SIEMBRA BACTERIOLOGICA

INTRODUCCION

La siembra microbiológica es un procedimiento técnico que consiste en colocar

una pequeña fracción o volumen de la muestra, sobre o dentro, de uno o varios
medios de cultivo que contengan los nutrientes necesarios para las especias que
presuntivamente contiene, con la finalidad de que puedan desarrollarse
adecuadamente, para ayudar a su estudio y posterior identificación. El método de
siembra a emplear dependerá del objetivo planteado en cada práctica. Con
independencia del tipo de medio y el método de siembra a emplear ésta debe
realizarse en las proximidades de la llama del mechero y a que el calor emanado
reduce el número de microorganismos presentes en sus inmediaciones, lo cual es
utilizado como un recurso a favor del proceder aséptico.

Si hablamos de cómo se cultivan las bacterias tenemos que hacerlo también de

unas condiciones generales que deben darse:

-Nutrientes adecuados disponibles. Un cultivo de bacterias adecuado para

investigar ha de contener como mínimo carbono, nitrógeno, azufre, fósforos y
sales inorgánicas. Actualmente, la forma más extendida de aportar estas
sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente
fácilmente asequible de nitrógeno y carbón. A menudo se añaden al medio de
cultivo ciertos colorantes.

-Consistencia del medio. Partiendo de un medio líquido podemos modificar su

consistencia añadiendo productos como la albúmina, gelatina o agar.

-Luz ambiental. La mayoría de los microorganismos de un cultivo de bacterias

crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar.

-Temperatura. En líneas generales los patógenos humanos crecen en rangos de

temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC.

-Humedad y pH. Un mínimo de humedad en medio y atmosfera es necesario para

el desarrollo, así como un pH neutro.

-Esterilidad. Fundamental recordar que todos los medios de cultivo han de estar
perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan
alterar, enmascara o impedir el crecimiento.

-Las siembras pueden ser:

1.- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez.

2.- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria.
 Métodos Generales:

1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el
caldo simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del
asa cargada con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.

-          Medio de cultivo: Liquido

-          Instrumento: Asa
-          Finalidad: poner la bacteria en suspensión.

2) Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie de

el agar inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con
el asa bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a
sembrar, haciendo estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia
por la parte más profunda de la superficie inclinada y se termina la estría en la
parte más cerca de la boca del tubo.

-          Medio de cultivo: agar base inclinado

-          Instrumento: asa o aguja bacteriológica.

3) Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puede

conseguir una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se
funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el
asa previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se
descarga sobre la superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de
varias formas:

a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando se

quiere obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de
Petri, para lo cual se repite la operación sin tomar con el asa nuevo material.

b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el

material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una
estría luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el
asa; en el último cuadrante aparecerán las colonias aisladas.

c- El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde,

se esteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente.

-          Medio de cultivo: solido en placa de Petri

-          Instrumento. Asa
-          Finalidad. Obtener colonias aisladas
  

4) Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere

sembrar y se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja
hasta el fondo, formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos
luego. Este método se utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.

-          Medio de cultivo: Semisólido

-          Instrumento: aguja bacteriológica
-          Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar

Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador
que es el rojo fenol. En este medio sembraremos por picadura y estrías en
superficie, como ya conocemos, para estudiar los cambios que ocurrirán en
superficie y profundidad. A lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y
según lo hagan en la parte superior o inferior del tubo, estarán indicando su
comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo siguiente:
MATERIALES

-QUESO
-CHICHA
-LECHE
-ASA DE SIEMBRA EN ARO
-PIPETA
-MECHERO

MEDIOS DE CULTIVOS SOLIDOS

-AGAR PLATE COUNT

-AGAR TRIPTICASA SOYA
-AGAR MAC CONKEY
-AGAR BAIRD PARKER

EQUIPO DE SEGURIDAD PERSONAL

-TOCA
-GUANTES
-TAPABOCA
-GUARDAPOLVO
PROCEDIMIENTO:

Se harán dos tipos de muestra: Por Dilución y Por Estria.

-Por Dilución:

Colocamos a la placa Petri 1 mililitro de nuestra muestra (chicha, leche, queso)

con la ayuda de la pipeta.

Ya diluida nuestros medios de cultivo vaciamos lentamente a nuestra placa Petri

con la muestra en ella, mezclamos lentamente hasta que este uniforme.

Una vez ya sólido podemos voltear y poner en la incubadora (37°C).

-Por Estria:

Utilizar los medios de cultivo sólido en placa Petri y dividir en partes iguales,
enumerando cada parte según el número de su muestra.

Introducimos el asa de siembra y se toma

una goda de nuestra muestra (chicha, leche,
queso) que se extiende sobre el agar de la placa deslizando el asa suavemente
por su superficie.

Volteamos y llevamos a la incubadora (37°C).

RESULTADO

Los medios de cultivo están conformados por nutrientes favorables para la

proliferación de microorganismos.

Tenemos que esterilizar los materiales a utilizar para el cultivo de

microorganismos para evitar la contaminación.

DISCUSIÓN

A diferencia de la siembra por dilución de la de estria, es que por dilución

podemos saber cuántas bacterias hay por alimento porque sabes la cantidad de
muestra que se coloca.

RECOMENDACIONES

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

-Que se efectúen asépticamente
-Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
-Que se realicen solo los manipuleos indispensables
-Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un
mechero o bien Flujo laminar.

BIBLIOGRAFIA

https://es.scribd.com/doc/111643713/Preparacion-de-Medios-de-Cultivo-y-Siembra-de-Bacterias-
en-Medios-de-Cultivo

https://es.scribd.com/document/22870460/Preparacion-de-Medios-de-Cultivo-y-Tecnica-de-
Siembra

https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologia/practicoIII.pdf