Manual Inmunohematología

GUIA DE LABORATORIO
Unidad de Formación
Versión: 001 Fecha: FEBRERO DE Manual de calidad
2015
Código: UC-BAC-BAN- Pag 1 de 23
GL007
Laboratorio No 1
Tema: HEMOCLASIFICACION DIRECTA E INVERSA
Objetivo
 Determinar la clasificación sanguínea en relación con sistema ABO y el sistema RH,

efectuando pruebas que identifique el tipo sanguíneo de cada uno de los pacientes.
Fundamento
GRUPOS SANGUINEOS
El grupo sanguíneo es cada uno de los diversos tipos en que se ha clasificado la sangre de las
personas en relación con la compatibilidad de los hematíes y suero de otro individuo que la
recibe. Estos grupos son cuatro, según la clasificación que hizo Landsteiner, clasificación hoy
universal y se denominan: O, A, B, AB. Se caracterizan por las diferentes combinaciones de dos
aglutinógenos existentes en los glóbulos rojos y de dos aglutininas contenidas en el suero.
FACTOR Rh:
El factor Rh es un aglutinógeno encontrado en 1940 por Landsteiner y Weiner, en los glóbulos

rojos en unos primates (Macacus rhesus) y que también existe normalmente en el 85% de los
humanos, que por esta causa se denomina Rh positivos.
La sangre de estos transfundida a los Rh negativos (15%), provoca en el suero de estos últimos
la formación de anticuerpos, que en sucesivas transfusiones pueden destruir los glóbulos rojos
del donante Rh positivo, invalidando así la transfusión y creando efectos adversos. También en
el embarazo un feto Rh + puede provocar en la madre Rh – la producción de aglutininas que
podrán ser la causa de la enfermedad hemolítica de los recién nacidos.
El factor Rh esta constituido por un complejo de seis antígenos fundamentales, formado por tres
pares de genes alelos: Cc, Dd, Ee. El antígeno de mayor poder sensibilizante es el D, le siguen
en importancia el e y el E.
Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la sangre que dependen
de los antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre.
Las dos clasificaciones más importantes para describir grupos sanguíneos en humanos son los
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
Fecha Fecha Febrero Fecha

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GL007
antígenos y el factor Rh. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden
desembocar en hemólisis, anemia, fallo renal, shock y muerte.
LOS ANTIGENOS:
Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A en su
superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre.
Análogamente, las personas con sangre del tipo B tienen la combinación contraria, glóbulos rojos
con antígenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su
sangre.
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B) en la
superficie de sus glóbulos rojos, pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras
que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie y no fabrican ninguno
de los dos anticuerpos.
A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún problema a
cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO
HERENCIA DEL TIPO ABO:
Los grupos sanguíneos son heredados de los progenitores. Son controlados por un solo gen con
tres alelos: O, A, B
El alelo A da tipo A, el B da tipos B y el alelo i da tipos O, siendo A y B dominantes sobre i. Así

las personas que heredan dos alelos ii tienen tipo O; AA o Ai dan lugar a tipo A; y BB o Bi dan
lugar a tipos B. Las personas AB tienen ambos fenotipos debido a que la relación entre los alelos
A y B es de codominancia. Por lo tanto, es prácticamente imposible para unos progenitores AB el
tener un hijo con tipo O.
HERENCIA DEL FACTOR RH:
El factor Rh es heredado de la misma forma, con la diferencia de que hay dos alelos y el Rh es
dominante. Los alelos son Rh + y Rh –
FRECUENCIA:
La distribución de los grupos sanguíneos en la población humana no es uniforme. El más común

es O+, mientras que el mas infrecuente es AB-. Además, hay variaciones en la distribución en
las distintas subpoblaciones humanas.

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GL007
TIPO 0+ A+ B+ O- A- AB+ B- AB-

FRECUENCIA 40% 34% 9% 7% 6% 3% 2% 1%
DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO ABO
Las pruebas utilizadas para establecer la hemoclasificación sanguínea relacionada a los diversos
grupos sanguíneos, aprovechan las características inmunológicas que expresa cada individuo de
acuerdo a su particular codificación genética.
En dichas pruebas se evidencian los antígenos y/o anticuerpos del grupo sanguíneo, de acuerdo
a su comportamiento in Vitro. En cuanto al sistema ABO se investigan tanto antígenos o
aglutinógenos como los anticuerpos o isoaglutininas naturales.
Loa glóbulos rojos utilizados en estos procedimientos poseen en la membrana los antígenos,
además nos facilitan la visualización de la reacción como si fuesen los indicadores del punto final
de la hemoaglutinación.
La hemoaglutinación se considera la reacción de Ag – Ac de mayor utilidad en el laboratorio de

inmunohematología, por lo que se hace indispensable recordar las características y las
condiciones que modifican dicha reacción, para poder determinar con claridad los requerimientos
óptimos que permitan obtener la mayor constante de equilibrio en cada prueba específica y en
esta forma se asegure la confiabilidad y contribución exitosa de los procedimientos empleados
en el estudio de los grupos sanguíneos.
Actualmente es posible determinar todos los antígenos de los diferentes sistemas de grupos
sanguíneos presentes en los glóbulos rojos de un individuo. Para esto se emplean anticuerpos
específicos y en ocasiones lectinas. Sin embargo, en los procesos de rutina, cuando se solicita
hemoclasificación, se determinan únicamente los antígenos de los sistemas ABO y Rh
La práctica consiste en determinar el grupo sanguíneo del sistema ABO y Rh-D de las muestras
proporcionadas.
HEMOCLASIFICACION: SISTEMA Rh (Ag D)
En el sistema Rh, existen varios antígenos: D, C, c, E, e; sin embargo, de rutina, solo se

determina la presencia del Ag D en los eritrocitos y de acuerdo a su presencia o ausencia se dice
que un individuo es Rh D positivo o Rh D negativo
DETERMINACION DEL Ag DEBIL

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GL007
Consiste en determinar la variante D débil en una muestra previamente tipificada como Rh: D
negativo
La determinación de la variante D débil, solo se realiza a muestras que por el método manual
usual han resultado D negativas
Materiales y Equipos
Item Tipo Descripción
01 MAT Glóbulos rojos A, B y O
Tubos de ensayo
02 MAT Pipetas pasteur
03 MAT Muestra de sangre con EDTA
04 MAT Suero del paciente
Laminas del paciente
Palillos
05 EQU Centrifuga
Reactivos
Ítem Descripción
01 Solución salina 0.85%
02 Anti A, Anti B, Anti A,B
03 Anti D
04 Albumina Bovina
Procedimiento
Paso
1 HEMOCLASIFICACION DIRECTA:
A. Método en tubo:
 Marque los tubos con Anti A, Anti B, Anti A,B

 Lavar los glóbulos rojos del paciente 3 veces consecutivos en solución salina
y preparar una suspensión final al 3% en dicha solución (50 ul glóbulos rojos
lavados + 950ul SS).
 Adicionar:
2

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A B AB D
Reactivo anti- 2 Gotas - - -
A
Reactivo anti- - 2 Gotas - -
B
Reactivo anti - - 2 Gotas -
AB
Reactivo anti- - - - 2 Gotas
D
GR paciente 1 Gota 1 Gota 1 Gota 1 Gota
3  Incubar 5 minutos a temperatura ambiente antes de centrifugar
 Mezclar cada tubo y centrifugar 15 – 30 segundos
 Resuspender suavemente los botones celulares y observar aglutinación
POSITIVO: Aglutinación con cualquier antisuero. Reacciones positivas de

aglutinación: week, 1+, 2+, 3+ o 4+.
NEGATIVO: La presencia de una suspensión uniforme de GR (O)
4 HEMOCLASIFICACION DIRECTA:
B. Método en lamina:
 Centrifugar la muestra
 Separar los glóbulos rojos
 Lavar 3 veces con SS paquete globular
 Preparar una suspensión de la muestra de 3-5% (50 ul glóbulos rojos lavados
+ 950ul SS)
 Marcar cuatro laminas portaobjeto como A, B, AB y D, además del número de
muestra
 Adicionar:
5
A B AB D
Reactivo anti- 2 gotas - -
A
Reactivo anti- - 2 Gotas -
B
Reactivo anti - - 2 Gotas
AB

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GL007
Reactivo anti- 2 Gotas
D
GR paciente 1 Gota 1 Gota 1 Gota 1 Gota
6  Mezclar cada preparación con un palillo
 Rotar manualmente cada lamina
 Observar aglutinación y registrar los resultados
POSITIVO: La aglutinación fuerte de los glóbulos rojos en presencia de cualquier

anticuerpo ABO. Las reacciones positivas muestran 3+ de aglutinación
NEGATIVO: La presencia de una suspensión uniforme (O) de glóbulos rojos.
7 HEMOCLASIFICACION INVERSA:
PRUEBA INVERSA EN TUBO:
 Marcar tres tubos como A, B, O

 Adicionar:
A B O
Suero paciente 2 Gotas 2 Gotas 2 Gotas
8 GR A 1 Gota
GR B 1 Gota
GR O 1 Gota
9  Incubar de 5 minutos a temperatura ambiente

 Mezclar cada tubo y centrifugar por 15 – 30 segundos
 Al terminar la centrifugación observar el sobrenadante para evidencia la
presencia de hemólisis.
 Resuspender los botones celulares y observar aglutinación.
10 POSITIVO: Aglutinación y/o hemólisis

NEGATIVO: Una suspensión homogénea de eritrocitos.
11 Prueba directa en lamina:
 Marcar dos laminas como D y control

 Adicionar:

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GL007
12 D Control
Suero Anti-D 2 Gotas -
Albúmina Bovina 22% - 2 Gotas
Sangre 1 Gota 1 Gota
 Mezclar con palillos cada preparación
13  Rotar manualmente las láminas y observar aglutinación.
POSITIVO: Aglutinación de glóbulos rojos

NEGATIVO: Una suspensión uniforme de glóbulos rojos
14 OBSERVACIONES:
Si la preparación de glóbulos rojos con albúmina al 22% presenta aglutinación, la

prueba no se puede interpretar.
La desecación en los bordes de la preparación, no se debe confundir con
aglutinación.
15 Prueba directa en tubo:

 Lavar los glóbulos rojos del paciente tres veces con solución salina y
suspenderlos del 3 – 5%
 Marcar dos tubos como D y control
 Adicionar
16 D CONTROL
Suero Anti D 2 Gotas -
Albúmina Bovina al 22% - 2 Gotas
GR paciente 1 Gota 1 Gota
17  Mezclar suavemente y centrifugar durante 15 -30 segundos

 Resuspender el botón celular y observar aglutinación
POSITIVO: La aglutinación de los glóbulos rojos con anti-D

NEGATIVO: Una suspensión uniforme de los glóbulos rojos con anti-D
18 OBSERVACIONES:
Si en el control se observa aglutinación, la prueba no se puede interpretar, hasta

realizar mas análisis.

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GL007
DETERMINACION DEL Ag DEBIL

19
 Lavar los eritrocitos a tipificar 3 veces con solución salina y suspenderlos al 3
– 5%
 Marcar dos tubos con D y Control
Adicionar:
20
D CONTROL
Anti – D 2 Gotas -
Albúmina Bovina - 2 Gotas
GR paciente 1 Gota 1 Gota
 Mezclar e incubar los tubos a 370C durante 15 – 30 minutos, según las

21 especificaciones del fabricante
 Centrifugar 15 – 45 seg
 Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia de
aglutinación. Si el tubo con anti – D, los eritrocitos están fuertemente
aglutinados, pero no en el tubo control, registrar la prueba como D positiva y
no realizar la fase siguiente con el suero de Coombs
 Si las células no son aglutinadas o los resultados son dudosos, lavar los
22 eritrocitos 3 veces con abundante solución salina. Decantar la SS.
 Adicionar:
23
D CONTROL
Suero de Coombs 1 Gota 1 Gota
24  Mezclar y centrifugar 15 – 30 seg

 Resuspender suavemente cada botón celular, examinar para aglutinación y
registrar el resultado teniendo en cuenta la escala de intensidad. Si hay
aglutinación en el tubo de prueba con anti – D, entonces el resultado es D
positivo.
 Si el resultado es negativo, adicionar:
25 D CONTROL

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GL007
Células control de 1 Gota 1 Gota
Coombs
26 Las células control de Coombs son GR O Rh D positivo sensibilizados con anti

D
 Repetir la centrifugación por 15 – 30 seg. La aglutinación en este punto refleja

la presencia de suero antiglobulina libre y confirma que la reacción era
realmente Negativa
27 OBSERVACIONES:
Si se presenta aglutinación en cualquier fase de la prueba en el tubo control, no se

puede realizar la lectura.
Consulta
1. Que es el Fenotipo Bombay
2. Realice una tabla de compatibilidad entre los grupos sanguíneos, teniendo en cuenta
para cada grupo el Rh (-) y el Rh (+)..
Bibliografía
BERRIO, M. et-al El hemograma, análisis e interpretación con las tres generaciones. Editorial
Universidad de Antioquia. Medellín, Antioquia 2003.
BROWN B. Hematology: priciples and procedures 6ª ed. Filadelfia. Lea & Febiger; 1993.
MIALE JB. Hematologia medicina de laboratorio 6ª ed. Barcelona: Revertè; 1985.
LEE GR. Et al. Wintrobe’s clinical hematology. Filadelfia: Williams & Wilkins; 1999.
WILLIAM WJ. Et al. Hematology. 5ª ed. Nueva York. San Luis; 1995.
VIVES J.L. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología. Editorial Salvat.
TURGEON, M. Hematología clínica. Teoría y Procedimientos. Editorial El Manual Moderno. 2006
ANEXOS
No. 1
RESULTADOS DEL LABORATORIO

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GL007
INTEGRANTES:
HEMOCLASIFICACION ABO:
Directa en lamina Directa en tubo Inversa

Anti- Anti- Anti- Anti- Anti- Anti-AB A B O
A B AB A B
Resultado de la muestra analizada:
Grupo:____________
No. 2 Hemoclasificación Rh:
Directa en lamina Directa en tubo

Anti – D Control Anti – D Control
Hemoclasificación: Ag D DEBIL
D CONTROL
Centrifugacion
inmediata
Fase Coombs
Celulas control de
Coombs
Resultados de la muestra analizada:
Rh: _________Ag D débil: ____________
ANALISIS:

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GL007
Laboratorio No 2
Tema:
COOMBS DIRECTO E INDIRECTO
Objetivo
 Conocer el procedimiento de las pruebas de compatibilidad y adquirir destreza en la
realización del coombs directo e indirecto
 Interpretar cada uno de los resultados y tomar decisiones en las incompatibilidad de las
pruebas
Fundamento
COOMBS DIRECTO
Se usa para demostrar in vivo la cobertura de los eritrocitos con globulinas. Es útil en la
investigación de anemias hemolíticas autoinmunes, hemólisis inducida por drogas, eritroblastosis
fetal, reacciones aloinmunes contra eritrocitos recientemente transfundidos.
Significado de los resultados anormales:
Un examen de Coombs directo positivo indica anticuerpos contra los glóbulos rojos, los cuales a
su vez pueden indicar la presencia de una de las siguientes condiciones
 Anemia hemolítica autoinmune sin otra causa subyacente

 Anemia hemolítica inducida por medicamentos
 Eritroblastosis fetal
 Mononucleosis infecciosa
 Infecciones por Micoplasma
 Sífilis
 Leucemia linfocítica crónica u otro trastorno linfoproliferativo
 Lupus eritematoso sistémico u otra condición reumatológica
 Reaccion a transfusión como la ocasionada por unidades de sangre de compatibilidad
inadecuada
 Esta prueba también es anormal en algunas personas sin que exista una causa clara,
especialmente en personas de edad avanzada. Hasta el 3% de las personas que están
hospitalizadas sin un trastorno sanguíneo conocido tendrán un resultado anormal en el
examen de Coombs directo.
COOMBS INDIRECTO
Detecta anticuerpos hacia los glóbulos rojos en la circulación. Es importante para la

determinación de la compatibilidad entre dador y receptor en el caso de transfusiones de sangre.

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GL007
Detecta también la presencia de anticuerpos anti Rh en la madre durante el embarazo. Evalúa la
necesidad de administrar inmunoglobulina Rh (Ag D). Ayuda a confirmar el diagnostico de
anemia hemolítica.
Significado de los resultados anormales:
 Test positivo indica la presencia de anticuerpos circulantes contra los glóbulos rojos
 En la embarazada con sangre Rh negativo, un test con titulo positivo alto significa que el
feto puede desarrollar la enfermedad hemolítica del recién nacido.
CELULAS CONTROL DE COOMBS
Cuando las pruebas de la antiglobulina, directa e indirecta, dan negativas, es necesario verificar
el reactivo antiglobulina. Una manera fácil es, a partir de la prueba negativa, poner la suspensión
en contacto con eritrocitos O Rh+, sensibilizados con anti D conocidos como células control de
coombs y leer de nuevo.
INTERPRETACION:
La lectura con las células control de Coombs deben dar positivas, no mayor de dos cruces.
Es importante recordar que una prueba de la antiglobulina negativa, sin control, puede
interpretarse como una prueba negativa, falsa.
01 MAT Coombs directo
 Muestra de sangre con anticoagulante EDTA

 Tubos de ensayo
 Tapones de caucho
 Gradillas
 Pipeta pasteur
02 MAT Coombs indirecto
 Suero problema
 Muestra de sangre con anticoagulante EDTA
 Tubos de ensayo
 Micropipetas

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GL007
 Gradillas
 Pipetas pasteur
04 MAT Baño Maria a 370C,
06 EQU Centrifuga
Reactivos
Ítem Descripción
01  Solución salina al 0.85%
02  Suero de coombs
03  Albúmina bovina
04  Suero anti – D
Procedimiento
Paso Descripción
1 PRUEBA DE COOMBS DIRECTO
 Lavar los eritrocitos 3 veces con SS y suspenderlos del 3 – 5%

 Marcar dos tubos como CD y control
 Adicionar:
2
CD CONTROL
Suero de Coombs 2 Gotas 2 Gotas
GR paciente 1 Gota -
GR O positivo - 1 Gota
3  También puede realizar su control adicionando dos gotas del GR del

paciente y dos gotas de SS
aglutinación
 Graduar la aglutinación 0, 1+, 2+, 3+, 4+.
4
CD CONTROL
Coombs
5
 Repetir la centrifugación de 15 – 45 seg

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GL007
 La aglutinación en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina libre
y confirma que la reacción era realmente negativa.
6 OBSERVACIONES:
Si se presenta aglutinación en cualquier fase de la prueba en el tubo control, no se

puede realizar la lectura.
7 PRUEBA DE COOMBS INDIRECTO:
 Separar el suero del paciente con el que se va a realizar la prueba

 Lavar los eritrocitos del paciente 3 veces con SS y suspenderlos del 3 – 5%
 Marcar dos tubos como CI y Control
 Adicionar:
8
CI CONTROL
GR Paciente 2 Gotas
Suero del paciente 2 Gotas 2 Gotas
GR O positivo 2 Gotas
9  Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia de
aglutinación
10
CI CONTROL
Albúmina Bovina 2 Gotas -
Solución salina al 0.85% - 2 Gotas
11
 Incubar a 370C por 20 minutos
 Después de la incubación los glóbulos rojos se lavan tres veces con SS al
0.85%
 En el ultimo lavado descartar la SS al 0.85% hasta que quede la muestra en
las paredes del tubo
 Adicionar
12
CI CONTROL

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GL007
Suero de Coombs 2 Gotas -
Solución salina al 0.85% - 2 Gotas
13  Centrifugar 15 – 45 seg
aglutinación
 Graduar la aglutinación 0, 1+, 2+, 3+, 4+.
CD CONTROL
14 Coombs
15
 Repetir la centrifugación de 15 – 45 seg
 La aglutinación en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina libre
y confirma que la reacción era realmente negativa.
16 CELULAS CONTROL DE COOMBS:
 Lavar tres veces glóbulos rojos O+

 Colocar 8 a 10 gotas de suspensión de glóbulos rojos O positivos
 Colocar la misma cantidad de antisuero anti D al tubo
 Incubar a 37oC por 30 minutos
 Lavar de 5 a 6 veces en solución salina 0.85%
 Resuspender al 3-5% en solución salina 0.85%
 Probar estos glóbulos rojos con una gota de suero de Coombs y buscar
aglutinación
 Este control dura 4-5 dias a 4oC
Consulta
1. Una de las fases de la prueba de coombs indirecta requiere albúmina, mencione cuál es
la función de los potenciadores y que otros se pueden utilizar.
2. Cuál es la utilidad de las pruebas de coombs, explique
3. De acuerdo a las diferentes fases en las que se realizan las pruebas de coombs, indique
que clase de anticuerpos se pueden presentar
Bibliografía
Descripción

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GL007
ANEXOS
No. Anexo Descripción
No. Prueba de Coombs directa
Anexo
CD Control
Centrifugación
inmediata
Fase Coombs
Células control de
Coombs
Prueba de Coombs indirecta
CI Control
Centrifugación
inmediata
Fase albúmina
Fase Coombs
Células control de
Coombs

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GL007
Laboratorio No 3
Tema: PRUEBAS CRUZADAS
Objetivo
 Conocer el procedimiento de las pruebas de compatibilidad y adquirir destreza en la

realización del Coombs directo e indirecto
 Interpretar cada uno de los resultados y tomar decisiones en las incompatibilidad de las
pruebas
Fundamento
ANTIGLOBULINA HUMANA O DE COOMBS
La prueba de antiglobulina o de Coombs, es un procedimiento necesario en el trabajo cotidiano

de todo Banco de sangre, para demostrar la presencia de anticuerpos incompletos de grupos
sanguíneos, de significación clínica, fracciones del complemento o algunos antígenos de los
eritrocitos. Los anticuerpos incompletos, usualmente Inmunoglobulina G (IgG), son capaces de
unirse a las células rojas, pero no de aglutinarlas cuando están suspendidas en solución salina,
por las características de su molécula, el tamaño muy pequeño; sin embargo cuando se agrega
otro anticuerpo, anti Ig G, la aglutinación se hace posible. Este anticuerpo Ig G en si, es el suero
antiglobulina.
La prueba tiene una utilidad clínica muy amplia; es imprescindible cuando se trata de establecer
la naturaleza inmune de diversas situaciones como: una reacción transfusional, la enfermedad
hemolítica del recién nacido, una anemia hemolítica relacionada con drogas o con mecanismos
autoinmunes. Forma parte de estudios pretransfusionales que deben realizarse tanto al donante

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GL007
como al receptor, como las pruebas de compatibilidad y la detección e identificación de
anticuerpos inesperados.
El principio de la prueba de la antiglobulina es demostrar anticuerpos incompletos,

Inmunoglobulina G, o complemento, mediante el suero antiglobulina, el cual contiene un
anticuerpo anti Ig G y / o un anticuerpo anticomplemento.
El suero antiglobulina se prepara a partir de colonias diferentes de conejos inmunizados con

globulinas humanas. Los animales se inyectan con Ig G o betaglobulinas, altamente purificadas,
las cuales actúan como inmunogenos y provocan una respuesta de anticuerpos contra esas
globulinas humanas: anticuerpos anti Ig G o anticuerpos contra el complemento.
La prueba de la antiglobulina se hace mediante dos formas, la prueba directa y la prueba

indirecta; son métodos similares, pero se diferencian en la reacción de sensibilización de las
células rojas, es decir la unión entre antígeno y su correspondiente anticuerpo. En la prueba
directa se demuestra esa sensibilización in vivo, en la prueba indirecta in Vitro.
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
Cuando a un paciente se le va a realizar una transfusión de cualquier componente que contenga

glóbulos rojos, se debe clasificar para los sistemas ABO y Rh (Ag D) y buscar el componente del
mismo grupo ABO y Rh (Ag D). Además debe realizarse pruebas de compatibilidad, entre el
suero o plasma del receptor y los eritrocitos del donante
01 MAT  Muestra de sangre con anticoagulante EDTA
 Pipetas pasteur
02 MAT  Tubos de ensayo
03 MAT  Micropipetas
04 MAT  Gradillas
05 EQU  Baño Maria a 370C
06 EQU  Centrífuga
Reactivos
Ítem Descripción
01  Suero problema
02  Albúmina Bovina
03  Suero de Coombs
04  Solución salina al 0.85%

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GL007
Procedimiento
Paso Descripción
1 La práctica consiste en buscar 1 unidad de sangre compatible.
 Recolectar una muestra de sangre del receptor en tubo seco para obtener
suero y en tubo con EDTA para lavar glóbulos rojos
 Separar el suero del receptor
 Lavar los eritrocitos del receptor tres veces con solución salina y
resuspenderlos del 3-5%
2  Disponer de los tubos pilotos la bolsa proveniente del donante

 Lavar los glóbulos rojos provenientes de los pilotos del donante tres veces
con solución salina y resuspenderlos del 3-5%
 El procedimiento que se describe a continuación se debe realizar para cada
una de las unidades a transfundir
 Marcar dos tubos uno con el numero de la bolsa y el otro como autocontrol
 Adicionar:
3 FASE SALINA:
PRUEBA CRUZADA AUTOCONTROL

Suero receptor 2 Gotas 2 Gotas
GR donante 1 Gota -
GR receptor - 1 Gota
4
 Observar la presencia de hemólisis en el sobrenadante. Resuspender los
botones para observar aglutinación; si existe graduarla según la escala
 La presencia de hemólisis o aglutinación, constituye una prueba cruzada
incompatible, una suspensión homogénea de eritrocitos se considera como
una prueba cruzada compatible en la Fase Salina o inmediata.
5 FASE ALBUMINA:

Albúmina bovina 2 Gotas 2 Gotas
6
 Incubar 15-30 minutos a 370C

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GL007
 Observar la presencia de hemólisis en el sobrenadante. Resuspender los
botones para observar aglutinación; si existe graduarla según la escala
una prueba cruzada compatible en la Fase de Albúmina
 Lavar tres veces con SS y decantar bien el sobrenadante en el ultimo lavado
7
FASE DE COOMBS:
Suero de Coombs 2 Gotas 2 Gotas
8
 Resuspender los botones para observar aglutinación. Si existe, graduarla
según la escala
una prueba cruzada compatible en la Fase de Coombs

9 Células control de 2 Gotas 2 Gotas
Coombs
10  Centrifugar 30 – 45 seg
 Observar aglutinación y registrar los resultados
 La presencia de hemólisis o aglutinación, confirma que la prueba era
realmente negativa en la fase de Coombs y que se ha trabajado
correctamente. (Este es un control interno que no se informa).
11 OBSERVACIONES:
 En algunos centros se emplean medios diferentes a la albúmina para

disminuir el potencial Z; entre ellos están la solución salina de baja fuerza
iónica (LISS), el Polietilenglicol (PEG) y el Polibreno de baja intensidad
(LIP). Para cada uno existen protocolos que se deben seguir
cuidadosamente
 El autocontrol debe permanecer negativo siempre

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GL007
 Se deben registrar los resultados para cada unidad. Si la prueba es
incompatible la unidad no se debe trasfundir, se debe buscar otra unidad
de sangre y realizar las pruebas cruzadas correspondientes.
Consulta
1. Qué es un Banco de Sangre
2. Qué tipos de Banco de Sangre existen
3. Qué es un donante y cuáles son los criterios para proteger al donante
4. Qué es el receptor y cuáles son los criterios para proteger al receptor
5. Cuáles son las pruebas físicas y de laboratorio que se realizan antes de la donación
6. Cuáles son los criterios de autoexclusión de un paciente
7. Cuáles son los parámetros postdonación
8. Enumere algunas reacciones adversas a la donación
9. Cuáles son las pruebas de laboratorio que se le realiza a cada unidad de sangre.
Bibliografía
Descripción
ANEXOS
No. 1 Descripción

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GL007
Prueba Cruzada:
Prueba Cruzada Autocontrol

Fase Salina
Fase Albúmina
Fase de Coombs
Células control de
Coombs
Interpretación:
______________________________________________________

Manual Inmunohematología

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GUIA DE LABORATORIO

 Determinar la clasificación sanguínea en relación con sistema ABO y el sistema RH,

El factor Rh es un aglutinógeno encontrado en 1940 por Landsteiner y Weiner, en los glóbulos

Fecha Fecha Febrero Fecha

HERENCIA DEL TIPO ABO:

El alelo A da tipo A, el B da tipos B y el alelo i da tipos O, siendo A y B dominantes sobre i. Así

HERENCIA DEL FACTOR RH:

La distribución de los grupos sanguíneos en la población humana no es uniforme. El más común

Fecha Fecha Febrero Fecha

TIPO 0+ A+ B+ O- A- AB+ B- AB-

DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO ABO

La hemoaglutinación se considera la reacción de Ag – Ac de mayor utilidad en el laboratorio de

HEMOCLASIFICACION: SISTEMA Rh (Ag D)

En el sistema Rh, existen varios antígenos: D, C, c, E, e; sin embargo, de rutina, solo se

DETERMINACION DEL Ag DEBIL

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Fecha Fecha Febrero Fecha

 Marque los tubos con Anti A, Anti B, Anti A,B

Fecha Fecha Febrero Fecha

POSITIVO: Aglutinación con cualquier antisuero. Reacciones positivas de

NEGATIVO: La presencia de una suspensión uniforme de GR (O)

Fecha Fecha Febrero Fecha

POSITIVO: La aglutinación fuerte de los glóbulos rojos en presencia de cualquier

NEGATIVO: La presencia de una suspensión uniforme (O) de glóbulos rojos.

PRUEBA INVERSA EN TUBO:

 Marcar tres tubos como A, B, O

9  Incubar de 5 minutos a temperatura ambiente

10 POSITIVO: Aglutinación y/o hemólisis

11 Prueba directa en lamina:

 Marcar dos laminas como D y control

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Fecha Fecha Febrero Fecha

POSITIVO: Aglutinación de glóbulos rojos

Si la preparación de glóbulos rojos con albúmina al 22% presenta aglutinación, la

15 Prueba directa en tubo:

17  Mezclar suavemente y centrifugar durante 15 -30 segundos

POSITIVO: La aglutinación de los glóbulos rojos con anti-D

Si en el control se observa aglutinación, la prueba no se puede interpretar, hasta

Fecha Fecha Febrero Fecha

DETERMINACION DEL Ag DEBIL

 Mezclar e incubar los tubos a 370C durante 15 – 30 minutos, según las

24  Mezclar y centrifugar 15 – 30 seg

 Si el resultado es negativo, adicionar:

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Fecha Fecha Febrero Fecha

26 Las células control de Coombs son GR O Rh D positivo sensibilizados con anti

 Repetir la centrifugación por 15 – 30 seg. La aglutinación en este punto refleja

Si se presenta aglutinación en cualquier fase de la prueba en el tubo control, no se

1. Que es el Fenotipo Bombay

Fecha Fecha Febrero Fecha

Directa en lamina Directa en tubo Inversa

Resultado de la muestra analizada:

No. 2 Hemoclasificación Rh:

Directa en lamina Directa en tubo

Rh: _________Ag D débil: ____________

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Fecha Fecha Febrero Fecha

Significado de los resultados anormales:

 Anemia hemolítica autoinmune sin otra causa subyacente

Detecta anticuerpos hacia los glóbulos rojos en la circulación. Es importante para la

Fecha Fecha Febrero Fecha

Significado de los resultados anormales:

Rh: _Ag D débil: ____