INFORME DE LABORATORIO

Nombre del Curso: Calidad del agua

Título:
Laboratorio estudio microbiológico del agua.

Realizado:.Marzo 2021
Grupo:Calidad del agua
Integrantes:
1. Lina Mejorano Fonseca.
2. Juver Ivan Castañeda
3. Lida Otálora Contreras.
4. Olga Lucia Piragauta Barco.

1.- Fundamentos Teóricos.

Análisis microbiológico del agua.

El análisis microbiológico es el conjunto de operaciones encaminadas a determinar los

microorganismos presentes en una muestra problema de AGUA.

En el agua pueden encontrarse una gran variedad de microorganismos, los cuales afectan
en mayor o menor medida a la calidad sanitaria del agua Además de la flora normal
presente en cualquier sistema acuático (ejemplos: Bacillus, Pseudomonas, etc.), pueden
existir otros microorganismos contaminantes, algunos de ellos patógenos para el ser
humano y/u otros animales. Una de las fuentes principales de contaminación son las aguas
residuales que contienen materia fecal que puede ser vehículo de transmisión de patógenos.

Métodos de análisis:
1. Bacterias coliformes y Escherichia coli
(E. coli): UNE EN ISO 9308-1:2000.
2. Enterococos: UNE EN ISO 7899-2:2001.
3. Clostridium perfringens (incluidas las esporas)
4. Enumeración de microorganismos cultivables-Recuento de colonias a 22 °C:
UNE EN ISO 6222:1999.
Análisis del agua.
La calidad del agua se valora mediante análisis bacteriológico, utilizando a distintos tipos
de microorganismos. Los ensayos que se realizarán en esta práctica serán:

-Recuento y confirmación de Escherichia coli por método de Filtración por membrana.

- Recuento de bacterias aerobias mesofilas o totales por siembra en placa, fondo o masa.
- Análisis Fisicoquímico de agua:
a. Medición de pH.
b. Medición de Turbiedad
Toma de muestras para análisis microbiológico.
Las muestras que se tomarán para el análisis deben ser representativas para poder
determinar así su calidad microbiológica. Hay normas para la toma de muestras de aguas
según sus distintas procedencias (grifos, pozos, depósitos, lagos, ríos, manantiales, etc.).
Bacterias Coliformes.
Los coliformes reagrupan ciertas especies bacterianas pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae, de morfología bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias
facultativas, oxidasa negativa, no esporuladas y que fermentan la lactosa con producción de
ácido a 37ºC en 24-48 horas. Análisis microbiológico: Bacterias coliformes Del grupo
coliformes forman parte varios géneros: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter.
- Escherichia coli produce dolor abdominal, diarrea, nauseas, vómitos y fiebre. - Klebsiella
produce enfermedades respiratorias. - Citrobacter produce alteraciones a nivel del colon y a
nivel intestinal.

LIMPIEZADE LOS RECIPIENTES Y EQUIPOS DE MUESTREO PARA

ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO.
-Previa limpieza y lavado, los recipientes deben esterilizarse en húmedo como mínimo
durante 20 minutos a 121 ° C y 1 atmósfera de presión en autoclave; o empleando cualquier
técnica de esterilización seca equivalente como un horno durante 1 hora a 180° C. Puede
emplearse también material desechable estéril.
-Cuando se efectúen exámenes rutinarios de agua que ha sido tratada con cloro los
recipientes deben contener, antes de ser esterilizados, una concentración de 0.2 gramos de
tiosulfato de sodio ó 0.5 ml de solución de tiosulfato al 10% para poder neutralizar los
vestigios de cloro e impedir de esta manera que éste continúe ejerciendo su acción
bactericida y disminuya, por lo tanto, la oportunidad de detectar cualquiera de los
microorganismos que podrían indicar una posible contaminación del agua potable.
-Se deberán evitar cantidades excesivas de tiosulfato de sodio pues esto podrá ayudar al
desarrollo de las bacterias posiblemente presentes en la muestra, alterando la concentración
de las mismas, durante el tiempo transcurrido entre la recolección de la muestra y el inicio
del análisis.

TERMINOS Y DEFINICIONES.

Agua cruda: Es el agua natural que no ha sido sometida a proceso de tratamiento para su
potabilización.
Agua potable o agua para consumo humano: Es aquella que cumple las características
físicas, químicas y microbiológicas, en las condiciones señaladas en la Resolución 2115 de
2007.
Mensurando: Es el componente o característica (elemento, compuesto o ion) de interés
analítico de una muestra.

Cadena de custodia: Proceso por medio del cual se mantiene una muestra bajo posesión
física o control durante su ciclo de vida completo, es decir, desde que se toma hasta que se
desecha.

Calidad del agua: Es el resultado de comparar las características físicas, químicas y

microbiológicas encontradas en el agua, con el contenido de las normas que regulan la
materia.
Contramuestra: Toma puntual de agua en los puntos de muestreo concertados, en el
proceso de control de la Persona Prestadora y que se realiza simultánea y
representativamente con la Autoridad Sanitaria.

Laboratorio de análisis del agua para consumo humano: Es el establecimiento público

o privado, donde se realizan los procedimientos de análisis de las características físicas,
químicas y microbiológicas del agua para consumo humano según artículo 27 del Decreto
1575 de mayo 9 de 2007

Monitoreo: Proceso de muestreo del sistema de suministro de agua para consumo humano,
que cubre espacio, tiempo y frecuencia en los puntos concertados según norma.

Muestra: Toma puntual de agua en los puntos de muestreo concertados, que refleja la
composición física, química y microbiológica representativa del momento, para el proceso
de vigilancia de la Autoridad Sanitaria.

Muestreo: Proceso de toma de muestras que son analizadas en laboratorios para obtener
información sobre la calidad del agua del sitio concertado en que fueron tomadas.
Puntos de muestreo en red de distribución: Son aquellos sitios concertados y
materializados con dispositivos de toma, donde se realiza la recolección de la muestra de
agua para la vigilancia y el control según resolución 811 de 2008.

Representatividad: Lapso de tiempo de 10 minutos, dentro de los cuales se toma la

muestra y contramuestra de agua en el dispositivo instalado en el sitio de monitoreo
concertado entre vigilancia y control.
Sistema de suministro de agua para consumo humano: Es el conjunto de estructuras,
equipos, materiales, procesos, operaciones y el recurso humano utilizado para la captación,
aducción, pretratamiento, tratamiento, almacenamiento, conducción y distribución del agua
para consumo humano.
Traza: Es una cantidad mínima de una característica química encontrada en el agua
analizada de la muestra o contramuestra tomada.

2.- Materiales Empleados.

-Alcohol 95.
-Alcohol 70.
- algodón
-Varilla de vidrio – isopo
-Encendedor
-Frasco de vidrio esterilizado
- Filtros.
-Bomba de vacio
-Filtros de membranas.
-Desionizador de agua.
- Contador de colonias.
- Balanzas
- Agitador/ mezclador.
- Jarras de anaerobios
- Ph-metros
- Placas de Petri
- Pipetas de vidrio, de plástico y pipeteadores.
- Pipetas automáticas (micropipetas) y puntas de pipeta
- Refrigeradores.

3.- Desarrollo de la Experiencia.

OBJETIVO
Obtener una muestra representativa del agua para poder determinar a partir de ella su
calidad microbiológica de interés sanitario. La toma de muestras debe respetar, la
composición microbiológica del agua captada.

TOMA DE MUESTRA.

1) Se flamea la llave y se toma la muestra de agua fría- de 500 ml.

2) El envase a utilizarse deberá estar esterilizado y durante la toma debe prestarse atención
a mantener una adecuada asepsia para evitar la contaminación accidental de la muestra.
3) Rotular el envase o verificar que el rótulo sea el correcto.
4) Si el grifo, canilla o caño es metálico quemar con un mechero donde sale el agua (si el
material es plástico realizar el mismo procedimiento pero un menor tiempo para que no se
deteriore el material plástico), luego abrir el grifo, canilla o activar el mecanismo de
bombeo y dejar salir el agua el tiempo suficiente hasta que se esté seguro que es agua de la
fuente de agua o depósito, de manera que el chorro no sea intenso.
5) Abrir el recipiente estéril, evitando todo contacto de los dedos con la boca e interior del
mismo y sosteniendo la tapa de manera que ésta mire para abajo.
6) Llenar el frasco dejando una cámara de aire. Durante el llenado es conveniente tener la
precaución de mantener el frasco inclinado a 45° para evitar la introducción de partículas
externas.
7) Tapar inmediatamente asegurando un cierre perfecto.
8) La muestra debe ser guardada a 4°C( puede ser en una hielera, con hielo bien limpia y
que no contenga otros elementos propios del muestreo, o en la parte de abajo de una
heladera). En cualquier caso se debe tener la mayor higiene posible.
9) Trasladarla lo más pronto posible a Laboratorio (tiempo máximo 2 días y correctamente
refrigerada en lugar obscuro). Lo ideal sería que llegara al Laboratorio en unas pocas horas

FILTRACIÓN POR MEMBRANA.

La técnica se basa en el crecimiento, identificación y recuento de los microorganismos

retenidos en la superficie de un filtro, a través del cual se ha filtrado un volumen conocido
de agua, incubado en un medio de cultivo durante un tiempo determinado y a una
temperatura adecuada.
El método consiste en la determinación del nº de coliformes mediante filtración de
volúmenes determinados del agua a analizar por filtros de membrana e incubación sobre
medio de lactosa enriquecido (agar de lactosa TTC con heptadecilsulfato de sodio) y una
temperatura de 44,5ºC (+/-0,2ºC).
Volumen de agua a filtrar
Los volúmenes de agua recomendados para la filtración directa sobre membrana filtrante
por la normativa vigente para la vigilancia de la calidad sanitaria de las aguas costeras y de
playas son: 100 ml, 20 ml, y 5 ml. Esto significa la realización de tres filtraciones e
incubaciones para cada muestra de agua y para cada tipo de microorganismo analizado.
Cuando el contenido bacteriano o de materia en suspensión de la muestra inicial de agua
haga necesaria la utilización de un volumen inferior a 1 ml, la alternativa apropiada es la
dilución de la muestra. La utilización directa de volúmenes inferiores a 1 ml no permite
obtener resultados satisfactorios. La dilución del agua se tiene que llevar a cabo en una
botella que contenga el volumen adecuado del diluyente estéril (botella con capacidad entre
50 y 200 ml).

PROCEDIMIENTO
Colocar un filtro de membrana estéril sobre el soporte de filtración. Adaptar el embudo y
conectar el matraz a una bomba eléctrica de vacío. Filtrar 100 ml de muestra si se trata de
agua potable, y 0,1 y 1 ml si se trata de aguas no potables, previamente homogeneizadas.
Lavar con unos 30 ml de agua destilada. Retirar el embudo. Mediante las pinzas
esterilizadas, transferir la membrana filtrante sobre el medio de cultivo contenido en una
placa de Petri, de modo que la superficie de filtración quede hacia arriba. Cerrar e invertir
la placa e incubar a 44ºC (+/-1ºC ) durante 24h ( +/-2h ).

1. Preparación del equipo de filtración

El equipo de filtración que se recomienda es una rampa de tres puestos de manera tal que
con una sola filtración se procesen las tres filtraciones recomendadas o los tres filtros
destinados a la determinación de los tres microorganismos indicadores (CT, CF y EF) para
una misma filtración. Antes de proceder a las filtraciones es aconsejable realizar las
operaciones siguientes con el objeto de comprobar el buen funcionamiento del equipo.

a) Dejar que la bomba de vacío funcione durante cinco minutos antes de iniciar los análisis.

b) Comprobar que los matraces de recogida del filtrado (kitasatos) están bien instalados
para proteger la bomba de vacío.

2. Colocación de la membrana filtrante.

Los filtros a utilizar son de 47 mm de diámetro con un tamaño de poro de 0,45 µ.

a) Flamear las pinzas.

b) Coger con cuidado una membrana filtrante estéril utilizando la punta de las pinzas.
c) Colocar la membrana filtrante, con la cuadrícula hacia arriba, sobre el soporte de
filtración, prestando atención a que la membrana quede bien centrada.
d) Colocar el embudo de filtración estéril sobre el soporte, procurando no desplazar ni
deteriorar la membrana filtrante.
e) Ajustar el embudo de filtración al soporte de filtración.

3. Vertido del volumen de muestra a filtrar

La técnica utilizada para la filtración de la muestra varía según el volumen de muestra a
filtrar.
Volumen de muestra igual o superior a 50 ml.
a) Cuando el embudo de filtración tenga una escala de volumen graduada, se ha de agitar
enérgicamente la muestra y verterla directamente en el embudo, utilizando la escala para
medir el volumen de muestra a filtrar.
b) Cuando el embudo de filtración no tenga una escala de volumen graduada, se ha de
medir la muestra de agua con una probeta estéril, una vez agitada enérgicamente.
Verter, a continuación, la muestra contenida en la probeta en el embudo de filtración.
Añadir un volumen igual de agua tamponada estéril en la probeta y verterla en el embudo,
juntamente con la muestra

Volumen de la muestra entre 1 y 50 ml.

a)Añadir 20 ml, aproximadamente, de agua tamponada estéril en el embudo de filtración,
antes de añadir la muestra.
b) Agitar la muestra enérgicamente.
c) Medir el volumen de muestra, utilizando una pipeta estéril.
d) Verter el contenido de la pipeta en el embudo de filtración.
e) Añadir 20 ml aproximadamente de agua tamponada estéril en el embudo de filtración.

INCUBACIÓN.
a) Tapar la placa de Petri.
b) Identificar la placa de Petri con la muestra filtrada. La identificación debe contener el
origen o estación de la muestra, la posible dilución efectuada y el volumen de agua
realmente filtrada.
c) Invertir las placas de Petri para que la membrana filtrante quede por debajo del agar,
completamente adherida al mismo.
d) Colocar las placas de Petri invertidas en las estufas de incubación a las temperaturas
recomendadas para cada tipo de microorganismo, donde permanecerán el tiempo adecuado:
CT: medio Endo y/o Chapman TTC. Incubación a 37 ºC ± 0,5º, durante 24 horas.
CF: medio m-FC. Incubación a 44,5 ºC ± 0,2º, durante 24 horas.
EF: medio KF-Streptococcus. Incubación a 37 ºC ± 0,5º, durante 48 horas

RECUENTO DE COLONIAS Y CÁLCULO DE CONCENTRACIONES.

a)Abrir la placa de Petri
b) Colocar la placa bajo el objetivo de una lupa binocular y realizar el contaje de colonias
usando para su identificación las características visuales descritas para cada
microorganismo.
c)Realizar el cálculo de la concentración bacteriana por 100 ml de muestra de agua original:
 4.- Análisis y Discusión de Datos.

LECTURA E INTERPRETACION FILTRACION POR MEMBRANA.

La lectura de los resultados requiere el examen de las colonias aparecidas sobre la

membrana y el examen de los halos en la capa de agar subyacente a la membrana. La
fermentación de la lactosa provoca la formación de un halo amarillo. Por ello se considera
coliformes aquellas colonias que presentan halo amarillo, halo amarillo con centro naranja
(Escherichia y Citrobacter), o halo amarillo con centro rojo ladrillo (Klebsiella y
Enterobacter). La densidad se estima como el total de coliformes totales por 100ml,
utilizando aquellos filtros de membrana que tengan 20-80 colonias de coliformes y no más
de 200.

Discusión de Resultados.

Debido a la necesidad que tiene la industria alimentaria, de evaluar en forma

rápida la calidad microbiológica de las materias primas y productos terminados, así como el
estado microbiológico de procedimientos de manufactura, ha llevado al desarrollo y
refinamiento de métodos microbiológicos alternos de análisis más rápidos o más fáciles que
el método correspondiente de referencia, dado lo anterior y con el laboratorio realizado, es
importante tener en cuenta la norma y revisar que se cumplan con algunos objetivo como lo
es que el PH se neutro, es decir que no supere el 7, que la Turbidez sea menor a 2 unidades
ya que hace que el contenido bacteriano pueda aumentar, y que los colifornios no den nada
con respecto a los parámetros. De igual manera tener en cuenta que para filtrar 100 ml de
muestra si se trata de agua potable, y 0,1 y 1 ml si se trata de aguas no potables.

Según los resultados obtenidos se analiza que el agua es apta para consumo humano;
debido a que la probabilidad de detección de agua potable es mayor al 90% según los
limites permisibles exceptuando el medio de cultivo Agar Chapman donde se obtuvo un
65% lo cual pudo verse afectado ya que no se llevó a la temperatura que debería ser según
los parámetros de la tabla para coliformes fecales.

5.- Conclusiones.

• Es ideal realizar los análisis durante las primeras 6 horas para evitar que se
contamine la muestra, máximo 24 horas.
• El agua es un elemento esencial para la vida y es útil para todos los usos domésticos
incluida la higiene personal, de ahí la importancia de que todos deben disponer de un
abastecimiento satisfactorio (suficiente, salubre y accesible).
• La acidez disminuye el contenido de microorganismos.
• La materia orgánica aumenta el contenido de microorganismos
• Mucho oxígeno disuelto disminuye los microorganismos anaerobios.
• Las sales, si son abundantes, producen que el agua sea casi estéril.
• Si existe poca cantidad de sales se estimula el desarrollo bacteriano.
• La filtración disminuye el número de microorganismos.
• La temperatura puede aumentar o disminuir el contenido bacteriano.
• La turbidez hace que el contenido bacteriano pueda aumentar, ya que los rayos
U.V. no manifiestan su acción.
• Los protozoos fagocitan bacterias y así disminuyen el número de estas.

6.- Bibliografía.
Manual de Toma de muestras 2012,
Articulo 27 del decreto 1575 de 2007.
https://www.ins.gov.co/sivicap/Documentacin%20SIVICAP/2011%20Manual%20toma%20de%20muestras
%20agua.pdf

MUESTREO DE AGUA DE RIEGO PARA ANALISIS MICROBIOLOGICO.pdf Green Lab.

https://www.upct.es/~minaeees/analisis_microbiologico_aguas.pdf