Es un conjunto de Técnicas basadas

en el principio de retención
selectiva, cuyo objetivo es separar
los distintos componentes de una
mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de
dichos componentes
 Consiste en un liquido o gas
Fase
que es arrastrado a través de
Móvil la fase estacionaria

Fase Consiste en un solido o un liquido

Estacionaria fijado a un solido por donde el
cual pasa la fase móvil
 Plana En Columna

En papel En capa fina Intercambio Por Afinidad

Iónico

Por Exclusión
Molecular
 Análisis cualitativos

En Papel
La fase estacionaria se
representa por un
papel de filtro y la
móvil por un
disolvente.
 Separar Componentes Puros

En Capa
Fina
Una fase móvil
(normalmente, un disolvente)
y a una fase estacionaria (la
llamada capa fina, que puede
ser papel o gel de sílice)
Depósito

Proteína
Simple (Fase
Móvil)

Matriz porosa
sólida (Fase
Estacionaria)

Soporte
Poroso

Efluido
 Separa proteínas según su
Cromatografía tamaño.
de Exclusión La fase sólida consiste en
Molecular pequeñas perlas que contienen unos
poros o cavidades de tamaño
calibrado.
Las proteínas de mayor tamaño no
pueden entrar en las cavidades.
La cromatografía de filtración Las proteínas mas pequeñas
molecular es un método de penetran en las cavidades.
cromatografía en columna por el
cual las moléculas se separan en
solución según su peso
molecular.
 Partículas más pequeñas
Espacio interno
Partículas más grandes entre partículas
Fibras de la matriz
polimérica

Volumen de intersticio
entre partículas

Representación de un lecho comatográfico formado por micropartículas porosas como las

empleadas en cromatografía de exclusión molecular.
 Cromatografía de
Intercambio Iónico

En este tipo de Cromatografía la

F.E tiene grupos cargados que
interaccionan
electroestáticamente con iones
de signo contrario de la fase móvil.
 En el caso de los
intercambiadores
catiónicos, las proteínas con
carga neta negativa se
desplazan más rápido y
eluyen antes.
Partículas poliméricas con grupos
funcionales cargados negativamente

Se añade la mezcla de proteínas a la columna

que contiene intercambiadores de cationes

Las proteínas se desplazan a través de la columna a velocidades determinadas por su

carga neta al pH que se esta utilizando.
 La cromatografía de
Cromatografía afinidad permite la
por Afinidad separación de mezclas
proteicas por su afinidad o
capacidad de unión a un
determinado ligando

LECTINAS COFACTORES

INHIBIDORES
ENZIMATICOS ANTICUERPOS

LIGANDO DE AFINIDAD
 LIGANDO DE AFINIDAD

MOLÉCULAS BIOQUÍMICAS RESPONSABLES DE LA RETENCION ESPECIFICA

DE LOS SOLUTOS- ANALITICOS ,( PROTEINAS).

NATURALEZA ACCION

acromoléculas biológicas o Ligando específicos Ligando

moléculas de bajo peso generales
molecular Biomolèculas pequeñas o
macromoléculas bioquímicas Lectinas y
Anticuerpo nucleótidos
Características
de la CAMPO DE APLICACIÓN RESTRINGIDO
Cromatografía
de Afinidad
SEPARACIÓN DE UN SOLUTO ANALÍTICO
( PROTEÍNA)

ALTA SELECTIVIDAD EN EL MECANISMO DE RETENCIÓN