INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
“Laboratorio De Bioquímica”.

Integrantes: Sección: 2
Colorado González Alan Fecha de entrega:
González Almanza Mario Hector 23/08/2019
Grupo: 4QV2 OBJETIVOS:
 Analizar el
Práctica No.2: PRECIPITACIÓN, SEPARACIÓN Y PUNTO efecto que
ISOELÉRECTRICO DE PROTEÍNAS. produce la
modificación de
factores fisicoquímicos sobre la solubilidad de
INTRODUCCIÓN:
proteínas.
Desde el punto de vista bioquímico, las principales  Determinar el punto isoeléctrico de la insulina
propiedades comunes de las proteínas son tres: La basándose en sus propiedades de solubilidad a
posibilidad de precipitación selectiva, reversible o diferentes valores de pH.
irreversible por diversos procedimientos; la
RESULTADOS:
capacidad amortiguadora y las propiedades
osmóticas. Tabla 1. Precipitación de proteínas por
precipitación con sales (salting out):
La precipitación selectiva de las proteínas es una Biuret Interpretación
propiedad muy importante para su aislamiento y Filtrado 1 + Presencia de proteínas
purificación. Muchas veces la precipitación va solubles
acompañada de un proceso de desnaturalización. Precipitado 1 + Presencia de proteínas
precipitadas
Al ser el agua el disolvente biológico por excelencia, Filtrado 2 + Presencia de proteínas
las proteínas se encuentran normalmente en Precipitado 2 - Ausencia de proteínas
disolución acuosa de la que pueden precipitar
selectivamente por cambios en polaridad del Tabla 2. Precipitación por efecto del pH y
disolvente, en su fuerza iónica en el pH o en la solventes
temperatura. Normalmente, las moléculas de las Tubo No. 1 2 3
proteínas se hallan situadas por una serie de Clara de 3.0 3.0 3.0
moléculas de disolvente (agua de hidratación). huevo
filtrada, dil.
La precipitación puede producirse por desaparición 1:3 (mL)
total o parcial de esta envoltura acuosa que facilita la HCl 0.1N 1.0 - -
(mL)
agregación intermolecular. Muchas proteínas pueden
NaOH 0.1N - 1.0 -
precipitarse aumentando la fuerza iónica o la (mL)
concentración de solutos del medio, por adición Regulador
(NH4)SO4, Na2S2O3, guanidina, urea etc. de acetatos - - 1.0
0.1M,pH
La carga neta de las proteínas depende del pH. En el 4.7 (mL)
punto de neutralidad (punto isoeléctrico) las cargas Las Se alejó del Precipita
ácidas y básicas de las cadenas laterales de la proteínas se punto ción de
proteína están en equilibrio: la proteína ya no se precipitan isoeléctrico, las
desplaza a un campo eléctrico. El enfoque Observacio debido a la por lo tanto proteínas
isoeléctrico utiliza este efecto para separar las nes desnaturaliza se
proteínas en un campo eléctrico según sus puntos de ción solubilizaro
n las
neutralidad. Para ello se requiere generar en el gel de
proteínas
electroforesis un gradiente de pH estable para lo que Etanol 96° 3.0 3.0 3.0
se usan polielectrolitos (anfolitos) sintéticos que (mL)
llevan un gran número de sustituyente cargados Observacio Mayor Mayor Mayor
positiva y negativamente con diferentes valores de nes precipitación solubilizaci precipitac
pK. ón ión
 Tabla 3. Precipitación por metales pesados
Tubo No.
1 2 3 4 5 6
Clara de
huevo filtrada 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
dil. 1:3 (mL)
HgCl2 5% (mL) 0.25 - - - - -
AgNO3 2% - 0.25 - - - -
(mL)
Pb(CH3COO)2 - - 0.25 - - -
5% (mL)
BaCl2 5% - - - 0.25 - -
(mL)
NaCl 5% (mL) - - - - 0.25 -
Agua (mL) - - - - - 0.25
Observacione Precipitació Precipitació Precipitació Precipitació Precipitació Precipitació Las
s
Tabla 4. Determinación n +punto isoeléctrico
del n+ de la n + n- n- n-
insulina proteínas pueden precipitarse de soluciones por
Tubo CH3COO NaCH3CO Insulina pH Observaci diversos iones positivos o negativos. Los iones
No. H O 0.2M 40 U/mL ones positivos de uso más común para precipitar
0.2M (mL) proteínas son los metales pesados. Estos iones
(mL) precipitan proteínas de soluciones a pH superior al
1 0.23 0.02 6U Sin
isoeléctrico de cada proteína, porque a este pH la
(0.06mL 3.67 precipitaci
) ón proteína está disociada como proteína negativa
2 0.15 0.10 6U Sin que se combina con el ion metálico positivo para
(0.06mL 4.56 precipitaci dar un precipitado insoluble de proteínato del
) ón metal. Lo que sucede en este caso es que el metal
3 0.05 0.20 6U Precipitaci pesado (en este caso y como resultado + fue
(0.06mL 5.34 ón de
) proteínas
Plomo), formo interacciones químicas con las
4 0.01 0.24 6U 6.12 Sin partes apolares de la molécula protéica, formando
(0.06mL precipitaci ahora sales de metal pesado, las cuales
) ón precipitarán.
5 0.00 0.25 6U Sin
(0.06mL precipitaci El pH del medio afecta la solubilidad de las
) ón proteínas, pues cuando es igual al punto
isoeléctrico de la proteína, ésta pierde su carga
eléctrica neta y con ello su solubilidad, llegando a
Cálculos punto isoeléctrico de la insulina: precipitar en algunos casos. La presencia de
solventes orgánicos como la acetona, etanol etc.,
Ecuación de Henderson Hasselbach: afecta también la solubilidad de las proteínas,
porque en su presencia disminuye la capacidad de
[Base] 0 .02
pH = pKa + log ; pH =4.74 + log los solventes acuosos para separar y solubilizar a
[ Ácido ] 0 .23 ¿ ¿
los grupos cargados de las proteínas. Un indicador
3.67 cuantitativo de la polaridad de un disolvente es su
Análisis y discusión de resultados: constante dieléctrica, la cual es muy elevada al
tratarse del disolvente universal, pero en este
El término salting out ha sido atribuido al proceso experimento, el alcohol disminuyo
de precipitación con sales, en donde la considerablemente esa constante, por lo cual
concentración de iones aumenta progresivamente, favoreció aún más su precipitación.
y éstos interactúan con las moléculas de agua que
rodean la proteína, dejando al descubierto zonas Bibliografía:
"pegajosas" que hacen que las moléculas protéicas Gómez S. Fernández M. Ardilla N. Rodríguez J.
se unan entre sí y se precipiten, ya que a (1994). La inmunología. Diagnóstico clínico.
solubilidad de las proteínas globulares disminuye Capítulo 3. Anticuerpos. Editorial Ceja Colombia 1ª
directamente con la concentración de sales. edición.
Macarulla J. Goñi F. (2003). Biomolécula. Capítulo
5. Proteínas. Editorial Reverté S.A. Madrid 3ª
edición.
Muller W. (2008). Bioquímica. Fundamentos para
medicina y ciencias de la vida. Capítulo 2.
Proteínas, métodos de separación. Editorial
Reverté S.A. Madrid 1ª edición.

Los metales pesados se encuentran cerca de la

parte inferior de la tabla periódica, con lo que sus
densidades son altas en comparación con los otros
materiales. El término “metal pesado” se refiere a
aquellos metales de la tabla periódica cuyo peso
específico es superior a 5g/cm3 o que tienen un
número atómico por encima de 20 (excluyendo
generalmente a los metales alcalinos y elementos
alcalinotérreos (Bracke, 1991; triller, 1989).