Servicio Nacional de Aprendizaje – SENA

Centro de la Construcción
Programa de formación: TECNOLOGO EN CONTROL AMBIENTAL Fecha:
Guía de Practica 5 Practica 3. Abril 22 de 2014
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AMBIENTAL

MICROBIOLOGÍA DEL SUELOS: Practica 3

Hongos filamentosos del suelo

RESULTADOS DE APRENDIZAJE ASOCIADOS A LA PRÁCTICA:

 Clasificar los microorganismos empleados en procesos biotecnológicos de biorremediación.
 Establecer bioindicadores de contaminación de agua, suelo y aire.

OBJETIVOS
 Desarrollar habilidades en los aprendices para el reconocimiento de las características del
suelo
 Realizar cultivos de hongos filamentosos del suelo
 Diferencias tipos de hongos filamentosos asociados al suelo
 Reconocer las características de microorganismos como hongos filamentosos asociados al
suelo.

INTRODUCCIÓN
De acuerdo a Moratto et al 2005, “un buen estatus de los microorganismos del suelo (alta cantidad,
actividad y/o diversidad) es un prerrequisito de su buena calidad y fertilidad” por lo tanto el considerar
el componente microbiológico como indicador de calidad no solo es apropiado sino recomendado
debido a que éste es potencialmente uno de los indicadores biológicos más sensibles utilizados para
evidenciar disturbios o perturbaciones en él, esto debido a que los cambios en las poblaciones
microbianas y/o en sus actividades permitirían predecir modificaciones detectables en las propiedades
físicas y químicas del suelo (Moratoo et al 2005).

Los hongos son organismos eucariotas, heterótrofos y la mayoría aerobios con la excepción de las
levaduras. Los hongos son de gran importancia para el reciclaje de nutrientes, la descomposición de
materia orgánica e incluso para la degradación de compuestos contaminantes, por lo que juegan un
rol estratégico en el equilibrio del suelo, el mantenimiento de su diversidad, y por lo tanto de su
calidad y fertilidad. Los hongos filamentosos particularmente, son abundantes en los alimentos y en
el suelo y cuentan con una amplia distribución en diferentes hábitats, sus filamentos conocidos como
Hifas, crecen en los ápices y al crecer conjuntamente se entrecruzan y forman un aglomerado
denominado Micelio. Las hifas pueden dar lugar a Conidioforos, los cuales son estructuras que
contienen los conidios o esporas asexuales, que se caracterizan por presentar diferentes pigmentos,
cambiando el color del micelio y dando una apariencia polvosa cuando se presentan en grandes
cantidades.

ACTIVIDAD PRÁCTICA

Materiales y equipos
Para el paso 1:
- Por cada tipo evaluado, 10g de suelo incubado de la practica 2 correspondiente al tratamiento
denominado control
- Agua destilada
- Agar cloranfenicol rosa de bengala
- 6 cajas Petri esterilizadas por cada tipo de suelo evaluado
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- Goteros de 1ml por cada tipo de suelo

- 1 vaso de precipitado de 200ml
- 4 vasos de precipitado de 100ml
- 1 espátula
- 1 agitador
- Guantes

Para el paso 2:
- Cajas Petri incubadas de paso 1
- Lactofenol
- Cinta transparente
- 2 agujas
- Pinzas
- Porta objetos
- Aceite de inmersión

PROCEDIMIENTO

Adaptado de: Pepper and Gerba 2004 y Sanchez 2004

Paso 1:
a. Prepare el medio de cultivo (Agar cloranfenicol rosa de bengala) suficiente para 6 cajas de
Petri por tipo de suelo a evaluar. Esterilice y deje enfriar
b. Disuelva cada 10gr de suelo incubado en 95 ml de agua destilada
c. Considerando la dilución del punto b como 10-1 realice una serie de diluciones hasta llegar a
10-5, y rotule las 5 diluciones respectivamente o como A, B, C, D ,E
d. Considerando las diluciones C, D y E, rotule dos cajas de Petri por cada dilución de cada tipo
suelo. Posteriormente, adiciones 1 ml de dilución a cada una de las dos cajas
correspondientes.
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e. Adicione el agar suficiente a cada Caja de Petri (aprox. 20ml), posteriormente homogenice y
tape. Después de que el agar se halla solidificado, selle las cajas y deje incubando por una
semana a temperatura ambiente.

Paso 2.

a. Realice el conteo de las colonias por cada caja Petri y de acuerdo a las diluciones que fueron
cultivadas (tenga en cuenta que cajas con un número incontables de colonias no deben ser
tenidas en cuenta para el conteo). Posteriormente, examine las colonias al estereoscopio
b. Deposite una gota de lactofenol en un portaobjetos limpio. A continuación, con las pinzas
separe al menos 3 cm de cinta adhesiva transparente del rollo y corte. Posteriormente, pase
suavemente la parte adhesiva del trozo de cinta por la colonia de hongos, cuidando de aplicar
mucha presión en el proceso.
c. Consecutivamente, deposite el trozo de cinta, con la parte adhesiva hacia abajo, sobre la gota
de lactofenol (use las agujas para separar la cinta de las pinzas, evitar el contacto con la cinta
y la contaminación de la muestra). Cuidadosamente, y usando un elemento suave y redondo,
frote suavemente la cinta contra el portaobjeto tratando de eliminar el mayor número de
burbujas.
d. Observe al microscopio la muestra, e identifique al menos tres tipos diferentes de hongos.

PREGUNTAS
1. Calcule las UFC por gramo de suelo, considerando las diluciones y los tipos de suelo
evaluado.
2. El número de colonias encontrados es coherente con lo observado en las placas de la practica
2 y con los protozoos encontrados asociados a cada tipo de suelo?, explique su respuesta.
3. Qué función cumple el lactofenol en el montaje de la placa
4. Ilustre la morfología de los hongos filamentosos y explique la función cada parte que
conforma el hongo.
5. Realice esquemas de lo observado y describa de forma precisa y usando un lenguaje técnico
las colonias encontradas y lo observado en el montaje examinado al microscopio.
6. Cuál es la influencia que tiene el pH en la diversidad de hongos encontrados en el suelo?
7. Cuál es la influencia del carbono orgánico del suelo en la diversidad de hongos filamentosos
del suelo?
8. En qué tipo de suelo sería más probable encontrar una mayor riqueza de hongos filamentosos?
9. Selecciones dos plaguicidas comerciales y explique cuál es el efecto a corto y a largo plazo
en la diversidad de hongos filamentosos, considerando los siguientes escenarios:
a. Una única aplicación
b. 15 aplicaciones en dos meses
c. 23 aplicaciones en tres meses
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Ilustraciones de diferentes tipos de hongos

Fuente: Pepper, I.L. & Gerba, C.P. 2004
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Rhizopus

http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/page/view.php?id=100895
Mucor

https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mature_sporangium_of_a_Mucor_sp._fungus.jpg http://vetbook.org/wiki/cat/index.php?title=Mucor_spp

Penicillium

http://microbiologiayepidemiologia.blogspot.com.co/2012/06/penicillium-
http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/page/view.php?id=100815 phialosphora-rhyzopus.html

Fusarium

ttps://es.wikipedia.org/wiki/Fusarium http://www.vetbook.org/wiki/dog/index.php?title=Fusarium_spp

http://www.dehs.umn.edu/iaq_fib_fg_gloss_fusariumsp_photo1.htm
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BIBLIOGRAFÍA
FAO and ITPS. 2015. Status of the World’s Soil Resources (SWSR) – Main Report.
Food and Agriculture Organization of the United Nations and Intergovernmental Technical Panel on
Soils, Rome, Italy.

Pepper, I.L. & Gerba, C.P. 2004. Environmental microbiology. A laboratory manual. Segunda
edición. Elsevier Academic Press

Sanchez Colin, M. J. 2004. Microbiología de suelos Técnicas, métodos y medios de cultivo.

Universidad Nacional Autónoma de México

Autor

Johanna Fernández Bermúdez

Bióloga M.Sc
Instructora Control Ambiental
Centro de la Construcción
SENA-Valle