APUNTES DE UNIDAD 3 M.M.

Rosa María Zavaleta Martínez

INGENIERÍA DE BIORREACTORES

TRANSFERENCIA DE CANTIDAD DE MOVIMIENTO

Aireación y Agitación

La mayoría de los procesos fermentativos son aerobios y por lo tanto, requieren oxígeno.
Considerando la estequiometría de oxidación de la glucosa, se requieren 192g de oxígeno para la
completa oxidación de 180g de glucosa. Sin embargo, ambos componentes deben estar en solución
antes de que estén disponibles para un organismo. El oxígeno es aproximadamente unas 6000 veces
menos soluble en agua de lo que es la glucosa, por ello no es posible proveer a un cultivo microbiano
de todo el oxígeno que necesita para completar la oxidación de la glucosa o cualquier otra fuente
de carbono en una sola adición.

Es por ello que el cultivo microbiano debe ser suplementado con oxígeno durante el crecimiento
con una velocidad suficiente para satisfacer las demandas del microorganismo.

Ésta demanda de oxígeno en un proceso fermentativo industrial, es satisfecha por la agitación y

aireación del cultivo.

La estequiometría de la respiración, otorga una apreciación del problema de suplementación de

oxígeno, pero no es un indicativo de la demanda real de oxígeno porque no toma en cuenta la
cantidad de fuente de carbono que se transforma en biomasa.

Al lograr una mayor cantidad de oxígeno disuelto que el nivel crítico, puede no verse influenciada la
producción de biomasa, pero puede estimular la formación de producto. La demanda de oxígeno
de una fermentación depende en gran medida de la concentración de biomasa y su actividad
respiratoria, lo cual está relacionado con la velocidad de crecimiento.

Aireación: tiene la función de proveer a los microorganismos del oxígeno suficiente para sus
requerimientos metabólicos.

Agitación: tiene la función de asegurar que se tiene una suspensión homogénea de células
microbianas en un medio nutritivo homogéneo.

Un proceso con agitación, se ocupa en fermentaciones con hongos y actinomicetos (bacterias

filamentosas, la mayoría aerobias, aunque pueden ser aerobias facultativas). Las funciones del
agitador incluyen: disminuir el tamaño de las burbujas de aire para dar lugar a una mayor área de
transferencia de oxígeno. Otra función es mantener un ambiente uniforme dentro del tanque.

Se ha determinado experimentalmente que la turbina de disco es más adecuada en un fermentador

porque puede romper una corriente rápida de aire. La propela y la turbina abierta se inundan
cuando la velocidad del aire basada en el área transversal del envase excede los 21m/h, mientras
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que la turbina con aspas puede tolerar más de 120m/h antes de quedar saturada (cuando se utilizan
2 juegos de aspas en el eje).

La propela es menos eficiente en el rompimiento de corrientes de aire y el flujo que produce es axial
más que radial. En tanques altos se puede requerir más de 1 impulsor. Idealmente, el impulsor debe
ser de 1/3 a ½ del diámetro del tanque.

CONSUMO DE OXÍGENO

El efecto de la concentración de oxígeno disuelto sobre la velocidad específica de toma de oxígeno

(QO2) presenta el comportamiento de una cinética de Michaelis-Menten. Por encima de la
concentración crítica, ya no se puede aumentar la velocidad.

Se tiene un máximo en la producción de biomasa satisfaciendo el máximo nivel de demanda de

oxígeno, esto se logra manteniendo la concentración de oxígeno disuelto por arriba del nivel crítico.

Si la concentración de oxígeno disuelto estuviera por debajo del nivel requerido, pueden ocurrir
inestabilidades metabólicas, sin embargo, eso es lo que se busca en algunos casos.

REQUERIMIENTOS DE POTENCIA

El mezclado se usa para promover o aumentar los índices de transferencia de masa y calor en el
biorreactor. La productividad de muchos procesos de fermentación está limitada por la capacidad
de aireación del fermentador. La potencia se requiere para las funciones de mezclado (asegurar el
mezclado del contenido del reactor y promover altos índices de transferencia de masa.

El rango de capacidad de los fermentadores industriales, oscila entre los 50-200m3, y los
requerimientos de potencia varían de 40-600kW por unidad, lo que representa una variable
importante en el diseño de un biorreactor, desde el punto de vista económico.
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Sistemas air-lift (de ascenso de aire)

En estos sistemas, la difusión del gas debe proveer toda la energía requerida para las operaciones
de mezclado y transferencia de masa.

La potencia de entrada de la corriente de aire a través del biorreactor, puede llegar a ser un factor
de suma importancia en reactores a gran escala.

Asumiendo que el cambio de energía cinética del gas (debido a diferencias de velocidad entre la
línea de entrada y el biorreactor) puede ser ignorada y que la expansión isotérmica del gas es la
fuente de todo el poder de mezclado, la potencia de entrada puede ser calculada mediante la
siguiente expresión:

Pg = GRT ln(Pi/Po)

Pg= potencia de entrada en sistemas gasificados

G= índice de flujo molar del gas

R= constante universal de los gases

T= temperatura

Pi= presión en el líquido al mezclar

Po= presión en la superficie del líquido

EJERCICIO:

Determinar la potencia de entrada para un fermentador gasificado que opera a una temperatura
promedio de 35°C, considerar que la presión en el líquido al mezclar es de 1.4atm y que la presión
en la superficie del líquido es de 1.0 atm. El oxígeno circula a razón de 0.4 kg/s. Expresar el resultado
en kW.

NOTA: Considerar un valor de R= 8.314 J/Kelvin mol. El índice de flujo molar del gas se debe expresar
en mol/s, para ello hacer la conversión de flujo másico a flujo molar.
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TRANSFERENCIA DE MASA
La transferencia de masa en los biorreactores suele medirse en términos de la cantidad de oxígeno
que es transferido al sistema, las principales funciones del oxígeno en los microorganismos son:
crecimiento, mantenimiento. La dispersión del gas dentro del biorreactor se hace a través de
pequeñas burbujas, siendo el tamaño la propiedad más importante de éstas.

 Entre menor sea el tamaño de las burbujas, mayor será el área de transferencia de masa
entre la fase gaseosa y la fase líquida.

 Mayor será el tiempo de retención de la burbuja en el medio líquido, garantizando la

disolución del oxígeno.

La velocidad de transferencia de oxígeno (OTR) por sus siglas en inglés, se puede calcular a través
de la siguiente expresión:

La velocidad de transferencia de oxígeno se expresa en:

Donde:

El principal parámetro a medir en transferencia de masa de biorreactores, es K La (coeficiente

volumétrico de transferencia de oxígeno), el cual proporciona una medida de la capacidad de
aireación de un fermentador. Entre mayor sea, mayor será la capacidad de aireación del sistema.

Su determinación es esencial para establecer la eficiencia de aireación del fermentador y para

cuantificar los efectos de las variables de operación en la provisión de oxígeno.

Como resulta difícil medir KL y a por separado, se combinan, dando el coeficiente volumétrico de
transferencia de oxígeno, cuyas unidades son h-1.
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Otro parámetro de interés es OUR (velocidad de consumo de oxígeno- demanda de oxígeno). Éste
parámetro determina la velocidad a la que debe transferirse el oxígeno. Los factores que influyen
para ésta transferencia son: especie celular utilizada, fase del crecimiento del cultivo y la naturaleza
de la fuente de carbono en el medio. Éste parámetro se puede calcular con la siguiente ecuación:

Donde:

Por lo tanto, el balance de oxígeno en un fermentador, está dado por la diferencia entre la oferta
(OTR) y la demanda (OUR) de oxígeno en el fermentador:

Problemas asociados con la transferencia de oxígeno

*Microorganismo utilizado: en células dispersas en el medio, la película de líquido que rodea cada
célula, es mucho más fina que la que rodea a las burbujas, por lo tanto, su efecto puede
despreciarse.

En pellets muy grandes, la célula puede sufrir autolisis debido a la limitación de nutrientes como el
oxígeno. Lo deseable son pellets pequeños.

*Tamaño de burbuja: las burbujas pequeñas poseen velocidades de ascenso bajas, por lo que el
tiempo de residencia en el líquido es mayor, contribuyendo a una mayor absorción del oxígeno. En
caldos muy viscosos, las burbujas permanecen por largos periodos de tiempo, pues su velocidad de
ascenso disminuye.

*Velocidad de agitación y dispersión de burbujas: dependiendo de la velocidad de agitación y del

flujo de gas, será el resultado obtenido en términos de transferencia de masa.
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Si la velocidad de agitación es baja y el flujo de gas es alto, entonces el gas envuelve al impulsor sin
dispersarse lo suficiente, lo cual ocasiona la inundación del impulsor (A). Si la velocidad de agitación
es alta y el flujo de gas es bajo, entonces el impulsor dispersa el gas hacia las paredes del
fermentador (B), y si el flujo de gas es constante y se va dando un incremento en la velocidad de
agitación, entonces la dispersión del gas es completa (C).

Métodos para medir KLa

Método dinámico (o de desgaseo): es un método que se basa en la determinación de las

concentraciones de oxígeno durante la absorción y desorción del mismo en la solución o medio de
cultivo. Primero se elimina el oxígeno del biorreactor, lo cual se puede conseguir haciendo circular
un gas inerte, como el nitrógeno, después se alimenta al biorreactor con aire o con oxígeno para
evaluar la variación del oxígeno disuelto con el tiempo.

El método puede emplearse para determinar KLa en ausencia o en presencia de células. En el primer
caso, la metodología se usa para la determinación de los efectos de las condiciones de operación.
Los electrodos de oxígeno usados en biorreactores, miden la presión parcial o la tensión de oxígeno
disuelto en el medio de cultivo y no la concentración de oxígeno, sin embargo, la tensión de oxígeno
disuelto (TOD) es proporcional a la concentración. De este modo, se puede utilizar la siguiente
ecuación:

Donde:

TODee =Tensión de oxígeno disuelto en el estado estacionario

TOD1 = tensión de oxígeno disuelto en el tiempo 1

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TOD= tensión de oxígeno disuelto en el tiempo t

t= tiempo t

t1= tiempo inicial

Se considera que la tensión de oxígeno en el estado estacionario, cuando no hay células, es del 100%
cuando los electrodos se han calibrado adecuadamente.

Al realizar un gráfico de

se obtiene como pendiente el valor de KLa. La misma expresión y procedimiento se pueden utilizar
para determinar KLa en presencia de células, sólo que, en este caso, el valor de TODee será menor
que 100%, y dependerá del consumo de oxígeno por parte de las células.

EJERCICIO

En un fermentador batch se realizó la producción de vitamina B2 por Kluyveromyces fragilis, los

datos del monitoreo de la tensión de oxígeno disuelto se muestran en la tabla 1. Si en el estado
estacionario la TOD alcanzó un valor de 83%, y si la TOD1 es 92%, determinar el valor de KLa por el
método dinámico o de desgaseo según la teoría revisada previamente. Determinar también el valor
de la velocidad de transferencia de oxígeno (OTR) si la concentración de oxígeno en el equilibrio
líquido-gas en el fermentador fue de 1.26x10-2mol/L y la concentración de oxígeno en el seno del
fluido fue de 1.34x10-3mol/L. Considerar que t1= 20 h. Realizar ajuste de la recta por mínimos
cuadrados en caso necesario.

TABLA 1 Relación de TOD y tiempos de muestreo

TOD (%) t (h)

90 40
88.5 60
87.6 80
85 100
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Método de oxidación de sulfito

Se basa en la velocidad de conversión de una solución de sulfito de sodio 0.5M a sulfato de sodio en
presencia de un catalizador a base de cobre o cobalto.

En éste procedimiento, tan pronto como entra el oxígeno a la solución, es inmediatamente

consumido, de modo que la velocidad de oxidación del sulfito es equivalente a la velocidad de
transferencia de oxígeno. La aireación y la agitación se mantienen a velocidades fijas y se realiza una
toma de muestra a diferentes intervalos de tiempo.

En el recipiente donde se tomó la muestra se agrega una solución de yodo que reacciona con el
sulfito no consumido, por lo tanto, el nivel de sulfito no consumido se determina con una titulación
con una solución estándar de tiosulfato de sodio.

Finalmente, se grafican los mililitros gastados de la titulación contra el tiempo en el cual se tomaron
las diferentes muestras, con ello se obtiene una curva, al determinar la pendiente de la recta
tangente a la curva, se obtiene OTR, posteriormente se puede calcular KLa con la expresión indicada
en la página 4.

Como ventajas, éste método es simple. Como desventajas, es largo (3h aproximadamente), es
inadecuado en presencia de bajos niveles de contaminantes como aminoácidos, proteínas, ácidos

grasos, ésteres, lípidos, etc. El costo del sulfito de sodio a nivel industrial, lo hace inadecuado, así
como las grandes variaciones al trabajar con medio de cultivo en fermentación, especialmente
cuando se trabaja con organismos que forman micelio.

Técnica del balance de oxígeno

Ésta técnica determina directamente la cantidad de oxígeno transferida dentro de la solución en un

intervalo de tiempo. El procedimiento involucra la medición de:

 Volumen (VL) de medio (en litros)

 Temperatura (Ti,To) de los gases a la entrada y salida (en Kelvin)
 Índice de flujo volumétrico de aire (Qi, Qo) a la entrada y salida (en L/min)
 Presión total en el aire (Pi, Po) de entrada y salida (en atm)
 Fracción molar de oxígeno (yi, yo) a la entrada y salida

El índice de transferencia de oxígeno se puede calcular entonces con la siguiente ecuación:

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Estas mediciones requieren medidores de flujo adecuados, manómetros, sensores de temperatura,

analizadores de oxígeno gaseoso. Parece ser el método más simple para la determinación de KLa.

Factores que afectan el valor de KLa en tanques de fermentación

1.-Velocidad de flujo de aire: no tiene un efecto significativo en el valor de KLa en sistemas agitados
convencionalmente. El rango de la velocidad de flujo de aire en una fermentación, rara vez cae fuera
del rango de 0.5 a 1.5vvm (volumen de aire por volumen de medio por minuto).

Al usar muy altas velocidades de flujo, entonces se obtienen muy bajos índices de transferencia de
oxígeno, debido a que el impulsor se inunda, es decir, la velocidad de flujo de aire es tan alta que el
impulsor está rotando en una fase gaseosa y por lo tanto no tiene acceso a la solución para llevar a
cabo la transferencia de oxígeno.

2.-El grado de agitación: se ha demostrado que el grado de agitación tiene un efecto significativo en
la eficiencia de la transferencia de oxígeno en un tanque agitado, ya que incrementa el área
disponible para la transferencia de oxígeno, dispersando el aire en el cultivo en forma de pequeñas
burbujas. Retrasa el escape de las burbujas de aire del líquido. Previene la coalescencia de las
burbujas de aire y disminuye el espesor de la película líquida en la interfase gas-líquido al crear
turbulencia en el cultivo.

El grado de agitación puede ser medido por la cantidad de potencia consumida al agitar el contenido
del tanque.

3.-Propiedades reológicas del medio de cultivo: la reología del medio es afectada por la composición
del medio original y su modificación por el cultivo en crecimiento, la concentración y morfología de
la biomasa y la concentración de productos microbianos.

Muchas bacterias y levaduras tienden a dar fermentaciones no viscosas, cuyo comportamiento es

newtoniano. Éstas fermentaciones no tienen problemas de transferencia de oxígeno.

En cultivos no newtonianos de fermentaciones con hongos y estreptomicetos, existen mayores

dificultades en la provisión de oxígeno. La productividad de tales fermentaciones se ve limitada por
la disponibilidad de oxígeno.

Durante la limitación de oxígeno, el consumo de oxígeno permanece constante en un sistema

unicelular, mientras que decrece en un cultivo miceliar.
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Los problemas reológicos se han podido resolver aumentando en 2°C la temperatura del cultivo,
aumentando la velocidad de agitación, o diluyendo con agua estéril el cultivo en las últimas etapas
de la fermentación.

4.-Presencia de antiespumantes: cuando en una fermentación se requiere agitación y aireación,

suele ocurrir el fenómeno de formación de espuma. La espuma se puede desbordar del tanque por
la salida de aire o la toma de muestra, llevando a pérdida del medio y contaminación, también puede
tener un efecto adverso en la velocidad de transferencia de oxígeno.

Consideraciones finales:

La presión más alta de oxígeno se consigue durante la aireación con oxígeno puro. Comparado con
el valor obtenido con aire (9mg de O2/L), en agua se disuelven 43mg de O2/L cuando se utiliza
oxígeno puro.

El coeficiente volumétrico de transferencia de oxígeno, depende del diámetro, capacidad, potencia,

sistema de aireación y velocidad de aireación del biorreactor, y de la densidad, viscosidad y
composición de la solución de nutrientes, la estructura del microorganismo, el agente
antiespumante utilizado y la temperatura. Los propios microorganismos tienen un efecto sobre la
transferencia de oxígeno, actuando como barrera e inhibiendo la transferencia de oxígeno.