Bioprocesos IV

Profesor: Dr. Roberto Vega Paulino

El Bioreactor continuo
 El Cultivo Continuo en Quimiostato

F S0 F X S P
Balance de células
d ( XV )
  FX   XV
dt
dX F
  DX   X D
V X dt V
S
µ P Estado estacionario D

Balance de sustrato limitante

Balance de Producto
d ( SV )
d ( PV )  FS0  FS  qs XV
  FP  q p XV dt
dt
dS
dP  D ( S 0  S )  qs X
  DP  q p X dt
dt
Estado estacionario X  Yxs (S0  S )
qp X
Estado estacionario P
D
 m S
Cinética de Monod 
Ks  S

DK s
Estado estacionario S
m  D

DK s
Por lo tanto, la biomasa en el estado estacionario resulta: X  Yxs ( S0  )
m  D
En el estado estacionario:
Dcrit es la velocidad específica
Sí X=0 S=S0  m S0
  Dc  de crecimiento máxima real
K s  S0 (práctico). µM es una asíntota

Dcrit  M

Conceptualmente Dcrit es diferente a µM, aunque

numéricamente son muy similares: S0>>Ks
Velocidad de dilución crítica
D crit X=0
S0 Dcrit es la velocidad específica
Dcrit  M de crecimiento máxima real
K s  S0 (práctico). µM es una asíntota

Dcrit   M

Conceptualmente Dcrit es diferente a µM, aunque

numéricamente son muy similares: S0>>Ks
Isotermas del cultivo continuo teórico del cultivo
continuo

=So

X=0
D=µm
Dcrit
Productividad Volumétrica de Biomasa Qx
DK s
Qx   X  DX  DYx / s ( S0  )
M  D
dQx
0
dD
KS
DM   M (1  )
S0  K S

X M  Yx / s ( S0  K s  K s ( S0  K s ))

QM  DM X M
 Método de Lavado

Consiste en aumentar sobre Dcrit el valor de D en un cultivo en estado estacionario de

forma que se produzca el lavado.
Dado que D>Dcrit las células crecerán a su máxima velocidad µM.
lnX

Es aprox. a µM, es la
velocidad máxima que
t crece el m.o y se
asume a µM.
dX
  DX   M X
dt
1 dX d ln X
M  D  .  D
X dt dt
 Operación del Quimiostato

1. Puesta en marcha
2. Tiempo aproximado para alcanzar un estado estacionario

dC
  DC
dt
0.05Co t
dC
 
Co
C
 D  dt
0

1
t  3.0  3.0
D
Productividades volumétricas en el estado
estacionario

P
qp X QP  PD  q p X
D
Qx   X  DX
 Sistemas Continuos Multietapa

αF, So’
F F (α+1)

X1 X2
F, So S2
S1
P1 P2

V1 S1
V2 S2
μ1 X1 P1 μ2 X 2 P2
 Balances de Masa
dX 1
  D1 X 1  1 X 1
dt
dX 2
 D2 [ X 1  (  1) X 2 ]  2 X 2
dt

dS1 
 D1 ( S0  S1 )  1 X 1
dt Yx s1

dS 2  F2
 D2 [ S1   So'  (  1) S 2 ]  2 X 2
dt Yx s2 D2 
V2
dP1
  D1P1  q p1 X 1
dt
dP2
 D2 [ P1  (1   ) P2 ]  q p 2 X 2
dt
 En el Estado
Estacionario
(1   ) X 2  X 1
2  D2 [ ]
X2
1  D1
X 1  Yx s1 ( So  S1 ) Yx s2 [ S1   So'  (1   ) S 2 ]  X 1
X2 
1 
q p1 X 1
P1  qp2 X 2 P1
D1 P2  
D2 (1   ) 1  
D1K s
S1  2 K s
m  D1 S2 
m  2

D2=F/V2

Asumiendo cinética de
Monod
 CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO (CLA) (FED-Batch)

d (V  R ) Ec. (1)
 F F
F dt

SF
d ( XV )   XV Ec. (2)
dt
d (SV )  FS   XV Ec. (3)
dt F Y
µ S x/s
d ( PV )
 qP XV Ec. (4)
X V dt

P   M S Ec. (5)
KS  S

SF = Cte

XV  X 0V0  S0V0Yx/ S  FYx/ s SF t Yx/ s SV Ec. (3)

Si Fijamos F constate: ¿cuál es el comportamiento del reactor?

Si fijamos un comportamiento en el reactor (µ) ¿cuál es el perfil de la
alimentación?
 CULTIVO POR LOTE ALIMENTADO (CLA) (FED-Batch)

F dV  F Ec. 1
SF dt
dX  (  F ) X Ec. 2
µ S
dt V
X V
dS F Ec. 3
 ( S F  S )  qs X
P dt V
dP F
 qP X  P Ec. 4
dt V
SR
  M Ec. 5
SF = Cte K S  SR

Si Fijamos F constate se ve el comportamiento del reactor

Si fijamos un comportamiento en el reactor (µ) que perfil tiene la
alimentación.
Alimentación Constante (F=cte) CLA-AC
Zona de
Alimentación Crecimiento
Zona de lineal
Crecimiento
C. Lote
exponencial
µm

SV µ

XV

0 tT Demanda
qs Zona de
Crecimiento Zona de

 FSF   XV
d (SRV ) exponencial Crecimiento lineal
Oferta
dt Yx/s
Oferta Demanda
cte
Tiempo
De la Ec. (1)
dV  F Ec. (1.1)
dt

Sí F=constante V V0  Ft Ec. (1.2)

 Zona de crecimiento exponencial

S>>Ks   Max

 t
M t X 0V0e M
De la Ec. (2) y Ec (1.2) XV  X 0V0e  X  Ec. (2.1)
V0  Ft

De la Ec. (3) SV  S0V0  FSF t  ( X 0V0  XV )

1
Ec. (3.1)
Yx / s
 1 Mt
S0V0  FSF t  X 0V0 (e 1)
De la Ec. (3.1) S Y x/ s

V0  Ft

qP X 0V0
De la Ec. (4) PV  P0V0  (e t 1) Asumiendo

M

M qp constante

q p  M  
 S~Ks Zona de crecimiento Limitado

X XV
De la Ec. (3.1) V (S  )  S0V0  FS F t  0 0
Yx / s Yx / s

X
 S
Yx / s

XV  X 0V0  Yx/ s S0V0  Yx/ s FS F t

d ( XV )
 Yx/ s FSF   XV
dt
FSF Yx/ s

X 0V0  S0V0Yx/ S  FYx/ s S F t
  KS
S
M  

FSF K SYx/ S
S
M (S0V0Yx/ S  X 0V0 )  FS FYx/ S  FS FYx/ S M t
Ec. (***)
t
PV  P0V0   qP ( XV )dt
0

q p    
 Para hallar el tT (Tiempo de transición)

M tT
X 0V0e  X 0V0  S0V0Yx/ S  FYx/ s S F tT  Yx/ s SV
Para simplificar: S=0
M tT
X 0V0e  X 0V0  S0V0Yx/ S  FYx/ s S F tT
Si tT=0 se elimina la etapa exponencial y eso se quiere

X V eM tT  X 0V0  S0V0Yx/ S  FYx/ s S F t  Yx/ s S (V0  Ftt ) (A)

0 0 T

t 0  S S 0 0

Al reemplazar la Ec. (***) se puede obtener un valor para SF

m S0V0 ( S0Yx / s  X 0 )
SF 
FYx / s ( K s  S0 )
ELIMINAR LA FASE DE CRECIMIENTO EXPONENCIAL
 2) Alimentación Exponencial

  cte Distinto a µM, si se quiere cultivar a µM trabajar por lotes

S  cte S
Ks 
M  

t
XV  X 0V0 e
d (SV )  FS   XV  XV
De la Ec. (3) F
dt F Yx/ s Yx / s ( S F  S )

Reemplazando XV

 X 0V0 t
F
( S F  S )Yx / s
e t
F  F0 e
SF debe ser alto para que F sea menor
De la Ec. (1.1)

dV
F
dt
F0
V  V0  (e t  1)


Reemplazando V en la expresión XV

t
X 0V0 e
X 
F0 t
V0  (e  1)

 PV t

d ( PV )  d ( PV )  q p X 0V0  e t dt
 q p XV P0V0 0
dt
qp
PV  PV
0 0  X 0V0 (e t  1)

 ESTADOS PSEUDOESTACIONARIOS, X=cte

dX
 0
dt
d ( XV )   XV  V dX
X
dV
  XV
dt dt dt

XF   XV  D
F Ec. (6)
V

Se cumple para cultivo

alimentación exponencial y
constante
1) Caso de CLA con alimentación exponencial

Reemplazando en la Ec. (6)

F0 e t Simplificando F0

F0 t   D0 Ec. (7)
V0  (e  1) V0


Sustituyendo la expresión para F0 X0

 SF  S constante
Yx / s
Preparar el medio de cultivo que se
va alimentar con esta concenntración
de nutriente limitante
Entonces reemplazando en X, la Ec. (7)

X 0V0 e t
X  X  X0
F0 t
V0  (e  1)
 Limitación !
Si se quiere cultivar a 30 g/L, la
condición inicial tendrá que ser 30
g/L y puede ser una concentración
muy alta que no se alcance en el
cultivo por lotes
2) Caso de CLA-AC
2.1) Zona de crecimiento exponencial

De la Ec. (6) o derivando X respecto al

tiempo de la Ec ( 2.1) e igualando a   
F F
 f (F , t
V V0  Ft
M
cero, se obtiene

Esto es un absurdo, uM es
constante, no es función de F y t

Por lo que no hay estado seudoestacionario en

la zona de crecimiento exponencial
 2.2) Zona de crecimiento limitado

X 0V0  S0V0Yx/ S  FYx/ s S F t

X
V0  Ft

dX X0
0 S F  S0 
dt Yx / s

F F X  X 0  S 0Yx / s
 D  f (F , t)
V V0  Ft XV  f (t )
Esta es una característica sobresaliente ya que en el estado
seudoestacionario la biomasa está en un estado transiente con su velocidad
específica de crecimiento bajo control
Si se desea obtener el estado seudo-estacionario desde
el inicio del Lote Alimentado, entonces

t  0  S0  S  0
F  M S0
o  
V0 K S  S0

 M S0V0
F
K S  S0
 Resumen Alimentación constante

tT =0 X=cte, tT =0

m S0V0 ( S0Yx / s  X 0 ) X0  M S0V0

SF  S F  S0  F
FYx / s ( K s  S0 ) Yx / s K S  S0
Transferencia de Oxígeno en caldos de cultivo
 Relación de Equilibrio Gas-Líquido

H *
CG  CL (Concentración del O2 en el equilibrio en la fase gaseosa)
RT
 yO 2 PT

H (T )
 Velocidad de consumo de Oxígeno (VCO)

Factores que afectan a VCO:

VCO  .X
YO
2

 La especie utilizada
 La fase de crecimiento
 La concentración de células
 La naturaleza de la fuente de carbono
La VCO está alrededor de 50 a 100 mmoles de O2/L.h
(1.6 a 3.2 g O2/L.h), demandas sobre 120 mmoles/L.h son valores
altos que resultan difíciles de satisfacer en equipos de fermentación
de diseño estándar y en condiciones de operación económicas.
kLa: coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno [1/T]
 Valores Típicos de VTO y kLa

VTO kLa (h-1)

(m moles/L.h)
Matraz 30-60 200 -400
Fermentado 60 -120 60 – 500
r laboratorio
Fermentado 70 – 100 100 - 400
r industrial
 por lotes

dCL
0 y CL  CL crítico
dt
 Cultivo Continuo

dCL
0 y CL  CL crítico
dt

X Estado
k L a (C  CL )  N A 
*
L
YO 2 Estacionario
YO 2 k L a *
X (CL  CL )
D
YOo2 k L a
X (CL*  CL )
mO 2YOo2  D
García-Ochoa et al. (2010).
Biochemical Engineering Journal 49: 289-307
10-3 M Cu+2
 Método del Balance de Oxígeno

VL  VTO  Fg (Cogi  Cogo )  VL k L a(Cout

*
 CL )

Fermentadores de Laboratorio
Fg (Cogi  Cogo )
kL a  *
VL (Cout  CL )

Fermentadores de gran escala

(Cin*  CL )  (Cout
*
 CL )
Cin*  CL
ln( * )
Cout  CL
Ejemplo:
 tiempo (s) [O2] mg/L 1-CL/C* Ln(1-CL/C*)
0 0 1 0
20 2.84 0.645 -0.43850496
40 4.63 0.42125 -0.8645288
60 5.87 0.26625 -1.32331956
80 6.62 0.1725 -1.75735804
100 7.1 0.1125 -2.18480206
120 7.4 0.075 -2.59026717

Determinación de Kla
0
0 20 40 60 80 100 120 140
-0.5

-1
Ln(1-CL/C*)

-1.5
y = -0.0218x
R² = 0.9998
-2

-2.5

-3
kLa=0.0218*3600=78.48 h-1 Tiempo (s)
 Ejemplo
El aire suplementado a un fermentador se cortó por un periodo de tiempo breve y luego se
restauró. Un valor para C*L de 7.3 mg/L se ha determinado para las condiciones de
operación. Use las medidas tabuladas de oxígeno disuelto para estimar la demanda de
oxígeno y el KLa en este sistema.
Tiempo OD
(min) (mg/L)
-1 3.3
Aire off 0 3.3
1 2.4
2 1.3
3 0.3
4 0.1
5 0.0
Aire on 6 0.0
7 0.3
8 1.0
9 1.6
10 2.0
11 2.4
12 2.7
13 2.9
14 3.0
15 3.1
16 3.2
 Tiempo OD
(min) (mg/L)
0 3.3 3.5

1 2.4 3

2 1.3 2.5

C L (mg/L)
3 0.3 2
y = -0.9929x + 3.3
R²1.5= 0.9982

0.5
VCO = 0.993
0
mg/L.min 0 1 2 3 4
Tiempo (min)
 3.5
Tiemp
o Tiempo OD derivada 3

(min) (min) (mg/L) derivada +VCO 2.5

D.O (mg/L)
6 0 0 2

7 1 0.3 1.5
y = -0.0293x2 + 0.6132x
1
8 2 1 R² = 0.9918
0.5
9 3 1.6 0.4504 1.4434
0
10 4 2 0.3968 1.3898 0 2 4 6 8 10 12
Tiempo (min)
11 5 2.4 0.3432 1.3362
12 6 2.7 0.2896 1.2826 3

13 7 2.9 2.5

14 8 3 2

D.O (mg/L)
15 9 3.1 1.5
y = -0.0268x2 + 0.6112x
16 10 3.2 1 R² = 0.9993
17 11 3.2 0.5

0
0 2 4 6 8
Tiempo (min)
 3

2.5

2
kla 0.145 min-1

OD (mg/L)
y =1.5
-6.903x + 11.584
8.7 h-1 R² = 0.9956
1

0.5

0
1.25 1.3 1.35 1.4 1.45 1.5
dCL/dt + VCO
 VCO
k L arequerido  *
CL  CL
 Eficiencia de Transferencia de Oxígeno
Fa N A  22.4  T

V 32  273  P  0.21 60  E
Donde:
Fa/V: Laire/(Liq.*min) (vvm)
E: eficiencia de absorción de O2 (0.03 – 0.35)
NA: VCO (g/L.h)
T: temperatura absoluta (K)
P: presión del aire (atm)

Fa N A  22.4  T

NA: VCO (m moles/L.h)

V 1000  0.21  E  P  273  60

 Eficiencia de Transferencia de Oxígeno

0.35
E V
0.03

Valores típicos de vvm

Laboratorio: 1.0 – 1.5 vvm
Industrial: 0.2 – 0.7 vvm
 Velocidad Superficial del aire, vs

F  vS A

A: Área sección recta del fermentador

Valores típicos de Vs: 30 – 300 cm/min
constante Agitación y
aireación
Solo de Variables independientes:

  
kL a  K  D  Vs  N
 Ejercicio de aplicación
El crecimiento celular es limitado por la velocidad de transferencia de oxigeno y
también por la fuente de carbono. Los balances de la fase líquida para X, S y O2
son por lo tanto usados junto con el balance de oxígenos en la fase gaseosa para
determinar la velocidad de suplementación de oxigeno. Representación
esquemática del fermentador aireado continuo.

Gas G, CG
F, So
F, S, X, CL

T=40 °C
X S

CL µ

Aire G, CGo
Balances de Masa
dX
  DX   X
dt

dS
 D ( S o  S )  qs X
dt

dCL
 D(CLo  CL )  qo X  k L a (CL*  CL )
dt

m S CL

K S  S K O  CL