Taller de Bioquímica 6

1. Tome pantallazo de haber realizado cada uno de los pasos y explique brevemente porqué se
usa el reactivo o porqué es necesario realizar el procedimiento que indica el paso
RTA: El simulador comienza en un entorno virtual en el cual se dispone de todos los materiales
para realizar la práctica.

Una vez se tiene todo preparado se procede a abrir la balanza analítica y se introduce un
Erlenmeyer vacio para posteriormente cerrar la balanza y tarar para tener una medida más
precisa.

Una vez tarada la balanza con el Erlenmeyer se procede a agregar 2 gramos de agarosa con la
espátula al Erlenmeyer, posteriormente se saca de la balanza y se agrega TAE Buffer. ¿Por qué se
realiza esta solución? Pues la agarosa es un polímero lineal formado por galactosa y 3,6-
anhidrogalactosa el cual al ser mezclado con soluciones buffer o tampón tales como el TAE
(Tris-Acetate-EDTA) O TBE (Tris-Borato-EDTA) y fundirlo en el microondas se forma una
mezcla homogénea la cual con el transcurso del tiempo se secará tomando una forma de gelatina
o Gel. El gel también se podría hacer utilizando agua pero el uso del TAE es para regular el pH y
así evitar que las moléculas de ADN se descompongan o reaccionen. (Checa Rojas, 2017)
Se tapa el recipiente y se coloca en el microondas a 180 grados por 1 minuto, se saca y se agita
para colocarlo nuevamente en el microondas por 30 segundos más para que la solución se
homogenice correctamente.

Se saca del microondas y se deja enfriar por hasta los 60° C y se procede a agregar 3 μL de
colorante de bromuro de etidio al Erlenmeyer, esto se hace ya que este colorante hace visible al
ADN o ARN (fluoresce) mediante la emisión de luz ultravioleta.(Checa Rojas, 2017)

Terminada la preparacion se procede a la etapa 2 de la practica en la cual se debe agregar la

solucion creada en la etapa anterior en una bandeja para gel que se divide en una bandeja, dos
bordes pertenecientes a esta y un peine que se coloca en medio de la bandeja para que se formen
unos agujeros.
Después de 20 minutos la gel se ha secado, se remueven los bordes para transferir el gel un
tanque el cual tiene a cada lado un electrodo después se agrega solución tampón TAE en ambos
agujeros del tanque hasta que la solución este aproximadamente 2 mm por encima de la gel (esto
se hace para que la corriente pueda viajar libremente) y en ese momento se retira el peine.

Se agregan 2 μL del tampón de carga en gel en distintos tubos para centrifuga y posteriormente se
le adiciona a cada uno 10 μL de muestra de ADN, siendo que hay 4 muestras de ADN y dos
tubos rotulados como Ve+ y Ve- se le agrega a cada tubo para centrifuga una muestra diferente.

Una vez teniendo las muestras preparadas se toma cada una de estas y se agrega en un agujero del
gel.

Se coloca la tapa del tanque y se conectan los electrodos a la fuente de alimentacion la cual se
activa a 100 V lo que provicara un flujo de electricidad que derivara en la separacion de los
fragmentos del ADN.
Una vez acabe se retira el gel con las muestras y se transfiere a la camara UV para observar los
fragmentos del ADN y su ubicación y/o dezplazamiento.

2. Adjunte pantallazo del cuestionario resuelto correctamente

REFERENCIAS:

Checa Rojas, A. (2017). Metodo: Gel de Electroforesis Agarosa. Conogsi, Conocimiento Para La
Vida. http://conogasi.org/articulos/metodo-gel-de-electroforesis-agarosa/