Química Agrícola 2020

Trabajo Práctico nº 8
Determinación de nitratos en muestras de suelo
Método de SNEDD

Profesor Responsable: Ing. Agr. Sergio David Chiofalo

Auxiliar de Primera: Florencia Agustina Camiolo

Auxiliar Alumna: Srta. Lucía Nahir Monasterio

Introducción

Los métodos espectrofotométricos para la cuantificación de NO3- en el suelo que se basan

en la reducción de los NO3- a NO2- son más sensibles que los métodos de evaluación
directa de los NO3-. Esta condición se debe a la especificidad con el ión NO2- de la reacción
involucrada.
El procedimiento consiste en la extracción de los NO3- del suelo, seguida por su
reducción a NO2- y posterior cuantificación por medio de una reacción que produce un
diazocompuesto coloreado, que posibilita su cuantificación en un espectrofotómetro,
donde la intensidad del color está directamente relacionada con la concentración de NO3-
extraídos del suelo.
Como la mineralización del nitrógeno es llevada a cabo por degradación microbiana, es
de vital importancia tener en cuenta la metodología de extracción, acondicionamiento y
conservación de la muestra para esta determinación. Cuando se desea determinar NO 3-
en una muestra de suelo, se debe extraer la muestra e inmediatamente llevar a una
conservadora de modo de mantener la misma a bajas temperaturas para así evitar la
mineralización, y consiguiente pérdida, de los NO3-. Una vez en el laboratorio la muestra
se conserva en heladera entre 2 a 4 ºC hasta el momento de la determinación.

El método de SNEDD

o Materiales

 Espectrofotómetro
 Agitador rotativo
 Baño de agua termostatizado
 Erlenmeyers y tapones correspondientes
 Tubos de ensayo y tapones correspondientes
 Agitador para tubos

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o Reactivos

(1) Solución extractante = 100 ml solución A + 10 ml solución B. Llevar a 1l con agua

destilada
- Solución A: Solución A (sulfato de cobre 2,5%) = disolver 25g de SO4Cu 5 H2O
en suficiente cantidad de agua destilada. Llevar a 1 litro.
- Solución B (ácido bórico 1M): disolver 61,8 g de H3BO3 en 1l de agua destilada.
Llevar a ebullición para disolución total.
(2) Catalizador = 130 ml de agua destilada + 10 ml de SO4Cu 0,01% + 10 ml de NaOH
0,5 N, respetar el orden indicado y preparar diariamente.
(3) Hidróxido de calcio finamente molido
(4) Sulfato de hidrazina 0,016 M: disolver 0,02082 g N2H4.SO4H2 en 100 ml de agua
destilada.
(5) SNEDD(concentrado) (Sulfanilamida N-(1-naftil) etilendiamina diclorohidrato):
solución al 10% (v/v) de H3PO4 (c) + 4% (p/v) de sulfanilamida + 0,1% (p/v) N-
(1-naftil) etilendiamina diclorhidrato. Incorporar en el orden indicado. Conservar
en frasco color ambar a temperatura próxima a 2ºC.
(6) SNEDD(diluido) = 1 volumen de SNEDD(concentrado) + 7 volumenes de agua destilada.
Se prepara en el momento que va a ser utilizado

o Curva de calibración

Realizar diluciones (0-1-2-4-6-8 mg/l N-NO3= ) a partir de un patrón de 100 mg/l N-NO3=.
Así obtenemos una curva como la de la fugura 1.

ppm N-NO3 vs absorbancia

1,2

1
y = 0,1909x
0,8 R² = 0,9956
Absorbancia

0,6

0,4

0,2

0
0 1 2 3 4 5 6
ppm N-NO3

Figura 1. ppm de nitrógeno de nitratos vs. Absorbancia del extracto de suelo

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o Procedimiento

1. Extracción
Pesar 20g de suelo húmedo y colocar en un Erlenmeyer de 250ml
Agregar 100 ml de solución extractante (1)
Agitar en forma rotativa 30 minutos
Agregar 400 mg de Ca(OH)2 polvo (3), resuspender bien y dejar sedimentar.

2. Determinación del contenido de humedad de la muestra y corrección a muestra seca

a 105ºC. En este caso se utilizarán 10 g de suelo (Ver técnica en TPNº1).

3. Colorimetría

Transferir una alícuota de 0,5 ml del extracto de suelo a un tubo de ensayo.

Agregar 1,5 ml de catalizador (2). Agitar con agitador de tubos de ensayo (vórtex) o
medio minuto a mano.
Dispensar 0,1 ml de solución de sulfato de hidracina (4).
Tapar rápidamente, evitando que la goma esté en contacto con la solución. Agitar e
incubar durante 30 minutos a 50ºC en baño de agua.
Enfriar 3 a 5 min en heladera, sin retirar los tapones.
Destapar y agregar 4 ml de SNEDDdiluido (6) con dispensador (Tóxico, no pipetear con la
boca).
Agitar y leer luego de 10 min en longitud de onda 540nm.

o Cálculos

1º. Cálculo de la humedad %H2O = Ph – Ps x 100

Ps

Pmh
2º. Corrección a muestra seca a 105ºC Pms =
%H2O
1+
100

3º. Contenido de N–NO3 corregido para muestra a 105ºC

N-NO3 (mg/Kg suelo) = N-NO3(curva) * [Pmh - Pms +100]

Pms

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Ph= peso de la muestra húmeda para la determinación de humedad

Ps= peso de la muestra seca a 105ºC
Pmh= peso de la muestra que se usa para la determinación
Pms= peso de la muestra que se usa para la determinación corregida a 105ºC
N-NO3(curva)= contenido de N-NO3- del extracto de la muestra en ppm

o Llevar el resultado de mg/kg suelo a kg/ha Profundidad muestra

δ= m m= δxv
v
20 cm
δ = 1,23 tn/m3 v = prof. x sup.

prof. = 0,2 m 40 cm

sup. = 10.000 m2
60 cm
m = 1,23 tn/m3 x 0,2 m x 10.000 m2 m = 2.460 tn

δ = densidad aparente del suelo. El valor dado es un aproximado, lo correcto es

determinar la δ del suelo con el que se está trabajando.
m = masa del suelo. El resultado que obtenemos aquí es la masa de suelo que tenemos
por hectárea
v = volumen de suelo
prof. = es la profundidad de nuestra muestra
sup. = utilizamos 10.000 m2 puesto que queremos conocer el contenido de N-NO3/ha.
Recordemos que 1 ha = 10.000 m2

Con el método de SNEDD obtenemos el contenido de N-NO3 en mg/kg de suelo que es

lo mismo que ppm, lo que también puede expresarse como kg/1000 tn. Utilizamos esta
última para realizar los cálculos finales.

Finalmente calculamos cuánto N-NO3 hay en nuestro suelo en kg/ha:

? = resultado obtenido por el método SNEDD

Con éste método obtendremos la oferta de nitrógeno disponible de nuestro suelo, que
en conjunto con el porcentaje de nitrógeno potencialmente mineralizable (2% del
nitrógeno orgánico total, Kjeldhal), nos dará la OFERTA TOTAL DE NITRÓGENO. En
función de la demanda del cultivo a implantar será la dosis de fertilizante a aplicar.

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Bibliografía
 Jackson M. L. 1976. Análisis química de Suelos. 3º Edición. Ed. Omega. Barcelona
 Marbán L. y Ratto S. 2005. Tecnología en análisis de suelo: Alcance a laboratorios
Agropecuarios. 1º Edición. Ed. AACS.