Journal of Biorepository Science para AppliedMedicine
acceso abierto a la investigación científica y médica
Artículo de texto completo de acceso abierto
Métodos para extraer ADN genómico de muestras de
sangre total: perspectivas actuales
Diego Chacón-Cortes
Lyn R Griffiths
Centro de Investigación en Genómica, Instituto de
Salud e Innovación Biomédica, Universidad
Tecnológica de Queensland, Kelvin Grove, QLD,
Australia
Correspondencia: Lyn R Griffiths Genomics
Research Center, instituto de salud e
innovación biomédica, Queensland University
of Technology, 60 Musk Avenue, Kelvin Grove
4059, QLD, Australia
Tel +61 7 3138 6102 Fax
+61 7 3138 6039
correo electrónico lyn.griffiths@qut.edu.au
envíe su manuscrito | www.dovepress.com
Paloma prensa
http: //dx.doi.org/10.2147/BSAM.S46573
Paloma prensa
Revisión
Resumen: La extracción de ácido desoxirribonucleico (ADN) ha evolucionado considerablemente desde que se realizó inicialmente en 1869.
Es el primer paso necesario para muchas de las aplicaciones posteriores disponibles que se utilizan en el campo de la biología molecular.
Las muestras de sangre total son una de las principales fuentes utilizadas para obtener ADN, y hay muchos protocolos diferentes disponibles
para realizar la extracción de ácido nucleico en dichas muestras. Estos métodos varían desde protocolos manuales muy básicos hasta
métodos más sofisticados incluidos en protocolos de extracción de ADN automatizados. Basándose en la amplia gama de opciones
disponibles, sería ideal determinar las que funcionan mejor en términos de rentabilidad y eficiencia de tiempo. Hemos revisado el historial de
extracción de ADN y los métodos más utilizados para la extracción de ADN de muestras de sangre completas, destacando sus ventajas y
desventajas individuales. También se realizaron búsquedas en la literatura científica actual para encontrar estudios que compararan
diferentes métodos de extracción de ácidos nucleicos, para determinar la mejor opción disponible. Con base en nuestra investigación, hemos
determinado que no hay suficiente evidencia científica para respaldar un método de extracción de ADN en particular a partir de muestras de
sangre total. La elección de un método adecuado sigue siendo un proceso que requiere la consideración de muchos factores diferentes, y se
necesita más investigación para validar las elecciones realizadas en las instalaciones de todo el mundo. hemos determinado que no hay
suficiente evidencia científica para respaldar un método de extracción de ADN en particular a partir de muestras de sangre total. La elección
de un método adecuado sigue siendo un proceso que requiere la consideración de muchos factores diferentes, y se necesita más
investigación para validar las elecciones realizadas en las instalaciones de todo el mundo. hemos determinado que no hay suficiente evidencia científica para respa
Palabras clave: extracción de ADN genómico, muestras de sangre completa, extracción de ADN en solución, extracción de ADN en
fase sólida, rentabilidad, eficiencia de tiempo
Introducción
Los estudios de salud humana en el campo de la biología molecular requieren el uso de ácido desoxirribonucleico
(ADN), ácido ribonucleico (ARN) y muestras de proteínas. El uso exitoso de las aplicaciones posteriores disponibles
se beneficiará del uso de ADN de alta calidad y gran cantidad. Por lo tanto, la extracción de ácidos nucleicos es un
paso clave en los procedimientos de laboratorio necesarios para realizar más aplicaciones de investigación
molecular. Es fundamental elegir un método de extracción adecuado y hay que tener en cuenta algunas
consideraciones al evaluar las opciones disponibles. Estos pueden incluir requisitos técnicos, eficiencia de tiempo,
rentabilidad, así como las muestras biológicas que se utilizarán y sus requisitos de recolección y almacenamiento. 1
La sangre total es una de las muchas fuentes disponibles para obtener ADN genómico (ADNg) y se ha utilizado
ampliamente en instalaciones de todo el mundo. Por tanto, nos centraremos en los protocolos de extracción de ADN
utilizando muestras de sangre total. Los problemas relacionados con la recolección, el almacenamiento y la manipulación
manual de muestras de sangre humana total escapan al alcance de esta publicación y no estarán cubiertos. Sin embargo,
son importantes y deben tenerse en cuenta, ya que podrían tener un impacto potencial en el rendimiento y el éxito de
cualquier técnica de extracción de ADN elegida.
Journal of Biorepository Science for Applied Medicine 2014: 2 1–9 1
© 2014 Chacon-Cortes y Griffiths. Este trabajo es publicado por Dove Medical Press Limited y tiene una licencia Creative Commons Attribution - Non Commercial (unported, v3.0)
License. Los términos completos de la licencia están disponibles en http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/. Los usos no comerciales de la obra están permitidos sin más
permiso de Dove Medical Press Limited, siempre que el trabajo se atribuya correctamente. Los permisos más allá del alcance de la Licencia son administrados por Dove Medical Press Limited. Puede encontrar
información sobre cómo solicitar permiso en: http://www.dovepress.com/permissions.php
Chacon-Cortes y Griffiths
Desarrollo inicial de técnicas de
extracción de ADN
Friedrich Miescher fue el primer científico en aislar el ADN mientras estudiaba
la composición química de las células. En 1869, utilizó leucocitos que recogió
de las muestras en vendajes quirúrgicos frescos y realizó experimentos para
purificar y clasificar las proteínas contenidas en estas células. Durante sus
experimentos identificó una sustancia novedosa en los núcleos, a la que llamó
“nucleína”. 2 Luego desarrolló dos protocolos para separar los núcleos de las
células del citoplasma y aislar este nuevo compuesto, hoy conocido como ADN,
que se diferenciaba de las proteínas y otras sustancias celulares. Este hallazgo
científico, junto con los protocolos de aislamiento utilizados, fue publicado en
1871 en colaboración con su mentor, Felix Hoppe-Seyler. 2,3
Sin embargo, no fue hasta 1958 que Meselson y Stahl 3,4
desarrolló un procedimiento de laboratorio de rutina para la extracción de ADN.
Realizaron extracción de ADN de muestras bacterianas de
Escherichia coli utilizando un protocolo de centrifugación en gradiente de densidad de
sal. Desde entonces, las técnicas de extracción de ADN se han adaptado para realizar
extracciones en muchos tipos diferentes de fuentes biológicas.
Los métodos de extracción de ADN siguen algunos procedimientos comunes
destinados a lograr una ruptura eficaz de las células, la desnaturalización de
complejos de nucleoproteínas, la inactivación de nucleasas y otras enzimas, la
eliminación de contaminantes biológicos y químicos y, finalmente, la precipitación del
ADN. 5 La mayoría de ellos siguen pasos básicos similares e incluyen el uso de
reactivos orgánicos y no orgánicos y métodos de centrifugación. Finalmente, se han
convertido en una variedad de procedimientos automatizados y kits disponibles
comercialmente. 1,5–7
Inicialmente, discutiremos los protocolos y pasos destinados a lograr la lisis
celular, inactivación de enzimas celulares, desnaturalización de complejos
celulares y precipitación de ADN, que requieren procedimientos y / o reactivos
similares durante la extracción de ADN de muestras de sangre total. Las
diferencias clave en los pasos que tienen como objetivo eliminar contaminantes
biológicos y químicos se destacarán cuando analicemos cada protocolo en detalle.
Como se mencionó anteriormente, la lisis de células es un paso común en la
mayoría de los protocolos de extracción de ADN, y comúnmente se logra mediante el
uso de detergentes y enzimas. El dodecilsulfato de sodio (SDS) y Triton ™ X-100
(Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE. UU.) Son ejemplos de detergentes populares que se
utilizan para solubilizar las membranas celulares. Las enzimas también se combinan con
detergentes para atacar la superficie celular o los componentes citosólicos. La proteinasa
K es una enzima de uso común que se utiliza en varios protocolos para escindir las
glicoproteínas e inactivar las ARNasas y las ADNasas. Otros desnaturalizantes como la
urea, las sales de guanidinio y los caótropos químicos han
2 envíe su manuscrito | www.dovepress.com
Paloma prensa
Paloma prensa
también se ha utilizado para alterar las células e inactivar las enzimas celulares, pero
estas pueden afectar la calidad y el rendimiento de ácido nucleico. 1,7–9
La precipitación del ADN se logra agregando altas concentraciones de sal a las
soluciones que contienen ADN, ya que los cationes de las sales como el acetato de
amonio contrarrestan la repulsión causada por la carga negativa de la cadena
principal de fosfato. Mezcla de ADN y sales en presencia de solventes como el etanol
(concentraciones finales del 70% –80%) o isopropanol (concentraciones finales del
40% al 50%) hacen que los ácidos nucleicos precipiten. Algunos protocolos incluyen
pasos de lavado con etanol al 70% para eliminar el exceso de sal del ADN.
Finalmente, los ácidos nucleicos se resuspenden en agua o tampón TE (Tris 10 mM,
ácido etilendiaminotetraacético [EDTA] 1 mM). 7-9 El tampón TE se usa comúnmente
para el almacenamiento de ADN a largo plazo porque evita que se dañe por
nucleasas, pH inadecuado, metales pesados y oxidación por radicales libres. Tris
proporciona un pH seguro de 7-8 y el EDTA quela los iones divalentes utilizados en la
actividad nucleasa y contrarresta el daño oxidativo de los metales pesados. 9
Principales tipos de muestras de sangre para
métodos de la totalidad humana
extracción de ADN
La Tabla 1 muestra las principales categorías y subcategorías de métodos de
extracción de ADN de muestras de sangre completa que se utilizan generalmente en
instalaciones de investigación en todo el mundo. Los reactivos de laboratorio
comúnmente utilizados para cada etapa del protocolo de extracción de ácido nucleico
se incluyen en esta tabla para resaltar las similitudes y diferencias entre ellos.
Las técnicas de extracción de ADN incluidas en la Tabla 1 se analizarán con
más detalle en las siguientes secciones, junto con un breve resumen de la historia y
los antecedentes de la técnica. En los últimos años, algunos de estos protocolos se
han adaptado a microdispositivos que desarrollan sistemas miniaturizados de
análisis químico total o microchips de análisis genético de microfluidos. 7,10
Sin embargo, limitaremos el alcance de nuestra revisión a aquellas técnicas que están
disponibles para la extracción de ácidos nucleicos a macroescala.
Métodos de extracción de ADN basados en soluciones
Como se mencionó anteriormente, los protocolos basados en soluciones tienen dos
enfoques principales: 1) métodos basados en soluciones que utilizan disolventes
orgánicos y 2) aquellos basados en una técnica de salazón. A continuación se
describen con más detalle ambos métodos.
Extracción de ADN basada en solución
métodos que utilizan disolventes orgánicos
Protocolos de extracción de ADN que utilizan disolventes orgánicos derivados
originalmente de una serie de métodos de extracción de ARN relacionados.
Journal of Biorepository Science for Applied Medicine 2014: 2
Paloma prensa Métodos de extracción de ADN

tabla 1 Métodos de extracción de ADN comúnmente utilizados para la extracción de muestras de sangre completa.

Extracción de ADN Extracción de ADN Etapa del protocolo de extracción de ADN

método (principal método Lisis celular Desnaturalización de nucleoproteínas / Eliminación de ADN

categoría) (subcategoría) inactivación de enzimas celulares contaminantes precipitación

Basado en soluciones Salar • SDS • Proteinasa K • Acetato de potasio • etanol

Extracción de ADN métodos • SDS / proteinasa K • Polvo de lavandería • Acetato sódico • isopropanol
métodos • Triton X-100 • Cloruro de sodio
Disolvente orgánico/ • SDS • Tiocianato de guanidina • Fenol • Acetato sódico/
caotropos • SDS / proteinasa K • Fenol • Fenol-cloroformo etanol
métodos • Fenol-cloroformo, • Acetato sódico/
alcohol isoamílico isopropanol
Fase sólida Vaso de leche / sílice • SDS • Tiocianato de guanidina • Leche de vidrio (sílice en • etanol
Extracción de ADN métodos de resina • Triton X-100 tampón caotrópico) • isopropanol
métodos • Matriz de sílice

• Tierra de diatomeas
Intercambio de aniones • Calor • Chelex • Chelex • N/A

métodos • Chelex / proteinasa K

Cuentas magnéticas • SDS • N/A • Cloruro de sodio/ • Cuentas magnéticas

métodos polietilenglicol

Abreviaturas: ADN, ácido desoxirribonucleico; N / A, no aplica; SDS, dodecilsulfato de sodio.

Algunos de los pasos principales usados en estos métodos son: 1) lisis celular tales como acetato de sodio y etanol o isopropanol en proporciones 2: 1 o 1: 1. El

realizada agregando una solución que contiene detergente / caotrópico, exceso de sal se puede eliminar agregando etanol al 70% y la muestra luego se

incluyendo SDS o N-Lauroil sarcosina; 2) inactivación de DNasas y RNasas, centrifuga para recolectar el sedimento de ADN, que se puede resuspender en

normalmente mediante el uso de disolventes orgánicos; 3) purificación de ADN y agua destilada estéril o tampón TE (Tris 10 mM; EDTA 1 mM pH 8.0). 1,5

eliminación de ARN, lípidos y proteínas; y 4) resuspensión de ácidos nucleicos

extraídos. 1,5,11 Debido a que estas técnicas involucran el uso de solventes orgánicos tóxicos y

corrosivos, la seguridad es una preocupación principal. Se requiere equipo de protección

Este método se desarrolló inicialmente en 1977 cuando Ullrich et al personal, medidas de seguridad que impliquen el uso de una capucha de riesgo

utilizaron una técnica de extracción de ARN con isotiocianato de guanidio. 12 para biológico y capacitación. Es necesario equilibrar el fenol-cloroformo a un pH adecuado y

aislar el ADN plasmídico. Esta técnica fue posteriormente modificada por optimizar las condiciones del protocolo. 7 En un esfuerzo por mejorar la seguridad y la

Chirgwin et al. 13 en 1979. Requirió el uso de tiocianato de guanidio y largas facilidad de uso de estos protocolos, se han introducido ciertas modificaciones para

horas de ultracentrifugación a través de un colchón de cloruro de cesio. En un evitar el contacto físico con disolventes. Estos incluyen la incorporación de un polímero

esfuerzo por mejorar este método, Chomczynski y Sacchi 14,15 de gel de sílice. dieciséis o reemplazar los solventes con otras sustancias como el alcohol

bencílico. 17

desarrolló en 1987 un protocolo para la extracción de ARN utilizando tiocianato

de guanidio-fenol-cloroformo y mucho más corto

centrifugación. Este último protocolo de extracción de ARN logró aislar ARN, Extracción de ADN basada en solución
ADN y proteínas, pero para ser utilizado como técnica de extracción de ADN, el métodos que utilizan la salazón
tiocianato de guanidio-fenol-cloroformo fue reemplazado posteriormente por una También se han desarrollado a lo largo de los años algunas técnicas de extracción de
ácidos nucleicos que evitan el uso de disolventes orgánicos. 1,6,11
mezcla de fenol, cloroformo y alcohol isoamílico, como el primero. El disolvente

no inhibió completamente la actividad de la ARNasa. 11 El fenol es un ácido En 1988, Miller et al 18 publicó un protocolo que logró la purificación del ADN

carbólico que desnaturaliza las proteínas rápidamente, pero es altamente mediante precipitación de proteínas a alta concentración de sal. El protocolo

corrosivo, tóxico e inflamable. Este disolvente orgánico se suele añadir a la tradicional implica la ruptura celular inicial y la digestión con SDS-proteinasa K,

muestra y luego, mediante fuerza centrífuga, se obtiene una emulsión bifásica. seguida de la adición de altas concentraciones de sales, generalmente cloruro de

La capa hidrófila superior contiene ADN diluido y la capa hidrófoba inferior está sodio 6 M. A continuación, la mezcla se centrifuga para permitir que las proteínas

compuesta de disolventes orgánicos, restos celulares, proteínas y otros se precipiten al fondo, y el sobrenadante que contiene ADN se transfiere a un

compuestos hidrófobos. Luego, el ADN se precipita después de la centrifugación nuevo vial. A continuación, el ADN se precipita usando etanol o isopropanol de la

agregando altas concentraciones de sal, misma manera que se describe para los métodos con disolventes orgánicos. 1,18-20

Journal of Biorepository Science for Applied Medicine 2014: 2 envíe su manuscrito | www.dovepress.com
3
Paloma prensa
Chacon-Cortes y Griffiths
Sin embargo, el uso de proteinasa K puede llevar mucho tiempo y ser
costoso en comparación con otros reactivos utilizados en diferentes enfoques
basados en soluciones, por lo que ha habido algunos intentos de encontrar
reactivos alternativos para la desproteinización del ADN. 21-24 En 1991, Lahiri y
Nurnberger 21 desarrolló un protocolo de extracción de ADN de muestras de sangre
que eliminó el uso de solventes orgánicos y la incubación prolongada con
proteinasa K. Su protocolo utilizó Nonidet ™ P-40 (NP-40; Sigma-Aldrich, St Louis,
MO, EE. UU.) para lisar células sanguíneas y tampones con alto contenido de sal
y SDS al 10% para inactivar y eliminar contaminantes. Otro protocolo es el método
de salazón modificado publicado en 2005 por Nasiri et al, 25 que reemplazó la
digestión con proteinasa K con el uso de polvo para lavar. Esta técnica modificada
se ha utilizado con éxito como protocolo de extracción de ADN en muchas
instalaciones de todo el mundo. 26–34
Métodos de extracción de ADN en fase sólida
La purificación del ADN mediante el método de fase líquida / sólida se
remonta a 1979, cuando Vogelstein y Gillespie 35
utilizaron sílice en forma de polvo de vidrio en su protocolo para purificar fragmentos de
ADN previamente separados por electroforesis en gel de agarosa. Los métodos de
extracción en fase sólida para la extracción de ADN de muestras de sangre fueron
descritos inicialmente en 1989 por McCormick, 36 quien publicó una técnica que utiliza
partículas insolubles de base silícea, químicamente similares al fenol, que interactúan
con las proteínas para permitir la purificación del ADN. Desde entonces, se han
desarrollado varios procedimientos diferentes que utilizan el enfoque de extracción de
ADN líquido / sólido y se utilizan en la mayoría de los kits de extracción disponibles
comercialmente.
Estas técnicas absorberán ADN bajo condiciones particulares de pH y contenido
de sal a través de cualquiera de los siguientes principios: 1) unión de hidrógeno en
presencia de un agente caotrópico a una matriz hidrófila, 2) intercambio iónico usando
un intercambiador de aniones en condiciones acuosas, y 3) mecanismos de exclusión
de afinidad y tamaño. 5,7 La mayoría de estos métodos siguen una serie de pasos
similares para lograr la rotura celular, la adsorción del ADN, el lavado del ácido
nucleico y la elución final. La mayoría de las técnicas de fase sólida utilizan una
columna de rotación para unir el ácido nucleico bajo fuerza centrífuga. Las columnas
de centrifugado están hechas de matrices de sílice, partículas de vidrio o polvo, tierra
de diatomeas o portadores de intercambio aniónico, y estos compuestos generalmente
deben acondicionarse usando soluciones tampón a un pH específico para convertirlos
en la forma química requerida. Las células sanguíneas previamente degradadas
usando tampones de lisis particulares se aplican a las columnas y se centrifugan, y el
ADN se une a la columna con la ayuda de las condiciones de concentración de sal y
pH proporcionadas por las soluciones de unión. Algunas proteínas y otros compuestos
bioquímicos también pueden unirse a la columna y
4 envíe su manuscrito | www.dovepress.com
Paloma prensa
Paloma prensa
posteriormente se eliminan utilizando tampones de lavado que contienen agentes
competitivos durante una serie de pasos de lavado. Finalmente, el ADN se eluye en agua
destilada estéril o tampón TE. 1,5,7
Métodos de extracción de ADN utilizando sílice
y matrices de sílice.
Las matrices de sílice tienen propiedades únicas para la unión al ADN. Están
cargadas positivamente y tienen una alta afinidad hacia la carga negativa de la
columna vertebral del ADN. Las condiciones de sal y pH altos se logran utilizando
cationes de sodio, que se unen estrechamente al oxígeno cargado negativamente
en la cadena principal de fosfato del ADN. Los contaminantes se eliminan con una
serie de pasos de lavado, seguidos de elución del ADN a baja fuerza iónica (pH $ 7)
usando tampón TE o agua destilada estéril. Clontech Laboratories, Inc., Mountain
View, CA, EE. UU. (NucleoSpin ™) fabrica kits disponibles comercialmente que
utilizan un enfoque basado en sílice; MO BIO Laboratories, Inc., Carlsbad, CA, EE.
UU. (UltraClean ® BloodSpin ®); QIAGEN Pty Ltd, Victoria, Australia (QIAamp ®), Promega
Corporation, Fitchburg, WI, EE. UU. (Asistente ®); EpochLife Science, Missouri City,
TX, EE. UU. (EconoSpin ®); y Sigma-Aldrich, St Louis, MO, EE. UU. (GenElute ™),
entre otros. En estos protocolos, las muestras de sangre se incuban durante unos
minutos con un tampón de lisis. La mayoría de los protocolos tardan entre 40
minutos y 1 hora en completarse, lo que produce altos rendimientos de ADN con
una contaminación mínima. 1,5,7
Una sustancia que contiene altas cantidades de sílice (hasta un 94%) conocida
como tierra de diatomeas, diatomita o tierra de diatomeas también se ha utilizado
para la purificación del ADN. Inicialmente fue descrito por Boom et al. 8 en 1990. Se
une al ADN en presencia de agentes caotrópicos, seguido de un lavado con un
tampón que contiene alcohol, y finalmente el ADN se eluye en un tampón bajo en
sal o agua destilada estéril. Preparación cuántica ® ( Bio-Rad Laboratories, Hercules,
CA, EE. UU.) Es un ejemplo de un producto de extracción de ADN desarrollado con
tierra de diatomeas. 7
Los kits de extracción de ADN también han evolucionado y se incorporan en
equipos semiautomáticos y totalmente automatizados capaces de realizar protocolos
desde la lisis de muestras hasta algunas aplicaciones posteriores como la reacción en
cadena de la polimerasa (PCR), como BioRobot EZ1 ® Avanzado (QIAGEN) y Biomek ® 4000
Laboratorio Automatización Estación de trabajo (BeckmanCoulter, Inc.,
Brea, CA, EE. UU.), Entre otros. Entre las ventajas de estos dispositivos se
encuentran un menor riesgo de errores de pipeteo, un número reducido de
transferencias de muestras y un tiempo de protocolo menor. Sin embargo, deben
considerarse cuidadosamente, dado el alto costo de algunas de las opciones
disponibles de equipos. También se han incorporado a sistemas miniaturizados de
análisis químico total, que son microchips de silicio, donde se logra la separación y
detección de la purificación del ADN. 7
Journal of Biorepository Science for Applied Medicine 2014: 2
Paloma prensa Métodos de extracción de ADN

Extracción de ADN mediante resinas de Las partículas magnéticas están formadas por uno o varios núcleos

intercambio aniónico magnéticos, como magnetita (Fe O) o maghemita (gamma Fe O), recubiertos
34

Las sustancias químicas con carga positiva capaces de unirse a ácidos nucleicos o con una matriz de polímeros, sílice o hidroxiapatita con grupos terminales
23

contaminantes o enzimas con carga negativa, como las nucleasas, se denominan funcionalizados. En el protocolo desarrollado por Saiyed et al, 42,43 30 µ L de

resinas de intercambio aniónico y también se han utilizado como parte de los sangre completa se mezcla con un volumen igual de solución SDS al 1% (peso

protocolos de extracción de ADN de muestras de sangre. 9 / volumen [p / v]). El tubo se mezcla por inversión dos o tres veces y se incuba

a temperatura ambiente durante 1 minuto. Se añaden diez microlitros de

Chelex ® La resina 100 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EE. UU.) Está
nanopartículas magnéticas a esta mezcla, seguido de la adición de 75 µ L de

hecha de copolímeros de estireno y divinilbenceno que contienen pares de iones

tampón de unión (cloruro de sodio 1,25 M y polietilenglicol 6000 al 10%). La

iminodiacetato. Se utiliza en protocolos de extracción de ADN como resina de solución se mezcla por inversión y se deja reposar durante 3 minutos a

intercambio iónico quelante que se une a iones metálicos polivalentes, como las temperatura ambiente, y el sedimento magnético se inmoviliza utilizando un

nucleasas, que se utilizan comúnmente en la extracción de ADN de muestras imán externo para descartar el sobrenadante. El sedimento magnético se lava

forenses. El protocolo de laboratorio inicial, utilizando sangre como fuente biológica, con etanol al 70% y se seca. El gránulo magnético se resuspende en 50 µ L de

fue descrito por Walsh et al. 37 en 1991. Sobre la base de este enfoque inicial, se han tampón TE y las partículas magnéticas unidas al ADN se eluyen mediante

desarrollado otros protocolos para realizar la extracción de ácido nucleico de incubación a 65ºC. ° C con agitación continua. 42,43

muestras de sangre completa. Requieren pequeños volúmenes de muestra (menos

de 1 ml de sangre) y generalmente se realizan en una reacción de un solo tubo con

diferentes pasos y reactivos involucrados. Las muestras de sangre se pueden lisar

usando proteinasa K y / o incubación a alta temperatura, y la eliminación de

contaminantes se logra agregando Chelex ® Elegir el protocolo adecuado

El método de extracción ideal debe cumplir con los siguientes criterios: debe ser

sensible, consistente, rápido y fácil de usar, y dependiendo del país en el que se

100 resina, que los precipita. Se obtiene ADN monocatenario que permanece utilice, puede ser importante minimizar el equipo especializado o el conocimiento

suspendido en el sobrenadante, que puede usarse inmediatamente en la bioquímico. También debería suponer un riesgo mínimo para los usuarios, así como

aplicación posterior o puede transferirse a un nuevo vial para su evitar la posible contaminación cruzada de las muestras. Finalmente, y lo que es

almacenamiento a largo plazo. 37–39 más importante, la técnica de extracción de ADN elegida debería poder entregar

muestras de ADN puro listas para ser utilizadas en aplicaciones moleculares

Seligson y col. 40 utilizaron materiales de intercambio aniónico como parte de su
posteriores. 7,8,44
invención para aislar muestras de ácido nucleico de una variedad de fuentes, incluidas

muestras de sangre completa. El protocolo de Seligson et al utiliza una columna que

contiene una resina con grupos de dietilaminoetil celulosa cargados positivamente en La calidad y cantidad de ADN genómico extraído de muestras de sangre es una

su superficie para unir fosfatos cargados negativamente de la columna vertebral del característica clave que la mayoría de las instalaciones consideran al elegir un

ADN. La fuerza de la unión del ADN a la columna, así como el ARN y otras impurezas, protocolo. La medición de la absorbancia de la luz ultravioleta mediante

se puede alterar mediante concentraciones de sal y condiciones de pH de los espectrofotometría a diferentes longitudes de onda (230 nm, 240 nm, 260 nm y 280 nm)

tampones utilizados en este protocolo de aislamiento de ácidos nucleicos. Los es una forma inicial rápida y eficiente de determinar la pureza y concentración de las

contaminantes como proteínas y ARN se pueden lavar de la columna que contiene muestras de ácido nucleico. La concentración generalmente se calcula a partir de la

ADN utilizando tampones de sal media. 5,40 lectura de absorbancia del ADN a 260 nm usando la ley de Beer-Lambert. La pureza de

las muestras de ácido nucleico se evalúa en una proporción de absorbancia de

260/280, y los valores en el rango de 1.8 a 2.0 generalmente se consideran aceptables.

Las relaciones de absorbancia 260/230 entre 2,0 y 2,2 también se consideran

Métodos de extracción de ADN adecuadas como medida secundaria de pureza del ADN. 11,45–47

usando perlas magnéticas

Las técnicas de extracción de ácidos nucleicos que utilizan separación magnética han

ido surgiendo desde principios de la década de 1990. Fueron utilizados originalmente Lahiri y col. 44 publicaron un estudio en 1991 en el que compararon diez

para extraer ADN plasmídico de lisados de células bacterianas por Hawkins et al. 41 en métodos de extracción basados en soluciones para la extracción de ADN

1994 y en 2006 por Saiyed et al, 42,43 quien desarrolló y validó un protocolo utilizando utilizando sangre completa como fuente. Compararon un protocolo desarrollado

nanopartículas magnéticas desnudas para la extracción de ADN genómico de muestras previamente por su grupo (método 10a y 10b), 21 que no requirió el uso de

de sangre completa. disolventes orgánicos o digestión enzimática, frente a otros nueve métodos

previamente

Journal of Biorepository Science for Applied Medicine 2014: 2 envíe su manuscrito | www.dovepress.com
5
Paloma prensa
Chacon-Cortes y Griffiths Paloma prensa

publicado y utilizado para la extracción de ADN de la sangre. En su estudio, Lahiri et al. 44 Choque térmico por microondas, extracción de ADN con Wizard Genomic

extrajo muestras de sangre total de cinco individuos por triplicado utilizando los DNA Purification Kit (Promega Corporation), separación magnética (LC

métodos antes mencionados. Determinaron la concentración de ADN a partir de MagNA Pure Compact Instrument; Roche Diagnostics GmbH, Manheim,

muestras usando lectura de absorbancia por espectrofotometría a 260 nm y evaluaron Alemania) tanto manual como parcialmente automatizada con el procesador

la calidad a través de una relación de absorbancia de 260/280 y electroforesis en gel de de muestras de microplacas Precision ™ XS de Biotek Instruments (Vermont,

agarosa, así como la restricción de la digestión enzimática y la transferencia Southern. EE. UU.), Y finalmente modificaron el Wizard SV 96 Genomic DNA Purification

En la Tabla 2 se presenta un resumen de algunas de las características del protocolo, Kit (Promega Corporation), combinándolo con separación magnética mediante

así como de los hallazgos. el método de purificación MagNA Pure. Extrajeron 96 muestras de sangre y

utilizaron 100 µ L como volumen inicial. Sin embargo, no mencionaron cuántas

Todos los protocolos probados fueron capaces de aislar ADN con una pureza muestras se extrajeron con cada método y el número de repeticiones

relativamente buena (proporciones 260/280 de 1,7 a 1,94), pero el ADN obtenido con experimentales realizadas. Sus resultados mostraron ADN extraído para cada

los métodos 2, 5 y 6 mostró diferentes cantidades de degradación evidenciadas en la protocolo con concentraciones finales que oscilan entre 0,50 µ gramo/ µ L hasta

electroforesis en gel. Siete de los protocolos probados, los métodos 3-9, requerían el 0,98 µ gramo/ µ L. Aunque el fenol-cloroformo, la separación magnética manual

uso de disolventes orgánicos y / o sustancias peligrosas como fenol-cloroformo o y el método combinado Promega-MagNA Pure mostraron concentraciones de

cloroformo. Los métodos 1 y 2 no utilizaron compuestos orgánicos, pero el método 1 ADN relativamente similares (0,72-0,79 µ gramo/ µ L), la técnica de separación

fue el que consumió más tiempo. Se requirió incubación durante la noche con magnética y microondas logró las concentraciones de ADN más altas y más

proteinasa K, un problema resuelto en el protocolo 2 al incubar muestras durante 30 bajas, 0.98 µ gramo/ µ L y

minutos con proteinasa K y RNasaA, lo que redujo el tiempo de extracción de ADN a

5 horas. El método 10 (versión ayb) fue el más rápido de todos los métodos de

aislamiento de ADN (1 hora) y eliminó la digestión enzimática y el uso de disolventes

orgánicos / sustancias peligrosas. Ambas versiones de este protocolo pudieron 0,50 µ gramo/ µ L, respectivamente. En sus comparaciones, establecieron cinco

recuperar rendimientos de ADN similares o más altos que los otros protocolos categorías para simplificar la extracción: extremadamente simple, simple, menos

probados, con proporciones aproximadamente 260/280 comparables. Según los simple, más simple y difícil, pero su sistema puede ser confuso porque no

hallazgos de su estudio, Lahiri et al. 44 pudieron concluir que el método de extracción presentaron los criterios utilizados para cada categoría. Sin embargo, clasificaron

de ADN que desarrollaron era el más rápido y seguro de los métodos basados en el fenol-cloroformo como difícil y el MagNA Pure automatizado como

solución probados, recuperando ADN de calidad y cantidad comparables. extremadamente simple, utilizando su sistema de categorías mencionado

anteriormente. También tienen cinco categorías para el costo de cada protocolo,

con la técnica automatizada MagNA Pure como la más cara y el microondas como

el método más económico. Sus categorías de costos tampoco fueron definidas y

no hay mención real de costos específicos para cada método en su estudio. Con

Abd El-Aal y col. 48 comparó una combinación de métodos de extracción base en los hallazgos mencionados anteriormente, concluyeron que la separación

manuales y automatizados para la extracción de ADN de muestras de sangre magnética mediante un protocolo automatizado

completa. Su estudio incluyó seis técnicas: purificación de fenol-cloroformo,

extracción de ADN utilizando

Tabla 2 Resumen del estudio comparativo de métodos de extracción de ADN por Lahiri et al.

Método Enzima Peligroso ARNasa Hora 260/280 ADN

digestión reactivos tratamiento (horas) proporción rendimiento ( μ gramo)

10 a No No No 1 1,81 210
10b No No No 1 1.8 175
6 si si No 6 1,94 174
9 No si No 3 1,7 170
7 si si No 6 1,81 147
3 si si si 3 1,81 135
2 si No si 5 1,7 95
8 si si No Durante la noche 1,74 130
1 si No No Durante la noche 1,75 116
5 si si No Durante la noche 1,72 75
4 si si No Durante la noche 1,72 55

Nota: Reimpreso de Métodos de J Biochem Biophys 1992; 25 (4). Lahiri DK, Bye S, Nurnberger Ji Jr, Hodes Me, Crisp M. Un método de extracción no orgánico y no enzimático proporciona mayores rendimientos de ADN
genómico de muestras de sangre total que otros nueve métodos probados. 193-205. Copyright © 1992, con permiso de elsevier. 44

Abreviaturas: ADN, ácido desoxirribonucleico; ARNasa, ácido ribonucleico.

6 envíe su manuscrito | www.dovepress.com

Journal of Biorepository Science for Applied Medicine 2014: 2
Paloma prensa
Paloma prensa Métodos de extracción de ADN

Tabla 3 Resumen de los resultados del estudio comparativo sobre técnicas de extracción de ADN de Lee et al.

Método de extracción de ADN Media corregida Concentración de ADN Media 260/280 Rango 260/280
Concentración de ADN rango (min-max) proporción ± Dakota del Sur (mínimo máximo)

(ng / μ L) ± Dakota del Sur

QiAamp ® Blood Mini Kit (QiAGeN, Hilden, 25.42 ± 8.82 13.49–52.85 1,84 ± 0,09 1.59–2.04
Alemania) con QiAcube ®

Ácido nucleico MagNA Pure LC 22,66 ± 7.24 9.59–46.70 1,88 ± 0,08 1.6–1.97
Kit de aislamiento i con MagNA Pure LC (Roche
Diagnostics GmbH, Mannheim, Alemania)
Magtration-Magnazorb DNA Common 22.35 ± 6,47 12.57–35.08 1,70 ± 0,08 1,56–1,90
Kit-200N con Magtration System 12GC (Precision System
Science Co, Ltd, Tokio, Japón)

Nota: Reproducido de Lee JH, Park Y, Choi JR, Lee eK, Kim HS. Comparaciones de tres sistemas automatizados para la extracción de ADN genómico en un laboratorio de diagnóstico clínico.
Yonsei Med J. 2010; 51 (1): 104–110. 49
Abreviaturas: ADN, ácido desoxirribonucleico; min, mínimo; max, maximo; DE: desviación estándar.

se desempeñó mejor en términos de simplicidad de extracción, pureza del como el uso de compuestos tóxicos, el costo por muestra y el tiempo requerido, se

ADN extraído y velocidad, a pesar de que es el que tiene el costo más alto.
También llegaron a la conclusión de que era fundamental optimizar cualquier
método elegido y recomendaron el uso de la separación magnética, ya que
requería un mínimo de material de partida y era rentable y fácil de usar. Sin
embargo, como se indicó anteriormente, no se menciona cómo se determinó
la rentabilidad. 48
muestra en la Tabla 4.
Basado en los métodos incluidos en la Tabla 4, se puede observar que el
método basado en perlas magnéticas es el protocolo de extracción de ADN más
rápido, requiriendo más de 30 minutos para ser ejecutado, mientras que todos los
otros protocolos requieren más de 3 horas. Además, el método basado en perlas
magnéticas es el más caro, con un costo de más de US $ 5 por muestra extraída.

Esta revisión de las diferencias al comparar calidad y cantidad de ácido nucleico

Lee et al 49 extrajo ADN de 22 muestras de sangre total utilizando tres aislado para cada método. 1

sistemas de extracción automatizados. Los tres protocolos comparados se

basaron en técnicas de extracción en fase sólida: QIAamp ® Blood Mini Kit Chacon-Cortes et al 50 evaluó la rentabilidad y la eficiencia en el tiempo de tres

(QIAGEN, Hilden, Alemania) con QIAcube ®, que utiliza una membrana de técnicas de extracción de ADN disponibles a partir de muestras de sangre total: un

sílice y resinas dentro de una columna para unir ADN, y otros dos protocolos método tradicional de salazón, un método de salazón modificado y un kit disponible

que se basan en técnicas de aislamiento de ADN magnéticas MagNA Pure comercialmente basado en un método de extracción de ADN en fase sólida QIAamp ® ADNbloodmaxi

LCNucleicAcid Isolation Kit I con MagNA Pure LC (Roche Diagnostics GmbH,

Mannheim, Alemania) y MagtrationMagnazorbDNACommonKit-200N con el kits (QIAGEN ® PtyLtd, CliftonHill, VIC, Australia) .El protocolo de saltingout modificado 25 reemplazó

sistema de el paso de incubación de la muestra durante la noche del método tradicional de salazón, 18

necesario para la eliminación de contaminantes usando proteinasa K, con el uso de

12GC (Precision SystemScienceCo, Ltd, Tokio, Japón). La concentración de ADN se detergente para ropa para reducir el tiempo de extracción a aproximadamente 1 hora.

midió mediante espectrofotometría y la pureza se evaluó mediante una relación Cinco microlitros de sangre total de seis pacientes con cáncer de mama se

260/280, electroforesis de ADN en gel de agarosa y PCR. Se realizó un análisis

estadístico para validar los resultados del estudio, que se resumen en la Tabla 3.

Cuadro 4 Resumen de las características evaluadas para los métodos de extracción de ácido

Los resultados no mostraron diferencias estadísticas entre las concentraciones de desoxirribonucleico (ADN) revisados por Carpi et al.

ADN obtenidas entre los tres métodos comerciales, pero la pureza del ADN fue Extracción de ADN Tóxico Costo Hora
ligeramente más baja para el kit común de Magtration-Magnazorb DNA-200N en método compuestos estimación por necesario

comparación con los otros dos métodos. El ADN extraído fue de calidad similar según muestra (US $) (horas)

los resultados de la PCR y la electroforesis en gel de agarosa. Por lo tanto, Fenol-cloroformo Fenol, , 5 . 3
método cloroformo
concluyeron que la efectividad para todos los sistemas era equivalente y que todos
Método de gel de sílice Fenol, , 5 . 3
producían un aislamiento aceptable de ácidos nucleicos. 49
cloroformo
Método del alcohol bencílico Alcohol de bencilo , 5 . 3
Método de salazón Ninguna , 5 . 3
La tabla 4 fue adaptada de una revisión publicada por Carpi et al. 1 en 2011, donde
A base de perlas magnéticas Ninguna . 5 . 0,5
revisaron los métodos de extracción de ADN utilizados en una amplia gama de fuentes
método
biológicas, incluidos seis métodos utilizados en muestras de sangre completa. Un Nota: Copyright © 2011. Bentham Science Publishers. Carpi FM, Di Pietro F, vincenzetti S, Mignini F,
Napolioni v. Métodos de extracción de ADN humano: patentes y aplicaciones. Reciente Pat DNA Gene Seq. 2011;
resumen de las tres características evaluadas para los métodos de aislamiento de ácidos
5 (1): 1–7. Reimpreso con permiso de eureka Science Ltd. 1
nucleicos,

Journal of Biorepository Science for Applied Medicine 2014: 2 envíe su manuscrito | www.dovepress.com
7
Paloma prensa
Chacon-Cortes y Griffiths Paloma prensa

Cuadro 5 Resumen de resultados del estudio comparativo de métodos de extracción de publicado hasta la fecha. La extracción de ADN ha evolucionado a partir de
ADN de Chacon-Cortes et al.
técnicas manuales en solución y en fase sólida realizadas inicialmente de
ADN Promedio Promedio Costo Hora forma manual para incorporarlas en métodos automatizados. No existe
extracción ADNg final 260/280 estimar necesario
consenso sobre un método estándar de oro para la extracción de ADN de
método rendimiento ( μ gramo)proporción por muestra (horas)
(AUD) muestras de sangre total, y todos difieren en muchos aspectos diferentes.

Tradicional 32,65 1,75 3,65 Durante la noche

Los estudios que comparan las técnicas de extracción y destacan sus
salar fortalezas y debilidades son limitados, y hasta donde sabemos, no existe
método
una publicación que evalúe todos los enfoques en términos de todas las
Salazón modificada 40,47 1,75 1,9 1
características posibles. Por lo tanto, es muy difícil determinar la mejor
método de salida

QiAamp ® ADN 61,86 2.02 12,3 1 opción disponible. Las instalaciones de todo el mundo generalmente eligen
maxi kits de sangre un método basado en la disponibilidad de equipos, muestras y reactivos,
(QiAGeN ® Pty
además de considerar la velocidad, la eficiencia y calidad de extracción, los
Ltd, Clifton Hill,
viC, Australia)
requisitos técnicos y el costo.

Nota: Copyright © 2012. Springer. Mol Biol Rep. 2012; 39: 5961–5966. Comparación de técnicas de extracción
de ADN genómico de muestras de sangre total: estudio de evaluación de tiempo, costo y calidad.
Chacon-Cortes D, Haupt L, Lea R, Griffiths L. Reproducido con el amable permiso de Springer Science and
Business Media. 50

Abreviaturas: AUD, dólares australianos; ADNg, ácido desoxirribonucleico genómico.

Divulgar
extraído manualmente utilizando cada protocolo, y las técnicas se compararon en
Los autores de esta publicación certifican que no existen conflictos de interés

términos de calidad y cantidad de ADN extraído, así como costo y tiempo requerido. La con ninguna organización financiera o científica con respecto al material

cantidad de ADN se midió usando espectrofotometría, y la calidad del ADN se evaluó discutido en el manuscrito.

mediante la relación 260/280 y la electroforesis en gel de agarosa del producto de

PCR. En la Tabla 5 se presenta un resumen de los hallazgos. 50

Referencias
1. Carpi FM, Di Pietro F, Vincenzetti S, Mignini F, Napolioni V. Métodos de extracción de ADN
humano: patentes y aplicaciones. Reciente Pat DNA Gene Seq. 2011; 5 (1): 1–7.
Como se muestra en la Tabla 5, los kits QIAGENQIAampDNABloodMaxi produjeron

el mayor rendimiento y la proporción de 260/280 de todos los métodos evaluados, con 2. Dahm R. Friedrich Miescher y el descubrimiento del ADN. Dev Biol.

una medida promedio de 61,86. µ gy 2.02, respectivamente, pero los protocolos de
salazón tradicionales y modificados produjeron resultados similares en términos de
proporciones de ADN y 260/280. Sin embargo, el análisis estadístico mediante el análisis
de varianza mostró que el rendimiento de ADN y los resultados de la relación 260/280 no
fueron significativamente diferentes para los tres métodos ( PAG- valor de 0,110 y
0,05, respectivamente). Por otro lado, el método tradicional de salazón requería un
paso de incubación durante la noche, y el QIAGEN QIAampDNABloodMaxiKit fue
el más caro de todos los métodos incluidos, costando alrededor de 12.30 dólares
australianos, casi siete veces el protocolo de salazón modificado. Por lo tanto, con
base en estos hallazgos, el protocolo de salazón modificado desarrollado por Nasiri
et al 25 demostró ser la técnica más rentable y eficiente en el tiempo para aislar el
ADN de muestras de sangre entera. 50
2005; 278 (2): 274–288.
3. Holmes FL. Meselson, Stahl y la replicación del ADN: una historia
del experimento más bello de biología. New Haven, CT: Yale University Press;
2001.
4. Meselson M, Stahl FW. La replicación del ADN en Escherichia coli.
Proc Natl Acad Sci US A. 1958; 44 (7): 671–682.
5. Tan SC, Yiap BC. Extracción de ADN, ARN y proteínas: el pasado y el presente. J Biomed
Biotechnol. 2009; 2009: 574398.
6. Greene JJ, Rao VB, editores. Principios y principios del ADN recombinante
Metodologías. 1ª ed. Nueva York: Marcel Dekker, Inc .; 1998.
7. Price CW, Leslie DC, Landers JP. Técnicas de extracción de ácidos nucleicos y aplicación
al microchip. Lab Chip. 2009; 9 (17): 2484–2494.
8. BoomR, Sol CJ, Salimans MM, Jansen CL, Wertheim-van Dillen PM, van der Noordaa J.
Método rápido y sencillo para la purificación de ácidos nucleicos. J Clin Microbiol. 1990; 28
(3): 495–503.
9. Purificación de ADN de Herzer S. Solucionador de problemas de biología molecular:
Una guía de laboratorio. Nueva York: John Wiley & Sons, Inc .; 2001: 167-196.

10. Duarte GR, Price CW, Littlewood JL, et al. Caracterización de la extracción dinámica de ADN en
fase sólida de sangre con perlas de sílice controladas magnéticamente. Analista. 2010; 135 (3):
Desafortunadamente, en este estudio no se incluyeron otros métodos de extracción en 531–537.

fase sólida para la extracción de ADN. 11. Sambrook J, Russell DW. Clonación molecular: un manual de laboratorio.
Cold Spring Harbor, Nueva York: Prensa de laboratorio de Cold Spring Harbor; 2001.

12. Ullrich A, Shine J, Chirgwin J, et al. Genes de insulina de rata: construcción de plásmidos que
Conclusión contienen las secuencias codificantes. Ciencias. 1977; 196 (4296): 1313-1319.

La extracción de ADN ha evolucionado durante los últimos 145 años y se ha convertido

13. Chirgwin JM, Przybyla AE, MacDonald RJ, Rutter WJ. Aislamiento de ácido ribonucleico
en una diversidad de técnicas de laboratorio. Esta revisión destaca los métodos biológicamente activo a partir de fuentes enriquecidas en ribonucleasa. Bioquímica. 1979;

actualmente disponibles para la extracción de ADN de muestras de sangre total y 18 (24): 5294–5299.
14. Chomczynski P, Sacchi N. Método de un solo paso de aislamiento de ARN mediante extracción de
resume los estudios de comparación que utilizan diferentes enfoques de extracción de
tiocianato de guanidinio ácido-fenol-cloroforme. Anal Biochem.

ácidos nucleicos. 1987; 162 (1): 156-159.

8 envíe su manuscrito | www.dovepress.com

Journal of Biorepository Science for Applied Medicine 2014: 2
Paloma prensa
Paloma prensa
15. Chomczynski P, Sacchi N. El método de un solo paso de aislamiento de ARN mediante
extracción ácida con tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo: veinte años después. Nat
Protocol. 2006; 1 (2): 581–585.
16. Thomas S, Tilzer L, Moreno R, Inventors. Uso de gel de sílice para extracción de ADN con
disolventes orgánicos. Patente de EE.UU. US 5175271. Diciembre
29 de 1992.
17. Ness JV, Cimler BM, Rich B, Meyer J, Vermeulen NMJ, Inventors. Composiciones y métodos no
tóxicos útiles para la extracción de ácidos nucleicos. Patente estadounidense US 5393672. 28 de
febrero de 1995.
18. Miller SA, Dykes DD, Polesky HF. Un sencillo procedimiento de salazón para extraer ADN
de células humanas nucleadas. Ácidos nucleicos Res.
1988; 16 (3): 1215.
19. Greene F, BalchC, Haller D, MorrowM. AJCCCancer StagingManual.
6ª Ed. Nueva York: Springer; 2002.
20. Grimberg J, Nawoschik S, Belluscio L, McKee R, TurckA, EisenbergA. Un procedimiento no
orgánico simple y eficiente para el aislamiento de ADN genómico de la sangre. Ácidos
nucleicos Res. 1989; 17 (20): 8390.
21. Lahiri DK, Nurnberger JI Jr. Un método rápido no enzimático para la preparación de HMWDNA
a partir de sangre para estudios RFLP. NucleicAcids Res. 1991; 19 (19): 5444.
22. BahlA, Pfenninger MA Método rápido de aislamiento de ADN usando detergente para ropa. Ácidos
nucleicos Res. 1996; 24 (8): 1587-1588.
23. Drabek J, Petrek M. Un método de azúcar, detergente para la ropa y sal para la extracción de ácido
desoxirribonucleico de la sangre. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc República Checa.
2002; 146 (2): 37–39.
24. Gaaib JN, Nassief AF, Al-Assi AH. Método simple de salazón para la extracción de ADN
genómico de sangre completa. Revista Tikrit de ciencia pura. 2011; 16 (2): 9–11.
25. Nasiri H, Forouzandeh M, Rasaee MJ, Rahbarizadeh F. Método de salado modificado:
extracción de ADN genómico de alta calidad y alto rendimiento de sangre completa con
detergente para ropa. J Clin LabAnal. 2005; 19 (6): 229–232.
26. Arévalo-Herrera M, Soto L, Perlaza BL, et al. Respuestas inmunitarias celulares y mediadas por
anticuerpos inducidas en voluntarios sin experiencia mediante vacunación con péptidos sintéticos
largos derivados de la proteína circumsporozoito plasmodiumvivax. Am J Trop Med Hyg. 2011; 84
(Supl. 2): 35–42.
27. García-Sepúlveda C, Carrillo-Acuña E, Guerra-Palomares S, Barriga-MorenoM.
Extracciones de ADN genómico de Maxiprep para estudios de epidemiología molecular y
biorrepositorios. Mol Biol Rep. 2010; 37 (4): 1883–1890.
28. Iri-Sofla FJ, Rahbarizadeh F, Ahmadvand D, Rasaee MJ. Integración del gen del receptor
quimérico basado en nanocuerpos en células Jurkat mediada por la integrasa PhiC31. Exp Cell
Res. 2011; 317 (18): 2630–2641.
29. Liu B, ZhangY, JinM, et al. Asociación de polimorfismos seleccionados de CCND1, p21 y
caspasa8 con riesgo de cáncer colorrectal. Mol Carcinog.
2010; 49 (1): 75–84.
30. Liu H, Jiang X, Zhang MW y col. Asociación de polimorfismos genéticos CASP9, CASP10
y consumo de té con riesgo de cáncer colorrectal en la población china Han. J Zhejiang
Univ Sci B. 2013; 14 (1): 47–57.
31. Trejo-de la OA, Torres J, Pérez-Rodríguez M, et al. Los polimorfismos de TLR4 de un solo
nucleótido alteran los patrones de citocinas y quimiocinas de la mucosa en pacientes
mexicanos con enfermedades gastroduodenales asociadas a Helicobacter pylori. Clin Immunol.
2008; 129 (2): 333–340.
32. WuY, Jin M, Liu B, et al. La asociación de polimorfismos XPC y consumo de té con riesgo
de cáncer colorrectal en una población china. Mol Carcinog. 2011; 50 (3): 189–198.
Journal of Biorepository Science para AppliedMedicine
Publica tu trabajo en esta revista
Journal of Biorepository Science forAppliedMedicine es una revista internacional de acceso abierto revisada por pares que
se centra en los nuevos desarrollos y avances en el campo emergente y en evolución de la ciencia de los biorepositorios.
Esto incluye la obtención, procesamiento, preservación y almacenamiento de muestras biológicas para su aplicación a la
medicina aplicada. La revista invita a la presentación de manuscritos que aborden estos aspectos, además de la lógica de
los sistemas, el rendimiento clínico y los problemas éticos relacionados con la aplicación de biorrepositorios.
Envíe su manuscrito aquí: http://www.dovepress.com/journal-of-biorepository-science-for-applied-medicine-journal
Journal of Biorepository Science for Applied Medicine 2014: 2
Métodos de extracción de ADN
33. ZhangY, JinM, Liu B, et al. Asociación entre el polimorfismo genético H-RAST81C y el riesgo de
cáncer gastrointestinal: un estudio de casos y controles basado en una población en China. BMC
Cancer. 2008; 8: 256.
34. ZhangY, Liu B, Jin M y col. Polimorfismos genéticos del factor de crecimiento transformante β 1 y sus
receptores y susceptibilidad al cáncer colorrectal: un estudio de casos y controles basado en la
población en China. Letras de cáncer.
2009; 275 (1): 102–108.
35. Vogelstein B, Gillespie D. Purificación preparativa y analítica de ADN a partir de agarosa. Proc
Natl Acad Sci US A. 1979; 76 (2): 615–619.
36. McCormick RM. Un procedimiento de extracción en fase sólida para la purificación de ADN. Anal
Biochem. 1989; 181 (1): 66–74.
37. Walsh PS, Metzger DA, Higuchi R. Chelex 100 como medio para la extracción simple de ADN para
la tipificación basada en PCR a partir de material forense.
Biotecnologías. 1991; 10 (4): 506–513.
38. Manual de capacitación de laboratorio de capacitación de analistas de ADN Protocolo 3.05 Chelex ® 100
Extracción No Diferencial. Centro Nacional de Tecnología de Ciencias Forenses; 2006.
39. Butler JM. Extracción de ADN de muestras forenses con Chelex.
Protocolos de Cold Spring Harbor. 2009; 4 (6).
40. Seligson DB, Shrawder EJ, Inventors; Syngene, Inc, cesionario. Método de aislamiento y purificación de
ácidos nucleicos de muestras biológicas. Patente de Estados Unidos 4.935.342. 19 de junio de 1990.
41. Hawkins TL, O'Connor-Morin T, Roy A, Santillan C. Purificación y aislamiento de
ADN usando una fase sólida. Ácidos nucleicos Res.
1994; 22 (21): 4543–4544.
42. Saiyed ZM, Bochiwal C, Gorasia H, Telang SD, Ramchand CN. Aplicación de partículas
magnéticas (Fe3O4) para el aislamiento de ADN genómico de células de mamíferos. Anal
Biochem. 2006; 356 (2): 306–308.
43. Saiyed ZM, Ramchand CN, Telang SD. Aislamiento de ADN genómico utilizando nanopartículas
magnéticas como soporte en fase sólida. J Phys Condens Matter. 2008; 20 (20): 204153.
44. Lahiri DK, Bye S, Nurnberger JI Jr, HodesME, CrispM. El método de extracción no orgánico y no
enzimático proporciona mayores rendimientos de ADN genómico de muestras de sangre total
que otros nueve métodos probados.
Métodos de J Biochem Biophys. 1992; 25 (4): 193-205.
45. Huberman JA. Importancia de medir la absorbancia de ácido nucleico a 240 nm así como
a 260 y 280 nm. Biotecnologías. 1995; 18 (4): 636.
46. Troutman T, Prasauckas KA, Kennedy MA, Stevens J, Davies MG, Dadd AT. Cómo
utilizar y mantener correctamente el equipo de laboratorio.
Solucionador de problemas de biología molecular: Nueva York: John Wiley & Sons, Inc .; 2002:
49-111.
47. Sahota A, Brooks AI, Tischfield JA. Preparación de ADN de fuentes de mamíferos para
genotipado. Protocolos CSH. 2007; 2007: pdb.top19.
48. Abd El-Aal AA, Abd Elghany NA, Mohamadin AM, El-Badry AA. Estudio comparativo de cinco
métodos para la extracción de ADN de muestras de sangre total. Revista Internacional de
Ciencias de la Salud. 2010; III (1): 285–287.
49. Lee JH, Park Y, Choi JR, Lee EK, Kim HS. Comparaciones de tres sistemas automatizados para la
extracción de ADN genómico en un laboratorio de diagnóstico clínico. Yonsei Med J. 2010; 51
(1): 104–110.
50. Chacon-Cortes D, Haupt L, Lea R, Griffiths L. Comparación de técnicas de extracción de ADN
genómico de muestras de sangre completa: un estudio de evaluación de tiempo, costo y calidad. Mol
Biol Rep. 2012; 39: 5961–5966.
Paloma prensa
y sus efectos en la medicina clínica. La revista se caracteriza por la rápida divulgación de revisiones,
investigaciones originales, metodologías, tecnologías y análisis en esta área temática. El sistema de gestión de
manuscritos está completamente en línea e incluye un sistema de revisión por pares muy rápido y justo, que es
muy fácil de usar. Visite http: //www.dovepress. com / testimonials.php para leer citas reales de autores publicados.
envíe su manuscrito | www.dovepress.com
9
Paloma prensa