INNOVACIÓN PARA EL DESARROLLO

Producción industrial de penicilina

Un antibiótico es un producto del metabolismo secundario de muchos seres vivos que inhibe el
crecimiento de otros organismos o induce la muerte. Son moléculas que actúan sobre las
membranas y paredes microbianas, la replicación y la transcripción del DNA, la síntesis de
proteínas y, en general, sobre el metabolismo de los microorganismos a diferentes niveles.

La observación de Alexander Fleming en 1929 de que los penicillum notatum inhibían el

crecimiento de los estafilococos condujo al desarrollo del procese de producción de la
penicilina, iniciándose la era de los antibióticos.

Las penicilinas son antibióticos del grupo de los betalactámicos empleados profusamente en el
tratamiento de infecciones provocadas por bacterias sensibles. Distintas penicilinas son
producidas a partir de Penicillum chrysogeizuin por adición de una apropiada cadena carboxílica
en cantidad adecuada en el medio de cultivo, pero solamente tienen valor terapéutico la
penicilina G y la V.
Hay dos tipos de procesos para la producción microbiología de antibióticos:

1. El proceso superficial, mediante el cual el microorganismo productor de antibiótico se

desarrolla en forma de un almohadilla sobre la superficie de un medio líquido, en
bandejas o frascos, o en la superficie de un sustrato solido húmedo finamente
fragmentado; por ejemplo, virutas de madera o salvado de trigo.
2. El proceso de inmersión, mediante el cual el microorganismo se desarrolla en un medio
líquido mantenido bajo agitación mecánica y aireación continuas, de modo que el
microorganismo se desarrolla de manera uniforme y homogénea en la forma de una
suspensión de células aisladas o pequeños agregados o colonias en todas áreas del
líquido de cultivo.

Producción de penicilina por inmersión

El proceso de inmersión acelera en forma notoria el desarrollo y facilita la manipulación de
cantidades importantes de microorganismos. Este proceso es mucho más eficiente que los
procesos superficiales y, por lo tanto, es el único procedimiento factible para la producción
comercial en gran escala.

Etapa I. Preparación de la materia prima

Etapa de desarrollo en el laboratorio

Normalmente la cepa de producción es mantenida como esporos liofilizados o en nitrógeno

líquido. Otra alternativa es mantener el desarrollo vegetativo en nitrógeno líquido o congelado
a -70 °C.

El desarrollo del inóculo se lleva a cabo a 25 °C en agares inclinados y matraces erlenmeyers,

para inocular los tanques de sembrado (etapa de proliferación o propagacion) es necesario
disponer de un gran número de esporos (conidios). Usando un medio para esporulación
(semillas de cereales, afrecho de trigo humedecido, pan integral, etc.) se preparan los conidios
de la cepa utilizada.

La concentración de esporas (óptima 5x103/ ml) y la formación de agregados son cruciales para
el rendimiento subsecuente.

Luego de 6-10 dias los cultivos están bien esporulados y puede inocularse un tanque de
sembrado donde los conidios germinan y generan en 1-2 días un micelio activo, suficiente para
inocular un fermentador.
Desarrollo en tanques de sembrado

El inoculo para el fermentador se obtiene incrementando en forma progresiva la magnitud del

crecimiento a través de una serie de tanques de sembrado; se pasa de un tanque a otro
trasfiriendo el producto bajo presión de aire a través de cañerías estériles. En general este
inoculo masivo equivale a un 5-10% de la partida principal; por lo tanto, los tanques de siembra
equivalen a alrededor de 1/10 del volumen del tanque de gran tamaño subsiguiente. La
transferencia vegetativa continua del hongo en medios artificiales conduce a una pérdida de la
capacidad productora de penicilina (degeneración fisiológica), en consecuencia, es necesario
minimizar la cantidad de transferencias intermedias entre el cultivo madre y la partida final.
Medio de cultivo para la fermentación

En la fermentación el medio de cultivo es diferente al de proliferación, ya que ahora se trata de

favorecer la elaboración del antibiótico por sobre el desarrollo del micelio. Los antibióticos, así
como los pigmentos, son metabolitos secundarios.

Medio de producción típico

Licos de maíz (solidos)……….………..2% a 5%

Lactosa bruta……………….………….2% a 3%
Carbonato de calcio…………………...0.5% a 1%

El medio de cultivo utilizado para la producción comercial de penicilina por lo general contiene
material nitrogenado natural, nitrato, ácido α-aminoadípico, harina de semillas de algodón o
alcohol de maíz (un producto intermedio de la industria de la molienda del maíz), lactosa,
precursor de la cadena lateral, un agente tensioactivo y sales minerales (incluido el sulfuro),
también se adicionan compuestos inorgánicos conteniendo hidrogeno, oxigeno, fósforo,
azufre, potasio, magnesio, nitrógeno y trazas de hierro, cobre y zinc. Después de ajustar el pH a
4,5-5,0, el medio de cultivo se pasa al fermentador.

Etapa II. Biorreacción

Fermentadores

Para la fabricación de penicilina se utilizan tanques cerrados estacionarios, conocidos como

tanques fermentadores, con una capacidad de 20000 a 115000 litros. La mayoría de estos
tanques esta provista de mezcladores a hélice o turbina y un dispositivo mecánico para
distribuir aire estéril, el cual se encuentra acoplado en la regio del mezclador para alcanzar un
máximo efecto de dispersión. Los tanques tienen una compuerta de acceso desarmable en la
parte superior, visores y salidas para líneas de muestreo a válvula y cámaras de alimentación
accesorias, lo que la inoculación manual si fuera necesaria (sobre todo en el caso de tanques de
sembrado pequeño) y el agregado de otros materiales (estériles), como agentes antiespuma,
durante la fermentación. Todas las salidas de los tanques están constantemente expuestas a
un chorro de vapor para minimizar el riesgo de contaminación.

El medio de cultivo se esteriliza mediante vapor a alta presión con enfriamiento ulterior-.
Durante el desarrollo del hongo la temperatura se mantienen automáticamente entre 23°C y
25°C. El aire comprimido introducido en los fermentadores es esterilizado por filtración a través
de cartuchos de tamaño adecuado esterilizados al vapor y rellenados, por ejemplo, con lana de
vidrio.

El aire estéril permite el crecimiento del hongo aerobio, y la agitación facilita su uniforme
distribución en el seno del líquido.
La fermentación de penicilina es un proceso aeróbico con una velocidad de absorción
volumétrica de oxígeno de 0,4-0,8 mM/l min. La aireación presenta un problema especial en
esta fermentación, debido a que al incrementarse la biomasa, y por consiguiente la demanda
de O2, aumenta también la viscosidad del medio, lo cual crea una resistencia importante para la
transferencia de oxígeno. La velocidad de aireación requerida está entre 0,5-1,0 volúmenes de
aire (volumen de líquido)-1 min-1 dependiendo de la cepa, del biorreactor y del tipo de impulsor.

Se debe cuidar en esta fase no tener un exceso de glucosa debido a que el mismo puede
ocasionar una inhibición de la actividad o de la síntesis de enzimas involucradas en la biosíntesis
de penicilina.

Al cabo de unas 50 a 90 horas el crecimiento se va haciendo más lento, lo que indica que el
hongo se ha desarrollado por completo.

Condiciones especiales del fermentador

Características específicas de penicilina que debe ser considerado cuando se intenta

fermentación:

• La mayoría de las penicilinas constituyen caldos filamentosos que son pseudoplástico

(no Newtoniano) en la naturaleza. Esto significa que pueden ser difíciles de mezclar,
debido a su alta (Y no constante) viscosidad. Asimismo, el aumento de la viscosidad del
caldo puede obstaculizar la transferencia de oxígeno. Lo que nos lleva al siguiente
punto.
• La penicilina es un organismo aeróbico, por lo tanto la tasa de suministro de oxígeno es
crítico a la fermentación. Así, el reactor debe tener un suministro de oxígeno eficiente
sistema.
• El pH óptimo para el crecimiento de la penicilina es de 6,5. Así, el reactor debe
mantener pH eficientemente (esto se hace con frecuencia mediante la adición de
NaOH).
• Los problemas de estabilidad de deformación no existen y el mantenimiento de la cepa
cuidado es obligatorio.
• Duplicación de la biomasa es de aproximadamente 6 horas.

Etapa III. Purificación

Actualmente la extracción con solventes es la base para la separación y purificación de la

penicilina. El primer paso consiste en separar el micelio del medio de cultivo empleando un
filtro rotatorio a vacío tipo cilíndrico. El filtrado rico en penicilina es luego enfriado en un
intercambiador de calor a 0 - 4 °C con el objeto de disminuir la degradación enzimática y
química durante las etapas de extracción posteriores.
Las penicilinas G y V son ácidos fuertes (pKa entre 2.5 - 3.1). Las formas ácidas son solubles en
muchos solventes orgánicos y se pueden extraer con un alto rendimiento en acetato de amilo o
de butilo a pH 2.5 - 3.0. La extracción se puede realizar en operaciones continuas, a
contracorriente en extractores centrífugos en etapas múltiples, a temperaturas de 0 - 3 °C. Otra
posibilidad es el empleo de mezcladores estáticos o decantadores, los cuales tienen en menor
costo de inversión.

Se debe tener en cuenta que tanto la penicilina G como la V se degradan en medio ácido con
una cinética de primer orden a una velocidad proporcional a la temperatura y recíproca con
respecto al pH. Esto hace que la vida media en condiciones de eficiente extracción en medio
ácido sea muy reducida. Sin embargo como la forma V en tales condiciones es más estable que
la G, si el objetivo es obtener 6-amino penicilánico (6-APA) la producción de penicilina V es más
aconsejable.

La extracción de penicilina se puede realizar en una o más etapas sucesivas, con una
acidificación del caldo filtrado con H2SO4 o H3PO4 al 10% P/V y con el agregado de un agente
surfactante (0,003 - 0,1% P/P, en el solvente), realizándose la extracción y concentración en
extractores centrífugos. Dependiendo de las especificaciones de uso final, el solvente
conteniendo penicilina se puede tratar con carbón para separar pigmentos y otras impurezas.
Esta etapa actualmente no se realiza debido a las bajas impurezas de los caldos y a los altos
rendimientos obtenidos.

La cristalización se puede realizar desde la fase acuosa si se desea, siendo los valores críticos las
concentraciones de sodio o potasio, la temperatura, la concentración de penicilina y el pH. En
caso de hacerse la cristalización a partir de un solvente se requiere también un exceso de Na + o
K+, siendo los cristales recuperados en un filtro rotatorio a vacío. Estos cristales son lavados y
presecados con un solvente volátil que también separa impurezas coloreadas. El secado
definitivo se puede realizar con aire caliente, vacío o calor radiante.

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