Bioq.

Anabela Angeleri
Especialista3en3Bioquímica3Clínica.3Área3Citología.3FFyB.3
UBA
Líquidos)biológicos)a)analizar:

Líquidos)de)derrame
(Ascítico,)Pleural,)Pericárdico)
LCR

Líquido)de)
Líquido)
diálisis)
Articular
peritoneal
 Recepción(de(la(muestra:
Orden(médica
:
• Nombre(y(Apellido(de(paciente
• Edad;(H.(Clínica;(Piso(y(cama(de(internación
• Dx presuntivo
• Tipo(de(estudios(a(realizar:
!Citológico
! Fisicoquímico

! Bacteriológico

! Parasitológico

Conservación(de(la(muestra(((conocer(el(tiempo(entre((la(
obtención(y(la(recepción)(
Problemas habituales.con.las.muestras
Exceso#de#heparina#
Dificultad*en*recuento*celular*total:*
manual,autoamtizado,*extendidos*con*tinción*
defectuosa.

Presencia#de#acúmulos#celulares#
(observación#en#fresco)

Muestra#francamente#purulenta

Muestra#coagulada

Muestras#hemolizadas

En#todos#los#casos#realizar#recuento#celular#y#diferencial
 Estudio(citológico

Recuento(celular(total
• Método(manual(:(Hemocitometro
• Método(Automatizado:(contador(hematológico

Recuento(celular(diferencial
• Método(manual:(Extendidos(citológicos(y(
observación(al(microscopio

Centrifugación( Citocentrifufación
convencional
Recuento&celular&
total

Método&manual
(Cámara&de&Neubauer)
Muestra(sin(diluir(o
diluida(con(
solución(fisiológica(
o(de(Turk(
Cámara&de&
Neubauer&100x
 Hematíes

Leucocitos
 Fresco'L.*Pleural*– Células*necróticas

Célula*necrótica

hematíe
Grupos'
celulares
Dilución(con(turk(1/5
Dilución(con(sol.(fisiológica(1/10
Se$realiza$el$recuento$celular$por$duplicado$
Se$cargan$las$2$cámaras,$se$cuentan$alrededor$de$100$células$en$cada$cámara$o$el$
mayor$número$posible.
Causas$de$ •Error&por&dilución&
errores •Error&al&cargar&la&cámara 50

Diferencia%entre%recuentos%%
40
La mayor$causa$de$variabilidad$o$falta$de$precisión$en$
los$resultados$es$la$dispersión$al$azar$de$los$ 30
elementos$en$la$cámara$(distribución$de$Poisson) 20
10
Según$esta$distribución,$la$varianza$(σ)$es$igual$al$
0
número$contado$(N);$el$error$estándar$(ES)$es$$√N$y$
0 100 200 300 400 500 600
el$intervalo$de$confianza$IC95%=N±1,96$√N.
Suma%de%recuentos

•Se$verifica$que$la$diferencia$entre$ambos$recuentos$(N1;$N2)$no$supere$el$IC95%$calculando$la$suma$y$
diferencia$entre$ambos,$se$interpola$en$el$gráfico:$(N1IN2)$vs.$(N1+N2)$y$se$aceptan$los$valores$si$caen$por$
debajo$de$la$curva.

•En$caso$de$rechazo$se$repite$el$procedimiento$desde$las$diluciones
Calculo'del'recuento'celular

Cels./mm(³=(N(x(D(((x(10
Donde:
N(=(número(de(células(contadas((promedio)
D(=(inversa(de(la(dilución(empleada
10(=(para(llevar(a(mm3

Ejm:
Nº(1=(23F(Nº2=25
Nº1+Nº2=(48
Ň=24
Dilucion(1/10

Rto(celular=24(x(10(x(10=(2400(x(mm³
 Comparación+del+recuento+celular+entre+un+
método+manual+y+un+contador+automatizado+
en+líquidos+de+derrame
A"Angeleri1, A"Rocher1, M"Sardi1, C"Carbia1"2, J"Ariagno1, L"Palaoro1
1"Departamento"de"Bioquímica"Clínica"– Área"Citología."FFyBFUBA.,"Argentina."2"Área"Hematología."
Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana Vol. 51 marzo (1) 2017, 37>44. ISSN
0325>2957 (impresa), ISSN: 1851>6114

Objetivo:+Analizar+si+el+método+automatizado+(MA)+de+++rto celular+
empleado+en+hematología+puede+utilizarse+para+la+evaluación+de+
líquidos+de+derrame+
Materiales)y)métodos:

Se#procesaron#56#líquidos#de#derrame:
•25#ascíticos#(LA)#
•31#pleurales#(LP)

Recuento#celular#total:#
• Método#manual
• Método#automatizado:#hemocitometro contador#
hematológico:#Sysmex XT#1800#i#(Roche)

Métodos#estadísticos:#r2#y#Blant Altman
Método&automatizado:&
contador(hematológico(Sysmex XT(1800(i

• Impedancia*volumétrica*
• citometría de*flujo*fluorescente*con*láser*
para*el*análisis*de*las*diferentes*
poblaciones*celulares
Mide:
!Luz*dispersada**frontal
!Luz*dispersada*lateral
!Luz*fluorescente*dispersada*lateral

• Sensibilidad:*20*cel/mm3
• Muy*buena*exactitud*y*precisión
: Resultados: Análisis/estadístico/de/los/resultados:
14Regresión)lineal

L íquido(pleural
L iquido'as c itic o
4500 14000
y"= "1,117x "+ "6,2104
4000
R 2 "= "0,8371 12000
y"= "1,1591x ")"99,303
3500 R 2 "= "0,9507
10000
3000
R to(en(c ontador

8000

R to'en'c ontador
2500

2000 6000

1500 4000

1000
2000

500
0
0 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 )2000
R to(e n(c a m a ra R to.'E n'c a m a ra

Liq.%Pleural: r2=%0,87;%p<0,0001 Liq.Ascítico; r2=%0,95;%p<0,0001%

2-Bland-Altman:

Bias =%rto.%manual%– rto.%Automatizado Bias (LA)=%G 71

Bias (LP)=%G108
 Conclusiones:
• Los$resultados$demuestran$que$los$métodos$son$comparables$entre$
sí$y$por$ende$se$puede$remplazar$el$rto manual$por$el$automatizado$
de$demostrada$eficiencia$y$exactitud.$Sin$embargo$cabe$aclarar$que$
todos$los$líquidos$requieren$una$observación$al$microscopio$óptico$
previo$a$ser$procesados$por$el$contador$hematológico

Leucocitos,#c.#mesoteliales.#Giemsa– 400x C.#neoplásicas.Giemsa. 400x C.#neoplásicas. coloración#de#PAP.400x

Correlación+entre+método+manual+y+
automatizado+para+el+rto+total+y+diferencial
• Contador(hematológico(Sysmex(XT(2000(contiene(software(para(
líquidos(biológicos
 Recuento(celular(diferencial
Giemsa:
metanol:,3,D,,,giemsa:,1/10,1,5,D
Centrifugación(convencional:

• Sobrenadante,para, • Extendidos,por,duplicado
parámetros,bioquimicos • Coloración,de,Giemsa
• Centrifugar,10,ml
• Sedimento,para,los, • Coloracion,de,PAP
• Concentracion,celular extendidos,citológicos • Inmunohistoquimica

L.,punción,,BAL LCR
 Técnicas(de(coloración(en(líquidos(de(derrame

Giemsa
• Fácil'y'obtención'de'resultados'en'poco'tiempo
• diagnóstico'de'tumores''mesenquimáticos
(leucemias,'linfomas
• Cistoadenocarcinoma de'ovario

Papanicolaou
• Mas'compleja'
• diagnóstico'de''tumores'epiteliales'como'el''
Adenocarcinomas'(95%'de'los'tumores'
metastásicos)

Rocher'AE,'Guerra'FR,'Rofrano'J,'Angeleri'A,'Canessa'OE,'Mendeluk'GR,'
Palaoro'L.'Sensitivity'and'Specificity'in'the'cytodiagnosis'of'body'fluids'using
Papanicolaou,'Giemsa'and'AgNOR'techniques. Biotech(Histochem. 2011(Oct186(5):326932.
Célula-mesotelial

macrófago

Giemsa'400X
Giemsa'400X
L.#Ascítico+ Giemsa#400X
Informe(citológico
Tipo(de(muestra:(Líquido(Ascítico
Color(y(Aspecto:(amarillo(ligeramente(turbio

Recuento(celular(total:(600/mm3
Recuento(leucocitario:(BBB/mm3
Recuento(celular(diferencial:(((B Neutrófilos:(75(%
B Eosinófilos:(0(%
B Linfocitos:(20(%
BMonocitos:(5%

Otras(células:(células(mesoteliales reactivas,(macrófagos.
Coloración(de(PAP:(
Observaciones:
 LCR

precentrifugado postcentrifugado
Informe(citológico
Tipo(de(muestra:(LCR
Color(y(Aspecto:(Precentrifugado:(Xantocrómico
Postcentrifugado:(Xantocrómico con(botón(hemático

Recuento(celular(total:(210/mm3
Recuento(leucocitario:(EEE/mm3
Recuento(celular(diferencial:(((E Neutrófilos:(87(%
E Eosinófilos:(0(%
E Linfocitos:(10(%
EMonocitos:(3%

Otras(células:(células(necróticas
Coloración(de(PAP:(
Observaciones:
 Informe(citológico
Tipo(de(muestra:(LCR
Color(y(Aspecto(precentrifugado:(Xantocrómico
Color(y(Aspecto(postcentrifugado:(Xantocrómico con(botón(hemático

Recuento(celular(total:(???/mm3
Recuento(celular(diferencial:(((? Neutrófilos:(80%
? Eosinófilos:(0%
? Linfocitos:(17%
?Monocitos:(3%

Otras(células:(?
Coloración(de(PAP:(
Observaciones:

L.#pleural.#Giemsa#400x
Informe(citológico
Tipo(de(muestra:(Líquido(Pleural
Color(y(Aspecto:(amarillo(ligeramente(hemorrágico
Recuento(celular(total:(850/mm3
Recuento(leucocitario:(200/mm3
Recuento(celular(diferencial:(((F Neutrófilos:(5(%
F Eosinófilos:(0(%
F Linfocitos:(95(%
FMonocitos:(%
Otras(células:(Se(observan(células(sospechosas(de(malignidad.(Se(realizará((
coloración(de(PAP.(
Coloración(de(PAP:F
Observaciones:FFF
 Informe(citológico
Tipo(de(muestra:(Líquido(Pleural
Color(y(Aspecto:(amarillo(ligeramente(turbio

Recuento(celular(total:(850/mm3
Recuento(leucocitario:(200/mm3
Recuento(celular(diferencial:(((E Neutrófilos:(5(%
E Eosinófilos:(0(%
E Linfocitos:(95(%
EMonocitos:(0%

Otras(células:(Se(observan(células(sospechosas(de(malignidad.(Se(realizará(
coloración(de(PAP.
Coloración(de(PAP:(
Observaciones:
L.#pleural.#Coloración#de##
PAP3400x
Informe(citológico
Tipo(de(muestra:(Líquido(Pleural
Color(y(Aspecto:(amarillo(ligeramente(hemorrágico
Recuento(celular(total:(850/mm3
Recuento(leucocitario:(200/mm3
Recuento(celular(diferencial:(((F Neutrófilos:(5(%
F Eosinófilos:(0(%
F Linfocitos:(95(%
FMonocitos:(%
Otras(células:(Se(observan(células(sospechosas(de(malignidad.(Se(realizará((
coloración(de(PAP.(
Coloración(de(PAP:(Se(observan(células(neoplásicas(en(disposición(glandular.
Observaciones:FFF