Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Práctica No. 12. Aislamiento de DNA, hidrólisis de RNA y
DNA e identificación de bases
púricas y pirimídicas por cromatografía en capa fina.
Granados Rivas Brenda, Pérez Cabrera Ana Karen
3FM1 Laboratorio de Bioquímica
c
Objetivos
❖ Conocer y realizar un procedimiento de
purificación de DNA de un vegetal.
❖ Determinar el espectro de absorción
característico del DNA aislado.
❖ Identificar las bases nitrogenadas con luz
ultravioleta del hidrolizado de DNA y RNA
mediante una cromatografía en capa fina.
Resultados
Se anexan imágenes de cromatografía de capa fina,
espectro de absorbancia, nomograma, cálculos de
concentración y pureza
Discusión de Resultados
En un gráfico de espectro de absorción de DNA, la
absorbancia a 260 nm es el pico máximo y
corresponde a las bases nitrogenadas, la
absorbancia a 280 nm a las proteínas ricas en
Laminoácidos aromáticos, la absorbancia a 230 nm
corresponde a los enlaces peptídicos de las
proteínas y la absorbancia a 210 nm se debe a los
fosfatos. Empleando esta información nos permite
observar que en la muestra de DNA empleada en
esta práctica no solo existe DNA ya que de ser así
solo se hubiera presentado un pico máximo en la
absorbancia que corresponde a la longitud de onda
de 260 nm debido a las bases nitrogenadas que
constituyen a la molécula de DNA sin embargo en
nuestro caso se observa más de un pico máximo,
Se
unoanexan
en graficas de los integrantes
la absorbancia a 260 nm con lo que
rectificamos la presencia de DNA y el otro pico que
corresponde a las absorbancias dentro del intervalo
de 215 nm a 220 nm debido a que la muestra puede
contener grupos fosfatos o proteínas pues como se
mencionó con anterioridad las absorbancias a 210
nm y 230 nm corresponden a dichas sustancias.
Con lo observado anteriormente podríamos decir
que la muestra utilizada contiene impurezas sin
embargo después de emplear la fórmula que nos
permite conocer la pureza del DNA podemos
observar que el DNA se encuentra casi puro pues
tiene una pureza de 1. 9930 donde el valor máximo
de pureza es de 2 y un porcentaje de pureza igual a
99.65, por lo que si existen proteínas o grupos
fosfatos en la muestra de DNA son en pequeñas
cantidades, pues podemos considerar al DNA casi
puro. Para identificación de las bases nitrogenadas
se procedió a realizar un hidrolizado y una
cromatografía en capa fina en donde se colocaron
en distintos puntos los bases nitrogenadas por
separado y las muestras de DNA y RNA
hidrolizadas, después de su corrimiento y revelación
podemos observan en la imagen como el DNA y el
RNA se constituyen de las bases nitrogenadas
Adenina, Guanina y Citocina pues ambas muestras
presentas Rf similares a la de estas bases
nitrogenadas, sin embargo podemos observar que
en la muestra de DNA se observa una mancha con
el mismo Rf que la timina y por el contrario el RNA
presenta una mancha con el Rf similar al de la base
nitrogenada uracilo, esto se debe a que como
sabemos una de las diferencias entre ambas
moléculas es la diferencia precisamente en estas
bases nitrogenadas pues en el DNA la timina se une
con la adenina mientras el en ARN esta base
nitrogenada se sustituye por el uracilo uniéndose a
la adenina, corroborando así dicha información con
la cromatografía en capa fina. Después de aplicar
las fórmulas para obtener la concentración de DNA,
dicha concentración es de 0.0005031 g/mL, de la
misma manera también se puede emplear el
nomograma, aunque este puede arrojar datos no
tan exactos debido a que al trazar la línea no lo
hagamos correctamente debido a la pequeña
escala, aunque arroja valores muy cercanos a los
obtenidos con las fórmulas.
Conclusiones
En un espectro de absorción la absorbancia a 260 nm
es el pico máximo debido a las bases nitrogenadas.
La absorbancia a 260 nm y 280 nm nos permite
calcular la concentración de DNA aislado y la pureza
del mismo.
La identificación de las bases nitrogenadas nos
permite diferenciar entre DNA y RNA debido a la
presencia de Timina en DNA y Uracilo en RNA.
Bibliografía
Eric. E. y P.K. Stumpf “Bioquímica Fundamental”
Edit. Limusa, S.A., 3° edición.
Plummer, D.T. (1981). “Introducción a la Bioquímica
Practica” Edit. Mc Graw Hill Latinoamericana, S.A.
Anexo.
Cromatografía

T U C A G DNA RNA

Espectro de absorción

Cálculos
Resultados
A a 260= 1.132, A a 280= 0.568, Dilución 1:10
Formulas
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝒂 𝟐𝟔𝟎 𝒏𝒎
𝑪𝒐𝒏𝒄𝒆𝒏𝒕𝒓𝒂𝒄𝒊ó𝒏 𝒅𝒆 𝑫𝑵𝑨 = 𝒙 𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝒅𝒊𝒍𝒖𝒄𝒊ó𝒏
𝟐𝟐𝟓𝟎𝟎
l 𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝒂 𝟐𝟔𝟎 𝒏𝒎
𝑷𝒖𝒓𝒆𝒛𝒂 =
𝑨𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒄𝒊𝒂 𝒂 𝟐𝟖𝟎 𝒏𝒎
v
1.132
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝐷𝑁𝐴 = 𝑥 (10) = 𝟓. 𝟎𝟑𝟏𝒙𝟏𝟎−𝟒 g/mL
22500

1.132
𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 = = 𝟏. 𝟗𝟗𝟑𝟎
0.568
1.9930𝑥100
%𝑃𝑢𝑟𝑒𝑧𝑎 = = 𝟗𝟗. 𝟔𝟓%
2
 Gráfico del espectro de absorción de DNA
1.4

1.2
Absorbancia (A)

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0 50 100 150 200 250 300 350

Longitud de onda (nm)