la extracción Soxhlet en la industria: Aunque la aplicación de la extracción Soxhlet

es ampliamente reconocida en el campo agroalimentario es también de utilidad en el área medioambiental,
dado que es el método de análisis recomendado para la determinación del aceite y la grasa total recuperable
en aguas de vertidos industriales permitiendo la determinación de hidrocarburos relativamente no volátiles,
aceites vegetales, grasas animales, ceras, jabones y compuestos relacionados. Así, en el campo
agroalimentario, la extracción soxhlet es la técnica de separación sólido-líquido comúnmente usada para la
determinación del contenido graso en muestras de diferente naturaleza. De igual modo, puede ser usada
como técnica preparativa de muestra como paso previo al análisis mediante otra técnica instrumental, por
ejemplo, la extracción de ácidos grasos en muestras de tocino para su posterior determinación mediante
cromatografía de gases. El procedimiento puede aplicarse a distintos tipos de alimentos sólidos. Tiene una
importancia esencial que la muestra sea anhidra (que esté seca), porque el solvente orgánico puede ser
parcialmente soluble en agua, lo cual conlleva a extraer azúcares entre otros compuestos no deseados, lo que
puede ser fuente de error.
Extracto vegetal:

Un extracto vegetal es una mezcla compleja, con multitud de compuestos químicos, obtenible por procesos
físicos, químicos o microbiológicos a partir de una fuente natural y utilizable en cualquier campo de la
tecnología. El carácter especial de los extractos vegetales es que a partir de una misma planta se pueden
obtener extractos diferentes con principios activos variados. También depende del solvente empleado para
extraer una parte vegetal definida. El alcohol disuelve los principios activos liposolubles de una parte vegetal
específica. Los extractos de planta se diferencian no solamente por medio del solvente primario empleado,
sino también por los pasos de preparación empleados. Los colorantes permitidos como aditivos para los
alimentos, están regulados una lista denominada “lista E de aditivos” los cuales están fijados por la
Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura (FAO) como la Administración de
Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA) y la Comunidad Económica Europea (CEE).

Algunos aspectos sobre las antocianinas: Las antocianinas son pigmentos naturales hidrosolubles (solubles
en agua), pertenecientes a la familia de los flavonoides, ampliamente distribuidos en el reino vegetal, y que
son responsables del color atractivo y brillante de las frutas, las flores y las hojas. El color puede variar desde
el rojo vivo al violeta o azul dependiendo de la longitud de onda ( max) en la que absorban la luz del espectro
visible. Poseen características de glicósidos; están constituidos por una molécula de antocianidina, que es la
aglicona, a la que se le une un azúcar por medio de un enlace -glicosídico y en algunos casos por un enlace
-glicosídico. La estructura química fundamental de estas agliconas es el ión flavilio (o catión 2-
fenilbenzopirilio). Como se observa en la Figura, el catión flavilio consta de dos grupos aromáticos: un sistema
heteroanular fusionado tipo benzopirilio formados por los anillos A y C y un anillo B de naturaleza fenólica. R1
y R2 pueden ser H o azúcares; R3 y R4 pueden ser OH, OCH3 o H.Por el carácter trivalente del oxígeno, el flavilo
normalmente se comporta como un catión. Cuando en una misma molécula se encuentran dos azúcares, éstos
se localizan en los hidroxilos 3 y 5, produciendo una estructura que generalmente es más estable que cuando
contiene un solo monosacárido.

Estructura general de una antocianina

De todas las antocianidinas que actualmente se conocen (aproximadamente 20), las más importantes en los
alimentos son: pelargonidina, delfinidina, cianidina, la peonidina, petunidina y la malvidina. Estos nombres se
derivan de la fuente vegetal de donde se aislaron por primera vez. La combinación de éstas con los diferentes
azúcares, genera aproximadamente 150 antocianinas que abundan en la naturaleza.
Es muy común que una misma antocianidina interaccione con más de un hidrato de carbono para formar
diferentes antocianinas. Son responsables de los colores rojo, anaranjado, azul y púrpura de las uvas,
manzanas, rosas, fresas y muchos otros productos de origen vegetal, principalmente frutas y flores.
Generalmente, se encuentran en la cáscara o piel, como en el caso de las peras y manzanas, pero también se
pueden localizar en la parte carnosa, como en las fresas y ciruelas.

Estructura química de algunas antocianinas importantes en los alimentos

Uso de antocianidinas en los alimentos: Las antocianinas son uno de los pigmentos naturales más estudiados
en la industria de los alimentos y una de las opciones más atractivas para el desarrollo de colorantes naturales.
Debido a que las antocianidinas no existen en estado libre en los alimentos, su presencia es indicio de una
posible hidrólisis química o enzimática del enlace glucosídico del pigmento; esta reacción no necesariamente
causa la pérdida del color, pero la aglicona se vuelve más sensible a muchos factores externos, e incluso puede
precipitar. En ambos casos el color se ve fuertemente afectado después de algún tiempo. Las antocianinas se
utilizan solamente como colorantes en algunos derivados lácteos, helados, caramelos, pastelería y conservas
vegetales, licores, sopas y bebidas y son eliminadas en parte por la flora intestinal.
Estabililidad de las antocianinas: Las antocianinas son altamente inestables lo que conlleva a que sean
rápidamente perecibles, su estabilidad se afecta por varios factores como el pH, la temperatura de
almacenamiento, su estructura química (debido a la presencia del núcleo flavilio el cual es deficiente en
electrones y por lo tanto, muy reactivo), la concentración, la luz, el oxígeno, los solventes, la presencia de
enzimas, flavonoides, proteínas e incluso, iones metálicos. Las reacciones ordinariamente comprenden
decoloración de los pigmentos y son casi siempre no deseables en el procesado de frutas y hortalizas. El color
de las antocianinas depende de varios factores intrínsecos, como son los sustituyentes químicos que contenga
y la posición de los mismos en el grupo flavilio; ejemplo, si se aumentan los hidroxilos (OH) del anillo fenólico
se intensifica el color azul, mientras que la introducción de metoxilos (CH3O) provoca la formación de los tonos
rojos.

En la naturaleza las antocianinas siempre se aprecian en la forma heteroglucosídica (R1 y R2), conteniendo una
o más moléculas de azúcar, como monosacáridos (glucosa, galactosa, remanosa, arabinosa); también pueden
ser encontrados disacáridos y trisacáridos. Son solubles en agua y en mezcla de agua y alcohol etílico, pero
son insolubles en aceites y grasas. En diferentes pH estos pigmentos se encuentran en formas y colores
diversos; así, en soluciones ácidas (pH inferior a 2) las antocianinas se encuentran en la forma de sales de
oxonio (catión flavilio, AH+) y son generalmente de color rojo brillante. Con el aumento del pH ocurre pérdida
de un protón y adición de agua en la posición 2, dando lugar a un equilibrio entre la pseudobase carbinol o
hemiacetal B (inestable e incolora) y la forma chalcona C (inestable e incolora). A valores de pH superiores a
7 se presentan las formas quinoidales (A, A-) de color púrpura que se degradan rápidamente por oxidación
con el aire. Los cambios fisiológicos en la maduración de los frutos llevan consigo alteraciones en el pH y por
tanto, modificaciones en el color del tejido vegetal.

Cambios estructurales de las antocianinas con el pH

Uno de los primeros pigmentos caracterizados por Willstatter y Everest en 1913, fue la cianina, que se
encuentra en la rosa y amapola. Sus cambios de color con el pH, se interpretan en función de los siguientes
cambios estructurales: la hidrólisis ácida de las antocianinas da un azúcar (con frecuencia glucosa C 6H12O6) y
una sal de oxonio denominada antocianidina. Así la hidrólisis de la cianina con ácido clorhídrico produce
glucosa y cloruro de cianidina.

Hidrólisis ácida de la cianina

Cambios estructurales de la cianina con el pH

Objetivos

a) Realizar una extracción continua sólido-líquido de los componentes orgánicos de los pétalos de las rosas.

b) Estudiar el comportamiento de las antocianinas frente a los cambios de pH.

c) Conocer el uso de las antocianinas en la industria de los alimentos.

d) Consultar acerca de otros pigmentos de la naturaleza.

 Preguntas de pre-laboratorio

a) Haga un breve resumen de la historia del extractor “Soxhlet”

b) Haga una lista de al menos 5 aplicaciones (con ejemplos prácticos) de la extracción Soxhelt en la industria
alimentaria.
c) Cuál es la definición de colorante, que tipos de colorantes existen, cuál norma regula la adición de
colorantes a los alimentos en Colombia y haga una lista con las estructuras de los colorantes permitidos
en los alimentos por la Comunidad Económica Europea (CEE).
d) Que es el color.
e) Escriba la estructura de la tartrazina (E-102) e indique que tipo de colorante es, sus usos y sus
restricciones.
f) Escriba la relación entre la longitud onda y los colores percibidos por el ojo humano.
g) Escriba al menos 5 fuentes naturales que contengan antocianinas y que se usen en la industria de los
alimentos.
h) Escriba que se debe observar al cambiar el pH de la cianidina en un rango de 1 a 14.
i) Consulte cuáles son las estructuras químicas responsables del cambio de color en las hojas de las plantas.
j) Consulte cuál es la estructura del pigmento que le da el color verde y luego naranja o rojo (según el caso)
a los siguientes frutos: mango, tomate, guayaba, manzana, banano, plátano.

Materiales

Aparatos Reactivos
Aparato Soxhlet completo Etanol
Balón de fondo redondo de 250 mL Pétalos de rosas u otras flores
Condensador

Parte experimental

Parte A

 Adicione el material vegetal en el dedal fabricado con papel filtro e introdúzcalo en el extractor Soxhlet.
 Adicione 150 mL de etanol en el balón de fondo redondo y adicione piedritas de ebullición.
 Monte el equipo de extracción Soxhlet para realizar la extracción del material vegetal seleccionado.
 Realice la extracción Soxhlet durante 45 minutos aproximadamente, luego deje enfriar hasta temperatura
ambiente.
 Retire el material vegetal del extractor Soxhlet y descártelo.
 Concentre el extracto de los colorantes evaporando el solvente con recuperación (preferiblemente al vacío
usando un equipo de evaporación rotatoria) o usando el mismo montaje pero sin el dedal. Entregue el
solvente recuperado al auxiliar del laboratorio.

Parte B

Ensayos de los cambios de color con el pH. La auxiliar preparará una gama de soluciones buffer con pH de 1 a
14 con el fin de ensayar el cambio del color del extracto obtenido.
Resultados y análisis

i. Reporte la apariencia del producto recogido de la extracción después de la evaporación del solvente.
ii. Reporte el resultado del cambio de color con los diferentes pH ensayados.
iii. ¿Por qué se debe pasar el solvente repetidas veces sobre el material vegetal y no se hace simplemente
una extracción con un embudo de separación?
iv. ¿Para qué se deben adicionar las piedritas de ebullición al solvente que se va a ebullir?
v. Reporte la apariencia del producto de la extracción soxhlet después de la evaporación del solvente.
vi. Explique en sus propias palabras a que se refiere la expresión extracción por agotamiento.
Mediante cuál técnica se podría determinar cuántos componentes contiene la mezcla de pigmentos
obtenida durante esta práctica.