CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA CROMATOGRAFIA
DE GASES LIQUIDA
 DEFINICION DE CROMATOGRAFIA
SEGÚN IUPAC “ LA CROMATOGRAFÍA
ES UN MÉTODO FÍSICO DE
SEPARACIÓN EN EL CUAL LOS
COMPONENTE A SER SEPARADOS
SON DISTRUIBUIDOS ENTRE
DOS FASES UNA DE ELLAS ES
ESTACIONARIA, MIENTRAS LA OTRA SE
MUEVE EN UNA DIRECCION DEFINIDA”.

LA FASE ESTACIONARIA PUEDE SER UN SÓLIDO, UN LÍQUIDO

RETENIDO SOBRE UN SÓLIDO Y PUEDE ESTAR EXTENDIDA
COMO UNA CAPA O DISTRIBUIDA COMO UNA PELÍCULA, ETC.
LA FASE MÓVIL PUEDE SER LÍQUIDA O GASEOSA.
 CROMATOGRAFIA DE GASES
LA CROMATOGRAFÍA ES UN MÉTODO
FÍSICO DE SEPARACIÓN EN EL
CUAL LOS COMPONENTE A SER
SEPARADOS SON DISTRUIBUIDOS
ENTRE DOS FASES UNA DE
ELLAS ES ESTACIONARIA, MIENTRAS
LA OTRA SE MUEVE EN UNA DIRECCION
DEFINIDA”.

LA FASE ESTACIONARIA PUEDE SER UN SÓLIDO, UN LÍQUIDO

RETENIDO SOBRE UN SÓLIDO Y PUEDE ESTAR EXTENDIDA
COMO UNA CAPA O DISTRIBUIDA COMO UNA PELÍCULA, ETC.
LA FASE MÓVIL ES UN GAS.
 FASE MOVIL
MUESTRA
A+B+C

FASE MOVIMIENTO
ESTACIONARIA DE LA FASE MOVIL

SEPARACION

CROMATOGRAFICA

CROMATOGRAMA,
CONCENTRACION,
SEPARACION PERFIL DE BANDA
DE
COMPONENTES
C
B
A
COMPONENTES
ELUIDOS
DETECTOR
 SEPARACION CROMATOGRAFICA

FASE MOVIL
COCENTRACION

DETECTOR
INICIO
COLUMNA
 DESCRIPCION DEL METODO

- La mezcla a separar será llevada a través de la columna

mediante el gas inerte
- Los componentes se repartirán entre el gas y un solvente
no volátil (Fase Estacionaria), depositado sobre un sólido inerte
(soporte)
- La selectividad del solvente retarda la elución de los
componentes según el coeficiente de reparto de cada uno hasta
formar las bandas separadas
- Conforme a estas bandas salgan de la columna, serán graficadas
en función del tiempo mediante el detector.
PARTES DE UN SISTEMA
CROMATOGRAFICO

- GAS DE ARRASTRE

- COLUMNA

- INYECTOR

- DETECTORES
PARTES DE UN SISTEMA CROMATOGRAFICO
MEDIDOR
DE POMPAS
DE JABON
REGISTRADOR

JERINGA
DETECTOR ELECTROMETRO
DIVISOR
REGULADOR O
DE FLUJO
DE PRESION PUENTE
A DOS NIVELES
ROTAMETRO
INYECTOR

A/D

CONTROLADOR SISTEMA
DEL FLUJO PARA EL
COLUMNA TRATAMIENTO
DE DATOS
BOTELLA
DE GAS
PORTADOR
HORNO TERMOSTATIZADO PARA LA COLUMNA
 GAS DE ARRASTRE

Gas portador (carrier)

- Inerte
- Difusión Gaseosa mínima
- Fácil obtención
- Alta pureza, libre de humedad
- Compatible con el detector
Los más comunes son el Helio, Nitrógeno
e hidrógeno.
 COLUMNAS

Es la parte más importante de un Cromatógrafo,

donde se realiza la separación de los componentes.

TIPOS DE COLUMNAS

- COLUMNAS EMPACADAS.- pueden ser hechas de

vidrio o metal (acero inoxidable), de 2 a 6 mm. De
diámetro interno y de 1 a 3 metros de longitud.

- COLUMNAS CAPILARES.- Son de sílice fundida de

0,2 a 0,7 mm. de diámetro interno y de 10 a 100
metros de largo.
SECCION TRANSVERSAL DE COLUMNAS

Película gruesa
Película
delgada

Fase
Estacionaría,
particulas

Capa de
copolimero Soporte y fase
estacionaria
(PLOT)
 SEPARACION CROMATOGRAFICA

Volumen de fase móvil

=
Volumen de fase estacionaria
 SEPARACION

CROMATOGRAFICA
 SANGRADO DE COLUMNA

LIMITE
ISOTERMICO
LIMITE DE
TEMPERATURA
PROGRAMADA

SEÑAL DEL
DETECTOR
 INYECTORES

- Es el dispositivo por donde ingresa la

muestra a ser analizada.

- Existen diferentes tipos, según sea la

muestra : Líquida, Gaseosa o Sólida.

- La técnica más sencilla consiste en

introducir la muestra disuelta en un
solvente.
INYECTOR CAPILAR UNIVERSAL
 INYECTOR CONVENCIONAL
CALIENTE, VAPORIZACIÓN INSTANTÁNEA

Jeringa

Condensación de
Zona componentes de alto
caliente punto de ebullición

Instantánea
Evaporación
(Expansión)
Columna
Venteo con
división
 Septa

Purga de septa
Gas de srrastre

O-ring Venteo de split

INYECTOR
Liner de cuarzo

SPLIT/SPLITLESS

Punto de Split
(punta de
columna)

Tuerca de
Columna conexión 1/16”
Capilar
LINERS Y EMPAQUE EN INYECTOR SPLIT/SPLITLESS

Empaque Empaque
Splitless Split

Porción gruesa Porción gruesa

O-ring
O-ring

Lana de Vidrio
ligeramente Lana de vidrio
empacada ligeramente
empacada

Lana de vidrio
fuertemente
empacada
Hendidura
Hendidura

4 mm D I 2 mm D.I 4 mm D I
Wide Bore Liner Narrow Bore Liner Wide Bore Liner
 INYECTOR

COL EMPACADAS
Ingreso de gas
INYECTOR

ON COLUMN
 PROGRAMACION DE TEMPERATURA

Se denomina así, al cambio controlado de la

temperatura de la columna durante el análisis.

* Esta programación es la extensión lógica del método

Isotérmico para superar las limitaciones de la técnica
de temperatura constante.

* Para separar muestras complejas , con un rango

amplio de puntos de ebullición.

* Para mejorar, simplificar o acelerar la separación.

PROGRAMACION DE TEMPERATURA

1 ISOTERMICA
4
A 45OC
2

0 10 20 30
PROGRAMACION DE TEMPERATURA

X4
5

ISOTERMICA
A 145OC
6

7
8

0 10 20 30
PROGRAMACION DE TEMPERATURA

PROGRAMACION
4 DE 30OC A 180OC

9
8
1 2 3 5 7
6

0 10 20 30

TIEMPO MINIMO

30O 60O 90O 120O 150O 180O

 DETECTORES

El propósito del detector es de monitorear el gas

carrier que emerge de la columna que genera una
señal en respuesta a variaciones en su composición
debido a los componentes eluídos.

CARACTERISTICAS QUE INDICAN SU UTILIDAD :

* Sensibilidad
* Respuesta
* Tiempo de respuesta
* Rango lineal
 RELACION SEÑAL A RUIDO

SEÑAL DEL
DETECTOR Señal del
detector
producida por
moléculas
eluyentes

Señal, S

Ruido,N

Oscilación
línea base Deriva

Línea base

TIEMPO DE CORRIDA
(Horas)
 DETECTORES

Sensibilidad.- Mínima concentración de analito que

produce una señal en el detector de por lo menos
dos veces el nivel de ruido llamado background

Respuesta.- Es la magnitud de respuesta de la señal

producida por una unidad de concentración de
analito en el gas carrier, o cantidad de un analito
medido como área de pico
 DETECTORES

Tiempo de respuesta.- Capacidad de producir una

señal instantáneamente a las variaciones de
concentración en el gas carrier que emerge de la
columna cromatográfica.

Rango lineal.- El rango de concentración del analito

sobre el cual es detector responde con la misma
sensibilidad.
 LIMITES DE DETECCION

5% de
Área de pico desviación

Rango lineal
 TIPO DE DETECTORES

Al estudiar los detectores conviene hacer una

distinción de acuerdo con el tipo de sustancias
capaces de detectar:

Según la especificidad de sus respuesta :

Detectores universales
Detectores específicos
Según su forma de detección:
Detectores destructivos y no destructivos
 TIPO DE DETECTORES

Detectores universales
Aquellos capaces de detectar cualquier sustancia de
un modo lineal y cuya respuesta específica es
independiente de la naturaleza de la sustancia a
detectar
Detectores específicos
Dan una respuesta aceptable para un grupo más o
menos amplio de sustancias de acuerdo a su
naturaleza química, Ejm. ECD, MS, etc.
 TIPO DE DETECTORES

Detectores destructivos
Cuando la sustancia analizada queda modificada
químicamente.
Ejm. Ionización de llama

Detectores no destructivos
Capaces de detectar la sustancia sin modificarla
químicamente.
Ejm. Conductividad Térmica
 TIPO DE DETECTORES

* DETECTOR DE IONIZACION DE LLAMA (FID)

* DETECTOR CAPTURA DE ELECTRONES (ECD)
* DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TERMICA (TCD)
* DETECTOR NITROGENO-FOSFORO (NPD)
* DETECTOR FOTOMETRICO DE LLAMA (FPD)
* DETECTOR DE FOTOIONIZACION (PID)
* DETECTOR DE MASAS (MS)
 LIMITES DE DETECCION

MDA: Cantidad mínima detectable

LDR: Rango dinámico lineal
DETECTOR DE IONIZACION DE LLAMA

Es el detector universal de la cromatografía de

Gases y es usado con propósitos generales y de
rutina. Se le puede atribuir:
* Alta sensibilidad para todo los compuestos
orgánicos
* Mínima y casi nula respecto al agua, dióxido de
carbono, e impurezas del gas de arrastre y entrega
señal cero cuando el analíto no esta presente.
* Una línea base estable
* Buena linealidad
DETECTOR DE IONIZACION DE LLAMA
 Al Amplificador

DETECTOR
Colector
Jet

FID
Ingreso de Aire

Ingreso de
Hidrogeno

Extensión del Jet

Tuerca de conexión de la
columna
 DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD
TERMICA
Es el detector universal de la cromatografía de Gases mide
cambios en la conductividad térmica del gas de arrastre causada
por la presencia de sustancias que eluyen de la columna. El
mayor uso es el análisis de gases y control de procesos.
* La ventaja respecto al FID radica en su capacidad de detectar
gases como CS2, COS, H2S, SO2, CO, NO, NO2 y CO2.
•La propiedad de un material de transmitir calor cuando esta
sometida a variaciones de temperatura es conocida como
conductividad térmica
• Filamento de tungsteno-renio* sometido a una corriente eléctrica
constante y a una temperatura constante pierde calor debido al
cambio en el flujo masa del gas de arrastre.
•Algunos compuestos dan picos +, otros dan picos -
•Factor de respuesta depende de la temperatura y la linealidad es
baja
DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD TERMICA
DETECTOR
r

TCD
 DETECTOR DE CAPTURA DE
ELECTRONES
Es un detector específico de la cromatografía de Gases y es
usado para el análisis de trazas de contaminantes ambientales,
pesticidas y herbicidas clorados
* Alta sensibilidad a compuestos que contengan elementos
electronegativos
* Dos electrodos, celda cilíndrica de Ni63 y electrodo colector,
alta energía beta choca con gas de arrastre ( produce electrones
coleccionados por colector)
* Moléculas con afinidad por electrones reducen corriente
•Oxígeno, agua o sangrado de columna absorben electrones (-)
•Máxima temperatura 450ºC (Ni 63)
•Orden de respuesta a los halógenos F<Cl<Br<I
DETECTOR DE CAPTURA DE ELECTRONES
 Colector
Al Amplificador (Anódo)

DETECTOR
Fuente (Ni 63)

ECD

Gas Make-Up

Conexión de
Columna
 DETECTOR NPD

Es un detector especifico de la cromatografía de Gases y es

usado para el análisis de trazas de contaminantes ambientales,
pesticidas y herbicidas nitrogenados y fosforados
* Alta sensibilidad a compuestos que contengan nitrógeno y
fósforo
•Bolita de rubi insertada en un filamento de platino, es calentada
eléctricamente en presencia de hidrogeno y aire, produce una
fase gaseosa altamente ionizante.
•Flujo de hidrogeno y y corriente de calentamiento, críticos
* Evitar en lo posible usar solventes halogenados o para sililación
•Evitar columnas con fase liquida que contengan N o P
•Si se tuvieran que usar solventes halogenados o para sililación,
apagar la corriente mientras eluyen
DETECTOR NPD
DETECTOR
r

NPD
DETECTOR FOTOMETRICO DE LLAMA

Es un detector específico de la cromatografía de Gases y es

usado para el análisis de trazas de compuestos azufrados y
fosforados
* Basado en la formación de especies quimiluminicentes en una
flama rica en hidrógeno, se mide la intensidad de la emisión.
•Se coloca un filtro pasa banda antes del fotomultiplicador, 394
nm para azufre y 526 nm para fósforo
• Más flujo de hidrógeno más sensible, exceso llama inestable
• Rango de temperatura 150 a 275 °C
• Respuesta al fósforo es lineal.
• Para el azufre, a raiz cuadrada de la respuesta es proporcional a
la concentración de azufre
DETECTOR FPD
DETECTOR
r

FPD
 FACTORES A CONSIDERAR CUANDO
SE ESPECIFICA UN SISTEMA

* Anotar el rango del punto de ebullición y

características de la fase vapor de los componentes

* Identificar las características polares o no polares

de los componentes en la mezcla y sus grupos
funcionales

* Selección de la fase estacionaria, ancho de la

película, para dar el requerimiento de la selectividad
y factor de separación.
 FACTORES A CONSIDERAR CUANDO
SE ESPECIFICA UN SISTEMA

* Optimizar la velocidad del gas de arrastre (análisis

rápidos, mínimo tiempo muerto).

* Optimizar la temperatura o seleccionar la mejor

temperatura para un análisis isotérmico.

* El Helio deberá ser el gas de arrastre.

* Probar el sistema con una mezcla de estándares

o una mezcla que incluya compuestos de diferente
carácter polar y punto de ebullición.
 SISTEMA DE TOMA Y
PROCESAMIENTO DE DATOS

El resultado del ensayo

cromatográfico es :
- La obtención de fracciones
separadas de los
componentes de la muestra.
- Obtención de un gráfico
o cromatograma
Este registro y la eventual manipulación se obtienen a
partir de la señal proveniente del detector por medio de
un sistema de toma y procesamiento
de datos.
 SISTEMA DE TOMA Y
PROCESAMIENTO DE DATOS

En este sistema se puede

considerar:
REGISTRADOR GRAFICO :
Convierte la señal en un
gráfico del tipo x-y
INTEGRADOR :
Permite obtener un registro
gráfico (cromatograma) y
procesamiento de datos
 SISTEMA DE TOMA Y
PROCESAMIENTO DE DATOS
COMPUTADORA :

El registro gráfico del

cromatograma
Cálculos y manipulación de datos
Almacenamiento de ensayos
Generación de reportes
Manejo de varios Cromatogramas.

Se requiere de una Interfase analógica-digital que convierta

la señal analógica entregada por el detector.
 PROCESAMIENTO DE DATOS
ANALOG
DETECTOR COMPUTING INTEGRATOR
SIGNAL

ANALOG TO
DETECTOR AMPLIFIER DIGITAL
CONVERTER

GC/HPLC KEYBOARD
FUNCTION
CHROMATOGRAPH SELECTION
COMPUTER
SYSTEM AND
RECORDER CHROMATOGRAPHY
ALGORITHMS IN PRINTOUT
ROM WRETYRUITIYOPUPPIÍÓ´´OÓ´++
++FSGDGFH G HH J DFGHHHH
GGHJH,MKDFGAJGJGJHKHHLJL
LNNNNNNNNNNNNJÑJÑÑKK{H
GGTTHHHHHGGGNMMGGGG
GGGGGHMMJM B
NMMMFFFFFFFFFFFFFFV
TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
TTTTT TTTT TTTTTTTTTTT
SDFFGRTHKKILO IKIOOLOÑO
JKKIUKUYJKIKJTIIL
 CROMATOGRAMA
BGN

1.726

3.779 UNDECANE

5.026 1-OCTANOL
5.496 DECANE

7.951 DIMETHYL PHENOL

8.711 DIME ANALINE
9.336 TRIDECANE

BEND
METHOD 1 MODIFIED CALCULATION EXT STD
REPORTE DE CROMATOGRAMA
 NOMENCLATURA Y CALCULO

La nomenclatura en Cromatografía fue

estandarizada por la

ASTM : AMERICAN SOCIETY FOR

TESTING AND MATERIALS y la

IUPAC : INTERNATIONAL UNION OF PURE

AND APPLIED CHEMISTRY
DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
CROMATOGRAMA

LINEA BASE

TIEMPO DE RETENCION (TR)

ANCHO DE PICOS

FACTOR DE CAPACIDAD (K)

FACTOR DE SEPARACION (α)

RESOLUCION DE PICO (R)

 DEFINICIONES YCROMATOGRAMA
RELACIONES
BASICAS

CROMATOGRAMA
Según IUPAC “es un gráfico u otra representación
de la respuesta del detector, concentración del
efluente u otra cantidad usada como medida de la
concentración del efluente , versus el volumen del
efluente o tiempo”

Idealmente el pico tiene distribución normal gausiana.

El Cromatograma comienza en el momento que

la solución en ensayo es inyectada.
 DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
LINEA DE BASE

Es la porción del cromatograma donde sólo se aprecia

la elución de la fase móvil, sin señal debida al soluto

LINEA DE BASE

TIEMPO
 DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
TIEMPO DE RETENCION (TR)

Es el tiempo que un soluto permanece en la

columna.

Se mide desde el punto de inyección al máximo

del pico.

Es característico del soluto para una columna y

condiciones de operación dadas.
 DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS

TIEMPO MUERTO (TO, TM)

Es el tiempo requerido para eluir un componente no

retenido.

Es el tiempo que cualquier componente esta en la

fase móvil.

Se utiliza para medir el volumen vacío de la columna.

DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS

TIEMPO DE RETENCION CORREGIDO (TR’)

Mide el tiempo que el componente realmente

está en la fase estacionaria.

Tr’ = tr - to
DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
ANCHO EN LA BASE (Wb)

Es la porción de la línea base intersectada por las

tangentes a los lados del pico

Es necesario para calcular la resolución y el

número de platos teóricos.

Se puede tomar en varias posiciones, las más

comunes a: 60,7%, 50%, y en la base del pico.
 DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
PLATO TEORICO (N)

Es un equilibrio del soluto entre la fase móvil y estacionaria.

SE CALCULA CON :

tr 2 tr 2
N = 16 = 5.54
Wb W1/2
DONDE : tr y Wb o W1/2 deben expresarse en las mismas
unidades - VOLUMEN, TIEMPO, DISTANCIA-, ya que N es
adimensional.
UNA BUENA COLUMNA TIENE UN NUMERO ALTO DE PLATOS TEORICOS
 DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
ALTURA EQUIVALENTE A UN PLATO TEORICO
(H, AEPT, HETP)

Es la longitud de columna -L- requerida para un plato

teórico. L
H=
N
Donde : H y L se expresan usualmente en mm.

Una H pequeña significa más platos por unidad de

longitud y por lo tanto mayor eficiencia.
 DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS

COEFICIENTE DE REPARTO (K)

Es una propiedad física fundamental.

Es característico del soluto en una fase estacionaria.

Depende de la temperatura y es una medida de las

interacciones soluto-fase estacionaria.

Conc. del soluto en f. estac.

K=
Conc. del soluto en f. movil
DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS

RAZON DE FASES ()

Es el cociente de los volúmenes de fase

móvil y estacionaria en la columna.

Volumen de fase móvil

=
Volumen de fase estac.
 DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
FACTOR DE CAPACIDAD, RAZON DE CAPACIDAD - k´-

La razón entre la masa de soluto en fase estacionaria

y la masa de soluto en fase móvil en condiciones de
equilibrio. Es la relación entre el tiempo que un soluto
permanece en la fase estacionaria y la fase móvil.
tr´
k´ =
to´
Está relacionada con el coeficiente de reparto :

k´ = K / ß
 DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS
RESOLUCION - R -

Es una medida cuantitativa del grado de separación

entre dos picos. una resolución de 1.5 es una
separación a la línea base.

2 (tr2 - tr1)
R=
( Wb1 + Wb2)
Donde los tiempos de retención y los anchos de los
picos se expresan en las mismas unidades.
 DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS

SELECTIVIDAD -( α )O FACTOR DE SEPARACION

Mide las diferencias relativas en las fuerzas

de interacción de dos solutos con la fase estacionaria.

Un valor mayor de  significa una columna mas selectiva

y por lo tanto una mejor resolución

tr’2 k’2 k2
= = = (  1)
tr’1 k’1 k1
DEFINICIONES Y RELACIONES
BASICAS

ECUACIÓN DE LA RESOLUCION:

N k’ -1
R=
4 1 + k’ 

TIEMPO DE ANALISIS Y RESOLUCION

 2 (1+k’)3 H
tr =16 R2
-1 k’2 u
 ANALISIS CUALITATIVO

* Permite la identificación de un compuesto.

* Compara el tiempo de retención del analito

en la muestra, con respecto al tiempo de
retención del estándar.

* Confirmación con otra columna de diferente

polaridad.
 ANALISIS CUANTITATIVO

* Se obtiene con exactitud la cuantificación de un

analito en la muestra con respecto a un estándar
de concentración conocida.

* Se puede calcular la concentración de un analito

con diferentes métodos :
- Normalización Interna
- Estándar Externo
- Estándar Interno
- Estándar Agregado
 ANALISIS CUANTITATIVO

* NORMALIZACION INTERNA :

Ai
Pi= 100
Ai
- Donde :
Pi es el porcentaje del componente i en la
mezcla
Ai es el área del componente i, y
 Ai es la sumatoria de todas las áreas
 ANALISIS CUANTITATIVO

* ESTANDAR EXTERNO :

Am CS
P= D100
AS
- Donde :
P es el porcentaje del analito en la muestra
Am y AS son las áreas de la muestra y estándar
CS es la concentración del estándar y D es un
factor de dilución
 ANALISIS CUANTITATIVO

* ESTANDAR INTERNO :

Rm CS
P= D100
RS
- Donde :
P es el porcentaje del analito en la muestra
Rm y RS son las relaciones de área del analito
a estándar interno en la muestra y
D es un factor de dilución
 ANALISIS CUANTITATIVO

* ESTANDAR AGREGADO :
Am CS
P= D100
AmS - Am
- Donde :
P es el porcentaje del analito en la muestra
Am y AmS son las áreas del analito en la muestra
tal cual la muestra a la que se le ha
agregado estándar respectivamente.
CS es la concentración del estándar y D es un factor
de dilución
 SYSTEM SUITABILITY TESTS (SST)
PRUEBAS DE CONFORMIDAD DEL SISTEMA

Esto involucra una comparación de cromatograma de la

muestra vs. el cromatograma del standard
(forma, ancho de pico, resolución de línea de base)

Estos parámetros pueden ser calculados

experimentalmente para suministrar el reporte de prueba
de conformidad del sistema cuantitativo; incluye :
- Número de platos teoricos
- Factor de capacidad
- Factor de separación
- Resolución
- Factor de cola
- Desviación standard relativa o precisión
 NUMERO DE PLATOS TEORICOS
t

Picos de Soluto
no retenido
Wh

TIEMPO

n = 5.545 (1/Wh)2 BP or n = 16 (1/Wb)2 USP Wb

 FACTOR DE CAPACIDAD, K
tR
tM

Picos de Soluto
no retenido

TIEMPO
tM = Tiempo de retención del pico no retenido
tR = Tiempo de retención del pico de interés
FACTOR DE SEPARACION (Retención Relativa) 
tA

tB

B A
tM

KA KB Wb1 Wb2
= = Factor de capacidad para B
KB KA = Factor de capacidad para A
 RESOLUCION DE PICO, R
Va
Vb Δt

Wh

TIEMPO
Wb1 Wb2
RS = 2 (VRa- VRb) USP RS = 1.18 (VRb- VRb)BP
(Wa+ Wb) (Wha+Whb)
 FACTOR DE COLA, T

W
PICO T=
FRONTAL COLA h
2f
DE PICO

W 0.05
0.05h
f

ALTURA MAXIMA
DE PICO

W = Ancho a 5% de la altura del Pico

f = Distancia entre el máximo y el borde de entrada del pico
DESVIACION STANDARD RELATIVA
O PRECISION

Esto involucra la reproducibilidad de un número

de réplicas de inyecciones (6) de una solución
analítica
La USP requiere para un método especifico que :
- si la desviación standard relativa es
menor a 2%, se requiere 5 réplicas de
inyecciones
- si la desviación standard relativa es
mayor a 2% , se requiere 6 réplicas de
inyecciones
 GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
ACONDICIONAMIENTO DE LA COLUMNA.- Proceso de calentamiento de
la columna en presencia del flujo de gas portador que elimina las impurezas
volátiles de la fase estacionaria y da lugar a una línea de base estable.
ADSORCION.- Proceso que ocurre en la superficie de un líquido o sólido
como resultado de las fuerzas de atracción entre el adsorbente y el soluto.
Estas fuerzas pueden ser físicas, o químicamente débiles.
ANALISIS.- Investigación completa de una muestra mediante separación e
identificación de los componentes por cromatografía de gases y medidas
cuantitativas.
ANALISIS EN BLANCO.- Análisis sin inyectar muestra.
ANODO.- Electrodo cargado positivamente en cualquier circuito eléctrico
hacia el cual son atraídas los iones y partículas cargadas negativamente.
 GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
COLA.- Cuando el pico no es simétrico o gaussiano y la parte final se
ensancha.
COLUMNA CAPILAR ( WCOT- columna capilar de paredes
impregnadas) .- Columna de pequeño diámetro interno cuya pared
interior está cubierta con fase líquida.
DERIVA DE LA LINEA BASE.- Cualquier cambio regular que ocurre en
la señal de línea base del detector, normalmente debido a los cambios
en la temperatura de la columna y/o el flujo de gas.
DETECTORES.- Dispositivo que responde a los componentes de la
muestra mediante la producción de una señal eléctrica que puede
medirse y utilizarse para cuantificar la cantidad de cada uno de los
componentes presentes.
 GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
ENSANCHAMIENTO DE BANDA.- Proceso que ocurre en un
cromatógrafo de gases mediante el cual el ancho de un pico de un
componente va aumentando lentamente a medida que aumenta el
tiempo que permanece en la columna.
FASE ESTACIONARIA.- Parte del adsorbente sólido o líquido de la
columna que retiene los componentes cuando se disuelven o adsorben
en él.
FASE LIQUIDA.- Material que se encuentra en el interior de la columna,
responsable de la separación de os componentes debido a la partición
de estos entre la Fase Móvil (Gas Portador) y la fase estacionaria (Fase
Líquida)
FASE MOVIL.- El gas que transporta el soluto (muestra) a lo largo y
ancho de la columna. Este gas portador es inerte y normalmente se
utiliza helio, nitrógeno o hidrógeno.
 GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
GAS PORTADOR (Carrier Gas).- Fase móvil del sistema de
separación. Gas inerte que transporta la muestra desde el inyector
hasta el detector, a través de la columna. Este gas suele ser helio,
hidrógeno o nitrógeno.
JERINGAS.- Dispositivos de precisión utilizados para introducir la
muestra en el cromatógrafo. Existen jeringas tanto de gases, como de
líquidos.
LIMITE DE DETECCION.- Cantidad más pequeña de muestra que
puede detectarse en el detector utilizado. Normalmente se define como
la señal que es mayor que dos veces el ruido de fondo. También
llamada Mínima Cantidad Detectable.
LINEA BASE.- Señal del detector que se recoge en un registrador o
integrador, cuando sólo pasa el gas portador a través de él.
 GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
LINEALIDAD.- Cuantitativamente todos los detectores dan lugar a una
respuesta lineal con respecto a la concentración del soluto dentro de un
rango definido.
PARTICION.- Solubilidad diferencial de una sustancia en dos fases
diferentes. En el caso de la Cromatografía gas-líquido los componentes de
la muestra alcanzan un equilibrio entre la fase gas (móvil) y la fase líquida
(estacionaria). Cada componente tiene un coeficiente de partición
diferente que da lugar a la separación en la columna.
PICOS FANTASMA.- Picos que nos se deben a componentes de la
muestra, por ejemplo, picos producidos por impurezas del gas portador,
septum o componentes de análisis previos.
PICO NO RETENIDO.- Compuesto que no se retiene en esa columna. El
tiempo que tarda un compuesto no retenido en atravesar la columna es el
mismo tiempo que tardaría el gas portador en atravesarla.
 GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
PROGRAMACION DE TEMPERATURA.- Técnica comúnmente utilizada
con objeto de aumentar la velocidad de elución de los componentes. La
muestra se inyecta a una temperatura dada que aumenta a una velocidad
definida en °C/min.
RESOLUCION.- Grado de separación entre dos picos.
RUIDO.- Fluctuaciones de la señal de fondo. Esta respuesta depende de la
columna instalada, la pureza del gas portador, componentes electrónicos,
etc. la sensibilidad de cualquier detector se define según la relación señal-
ruido.
SANGRADO (Bleed) .- Evaporación de la fase estacionaria de la columna.
SEPTUM.- Material de goma de silicona localizado en el inyector y a través
del cual se realiza la inyección. Cuando la aguja retrocede, la silicona se
cierra y no permite que se escapen el gas o la muestra.
 GLOSARIO DE TERMINOS
CROMATOGRAFICOS
SISTEMA DE INYECCION.- Dispositivo mediante el cual se introduce la
muestra en la columna a través de un septum.
SUB-AMBIENTE.- Por debajo de la temperatura ambiente. El horno
enfría por debajo de la temperatura ambiente con el uso de nitrógeno
líquido o nieve carbónica.
TIEMPO DE RETENCION.- Intervalo de tiempo desde el punto de
inyección hasta la aparición del máximo del pico.
VELOCIDAD DE FLUJO.- Velocidad de flujo del gas portador en
mililitros por minuto.

Referencia : Denney, R.C. A Dictionary of Cromatography