Método Sanger

Melisa Andrea Castro Marín

C.C 1036950988

El método Sanger es un método de secuenciación de ADN que se basa en el mecanismo de síntesis

de DNA por medio de la DNA polimerasa, partiendo de un fragmento de ADN desconocido se
podría tener una hebra complementaria y consigo la hebra que se quiere estudiar. Para la síntesis de
la cadena complementaria es necesario la utilización de diversos reactivos, como, los
didesoxinucleótidos (ddNTPs), sustratos de DNA polimerasa modificados marcados con distintos
fluorocromos y que contribuyen a la visualización de los fragmentos de DNA. Se establecen 4
reacciones en paralelo para, finalmente, mediante una electroforesis en gel de poliacrilamida, llevar
a cabo la separación de los fragmentos de DNA en función de su carga y masa (I. Ribera, 2009).

La ADN polimerasa usa una hebra de ADN como molde y va incorporando nucleótidos
complementarios hasta introducir un terminador de la secuenciación, de este modo, en reacciones
independientes sobre el fragmento que se quiere secuenciar, se añaden los cuatro dNTPs. Se
realizan cuatro reacciones diferentes y estas puedan desarrollarse a partir de un único cebador que
puede ser de secuencia conocida, por ello la longitud de secuenciación puede ser mayor limitándola
únicamente el método de separación de los fragmentos de ADN obtenidos, de esta manera se
deberían producir fragmentos de todos los tamaños posibles por la introducción de esos ddNTPs en
diferentes momentos. Gracias a esto, y a la separación del producto de cada reacción en una
electroforesis en un gel desnaturalizante de poliacrilamida, se puede obtener la secuencia de ADN
del fragmento de interés evaluando la posición y orden de cada una de las bandas respecto a las
cuatro diferentes carriles que corresponden al mismo número de reacciones de secuenciación por
cada ddNTP (Valderrama Jose, 2019).

Referencias

I. Ribera, A. C. (2009). Aplicaciones de proteómica en ecología y evolución. Ecosistemas, 18 (1), 34-

38.

Valderrama Jose, e. a. (2019). Métodos de secuenciación de ácidos nucleicos: Primera generación.

Encuentros en la biología, eb, XIII(173), 19-25.