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Enzimologia y Bioenergetica
Enzimologia y Bioenergetica
ENZIMOLOGIA Y BIOENERGETICA
1
ENZIMOLOGIA
INTRODUCCION AL METABOLISMO
CELULAR incrementan la velocidad de la reacción
enzimática. De manera general se produce
Los seres vivos requerimos energía para bajo la ecuación:
desarrollar o cumplir con cada una de
nuestras funciones básicas y para soportar la S + E [ES] [EP] E + Ps
actividad física al que estamos sometidos día
a día. Los seres humanos obtenemos nuestro
combustible principalmente a partir de E S [ES] [EP]
carbohidratos, lípidos y proteínas de nuestra
dieta, sin dejar de considerar a los minerales,
agua y vitaminas (Fig. 1.1). Para ellos
nuestros alimentos deben ser digeridos y
absorbidos, una vez que llegan a la
circulación ingresan a los diversos tejidos y
son captadas por las células para ser
transformadas a través de una serie de
reacciones llamado metabolismo, en la cual se
algunos metabolitos se oxidan para producir E P
energía (Catabolismo), generando como
productos finales CO2 y agua y en caso de Aunque las enzimas pueden ser modificadas
proteínas NH3; para que ellos ocurra a durante la secuencia, retornan a su estado original
plenitud es necesario la presencia de oxígeno. una vez finalizado la reacción. Además,
Si en nuestra dieta se excede las necesidades incrementando la velocidad de las reacciones, las
inmediatas del organismo, éstas se almacenan enzimas proporcionan un medio para regular la
(anabolismo) en forma de glucógeno o tasa de reacciones en las vías metabólicas del
organismo
triglicéridos. Por el contrario cuando la
ingesta es deficitaria, lo almacenado se
degrada para generar energía. Los detalles de
estos procesos serán analizados
posteriormente
ENZIMOLOGIA
GENERALIDADES
2
ESTRUCTURA se denominan holoenzimas, y la parte
De todas las funciones de las proteínas, la proteica apoenzima.
catálisis es tal vez la más importante. En
ausencia de catálisis, casi todas las
reacciones de los sistemas biológicos se
llevarían a cabo con demasiada lentitud para
suministrar productos al ritmo que los
requiere un organismo metabolizador.
SITIO ACTIVO
El sustrato se une a una región específica de
la enzima denominada sitio activo o sitio
catalítico (Fig. 1.2)
3
interacciones entre el sustrato y grupos del sitio de catálisis; sin embargo,
reactivos funcionales sobre los residuos de trabajos recientes sugieren que el sitio
aminoácidos cofactores de la enzima activo de algunas enzimas no es tan
promueven el rearreglo electrónico necesario rígido, ya que su estructura se modifica
para la reacción. al unirse con el sustrato. El sitio activo
tiene una forma complementaria
La mayoría de las reacciones catalizadas por sustrato solamente después de
enzimas son muy eficientes y transcurren establecido su unión. Este proceso de
desde 106 hasta 1014 veces más rápido que la reconocimiento dinámico se llama
misma reacción no catalizada. Típicamente, inducido.
cada molécula de enzima es capaz de
transformar cada segundo de 100 a 1000
moléculas de substrato en producto. El COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO
número de estas moléculas transformadas a El efecto catalítico de una enzima siempre es
producto por molécula de enzima en cada precedido por la formación de un complejo
segundo, se conoce como el número de enzima-sustrato.
recambio
Características
Características 1. En algunas ocasiones se ha visualizado
1. Tamaño. Es relativamente pequeño directamente con microscopia
cuando se compara con el resto de la electrónica transmisión y con
enzima, ya que está constituido por cristalografía de rayos X.
una región que contiene pocos 2. Al constituirse el complejo enzima-
aminoácidos. sustrato se modifican algunas de las
2. Forma. El Sitio activo de una enzima propiedades físicas de la enzima, es el
tiene forma tridimensional. Algunos caso de solubilidad y la estabilidad al
aminoácidos interactúan más calor.
frecuentemente que otros con el 3. Al establecer el complejo, las
sustrato debido a la carga o características espectroscópicas de
características de sus grupos muchas enzimas cambian.
funcionales libres (amino, carboxilo, 4. El complejo puede ser aislado
hidroxilo, etc.) de la cadena peptídica. experimentalmente en forma pura en
3. Unión. El sustrato se une a las enzimas algunos casos.
por fuerzas relativamente débiles
4. Interacción. Al interactuar el sitio A una concentración constante de enzima la
activo con el sustrato, se forma un velocidad de una reacción se incrementa
complejo compacto que en su espacio directamente en proporción al aumento de la
intermolecular no cabe ni la molécula cantidad de sustrato, hasta alcanzar un
de agua. El sitio activo contiene varias óptimo. En otras palabras, a una
zonas polares, que son esenciales para concentración suficientemente alta de
el enlace y la catálisis; asimismo, sustratos, los sitios cata1íticos de la enzima se
posee otras regiones no polares, que se saturan y la reacción alcanza su velocidad
comportan como una región en la que máxima (ésta es la prueba general más
el sustrato interactúa con mayor o antigua de la existencia del complejo enzima-
menor intensidad, según sus sustrato). En contraste, las reacciones no
características. Especificidad. Un catalizadas no presentan este efecto de
sustrato debe tener una forma, tamaño saturación.
y características de carga para
interactuar en el sitio específico. La Por otro lado, la saturación indica también
enzima hexocinasa tiene como sustrato que la enzima presenta un número finito de
D-glucosa, que no interactúa con la sitios de combinación con el sustrato. Cuando
forma L. Emil Fisher propuso la todos los sitios están ocupados por sustrato,
metáfora de la cerradura y la llave para se puede hablar de saturación y es posible
hacer la similitud con las explicar el tipo de cinética descrito en 1913
características de estereospecificidad por Michaelis y Menten.
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cambios conformacionales afectan a toda la
En este caso, debe considerarse que sólo un enzima dando lugar a la exclusión del agua
sustrato y un producto son libremente del sitio activo
interconvertibles.
Especificidad
Las enzimas son muy específicas por el
substrato de la reacción que catalizan.
Interactúan con una o muy pocas moléculas
y catalizan únicamente un tipo de reacción,
por lo que las moléculas con las que Fig. 1.4 Modelo del acoplamiento inducido
interactúan deben ser muy parecidas, tanto
en composición, como en estructura MECANISMO DE ACCIÓN
tridimensional. Se han establecido dos ENZIMÁTICA
modelos, el de llave-cerradura y
acoplamiento o encaje inducido Aspectos cinéticos y termodinámicos de las
reacciones
Según el modelo de llave – cerradura existe
un encaje perfecto del sustrato a su lugar de La rapidez de una reacción y el grado en que
acción, la misma que sería rígido como una se favorece termodinámicamente son dos
cerradura (Fig. 1.3). Este modelo, propuesto temas distintos, aunque están muy
por Emil Fisher en 1894, establece que relacionados. Esto es verdad para todas las
durante las reacciones enzimáticas, los reacciones, intervenga o no un catalizador. La
compuestos se combinan con ciertos sitios diferencia entre las energías de los reactivos
específicos de las enzimas para convertirse (el estado inicial) y las energías de los
en productos productos (el estado final) de una reacción da
el cambio de energía de esa reacción,
expresado como cambio estándar de energía
libre ( G°).
Energía de
activación
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cambio de energía libre. La energía de ruptura de H2O2 se ha reducido en presencia
activación de una reacción no catalizada es de un catalizador de hierro. Curva (c)
más alta que la de una reacción no catalizada: diagrama de energía para la ruptura de H2O2
dicho de otro modo, una reacción no catalizada por la enzima catalasa. Esta
catalizada requiere más energía para ponerse reacción tiene el más bajo requerimiento de
en marcha. Por ello, su rapidez es más baja energía de activación. Curva (d), diagrama de
que la de una reacción catalizada (Fig. 1.6) energía para la ruptura no catalítica de H2O2 a
una temperatura elevada. Las moléculas de
La mejor forma de mostrar la energía de H2O2 comienzan a reaccionar desde un alto
activación y su relación con el cambio de nivel de energía.
energía libre de una reacción es con una
gráfica. Si se requiere aumentar la velocidad de la
reacción, se pueden hacer dos cosas:
incrementar el nivel de energía promedio de
las moléculas de H2O2 mediante un aumento
en a temperatura: o bien, añadir un
catalizador, La velocidad se incrementa en la
primera opción porque aumenta el número de
colisiones entre las moléculas y, por
consiguiente, la fracción de moléculas de
H2O2 con suficiente energía para vencer la
cima (pasando por el estado de transición).
Los requerimientos energéticos para la
Fig. 1. 6 Reacciones catalizadas y no reacción son iguales para las dos temperaturas
catalizadas No obstante, aumentar la temperatura no es
una opción viable para la mayoría de las
En la figura anterior 1a. coordenada X células vivas. La otra alternativa es añadir un
muestra el grado en que se ha efectuado la catalizador. Al añadir iones férricos (Fe3+) y
reacción, y la coordenada Y, la energía libre otros iones metálicos al peróxido en solución,
de una reacción idealizada. El perfil de la se incrementa unas 30 000 veces su velocidad
energía de activación muestra las etapas de degradación con respecto a la velocidad
intermedias de una reacción, entre los estados alcanzada sin el catalizador (compare las
inicial y final. Los perfiles de energía de (figuras 6.la y 6.lb). Un catalizador funciona
activación son indispensables para estudiar disminuyendo a energía de activación de una
los catalizadores. La energía de activación reacción (figura 6.2b, c). El Fe3+ dirige las
afecta directamente la rapidez de reacción, y moléculas de H2O2 a través de distintas vías
la presencia de un catalizador acelera la de descomposición en donde existe una
reacción alterando el mecanismo y abatiendo menor barrera energética aumentando así la
así la energía de activación. velocidad de reacción. La posición de
equilibrio de la reacción anterior no cambia
La elevación de temperatura de una mezcla de en presencia del catalizador; sin embargo, el
reacción aumenta la energía con que cuentan equilibrio se alcanza mucho más rápido
los reactivos el estado de transición. porque se degradan más moléculas de H2O2
por unidad de tiempo.
A continuación describiremos el ejemplo de
la catalasa para ilustrar de manera general el Ahora, veamos lo que ocurre en presencia de
mecanismo de acción enzimática. una enzima, un catalizador biológico. Cuando
se añade la enzima catalasa a la solución de la
Las moléculas de H2O2 deben alcanzar un velocidad de reacción es unas 100 000 000
nivel de energía equivalente a la energía de veces más rápida que sin el catalizador (figura
activación para ser transformadas en 6.2c). La catalasa es una proteína grande (PM
productos. Curva (a), energía de activación = 250000) formada por cuatro subunidades
para la reacción en ausencia de catalizador. idénticas, cada una asociada a una unidad
Curva (b), la energía de activación para la hemo (protoporfirina con hierro) y se
encuentra en casi todos los tipos de células
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animal y vegetal. Como todas las enzimas, la Por suerte, todas las enzimas conocidas se
catalasa tiene las propiedades de un verdadero pueden clasificar dentro le seis categorías
catalizador: (tabla 1.1).
1. Aumenta la velocidad de una reacción
al disminuir la barrera de energía de
activación. PRINCIPIOS DE CINETICA
2. No se consume ni sufre cambio ENZIMÁTICA
permanente de su estructura durante el
proceso catalítico. La cinética enzimática estudia la velocidad
3. No altera la posición de equilibrio de la de las reacciones catalizadas por enzimas.
reacción, sólo la velocidad a la cual se Estos estudios proporcionan información
alcanza dicho equilibrio. directa acerca del mecanismo de la reacción
4. Por lo general, actúa formando un catalítica y de la especificidad de la enzima.
complejo transitorio con el reactivo, La medida se realiza siempre en las
estabilizando así el estado de condiciones óptimas de pH, temperatura,
transición. presencia de cofactores, etc., y se utilizan
concentraciones saturantes de sustrato. En
estas condiciones, la velocidad de reacción
NOMENCLATURA Y CLASIFICACION observada es la velocidad máxima (V max). La
DE LAS ENZIMAS velocidad puede determinarse bien midiendo
la aparición de los productos o la desaparición
A la fecha se han aislado y estudiado miles de de los reactivos.
enzimas; y habría mucha confusión si no
existiera un sistema de nomenclatura y Aunque las enzimas poseen muchas de las
clasificación de enzimas. Los nombres más características de los catalizadores orgánicos
comunes para las enzimas se forman e inorgánicos típicos, sus propiedades
añadiendo el sufijo -asa, al nombre de los cinéticas, únicas, las sitúan en otro grupo de
reactivos. Así, la enzima tirosinasa cataliza la catalizadores. Lo primero que se observó del
oxidación de tirosina. Estos nombres definen comportamiento particular de las enzimas, fue
el sustrato, pero no describen a la reacción el efecto poco común de la concentración del
química. Los primeros nombres que se dieron sustrato sobre la velocidad de reacción
a las enzimas, como catalasa, tripsina y enzimática. Para estudiar las velocidades de
pepsina, son todavía menos descriptivos y no estas reacciones, se mezclan la enzima y el
dan pista alguna de su función o sustrato; para sustrato en una solución adecuada
evitar tal confusión, ahora as enzimas tienen amortiguada para mantener un pH constante,
nombres oficiales que reflejan las reacciones y a una temperatura fija.
que catalizan. Cada enzima tiene un nombre
oficial internacional terminado en -asa y, se La velocidad inicial (vo) se determina, en los
siguen las reglas establecidas por la IUPAC, primeros minutos de la reacción, midiendo ya
IUB y IEC. Se divide en clases, subclases de sea la disminución de la concentración del
acuerdo a la reacción que catalizan, reactivo o el aumento en la concentración del
asignándole un nombre recomendado, un producto.
nombre sistemático (tipo de reacción), Si se quiere estudiar el efecto de la
seguido de un número de cuatro dígitos concentración del sustrato, se plantea un
separados por puntos y precedido por las experimento como el de la figura 8.
letras EC (Enzyme Commission). Por
ejemplo, el código numérico: para la lipasa Se preparan varios tubos que contienen un
pancreática es: EC 3.1.1.3 amortiguador con cantidades crecientes de
sustrato; se les añade a cada tubo una cantidad
El primer 3 por ser una hidrolasa, primer 1, constante de enzima, se mide la velocidad de
por hidrolizar un enlace éster, el segundo 1 la reacción y, por último, se construye una
por ser éster carboxílico, y el segundo 3, gráfica de la velocidad de reacción contra la
porque es el número de orden que concentración de sustrato. Con
corresponde a esta lipasa específica. concentraciones relativamente bajas de
sustrato, a velocidad inicial de reacción
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aumenta conforme se añade más sustrato, como un efecto de saturación de sustrato. Los
como cabría esperar; pero con primeros investigadores que analizaron
concentraciones más altas, el aumento en la explicaron la forma de esta curva de
velocidad es cada vez más lento hasta el velocidad fueron los bioquímicos Leonor
punto en que la velocidad se hace constante Michaelis y Maud Menten
sin importar cuánto sustrato esté presente;
esto es, la curva tiene la forma de una Análisis cuantitativo de la cinética
hipérbola. enzimática:
Se basa en los estudios de Michaelis - Menten
Tabla 1.1 Clasificación de enzimas y de Haldane. Los estudios sistemáticos del
efecto de la concentración inicial del sustrato
Tipo de sobre la actividad enzimática comenzaron a
CLASE reacción Ejemplo
catalizada
realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882
1 Transferencia se introdujo el concepto del complejo enzima-
Oxidorredutasas de electrones, sustrato como intermediario del proceso de
casi siempre Succinato catálisis enzimática. En 1913, Leonor
en forma de deshidrogenasa Michaelis y Maud Menten desarrollaron esta
iones hidruro o
átomos de teoría y propusieron una ecuación matemática
hidrógeno. Citocromo de velocidad que explica el comportamiento
usan con oxidasa cinético de los enzimas.
frecuencia
coenzimas
como NAD+,
Ellos propusieron que las moléculas de
NADP+, enzima, E y las moléculas de sustrato, S, se
FAD+, lipoato combinan en forma reversible y por etapas
2 Transferencia para formar un complejo ES:
Transferasas de grupos
funcionales de Glucocinasa
una molécula a k1 k3
otra. E+S ES E+P
3 Ruptura de
Hidrolasas enlaces por lactasa k2 k4
hidrólisis.
4 Formación de Los términos k1, k2, k3 y k4 definen las
Liasas dobles enlaces
por Aldolasa constantes de velocidad de las etapas
eliminación de individuales. El complejo ES tiene dos
grupos o posibles destinos: revertirse, liberando la
adición de Citrato liasa enzima y el sustrato, o proceder por medio de
grupos o un
doble enlace.
una reacción reversible para formar la enzima
5 Transferencia libre y un producto, P. la reacción anterior es
Isomerasas de grupos Fosfotriosa la mínima reacción secuencial necesaria para
dentro de una isomerasa explicar la acción enzimática. Se ha propuesto
molécula para una versión más complicada de la reacción, la
dar formas epimerasa
isoméricas. cual muestra un complejo enzima-producto,
6 Formación de pero requiere de un análisis matemático más
Ligasas enlaces C-C, complicado y no mejora sustancialmente
C-S, C-O y C- nuestra comprensión de la función
N por Piruvato
condensación carboxilasa
enzimática:
acoplada con
la ruptura de E+S ES EP E+P
ATP.
La ecuación básica desarrollada por Michaelis
y Menten para explicar la reacción catalizada
La velocidad constante se define como la por una enzima es:
velocidad máxima o Vmáx, Este
comportamiento catalítico que se observa en
la mayoría de las enzimas, se puede describir
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Vmáx [S] de 10-3 M) representa una alta afinidad entre
vo = E y S (se forma un complejo fuerte).
K M [S]
donde: Ya se mencionó que Vmáx es la velocidad
vo = velocidad inicial dada por la máxima de una reacción catalizada por una
concentración de sustrato [S] enzima para un valor dado de [E]. Este
Vmáx = velocidad máxima término, que se puede medir de manera
KM = constante de Michaelis experimental, es una constante importante
Michaelis y Menten hicieron varias muy útil para caracterizar una enzima y
suposiciones para simplificar su ecuación. optimizar las condiciones de reacción. Pero lo
Decidieron no considerar la reacción que más relevante es que conociendo el valor de
revierte el producto P y la enzima libre al Vmáx podemos calcular otra constante: el
complejo ES (definida por k4 en la reacción número de recambio k3 de una enzima.
secuencial). Esta reacción se vuelve
significativa sólo cuando se han producido El número de recambio es el número de moles
concentraciones relativamente altas de (o moléculas) de sustrato transformado en
producto. Cuando los bioquímicos utilizan la producto por moles (o molécula) de enzima
ecuación de Michaelis-Menten en el en un tiempo determinado, usualmente un
laboratorio, sólo miden las velocidades segundo.
iniciales, cuando la reacción representada por
k4 es muy, muy lenta (por lo regular durante Las constantes KM, Vmáx y k3 nos dan mucha
los primeros minutos). Otra suposición información acerca de una reacción catalizada
necesaria para desarrollar esta ecuación es por una enzima, de ahí que sea importante
que el complejo ES es un intermediario en obtenerlas de manera experimental. En la
estado estacionario; es decir, después de mayoría de los métodos se utiliza el análisis
mezclar E y S, se forma rápidamente una gráfico de los datos experimentales. La curva
cierta cantidad del complejo ES y su de Michaelis-Menten se puede utilizar para
concentración permanece relativamente estimar Vmáx y KM, sin embargo, es difícil
constante porque se produce con la misma medir con precisión el valor de V máx porque
velocidad con la que se degrada. se necesitan alcanzar niveles altos de sustrato,
que no son fáciles de realizar
Otras dos constantes importantes de la experimentalmente. Por esta razón, Vmáx, se
ecuación de Michaelis-Menten, KM y Vmáx, determina casi siempre de la gráfica de
merecen una descripción más amplia. La Michaelis-Menten y el valor de KM como la
constante de Michaelis, KM, se expresa en concentración de sustrato que produce una
términos matemáticos como una combinación velocidad inicial de ½ Vmáx.
de constantes de velocidad
En resumen, en este modelo la enzima se
Expresado con palabras, KM equivale a la combina reversiblemente con su substrato
concentración de sustrato que produce una para formar el complejo enzima-sustrato (ES)
velocidad inicial de ½ Vmáx. Los valores de que subsecuentemente se rompe para formar
KM de las enzimas van desde 10-1 M hasta el producto, hecho que regenera a la enzima.
valores tan pequeños como 10-8 M. Para las
enzimas que emplean más de un sustrato, Luego de una serie de análisis, la
existe un valor de KM que define a cada una representación gráfica de la ecuación de
de ellas. Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es una
hipérbola (Fig. 1.9). La Vmax corresponde al
Bajo ciertas condiciones de KM es una medida valor máximo al que tiende la curva
de la afinidad entre E y S. Cuando KM es experimental, y la KM corresponde a la
relativamente grande (10-1 a 10-3 M), k2, la concentración de sustrato a la cual la
constante de velocidad de disociación de ES, velocidad de la reacción es la mitad de la Vmax
también lo es, y por lo tanto, el complejo ES
se mantiene muy débilmente unido. Por el
contrario, un valor pequeño de KM (de menos
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Fig. 1.10. Representación de la Ecuación de
Lineweaver-Burk
10
De esta manera, cuando los valores de pH se
Hasta ahora, sólo hemos revisado la incrementan o disminuyen de los rangos
influencia del sustrato (S} sobre la velocidad considerados óptimos para cada enzima, la
de las reacciones catalizadas por enzimas. La actividad enzimática siempre disminuye,
actividad enzimática está influenciada además debido a que las variaciones de pH afectan el
por una serie de factores externos e internos, carácter iónico de los grupos funcionales de la
sean éstos físicos, químicos y biológicos que enzima alterando su conformación o
afectan la actividad enzimática, entre ellos desnaturalizando a las enzimas al variar a una
tenemos: por factores experimentales como la acidez o basicidad relativa
concentración de enzima, el pH de la solución
de reacción y la temperatura, así como De la misma manera, la ttemperatura, de
actividad de productos e inhibidores. manera experimental juega un rol muy
importante en la cinética enzimática, aunque
Es fácil predecir el efecto que tendría añadir en el organismo del ser humano dado nuestros
más enzima, ya que al ser ésta el catalizador, mecanismos de control, la temperatura
la velocidad inicial de reacción debe ser prácticamente se mantiene en rangos ideales,
mayor cuanto mayor sea la concentración de dado nuestra homeostasis.
enzima (Fig. 1.11); pero siempre y cuando
haya suficiente sustrato. Las enzimas también De manera general, a incrementarse esta
son sensibles a los cambios ambientales. La variable, la actividad enzimática también lo
mayoría de ellas tienen un pH óptimo para hace pero hasta cierto límite, puesto que a
lograr su eficiencia máxima; éste varía de una temperaturas superiores a las óptimas las
enzima a otra, pero por lo general se enzimas se desnaturalizan y por ende la
encuentra entre pH de 6-8. La dependencia de actividad enzimática disminuye (Fig. 1.13);
pH se debe a la participación de los residuos de la misma manera, al disminuir la
de aminoácidos cargados que tiene la enzima temperatura, la actividad enzimática
o a los sustratos, cuyas estructuras iónicas disminuye, en ello se sustenta la criogenia.
cambian según varíe el pH (Fig. 1.12)
11
Además de actuar como catalizadores en las transferencia reversible de electrones
células, estas enzimas son responsables de entre iones metálicos y el sustrato
regular la velocidad total de los procesos
metabólicos. Las enzimas alostéricas o Por lo general, los requerimientos de iones
reguladoras son algo diferentes de las enzimas metálicos de una enzima son específicos, la
no reguladoras. En general, son de mayor actividad enzimática es baja o nula cuando el
peso molecular y se forman, de dos o más ión metálico específico para la enzima
subunidades; su actividad depende de varios metaloenzima) no se encuentra presente o se
factores, algunos son los mismos que influyen sustituye por otro. Alrededor de 30% de las
en las enzimas no reguladoras: [S], [E], enzimas conocidas requieren de un ión
temperatura, pH, cofactores, etc., además, metálico. Las metaloenzimas utilizan una o
muestran unión cooperativa del sustrato y/o varias de las estrategias recién descritas para
unen otro tipo de molécula llamada llevar a cabo a unión del sustrato y la acción
modulador o efector. La unión de un catalítica.
modulador puede potenciar o disminuir la Catálisis covalente
actividad de las enzimas reguladoras.
Este proceso sucede cuando un grupo
funcional nucleofílico (rico en electrones) de
Catálisis general ácido-base una enzima reacciona con el sustrato
formando un enlace covalente, dando lugar a
Muchas de las reacciones donde se transfieren un intermediario transitorio, particularmente
protones, incluidas la hidrólisis de ésteres y reactivo. La catálisis covalente se observa en
amidas, son catalizadas por ácidos y bases. las serina proteasas, un grupo de enzimas,
Los grupos funcionales del sitio activo de la entre las que figura la quimotripsina, que
enzima pueden actuar como ácidos (—NH3+; cataliza la ruptura de enlaces en los sustratos
—COOH) o como bases (—NH2; —COO-), y peptídicos.
ayudar en las reacciones de transferencia de
protones, facilitando la ruptura del enlace. ACTIVACION E INHIBICION
Los grupos funcionales ácidos y básicos de la Algunas enzimas, gracias a la acción de
enzima se orientan hacia el sitio activo, de tal algunas moléculas incrementan su actividad
forma que favorecen sus interacciones con el metabólica (activación), mientras otras
sustrato unido. disminuyen su actividad (inhibición). Estos
dos términos deben diferenciarse de
Catálisis mediada por iones metálicos inducción y represión, cuyo efecto es
semejante a activación y represión
Los iones metálicos asociados a la enzima o a respectivamente, con la diferencia que actúa
las moléculas de sustrato a menudo participan sobre la concentración de la enzima. Por
en la catálisis. Los iones de metales alcalinos ejemplo:
(Na+, K+) y los metales de transición (Mg2+,
Mn2+, Cu2+, Zn2+, F2+, Fe3+, Ni2+, y otros) Activación por ion (tabla 1.2, Fig. 1.14)
ayudan en las reacciones enzimáticas lo - Directamente en la reacción por
menos de tres maneras: formación de complejos con
1. Por medio de enlaces covalentes coenzima o cosustrato. Ejem. Fe -
coordinados fijan al sustrato para que FMN, ATP-Mg
quede orientado apropiadamente en - Parte de enzima, y actúa, ya sea como
esta forma el sustrato se puede unir al estabilizador de la conformación
sitio activo de la enzima con una activa, o directamente en el sitio
geometría muy específica. activo (Mn en isocitrato DHG; Zn o
2. Favorecen una reacción al polarizar el Cu en carboxipeptidasa)
enlace que va a ser escindido o
estabilizando un intermediario cargado
negativamente.
3. Participan en reacciones biológicas de
oxidación-reducción mediante la
12
Tabla 1.2 algunos activadores metálicos venenos y diversos medicamentos que alivian
el dolor, la inflamación, las infecciones, el
Elemento Enzima Activada cáncer, debido a su capacidad de corregir el
funcionamiento de las proteínas celulares, a
Zn++ Deshidrogenasas, anhidrasa carbónica, ARN y través de una enzima específica.
ADN polimerasas.
Fig.1. 14
Inhibidores reversibles e irreversibles
13
Las personas expuestas al DIFP degradan la
acetilcolina de las uniones nerviosas a E+S ES E + P
velocidades considerablemente reducidas, +
provocando un disparo continuo de impulsos I
nerviosos. Los residuos de serina, cisteína e
histidina son particularmente susceptibles a EI
las modificaciones químicas por los La magnitud de la inhibición depende de la
inhibidores irreversibles. proporción de concentración de sustrato y de
inhibidor, así como de la afinidad de cada uno
Estos inhibidores también pueden tener por la enzima. Una concentración muy alta de
efectos positivos. La aspirina ácido sustrato atenúa el efecto del inhibidor
acetilsalicílico) actúa como analgésico y competitivo, a menos que éste tenga más
antiinflamatorio al bloquear la síntesis de afinidad por la enzima que el sustrajo. La
prostaglandinas que producen dolor. La molécula del inhibidor no puede ser
aspirina modifica covalentemente e inactiva transformada en ‗producto‖ porque no tiene
de esta forma a ciclo oxigenasa y la los grupos funcionales sobre los que actúa
prostaglandina sintetasa, la enzima que normalmente la enzima. No obstante, si el
cataliza el primer paso de la síntesis de inhibidor es capaz de unirse al sitio activo,
prostaglandinas. debe tener alguna similitud estructural con el
sustrato normal. Un ejemplo claro del proceso
Inhibidores Suicidas: son inhibidores de de inhibición competitiva es la inhibición por
sitio activo que ejercen reacción parcial y malonato, oxalato y pirofosfato de la enzima
forman inhibidores irreversibles, por ejemplo succinato deshidrogenasa, una enzima del
la penicilina, para poder actuar es convertida ciclo del ácido cítrico. Estas tres pequeñas
a un compuesto que no puede disociarse del moléculas tienen estructura y carga
glicopeptidil transpeptidasa una de las semejantes a las del succinato, el sustrato
enzimas responsables de la síntesis de la normal, pero no pueden ser deshidrogenadas
pared bacteriana, por lo tanto al no poseer por la enzima.
pared (protoplasto) se lisan con gran
facilidad. Muchos investigadores a este grupo
de inhibición lo incluyen dentro de las Algunos de los mejores inhibidores
irreversibles competitivos que se han descubierto son los
análogos de estado de transición:
Los inhibidores reversibles son compuestos compuestos que se diseñan tomando como
que se pueden disociar fácilmente de la modelo las estructuras de los posibles estados
enzima y sólo la inactivan cuando están de transición. De hecho, el sitio activo de la
unidos. enzima es más complementario con el estado
de transición que con los reactivos o
El complejo EI se mantiene unido por productos de la reacción. De aquí se
interacciones débiles no covalentes, como desprende que una molécula diseñada a
sucede en el complejo ES. Los inhibidores semejanza del estado de transición predicho
reversibles se clasifican en tres tipos deberá unirse en forma muy selectiva con el
comunes: competitivos, incompetitivos, no sitio activo y ser un potente inhibidor
competitivos. competitivo. Actualmente. muchas compañías
farmacéuticas utilizan esta estrategia para
Los inhibidores competitivos (Fig. 1.15) diseñar fármacos potenciales. Un ejemplo
tienen una estructura semejante a la del bioquímico clásico es el de la succinato
sustrato normal y también se unen en el sitio deshidrogenasa por el malonato, un
activo de la enzima (fig. 1.16). La unión del compuesto semejante al sustrato clásico
sustrato y del inhibidor competitivo en el sitio succinato. Entre los fármacos con esta acción
activo de la enzima es un proceso podemos citar a la sulfas, que
mutuamente excluyente: cuando el inhibidor estructuralmente se parecen a PABA,
está unido, el sustrato no puede unirse y precursor para la síntesis del ácido fólico
viceversa. El esquema cinético de la bacteriano, coenzima importante para la
inhibición competitiva es el siguiente: síntesis de ácidos nucleicos. Así mismo los
14
antihipertensores captopril, enalapril, que grupo sulfhidrilo de un residuo de cisteína, y
inhiben a la ECA, el fluorouracilo para tratar un ión metálico tal como: Ag+, Hg2+ o Pb2+.
el cáncer.
+I
1/Vmax sin I
+I
1/Vmax
sin I
1/Km [S]
15
de KM no cambia, figura). En la inhibición 2) Heterotrópicas: La inhibición o
competitiva se obtienen líneas paralelas y estimulación es causada por sustancias de
cambian tanto Vmáx y KM (figura). origen natural que no sea el sustrato.
1/km [S]
Efecto cinético sobre la reacción inhibida a La curva que se grafica con concentración de
Tipo de
sustrato es sigmoidal, la misma indica que la
KM Vmáx KM/ Vmáx unión de las primeras moléculas de sustrato
inhibición mejora la unión de las primeras moléculas
posteriores.
Competitiva mayor inalterada Aumenta
16
enzima de control y está influenciada por la definir KM de la forma usual. En lugar de ello,
concentración del material inicial (A), o del la concentración de sustrato que produce una
producto final (P), o por ambos. Las enzimas vo y de ½ Vmáx se representa con el término
reguladoras son de varios tipos y se clasifican [S]0.5.
por su modo de acción. De ellas, las enzimas
alostéricas, son modificadas por la unión Las moléculas erectoras actúan mediante la
reversible no covalente de una molécula de unión no covalente, reversible con una región
señal (Fig. 1.20). de la enzima. Todas las enzimas alostéricas
1 2
hasta ahora estudiadas son mucho más
A B C D F P grandes y complejas que las no alostéricas y
poseen dos o más subunidades; p.e. son
En lo anterior se aprecia una secuencia oligoméricas. Además de de los sitios activos
hipotética de reacciones que forman parte en (sitios catalíticos) para la reacción, las
una ruta metabólica. La biomolécula A es enzimas alostéricas tienen sitios reguladores
convertida al producto final, P, a través de para unir efectores especificas. El principio
varios intermediarios (B, C, D y F). Las general que sustenta el concepto de
enzimas se representan como E1, E2, etc. alosterismo consiste en que la unión o el
evento catalítico que ocurre en un sitio,
influye en la unión o catálisis efectuada en
Efectores positivos y negativos otro sitio. Los mensajes se transmiten de un
sitio a otro mediante cambios
Las biomoléculas que influyen en la acción de conformacionales de la estructura proteica. El
una enzima alostérica se conocen como término alostérico se puede traducir como
efectores o moduladores. Estos pueden actuar ―otras formas‖. La unión de moléculas
como estimulantes (efectos positivos) o efectoras cambia a conformación de la
inhibidores (efectores negativos) de la proteína en modo tal que se comunica dicha
enzima. Por ejemplo, una alta concentración unión a las demás subunidades. En las
de A y una baja concentración de P, en la enzimas alostéricas se transmiten mensajes. a
figura, son indicadores de que la secuencia través de cambios conformacionales, entre los
metabólica procedería hacia la formación de sitios de unión que están en distintos planos
P. En este caso, A puede actuar como efector
positivo y sustrato. Cuando el producto P CONTROL POR RETROALIMENTA-
alcanza un cierto nivel deseado, puede actuar CIÓN o FEED BACK (Fig. 1.21)
como inhibidor (efector negativo). Este modo
de regulación es una forma muy lógica y Las enzimas reguladoras con comportamiento
práctica de controlar la velocidad de síntesis alostérico controlan varias vías en su forma
de P. con una regulación precisa, se producirá más simple, el que se conoce como
la cantidad adecuada de P sin que se agote por retroinhibición o inhibición por producto
completo A. final. Se ha encontrado que estas enzimas
alostéricas se localizan en o cerca del
En los primeros estudios detallados del comienzo de una vía enzimática y que son
comportamiento de las enzimas alostéricas, se inhibidas o estimuladas por el producto final
observó que la mayoría no exhiben curvas de de esa vía.
velocidad hiperbólicas; es decir, no siguen la
cinética típica de Michaelis-Menten y la COVALENTE (Fig. 1.22) Estado de
inhibición no puede ser descrita con las fosforilación o desfosforilación
gráficas tradicionales de Lineweaver-Burk.
Las curvas de velocidad de vo contra [S] para Algunas enzimas se regulan por la
las enzimas alostéricas son sigmoideas interconversión reversible entre sus formas
(figura). La presencia de un efector positivo o activa e inactiva, producidas por
negativo también da lugar a una curva modificaciones covalentes, dando lugar a un
sigmoidea, pero con una velocidad estado de fosforilación y desfosforilación, a
incrementada o inhibida respectivamente. través de cinasas y fosfatasas
Como las enzimas alostéricas no siguen una respectivamente, ya que estas enzimas poseen
cinética de Michaelis-Menten, no es posible
17
residuos específicos que le permiten estos algunos ejemplos de moléculas grandes, tales
cambios. como proteínas y ácidos nucleicos, que sirven
de sustratos. Como cabría esperar, las
enzimas que catalizan los cambios químicos
de otras enzimas, también están sujetas a un
estricto control de regulación.
18
producto. La forma adenilada de la enzima es Tabla 1.4 Enzimas digestivas (peptidasas)
inactiva. que existen como zimógenos
19
que la isoenzima H4 tiene mayor afinidad por
La coagulación de la sangre también requiere lactato.
una serie de activaciones proteolíticas en las
que interviene varias proteínas, en especial las El análisis de de las formas de isoenzima de
conversiones de protrombina en trombina y LDH del suero sanguíneo ha sido de gran
de fibrinógeno en fibrina. En el último paso utilidad en el diagnóstico y tratamiento de
de la formación de coágulos, que es el mejor ciertas enfermedades. En el daño celular
caracterizado, la proteína soluble fibrinógeno provocado por infarto del miocardio (ataque
se convierte en la proteína insoluble fibrina cardiaco) o por hepatitis infecciosa (una
como resultado de la hidrólisis de cuatro enfermedad hepática) o en trastornos del
enlaces peptídicos. músculo esquelético, la LDH y otras enzimas
se liberan hacia el torrente sanguíneo. El
tejido dañado se refleja en el patrón de
Regulación por isoenzimas isoenzimas de LDH que se encuentra en a
Algunos procesos metabólicos están sangre. La figura 1.24 muestra un patrón
regulados por enzimas que existen en electroforético de las formas de isoenzima de
diferentes formas moleculares, llamadas LDH.
isoenzimas o isozimas, que tienen secuencias
de aminoácidos semejantes pero no idénticas.
Todas las formas presentan la misma
actividad enzimática es decir catalizan la
misma reacción bioquímica, pero pueden
diferenciarse por tener distintas propiedades
cinéticas (diferente KM y Vrnáx) reguladoras
(diferentes efectores); preferencias por las
coenzimas, e incluso por su distribución
celular. Figura 1.24
Electroforesis de las formas isozímicas de lactato
deshidrogenasa (LDH.
La enzima mejor conocida y una de las
primeras que se encontraron en formas de
isoenzimas, es la lactato deshidrogenasa
(LDH), la cual cataliza una reacción clave en Mutagénesis de lugar dirigida catalíticas
el metabolismo muscular; la conversión
reversible de piruvato a lactato. La LDH es un Hasta 981, se suponía que la catálisis de las
tetrámero que consta de dos tipos posibles de reacciones bioquímicas se limitaba a las
subunidades, M y H. Las dos cadenas proteínas que se encontraban en forma
polipeptídicas, que se forman de dos genes natural. Desde entonces, se han hecho
distintos, se asemejan en su secuencia de importantes descubrimientos que han abierto
aminoácidos, pero se pueden separar nuevas fronteras en la catálisis biológica:
mediante electroforesis. La forma M4 de LDH 1. Empleando una técnica denominada
es la que predomina en el músculo mutagénesis de lugar dirigida, los
esquelético. Por el contrario, la LDH de científicos pueden modificar la secuencia
músculo cardiaco tiene la fórmula de de aminoácidos de enzimas conocidas y de
subunidad, H4. Otros tejidos como el hígado otras proteínas para cambiar su actividad,
tienen una mezcla de cinco posibles formas especificidad e incluso su conformación.
incluyendo híbridos (M4, M3H, M2H2, MH3, De hecho, ahora es posible crear proteínas
de prácticamente cualquier composición y
H4). No se conoce bien la razón por la que
existen isoenzimas de LDH y de otras secuencia de aminoácidos.
enzimas; sin embargo, se ha observado que 2. Utilizando análogos del estado de
las distintas formas de LDH de otras enzimas transición como antígenos, se han
muestran propiedades cinéticas y reguladoras preparado anticuerpos proteicos que
excepcionalmente distintas. Por ejemplo, la funcionan como catalizadores biológicos;
isoenzima M4 de LDH tiene mayor afinidad de ahí que se les conoce como anticuerpos
por el piruvato que las otras formas, mientras catalíticos.
20
El diseño de nuevos catalizadores proteicos transición de una reacción, mientras que los
ha llevado al desarrollo de nuevos tipos de anticuerpos unen específicamente moléculas
catalizadores para la industria biotecnológica, semejantes a los antígenos en su estado basal.
la medicina y la investigación básica. En consecuencia, ¿es posible producir un
anticuerpo con la actividad catalítica del tipo
Mutagénesis de lugar dirigida de las enzimas, utilizando un análogo del
estado de transición como antígeno? Si así
Cuando se estudia la estructura y actividad de fuera, esto ofrecería la oportunidad de generar
una enzima, resulta muy valioso poder anticuerpos que no sólo unan moléculas, sino
sustituir un residuo de aminoácido por otro o que también sirvan como catalizadores muy
modificar la estructura de un aminoácido ya selectivos de las reacciones químicas que se
existente. Por ejemplo, si uno supone que la quieran.
cadena lateral hidroxilo de un residuo
específico de serina es necesaria para la El estudio de anticuerpos catalíticos
actividad catalítica de una enzima, se puede (Abzimas) en su totalidad ha aumentado
remplazar esa serina por un residuo de sumamente la conversión actual de los
alanina. Posteriormente se analiza la actividad mecanismos de la catálisis de la enzima y
catalítica de la proteína modificada. Ahora los representa otro paso adelante en las tentativas
científicos han desarrollado vanas estrategias de crear las enzimas biológicas artificiales
para alterar la secuencia de las proteínas. dirigidas.
En la actualidad se cuenta con técnicas donde
se utilizan los nuevos procedimientos de El primer anticuerpo comercializado como
DNA recombinante para alterar los genes en abzima ha sido una con actividad de aldolasa
cualquier lugar del DNA. Con el empleo de desarrollada en el Grupo Lerner, U.S.A. Sin
enzimas que catalizan su ruptura, la síntesis embargo, el uso masivo de ellas aún está en
del nuevo DNA y la replicación de sus sus primeros pasos. La aldolasa del Grupo
hebras, es posible modificar el mensaje de un Lerner es utilizada para la síntesis del
gen particular para cambiar la secuencia de Epothilone A, un nuevo compuesto
aminoácidos expresada en el producto anticanceroso.
proteico final. El gen modificado, preparado
por síntesis química o biológica se introduce Otra manera de utilizar las abzimas ha sido
en una célula huésped, donde es donado y propuesta por diferentes laboratorios,
expresado para producir la proteína alterada utilizando las propiedades hidrolíticas, de las
en cantidad suficiente para estudios abzimas para activar prodrogas.
posteriores. Se pueden sintetizar genes que
produzcan proteínas de prácticamente Quizás el uso más emocionante de la
cualquier secuencia de aminoácidos. Esto tecnología de las abzimas es incidir de
permite diseñar proteínas por ingeniería con manera específica sobre las células
nuevas propiedades estructurales catalíticas. cancerígenas para generar su destrucción Las
células del cáncer contienen los determinantes
Anticuerpos catalíticos (Abzimas) únicos, llamados los antígenos de la célula del
tumor, ausentes en células normales.
Los anticuerpos proteicos de la sangre Utilizando los anticuerpos que unen
(inmunoglobulinas) funcionan como específicamente estos antígenos de la célula
moléculas de protección al unir fuertemente y del tumor, las drogas del cáncer se pueden
neutralizar las sustancias extrañas que pueden dirigir directamente al tumor. En la caja de
dañar a las células y a los organismos. Los abzimas, los científicos han previsto
anticuerpos se producen en la sangre de los anticuerpos con dos sitios obligatorios del
animales superiores como respuesta a la antígeno distinto: Un sitio ata con alta
invasión de moléculas extrañas llamadas afinidad a un antígeno de la célula del tumor,
antígenos. Hace muchos años, Linus Pauling mientras que el segundo sitio cataliza la
postuló que la diferencia fundamental entre hendidura de un prodroga, éste es un
las enzimas y los anticuerpos estriba en que precursor no tóxico de una droga citotóxica.
las enzimas unen selectivamente a las Primero, el anticuerpo se administra a los
moléculas de sustrato en el estado de pacientes, y ata las células del tumor con alta
21
afinidad. En segundo lugar, el prodroga se diversos tipos en diferentes organismos, aún
introduce en la circulación sanguínea pero el más incrédulo quedó convencido de su
solamente se activa en la vecindad del existencia. El verdadero significado del
anticuerpo apuntado. Por esta técnica, los descubrimiento de que ciertas formas de RNA
tumores son destruidos selectivamente pueden servir como catalizadores biológicos,
mientras que las células sanas se ahorran del fue reconocido al otorgarse el Premio Nóbel
tóxico afectan drogas del cáncer. de Química de 1989 a los autores del
descubrimiento de estos catalizadores únicos.
De las misma manera, otras posibles Sidney Altman (de la Universidad de Yale) y
aplicaciones de las abzimas contra virus. Los Thomas Cech (de la Universidad de
primeros estudios indican que pueden Colorado-Boulder). El término ribozima se
inactivarlos; por ejemplo, se han aislado las utiliza ahora para describir las enzimas de
abzimas que hienden las proteínas virales de RNA.
la capa del virus de la inmunodeficiencia
humana (VIH). Los investigadores también Las ribozimas presentan una gran
han desarrollado los abzimas que catalizan la especificidad de sustrato, esta es la
destrucción específica de genes virales. característica en que se fundamenta la idea de
Quizás en el futuro, tendremos las que las ribozimas pueden ser utilizadas como
herramientas para tratar una variedad amplia supresores génicos específicos y servir de
de enfermedades con el uso de la tecnología base para el desarrollo de nuevos agentes
catalítica del anticuerpo. terapéuticos. Las ribozimas actuarían
bloqueando la transmisión de información
RNA catalítico (ribozimas) genética a nivel del RNA mediante la
Hasta 1981, los estudiantes de bioquímica destrucción de genomas RNA (virus RNA) o
leían en sus libros de texto y escuchaban en de ARN m. y por lo tanto tienen un potencial
las clases que ―todas las enzimas son enorme como terapia para el control de genes.
proteínas‖.
Se han generado hasta hoy, bajo el
El estudio de los catalizadores biológicos se procedimiento del ADN recombinante más de
volvió muy intenso en la segunda mitad del 100 ribozimas nuevas, con perfiles catalíticos
siglo XIX por las investigaciones que se distintos de los que se encuentran en
hacían sobre el metabolismo de los azúcares. moléculas naturales. Se están empleando
En esa época a los catalizadores se les como potenciales agentes terapéuticos en una
llamaba ―fermentos‖ y se desconocía su amplia variedad de enfermedades, que
naturaleza química. incluyen infecciones virales, cáncer, diabetes,
enfermedades cardiovasculares y
En la década de los veinte (1920) se purificó osteoporosis.
y cristalizó la primera enzima, la ureasa. El
análisis químico que ésta se componía Ribonucleasa P
principalmente de proteína. Desde esa época
hasta 1981 todas las enzimas purificadas y El primer indicio del RNA catalítico viene de
analizadas fueron proteínas. Para entonces, la los estudios de la enzima ribonucleasa P, a
idea de que todas las enzimas eran proteínas cual se encuentra en todos los organismos.
se volvió un dogma bioquímico. El Los sustratos para la enzima son una serie de
descubrimiento de moléculas de RNA que moléculas precursoras de tRNA inactivo. Para
actuaban como enzimas fue realizado por dos preparar el tRNA funcional, maduro, se
distintos grupos de investigación entre 1981 y elimina un fragmento del ribonucleótido por
1982, así comenzó una revolución de la ruptura hidrolítica del enlace fosfodiéster,
bioquímica. Muchos bioquímicos se dejando la conocida estructura de hoja de
mostraron escépticos cuando se anunciaron trébol del tRNA para seleccionar y activar
por primera vez los resultados de la aminoácidos para la síntesis proteica. La
investigación sobre el RNA catalítico. Sin ribonucleasa P puede reconocer y romper por
embargo, como a evidencia experimental que lo menos 60 precursores distintos de tRNA.
sustentaba la existencia de las enzimas de
RNA se acumulaba y se iban descubriendo
22
El componente de RNA actúa como una APLICACIONES DE LA ACTIVIDAD
verdadera enzima: sigue la cinética de ENZIMATICA EN EL CAMPO
Michaelis-Menten, sólo se necesita en BIOMEDICO
pequeñas cantidades, permanece con su
estructura terciaria para ser activa y no La acción de las enzimas no se limita a la
modifica dicha estructura en el proceso de catálisis de las reacciones metabólicas dentro
reacción. de las células biológicas. Por sus
características de especificidad y eficacia, las
Granzimas enzimas resultan idóneas para utilizarse en
algunos tratamientos clínicos, en el
Pertenecen a una familia de proteasas-serina procesamiento de alimentos, en la limpieza de
estructuralmente relacionadas a la depósitos de desecho contaminados con
quimotripsina y todas muestran actividad químicos, e incluso en la manufactura de
catalítica por una triada His-Asp-Ser en su ropa.
sitio catalítico.
La industria de la biotecnología ha
Son clave del inicio de muchos procesos de desarrollado varias enzimas con fines
apoptosis que ocurren en células blanco terapéuticos. Recientemente se ha
marcadas para ser destruidas por las células recomendado utilizar la enzima
citotóxicas. Son producidas como zimógenos, desoxirribonucleasa (DNasa) para el
y se activan por acción de catepsinas C, tratamiento de los pacientes con fibrosis
también conocidas como dipeptidil peptidasa quística. Uno de los principales problemas
I, una proteasa. clínicos que se presentan en los nacientes con
la FQ es la producción de grandes volúmenes
Existen por lo menos 12 granzimas de moco sumamente viscoso en los pulmones
conocidas, cinco de éstas: A, B, H, K y M han y vías respiratorias. Esto induce falta
sido descritas en humanos, de ellas las respiratoria con bastante frecuencia y es la
granzimas A y B son las más estudiadas. causa más común de muerte en este tipo de
pacientes. El moco contiene bacterias que
provocan infecciones pulmonares crónicas y
ENZIMAS PLASMATICAS la DNasa ayuda a disminuir la viscosidad del
Las enzimas que se encuentran en el plasma moco.
se dividen en dos grupos principales:
Las enzimas tienen diversas aplicaciones en el
1. Enzimas plasmáticas específicas: El campo biomédico, por ejemplo como auxiliar
plasma es su sitio normal de actividad y de diagnóstico o pronóstico de enfermedades,
ubicación y aquí sus concentraciones son como tratamiento, como reactivo de
mayores que en los sitios de síntesis, por laboratorio, entre otros. Ello debido a que
ejemplo, hígado, proteínas de coagulación, tienen alta especificidad y eficacia catalítica,
seudocolinoesterasa etc. características muy apreciadas en su
2. Enzimas plasmáticas n o específicas: Se aplicación como agentes terapéuticos, o
caracterizan porque su función no ocurre diagnóstico. Sin embargo, requieren de un
en este líquido corporal. Se dividen en: alto grado de pureza, alta estabilidad a las
Enzimas de secreción. Provienen de condiciones de temperatura y pH fisiológicos,
glándulas exocrinas, como el así como una baja antigenicidad y
páncreas. accesibilidad al sitio corporal de destino
Enzimas del metabolismo
intermedio: Su concentración en Al analizar este tipo de aplicaciones, es
suero es muy elevada debido a un conveniente diferenciar entre aquellas
daño celular o necrosis, lo cual convencionales de administración oral o
propicia la fuga de una fracción de tópica, de aquellas sofisticadas en las cuales
estas enzimas hacia el plasma u otros se pretende utilizar la enzima para suplir una
líquidos corporales. deficiencia metabólica congénita, resolver un
trastorno funcional o atacar selectivamente
células malignas. Su uso clínico en pacientes
23
es muy reducido a la espera de recoger Dificultades de uso:: inestabilidad en
abundante información sobre los efectos las condiciones de uso, susceptibilidad a
colaterales en los animales de prueba, que la acción de proteasas, respuestas
permitan cumplir las estrictas normas de inmunológicas del paciente
seguridad exigidas. Alternativas: inmovilización de
enzimas a soportes sólidos o
El uso terapéutico no es reciente. Se confinamiento a fibras o cápsulas
comercializó antes de la primera guerra artificiales o biológicas
mundial: Takadiastasa, producido por la
fermentación en estado sólido de Aspergillus
oryzae (hongo) como ayuda digestivo. Las APLICACIONES EXTRACORPOREAS
convencionales son principalmente hidrolasas El torrente sanguíneo del paciente es derivado
de origen animal o vegetal (derivación arterio-venoso) hacia un circuito
externo a través de un reactor enzimático, en
En años recientes la aplicación terapéutica de el que se logra el efecto deseado. Este tipo de
las enzimas ha cobrado un nuevo impulso aplicación es adecuado para la remoción
como consecuencia de la posibilidad selectiva de metabolitos tóxicos y nutrientes
tecnológica de desarrollar sistemas de células malignas. Ejemplo: eliminación de
enzimáticos de aplicación extra o urea mediante ureasa inmovilizada (riñón
intracorporea. Aunque últimamente con el artificial enzimático), eliminación de
uso de la tecnología del DNArec se están asparagina mediante asparaginasa
obteniendo logros muy importantes, ya que se inmovilizada
puede clonar genes humanos productores de
enzimas en bacterias, principalmente E. coli.
Podemos destacar las siguientes: APLICACIONES INTRACORPOREAS
Es la que presenta mayores problemas dados
1. Tratamiento de deficiencias metabólicas el pH y temperatura desfavorables, y por
congénitas: catalasa, para el tratamiento respuesta inmunológica del paciente y acción
de acatalasemia; fenilalanina hidroxilasa de proteasas endógenas. Puede hacerse a nivel
y fenilalanina amoniaco liasa, para subcutaneo, intramuscular, gastrointestinal,
tratamiento de fenilcetonuria, Galactosa, intraperitoneal, intravenoso o intraarterial. Es
1- P uridil transferasa, para el tratamiento esencial la biocompatibilidad de los
de la galactosemia materiales empleados, a fin de evitar la aguda
2. Eliminación de metabolitos tóxicos por respuesta inmunológica
malfuncionamiento de órganos: ureasa y
uricasa, para eliminar urea y ácido úrico ENZIMAS COMO VALOR
por mal funcionamiento renal; UDP DIAGNOSTICO
glucoronil transferasa y bilirrubina Está comprobado que la medida de la
oxidasa para la remoción de bilirrubina en actividad de ciertas enzimas en el plasma
casos de ictericia derivados de tiene valor diagnóstico o pronóstico en varias
malfuncionamiento o inmadurez hepática; enfermedades. Se debe diferenciar las
anhidrasa carbónica y catalasa en enzimas intracelulares de las extracelulares, y
intercambio gaseoso de O2 y CO2 en de los que accidentalmente se han vertido al
respiradores artificiales medio extracelular, por alteración de las
3. Eliminación selectiva de nutrientes células que habitualmente los contienen. Debe
específicos de células malignas: conocerse también la estructura química y el
asparaginasa y glutaminasa en la comportamiento físico de las enzimas.
eliminación de L-asparagina y L-
glutamina en el tratamiento de leucemia; COMO REACTIVOS DE ANALISIS
carboxipeptidasa G1 y fenilalanina
amoniaco liasa en la eliminación de ácido Como auxiliares de análisis son mucho más
fólico; fenilalanina y tirosina en el control específicos que los reactivos químicos. Ejem.
del crecimiento de tumores. Para medir el nivel de glucemia y glucosuria,
se emplea glucosa oxidasa y peroxidasa.
24
Dado la importancia del dosaje de enzimas frecuencia, en corazón, hígado, músculo
como marcadores de órganos o tejidos y para esquelético y riñón. Cataliza la transferencia
el diagnóstico de enfermedades, se de un grupo amino de un aminoácido L-
describirán algunas de ellas en base a glutamato o L-aspartato a cetoácidos,
ejemplos concretos y muy frecuentes en la cetoglutarato y oxaloacetato. El fosfato de
vida cotidiana del médico. pirodoxal en forma de coenzima forma parte
del ciclo activo de la enzima.
25
Lipasa. Su sinónimo es: triacilglicerol el músculo esquelético; la fracción
acilhidrolasa. Se ha demostrado su presencia miocárdica de creatinfosfocinasa (CK-MB),
en el páncreas y posiblemente se encuentre en en el músculo cardiaco, y la fracción
el riñón. También la detección de la lipasa es encefálica e intestinal de creatinfosfocinasa
de gran utilidad diagnóstica en casos de (CK-BB), en cerebro e intestino, como sus
pancreatitis, comparada con la de amilasa. Al nombres lo indican.
igual que la amilasa, la concentración de la
lipasa se incrementa en la circulación de En las primeras 4 horas de dolor precordial, la
pacientes con insuficiencia renal. cuantificación de CK-MB es la prueba de
elección y se pueden tomar muestras de suero
Tripsina. Se detectan concentraciones altas cada dos o cuatro horas. Otra ventaja
de esta enzima en pancreatitis aguda y en adicional de medir la CK-MB es la de
50% de los casos de carcinoma pancreático, y detectar un reinfarto, ya que su actividad
las cifras están disminuidas en pancreatitis enzimática retorna a sus valores de referencia
crónica por insuficiencia exocrina. a las 36 horas.
26
Mioglobina y troponina. La mioglobina es que aumentan los valores de ALP son
una proteína intracelular que se encuentra en osteoporosis, raquitismo y osteomalacia por
grandes cantidades en el músculo cardiaco. Se deficiencia de vitamina D, y metástasis óseas
libera a la circulación sanguínea en las por enfermedades malignas de próstata,
primeras seis horas de dolor precordial. La pulmón o glándula mamaria.
troponina IT sólo se presentan en suero
cuando existe necrosis cardiaca; sin embargo, Marcadores prostáticos
la concentración de éstas permanece elevada La hipertrofia prostática benigna es una de las
de 3 a 14 días. Actualmente, la mioglobina y enfermedades más frecuentes en los varones
troponina se identifican por anticuerpos mayores de 50 años, lo cual hace necesario
monoclonales. La troponina (TN) es una contar con métodos para identificar
molécula esférica constituida por tres enfermedades prostáticas.
subunidades diferentes, las cuales se
denominan de acuerdo con su función: 1) TN- Fosfatasa ácida (ACP). Se distribuye en
T, que es la unidad que se une a próstata, eritrocitos, plaquetas, hígado, bazo,
tropomiosina; 2) TN-I, que es la unidad riñón y médula ósea. La ACP se usa para
inhibidora (TN-I); y 3) TN-C, que es la mediciones medicolegales del líquido seminal
unidad que se une al calcio. en la vagina después del coito. Los valores de
la actividad de ACP sérica siempre son
Marcadores musculares anormales en los estadios finales de
Creatinfosfocinasa. Diversas enzimas sirven carcinoma prostático metastásico.
para valorar afecciones musculares; la CK Isoenzimas de fosfatasa ácida. La isoenzima
sérica es más específica y sensible que la AST 2 separada por electroforesis también se
y la LDH, y más predictiva que la aldolasa. conoce como PAP y sólo se encuentra en la
Se observa un incremento de la actividad de circulación en el carcinoma prostático.
estas enzimas en la poliomielitis, las distrofias
musculares, las distrofias miotónicas y Enzima específica de la próstata (PSA). Su
algunos trastornos metabólicos. sinónimo es antígeno específico de próstata
Estas afecciones musculoesqueléticas causan circulante. Es una proteasa de la familia de las
un daño directo al músculo y, en calicreínas, con un peso molecular de 34 000
consecuencia, las enzimas pasan al suero. Da. Se produce por la próstata y se secreta al
Aldolasa. Pertenece a las liasas. Es una plasma seminal. La PSA se encuentra en
enzima importante en la vía de Embden- pequeñas cantidades en in dividuos normales
Meyerhof del metabolismo de la glucosa. Su y la actividad de ésta aumenta en la
principal función es romper el enlace hipertrofia prostática y en el adenocarcinoma
fructosa-1,6--bifosfato para formar fosfato de de próstata. Actualmente se identifica por
hidroxiacetona y gliceraldehído-3-fosfato. Se medio de anticuerpos monoclonales, tanto la
distribuye, en orden decreciente de fracción libre de PSA como la fracción de
frecuencia, en músculo esquelético, hígado y PSA ligada antiquimiotripsina. Los
cerebro. individuos con cáncer de próstata presentan
menos fracción libre de antígeno prostático y
Marcadores óseos éste se puede cuantificar mediante el método
En diferentes padecimientos óseos es de ensayo inmunoadsorbente enzimático
importante conocer las reacciones enzimáticas (ELISA). El límite superior normal de la
características para valorar la función de los actividad de PSA en suero es de hasta 6.5
osteoblastos y de los osteoclastos. ng/ml.
Fosfatasa alcalina (ALP). Se produce en Inhibición de enzimas en el tratamiento del
placenta, hígado, hueso y bazo, La actividad SIDA
primaria de la ALP refleja cambios en la
función ósea y hepática. Una estrategia clave en el tratamiento del
síndrome de inmunodeficiencia adquirida
Es probable que los incrementos de la (SIDA) ha sido el desarrollo de inhibidores
concentración de ALP se deban a una gran específicos que bloquean selectivamente la
actividad de los osteoblastos, como en la acción de enzimas exclusivas del virus de
enfermedad de Paget. Otras alteraciones óseas inmunodeficiencia humana (VIH), que causa
27
el SIDA. Muchos laboratorios están
explorando este enfoque de desarrollo de
agentes terapéuticos.
28
PROBLEMAS DE ESTUDIO 7. La acción catalítica de una enzima sucede
1. Defina los siguientes términos con 25 con el sustrato unido en el sitio activo.
palabras o menos. ¿Cómo puede alterarse la actividad
catalítica del sitio activo, por la unión de
a. Vitamina i. Isoenzimas otro tipo de compuesto en un punto
distante de dicho sitio activo?
b. Niacina j. Modificación
8. ¿Cuáles de los siguientes enunciados son
c. Coenzima covalente ciertos para las isoenzimas?
a. Catalizan las mismas reacciones
d. Grupo prostético k. Zimógeno químicas.
e. Micronutriente l. Mutagénesis de lugar
b. Tienen la misma estructura cuaternaria.
c. Se distribuyen por igual en los órganos
f. Efector negativo dirigida y tejidos.
d. Tienen el mismo nombre y número de
g. Sitio regulador m. Anticuerpos clasificación enzimática.
h. Cooperatividad catalíticos 9. ¿Cuál es el papel del componente de
RNA en el sistema de la enzima
n. Ribozima ribonucleasa?
10. ¿Qué diferencias existen entre los
o. [S]0.5
términos coenzima y grupo prostético?
11. Abajo se muestra la ruta de la síntesis de
colesterol en los animales. Sólo se
muestran algunos de los numerosos
2. ¿Por qué es lógico que el primer paso de intermediarios y enzimas. Utilizando los
una serie de reacciones metabólicas sea el principios de la regulación enzimática,
principal paso de regulación? responda: ¿Cuál reacción es el paso
determinante de la velocidad de esta ruta?
3. Explique ¿Por qué razón la ruptura ¿Esperaría que la enzima fuera reguladora
proteolítica no se considera como una en ese punto?
forma de modificación covalente? 1 2
HMGCoA mevalonato intermedarios de isopreno
4. ¿Por qué las enzimas proteolíticas
producidas en el páncreas y estómago 3
Escualeno
4
Lanosterol
5
Colesterol
deben ser sintetizadas en forma inactiva?
12. Relacione cada una de las vitaminas
5. Un individuo que tenía el dolor en el incluidas en la primera columna de la
pecho, fue a la sala de emergencias del tabla con su coenzima respectiva que se
hospital de la zona para que le dieran encuentra en la lista de la segunda
tratamiento. El análisis de la sangre del columna.
paciente mostró niveles elevados de la
enzima lactato deshidrogenasa (LDH) con Vitamina Coenzima relacionada
predominancia de la isoenzima H4. Riboflavina (vitamina Fosfato de piridoxal
Sugiera una posible causa que explique
los niveles elevados de LDH. Explique B2) NAD+
los posibles procesos bioquímicos que
sustentan el diagnóstico que usted Vitamina B6 FAD
propone. Niacina Coenzima A
29
BIOENERGETICA
Rutas catabólicas: liberan energía
GENERALIDADES almacenada en moléculas complejas, a través
Las células y seres vivos en general requieren de la ruptura o degradación de estas
de energía para efectuar trabajo para vivir, moléculas en sus componentes más simples.
crecer, y reproducirse. Para ellos tienen la
capacidad de captar energía de diversas Rutas anabólicas: requieren energía para
fuentes y canalizarlo para desarrollar trabajo, unir moléculas simples y sintetizar
constituyéndose en una de las propiedades macromoléculas ordenadas estructural y
fundamentales de los seres vivos, en todos los fisiológicamente. El acoplamiento de las rutas
niveles de la escala evolutiva. Los organismos catabólicas y anabólicas es la energía
llevan a cabo una serie de transducciones
energéticas, conversiones de una forma a otra Para qué se usa la energía en las células
de energía, usando para ello la energía vivientes
química como combustible para la síntesis de 1. Biosíntesis de proteínas y ácidos nucleicos
moléculas complejas (macromoléculas) a 2. Fosforilación de proteínas catalizada por
partir de moléculas simples. cinasas, para provocar cambios de
conformación
Esta serie de reacciones que se producen en 3. Superenrrollamiento del DNA
los seres vivos la denominamos 4. Conversión de azúcares simples en
metabolismo. En el metabolismo se fosfatos de azúcar y NDP-azúcares, y de
involucran miles de coordinadas, complejas, ácidos grasos en tioésteres
eficientes e integradas reacciones químicas, 5. Funcionamiento de los sistemas de
ordenadas en las llamadas vías metabólicas, - transporte activo
secuenciadas e intricadas rutas- controladas
por enzimas. Todos los seres vivos estamos constituidos
por miles de compuestos orgánicos diferentes,
De manera general al metabolismo (Fig. 1.25) que abarcan desde moléculas relativamente
se le divide en anabolismo y catabolismo.
METABOLISMO CELULAR
RESPIRACION SINTESIS
G CO2 + H2O Monómeros Macromoléculas
Reacciones Reacciones anabólicas
Catabólicas
ENTALPIA ENTALPIA
-ΔH + Δ H
-ΔG EXOTERMICA ENDOTERMICA + ΔG
ENTROPIA ENTROPIA
+ Δ S -Δ S
EXERGONICA ENDERGONICA
ATP
30
y calcular el cambio, que se acostumbra
simples como monosacáridos, aminoácidos, simbolizar con la letra griega delta mayúscula
ácidos grasos, vitaminas y otros, hasta ( ).
macromoléculas muy complejas como Si presión y temperatura son constantes, los
polisacáridos, proteínas, ácidos nucleicos. cambios de energía se relacionan únicamente
Estos a su vez pueden organizarse en con composición del sistema. Existen varios
agregados macromoleculares extremadamente tipos de sistemas: se define como sistema
complejos como los ribosomas, complejos aislado aquel que no intercambia materia y
multienzimáticos, nucleosomas y muchos energía con su medio. Sistema cerrado es
otros. Todas estas moléculas tienen en aquel que intercambia energía pero no
particular el de estar constituidas por los materia, y se denomina sistema abierto al que
mismos elementos que conforman la materia intercambia materia y energía con su entorno.
inerte, y al igual que ellos están regidos por Los sistemas biológicos se presentan como
los mismos principios y leyes de la física y la sistemas abiertos, isotérmicos (igual
química, como las de la termodinámica. temperatura) e isobáricos (igual presión). Un
sistema biológico puede ser una célula, un
Lo anterior se basa en que todo organismo organismo, una colonia o hasta el mundo
puede ser considerado como un sistema entero.
fisicoquímico, entendiéndolo como parte del
universo con la cual nos relacionamos. En el El comportamiento de un sistema, biológico o
caso de los seres vivos somos un sistema inorgánico, se rige por leyes o principios
abierto puesto que hay intercambio de materia establecidos por una rama de la fisicoquímica
(nutrientes, productos finales o de excreción) que estudia los fenómenos energéticos de los
y energía (calor) con nuestro entorno. Estas sistemas, la termodinámica. La aplicación de
interrelaciones son estudiadas por la las leyes de la termodinámica a los seres
Termodinámica, y de manera particular para vivos resulta de extraordinaria utilidad si se
los seres vivos están involucradas la 1ra y 2da considera que los procesos bioquímicos son
Ley. reacciones químicas que deben ajustarse en
todo a las leyes que rigen el comportamiento
Conceptos Termodinámicos de los procesos termodinámicos.
Un sistema posee un contenido energético que
comprende un sinnúmero de formas de La primera ley de la termodinámica establece
energía y a la suma de todas se conoce como que la energía total de un sistema, más la de
energía interna (E) del sistema. En física se su entorno permanece constante. A esta ley se
dice que energía es todo aquel capaz be le conoce también como ―Ley de la
producir trabajo. Sin embargo, de todo ese conservación de la energía‖, que significa
contenido energético de un sistema, sólo una que: la energía no se crea ni se destruye,
porción está disponible para realizar trabajo y sólo se transforma. Sin embargo, dentro de
es la energía útil a esa porción de a energía ese sistema total, la energía puede
total se le conoce como energía libre (F o G) transformarse de una a otra forma; por
o de Gibbs. Un sistema es un conjunto de ejemplo, la energía eléctrica puede
cuerpos que contienen materia y energía, transformarse en energía térmica, energía
cuyo estado se define en términos de presión, radiante o energía mecánica.
temperatura y composición. El contenido total
de energía de un sistema antes de que ocurra La forma de energía más usual es el calor (Q);
un proceso se designa como estado inicial. y puede afirmarse que casi todos los eventos
el contenido de energía del sistema después físicos o químicos que ocurren en a
de ocurrido el proceso que interesa estudiar se naturaleza, absorben o desprenden calor al
conoce cono estado final. efectuarse, es decir, son procesos exotérmicos
o endotérmicos.
Medir los cambios de energía que ocurren
durante un determinado proceso puede Imaginemos un sistema aislado, al cual se le
resultar difícil, pero resulta más fácil y administra una determinada cantidad de calor
preciso determinar el contenido energético del (Q), lo cual puede provocar un cambio en la
sistema en el estado inicial y en el estado final
31
energía interna del sistema ( E) o un trabajo cuanto más ordenado y estructurado es un
que realiza el sistema. sistema, más pequeña será su entropía.
32
debe ser exergónico. El conjunto de procesos - El intercambio de materia y energía
exergónicos (catabólicos) y endergónicos dentro del propio organismo y con su
(anabólicos) constituye lo que se conoce entorno
como metabolismo. - La transmisión de información
Un ejemplo clásico de acoplamiento genética, tanto de unos a otros
energético es la fosforilación de la glucosa: compartimentos de la propia célula, y
de una célula a su progenie
Glucosa + H3PO4 Glucosa-6-fosfato + H2O
F = +3.2 Kcal/Vmol El intercambio de materia y energía se inicia
con el aporte de material exógeno, es decir la
La reacción no es viable termodinámicamente ingesta de alimentos, las mismas deben ser
en la dirección propuesta. Sin embargo, digeridas hasta sus monómeros, absorberse e
acoplada a la hidrólisis de ATP: incorporarse a las diversas células. Estos
monómeros pueden seguir la vía de la
ATP + H2O ADP + Pi F° = -7.3 Kcal/mol degradación oxidativa o catabolismo (Fig.
1.27) hasta CO2, agua, amoniaco –que se
La hidrólisis del ATP confiere a la reacción convierte a urea-, con producción de energía
global un cambio exergónico que le permite (ATP, calor) o la biosíntesis de nuevo
transcurrir en la dirección propuesta: material celular o anabolismo (Fig. 1.28) para
almacenamiento o reposición de moléculas
Glucosa + H3PO4 Glucosa-6-P + H2O F°=+3.2 kcal/mol usadas, para ello consumen energía en forma
ATP + H2O ADP + H3PO4 F°=-7.3 Kcal/mol de ATP, lo cual explica la eficiente
∑ : Glucosa + ATP Glucosa-6-P+ADP F°= -4.1 Kcal/mol
conservación y utilización de la energía
En los sistemas biológicos, muchas química metabólica y el flujo adecuado de
reacciones exergónicas-endergónicas están intermediarios metabólicos a través de las
acopladas de esta manera, es decir, con un diversas rutas bioquímicas; es decir se cumple
intermediario común obligado. El principal el principio de acoplamiento que establece
compuesto intermediario o portador de alta que una reacción favorable desde el punto de
energía en la célula viva es el ATP (Fig. vista energético está ligada a la formación de
1.26). producto (s) que de otra forma sería
desfavorable.
33
forma un espacio intermembranoso, o
también cámara externa, mientras que por
debajo de la membrana interna ubicamos a la
cámara interna llena de un material
denominado matriz mitocondrial.
34
los músculos. Sus mutaciones son muy primeros casos, el carbono y el hidrógeno de
frecuentes debido entre otros factores a que los combustibles se combinarán con el
las mitocondrias no han evolucionado oxígeno del aire para formar CO2 y H2O y
suficientes mecanismos de reparación de su desprender energía calórica. En el último
ADN. Estas mutaciones desfavorables causan ejemplo, el hierro al combinarse con el
muchos problemas en la que se incluyen la oxígeno formará óxido de hierro. El factor
encefalomiopatías, distrofias y otros, con común a estos dos procesos oxidativos es la
gravedad proporcional a la edad del participación de oxigeno.
organismo. El ADN mitocondrial está
constituido por dos hebras circulares: H En la célula, la oxidación de la glucosa hasta
(heavy) y L (light) y todo lo que afecte la CO2 y H2O con liberación de energía se
producción de energía tiene consecuencias realiza en etapas, algunas de las cuales
negativas sobre la vida de la célula, de transcurren sin la participación de oxígeno.
manera particular se ha demostrado que las Por ejemplo, la transformación del lactato en
mitocondrias tienen una función directriz en piruvato:
la apoptosis celular.
35
una se oxida y la otra se reduce; a la reacción Acetaldehido + 2H+/etanol 2 -0.197
global, se llama reacción de oxidorreducción.
FAD+2H+/FADH2 2 -0.219
Potencial de Oxidorreducción NAD+ + 2H+/NADH + H+ 2 -0.320
La facilidad con la que un donador de
electrones (agente reductor) cede sus NAD+ + 2H+/NADPH + H+ 2 -0.320
electrones a un aceptor electrónico (agente
oxidante) se expresa como potencial de 2H+/H2 2 -0.421
oxidorreducción (potencial redox) del Ferrodoxina Fe+3/Fe+2 1 -0.430
sistema. El potencial redox de un par de
oxidorreducción se determina (en voltios) Acetato + 2H+/acetaldehido 2 -0.60
comparándolo con una hemipila patrón de
Cetoglutarato + 2H+/succinato + 2 -0.70
referencia.
CO2 2 -0.70
El potencial del electrodo de referencia se
sitúa por convención en 0.0V a un pH de 0.0, Piruvato +2H+/acetato + CO2
a concentración 1M y 25°C; sin embargo,
cuando se corrige este potencial para un pH
de 7.0, el potencial de referencia es -0.42V.
Este potencial se conoce como potencial Número de Oxidación
redox estándar (E°).
En las reacciones de oxidorreducción se
En la Tabla 1.5, se indican los potenciales maneja a menudo el concepto de número de
redox estándar de interés especial en oxidación que se defina como el número de
bioquímica. Esta lista permite predecir la electrones que se transfieren en una reacción
dirección del flujo de electrones de un par de oxidorreducción.
redox a otro. Los electrones fluirán de la
reacción E fuertemente negativa a la reacción Respiración celular
con E° más positivo.
Lo que se entiende por respiración, antes de
Tabla 1.5. Potenciales redox estándar de conocer las bases bioquímicas de los procesos
diversas reacciones bioquímicas oxidativos, se refiere realmente al transporte
de oxígeno desde el ambiente a la célula y,
Sistema n E° voltios dentro de ésta, a la mitocondria. Es aquí
donde se realiza la verdadera respiración o
½ O2 + 2 H+ /H2O 2 +0.82 respiración celular. El proceso consiste en la
transferencia de sustratos reducidos que
Citocromo a Fe+3/Fe+2 1 +0.29 cederán, primero sus hidrógenos, y luego los
electrones hasta el oxígeno como aceptor
Citocromo c Fe+3/Fe+2 1 +0.25
final.
Citocrorno c1 Fe+3/Fe+2 1 +0.22
36
fosforilación oxidativa responsable de la cabo la oxidación del piruvato y de todos los
producción de ATP en el organismo. intermediarios del ciclo de Krebs con gasto de
O2, por lo que se generalizó que contenían
El ciclo del ácido cítrico, es considerado el todas las enzimas necesarias para catalizar las
núcleo del metabolismo, puesto que actúa reacciones del ciclo y del transporte
como vía central que integra el flujo energético. La mayor parte de las enzimas que
metabólico del carbono entre las diversas participan en el ciclo de Krebs se encuentran
biomoléculas, estableciéndose procesos en la matriz mitocondrial, excepto succinato
catabólicos y anabólicos, como la deshidrogenasa que está adherida a la
gluconeogénesis, lipogénesis, transaminación, membrana interna. En algunos tejidos, en el
desaminación, es decir es un proceso citosol, se encuentran la aconitasa (hidrolasa),
anfibólico. Estas reacciones se llevan a cabo isocitrato deshidrogenasa (NADP+
en casi todos los tejidos, pero es el tejido dependiente), la fumarasa y la malato
hepático el único donde ocurren todas deshidrogenasa.
37
Dentro de las mitocondrias, las enzimas se
localizan en la membrana interna y en la
matriz mitocondrial, y próximas a las de la
cadena respiratoria. Esta proximidad facilita
el adecuado acoplamiento de ambos procesos.
38
de oxalacetato. Para que la acetil-CoA para formar grasa, mientras que los
convierta en CO2, su radical acetato, el ciclo aminoácidos que llegan pueden abandonarlo
ha de dar dos vueltas, para formar carbohidratos. Sólo una vía
parece cerrada; la que conduce de grasas a
El ciclo continúa por acción de la succinato carbohidratos. En la figura muestran las
tiocinasa (o succinil-CoA sintetasa, por la interconversiones más comunes de los
reacción en sentido inverso) que convierte la intermediarios del ciclo.
succinil CoA en succinato con la transferencia
del enlace de alta energía a la fosforilación de
GDP que pasa a GTP (o de IDP que pasa a
ITP). Ambos nucleótidos pueden ser
utilizados para la formación de ATP por
acción de un nucleósido difosfato cinasa o
fosfocinasa. Este as el único sitio del ciclo en
que se genera ATP a nivel del sustrato. Una
reacción alternativa en tejidos extrahepáticos
es a conversión de succinil-CoA en succinato
catalizada por la succinil CoA transferasa (o
tioforasa) acoplada a la conversión de
acetoacetato en acetoacetil-CoA. Esta es una
reacción que permite la incorporación de
cuerpos cetónicos al ciclo de Krebs.
Fig. 1.34. Papel anfibólico del ciclo de Krebs.
Por acción de la succinato deshidrogenasa, el
succinato es deshidrogenado a fumarato, pero En la figura puede observarse cómo se
esta enzima utiliza FAD+ como grupo sintetizan ácidos grasos a partir de citrato que
prostático, el cual en estado reducido sale de la mitocondria, así como la síntesis del
(FADH2) constituye una fuente directa de grupo hemo proveniente de succinil-CoA. El
electrones para la cadena respiratoria a nivel oxalacetato es el intermediario que mayor
de la coenzima Q. Esta es la única enzima del demanda muestra para mantener el ciclo.
ciclo integrada a la membrana mitocondrial Aunque en realidad con sólo una pequeña
interna, directamente ligada a la cadena cantidad de oxalacetato se forman grandes
respiratoria. Se reúnen así, anatómica y cantidades de citrato para el ciclo, por lo que
fisiológicamente, el ciclo de Krebs, el se considera que desempeña un papel
transporte de electrones y la fosforilación catalítico, la verdad es que si se incrementan
oxidativa. las demandas de oxalacetato para formar otros
compuestos como el aminoácido aspartato, o
El fumarato presenta luego una serie de bien fosfoenolpiruvato para la gluconeo-
cambios para regenerar el oxalacetato que génesis, entonces se requerirán vías
comprende una hidratación catalizada por la metabólicas que aseguren la disponibilidad de
fumarasa (fumarato hidratasa) para formar L- oxalacetato para mantener el flujo de
malato, el cual luego se oxida a oxalacetato metabolitos del ciclo. A esas reacciones
por medio de la deshidrogenasa málica y el auxiliares se les denomina anapleróticas, y
NAD+ como coenzima. son las catalizadas por piruvato carboxilasa y
por la enzima málica (Fig. 1.35)
39
de metabolitos del ciclo en aminoácidos para
biosíntesis de proteínas
Fig. 1.35. Vías anapleróticas y formación de ácido Fig. 1.37. Rutas de entrada de los aminoácidos en el
gama-aminobutírico (GABA) en el ciclo de Krebs. ciclo de Krebs. Reproducida con autorización de J.M.
Orten y O. W Neuhaus, Human Biochemistry, 10ª
La otra reacción anaplerótica es catalizada por edición, C.V. Mosby. Co., St. Louis, 1982, p. 344.
una deshidrogenasa dependiente de NADP+,
llamada enzima málica. Esta enzima produce Desaminación oxidativa y formación de
la carboxilación y reducción del piruvato, GABA
transformándolo en malato (Fig. 1.36)
En condiciones normales, existe en las
neuronas inhibidoras del cerebro una vía
colateral del ciclo de Krebs en la que se forma
un neurotransmisor inhibidor derivado de un
intermediario del ciclo; se trata del ácido -
aminobutírico (GABA) formado por
desaminación oxidativa del ácido glutámico,
proveniente a su vez del -cetoglutarato por
Fig. 1.36. Enzima málica transaminación.
40
triglicéridos. Por otro lado, del ciclo salen
intermediados al citosol que permiten la
síntesis de ácidos grasos, la cual es
extramitocondrial. En virtud de que la síntesis
de grasas es extra. mitocondrial, necesitan
transportarse al citosol indirectamente los
precursores (acetil-CoA), ya que la membrana
mitocondrial es impermeable a derivados de
CoA. El citrato formado intramito-
condrialmente sale al citosol donde es
transformado en oxalacelato y acetil-CoA por
acción de la ATP-citrato liasa
extramitocondrial (Fig. 1.38):
La acetil-CoA es la precursora de la
biosíntesis extramitocondrial de los ácidos
grasos
41
Deshidrogenasas membrana interna de la mitocondria y puede
actuar como un portador móvil de electrones.
Se puede considerar el descubrimiento de las La ubiquinona acepta hidrógenos y se reduce
deshidrogenasas realizado por Thunberg a a dihidroquinona (CoQH2). En la siguiente
principios de siglo, como el inicio de lo que etapa al reoxidarse cede dos electrones al
hoy se conoce como cadena respiratoria. sistema de citocromos y quedan dos protones
Thunberg descubre la acción de enzimas libres en el medio.
deshidrogenasas capaces de catalizar la
oxidación de ciertos sustratos en ausencia Los equivalentes de reducción (hidrógeno) se
absoluta de oxigeno, utilizando azul de extraen de los sustratos en el ciclo de Kebs, -
metileno como aceptor de hidrógeno, el cual oxidación de ácidos grasos o indirectamente
al reducirse se decolora transformándose en de la glucólisis y se dirigen secuencialmente,
leucobase. Las deshidrogenasas pertenecen al de acuerdo con su potencial redox, a los
grupo de enzimas llamadas oxidorreductasas. diferentes eslabones de la cadena respiratoria.
42
enzima por cianuro, Warburg la denomina Ultimo aceptor de electrones: oxígeno
―antirespiratoria‖.
El oxígeno es uno de los elementos de mayor
Los citocromos con Fe de las hemoproteínas electronegatividad en la tabla periódica. Esto
que contienen hierro, a diferencia del grupo significa que es el elemento más ávido de
hemo de la hemoglobina en la que el hierro electrones, y en la cadena transportadora de
del hemo permanece en estado ferroso (Fe++), electrones mitocondrial determina el flujo
el hierro del grupo hemo de los citocromos electrónico. Finalmente llegan al oxígeno dos
está alternadamente oxidado (Fe3+) o reducido electrones que completarán su orbital con
(Fe2+) en la transferencia de electrones hacia ocho, pero lo dejan con carga eléctrica
el aceptor más ávido de ellos, el oxígeno. negativa.
½ O2 + 2e- ½ O2
Los citocromos de las mitocondrias se
designaron como a, b y c, tomando como base
la banda a de su espectro de absorción y al Los dos protones (hidrogeniones, H+)
tipo de grupo hemo. producidos al ceder a CoQH2 los dos
electrones de cada hidrógeno al cit b, son
Transporte de electrones captados por el oxígeno iónico (½ O 2 ) y
forma una molécula de agua:
En las reacciones de transferencia del NADH
a la coenzima Q se transportan dos ½ O 2 2 + 2H+ H2O
hidrógenos (dos protones y dos electrones).
Al llegar a la CoQH2, se continúan La importancia que tiene el oxigeno como
transportando dos electrones por los agente que determina el flujo de electrones y
citocromos, pero un par de protones (H+) se con ello la liberación de energía para formar
liberan al espacio intermembrananoso, el cual ATP, se demuestra cuando un tejido sufre la
se acidifica. falta de oxígeno (hipoxia tisular) como en el
El transporte de electrones, se inicia al ser infarto de miocardio, o cuando un tejido
captados por el citocromo b; el hierro del como el músculo esquelético demanda
grupo hemo oxidado (Fe3+), al aceptar un mayores cantidades de oxígeno durante el
electrón (e-) se transforma en hierro reducido ejercicio intenso.
(Fe2+).
El O 2 (radical superóxido) es un producto
Nivel de energía de las reacciones aberrante de la cadena respiratoria. El 5% del
O2 se transforma en O 2 , porcentaje que
Durante la transferencia de hidrógenos y aumenta con la edad.
electrones desde el par NADH/NAD+ a la
molécula de oxigeno se produce un descenso
de potencial redox de 1.14V que, de acuerdo Superóxido
con la ecuación de Nerst, produce un cambio 2 O 2 + 2H+ dismutasa H2O2 + O2
de energía libre de 52.6 Kcal por mol. Esta
caída de potencial tiene lugar en etapas a La enzima superóxido dismutasa, que
medida que los hidrógenos o electrones pasan transforma el radical superóxido en H2O2, se
por los distintos eslabones de la cadena. encuentra en las mitocondrias de todas las
células aerobias. La catalasa, que degrada
En todas las reacciones de la cadena se posteriormente el peróxido de hidrógeno
produce liberación de energía, pero sólo en (H2O2) en H2O y ½ O2, constituye 40% de las
tres de ellas existe un sistema fosforilante proteínas de los peroxisomas.
acoplado que permite la síntesis de ATP; el
resto de la energía liberada en las otras Los niños pretérmino o prematuros no tienen
reacciones se pierde en forma de calor aún desarrolladas las superóxido dismutasas
(energía no útil) que, sin embargo, mantiene (metaloenzimas que contienen Se) y cuando
la temperatura corporal de los organismos son tratados con concentraciones
homeotérmicos (mamíferos) en forma casi excesivamente altas de oxígeno puro (que
constante (36.5°C).
43
Lipmann introdujo el concepto de enlace de
produce O 2 ) pueden presentar una retinopatía
alta energía ( ) y de enlace fosfato de alta
bilateral, caracterizado por dilatación,
energía ( P) y con ello se apreció con
proliferación y tortuosidad vasculares, edema
claridad el papel de estos compuestos en
y desprendimiento de retina, microftalmia y
bioenergética. De hecho, la conservación y
en ocasiones ceguera.
transferencia de la energía celular se lleva a
cabo gracias a la transferencia de grupos
Oxidación extramitocondrial
fosfatos. Los compuestos más ricos en
energía ceden su energía al ADP y lo
Existe otro tipo de transporte electrónico que
transforman en ATP, el cual a su vez la
se encuentra en el sistema retículo
distribuye donde la requieren las necesidades
endoplásmico o en la fracción microsomal del
celulares. Por consiguiente, el ATP es la
hígado, si como en tejido esteroidogénico
figura central en el sistema de transferencia
como la corteza suprarrenal, testículo, ovario
de energía en la célula, y con toda razón se le
y placenta.
considera ―la moneda energética celular‖.
Este sistema de transporte electrónico utiliza
Esto se ilustra en la Tabla 1.6, donde el ATP
NADPH+ como fuente de equivalentes de
ocupa una posición intermedia entre los
reducción y un citocromo exclusivo de este
fosfatos y otros compuestos con alta energía y
sistema que no se encuentra en la
los fosfatos de baja energía.
mitocondria, el citocromo P450, llamado así
porque la forma reducida tiene una banda de Tabla 1.6. Energía libre estándar de hidrólisis de
absorción a 450 nm, y es útil por ejemplo en algunos compuestos ricos en energía
la oxidación extramitocondrial de - F° - F°
medicamentos Compuesto
(Kcal/mol) (KJ/mol)
Medicamento-H + O2 + cit P450 Fe++ + NADPH
Fosfoenolpiravato 14.8 61.9
44
conocer la disposición espacial de los
A NIVEL DE SUSTRATO componentes de la cadena (Fig. 1.41)
Intermediarios ricos en energía de la ruta
glucolítica como el 1,3-difosfoglicerato (1,3-
DPG) y el fosfoenolpiruvato (PEP) pueden
transferir su fosfato de alta energía al ADP en
reacciones catalizadas por la
fosfogliceratocinasa y piruvatocinasa,
respectivamente. Los F° de estas dos
reacciones son -11.8 y -14.8 Kcal/mol,
respectivamente, y. por tanto, la transferencia
del fosfato es termodinámicamente posible y
da como resultado la síntesis de ATP.
45
fosforilantes‖, esferas o partículas de las cargas positivas y negativas en los
mitocondriales. Se ha establecido que estas diferentes compartimientos, se puede
partículas están relacionadas con los sitios de establecer un gradiente electroquímico de
fosforilación (Fig. 1.42) protones a través de la membrana
mitocondrial interna durante el transporte
electrónico.
46
La hipótesis ha recibido gran apoyo membrana mitocondrial que actúa como canal
experimental: protónico. Entre ambas porciones y la
1. La adición de protones (ácido) al medio membrana se encuentra un factor (F que
externo de las mitocondrias conduce a la recibe el nombre de OSCP (―oligomycin-
generación de ATP. sensitivity- confering- protein‖),
2. La cadena respiratoria contiene sus imprescindible para la acción de la
componentes organizados lateralmente oligomicina, y que es un verdadero
(asimetría transversal) como los requiere la ―cancerbero protónico‖, puesto que de éste
teoría. depende el transporte de protones (Fig. 1.43).
3. El cociente fósforo/hidrogenión de la
ATPasa (ATP sintetasa más propiamente)
es 1:2, y los cocientes hidrógeno/oxigeno
para la oxidación del succinato y del -
hídroxibutirato son 4 y 6, respectivamente,
en concordancia con las proporciones
fósforo/oxigeno esperadas de 2 y 3.
47
Los radicales hidroxilo son mucho más Dada la toxicidad del peróxido de hidrógeno
reactivos que el peróxido de hidrógeno y el y de los radicales superóxido e hidroxilo, el
anión superóxido y, por lo tanto, son más organismo dispone de mecanismos eficaces
tóxicos. Se cree que la toxicidad de O2 y el de protección. En condiciones normales, a las
H2O2 se debe a su capacidad de generar tensiones de O2 del aire atmosférico, las
radicales hidroxilo. concentraciones de estos agentes tóxicos se
mantienen en niveles muy bajos. Los
Los efectos nocivos de estos radicales se principales medios de defensa son:
ejercen sobre diferentes componentes de las a) Los aniones superóxido son eliminados
células, como ADN, proteínas, lípidos y en una reacción catalizada por una
diversas enzimas: enzima extraordinariamente activa,
Producen ruptura de ADN y distribuida en todos los tejidos, la
modificaciones químicas de sus bases superóxido dismutasa. En la reacción
nitrogenadas participan dos aniones superóxido y dos
Oxidan grupos sulfhidrilos de protones:
proteínas (se forman enlaces –S-S),
alterando la estructura de la molécula O2- + O2- + 2H+ H2O2 + O2
Atacan ácidos grasos insaturados de
lípidos componentes de membranas La cesión de un electrón de un anión
(formación de peróxidos). superóxido a otro corresponde a las
llamadas reacciones de disimulación. Se
Todo esto causa, además de cambios forma peróxido de hidrógeno, que
conformacionales, disminución de la también es un producto tóxico y debe ser
hidrofobicidad de las cadenas hidrocar- eliminado.
bonadas y desestabiliza las membranas
celulares. Por otra parte, los hidroperóxidos La superóxido dismutasa presenta dos
formados actúan como inhibidores de ciertas isozimas; una de ellas contiene Zn y Cu y
enzimas. se encuentra en citosol; la otra Mn y se
localiza en mitocondrias del hígado.
El pulmón y el cerebro son particularmente b) La descomposición del peróxido de
sensibles a estos agentes oxidantes. Respirar hidrógeno es catalizada por la catalasa,
concentraciones elevadas de oxígeno durante hemoproteína existente en casi todas las
un tiempo prolongado favorece la formación células, particularmente en el hígado,
de H2O2, O2 y OH- y causa alteraciones a riñón, médula y glóbulos rojos. Tiene
veces muy graves en el sistema nervioso y el gran actividad y cataliza la reacción.
pulmón.
2H2O2 2H2O + O2
La acción bactericida de los fagotitos
(leucocitos, neutrófilos, eosinófilos, La catalasa se encuentra en los
monocitos y macrófagos) es en parte peroxisomas, pequeñas organelas que,
dependiente de la producción de anión además de catalasa, contienen oxidasas
superóxido y peróxido de hidrógeno en las productoras de peróxido de hidrógeno.
vacuolas fagocíticas. Distintos gérmenes y Se han descrito casos de personas con
otros agentes extraños pueden desencadenar muy baja actividad de catalasa en sus
una respuesta inflamatoria en el organismo tejidos; se trata de un defecto genético
atacado, que moviliza fagotitos hacia el lugar llamado acatalasemia. Curiosamente, esta
de la injuria. A veces, la exagerada deficiencia no produce trastornos
producción de radicales libres en el lugar de importantes. Es probable que otras
la inflamación puede afectar células del enzimas compensen la falta de catalasa.
propio individuo. En procesos inflamatorios, c) Existe una enzima. Llamada glutatión
algunos de causa autoinmune, los radicales peroxidasa, que cataliza la reducción de
libres son la causa de daño tisular. Estos hidroperóxidos orgánicos y de peróxido
agentes también han sido implicados como de hidrógeno en reacciones en las que
factor de envejecimiento. participa el glutatión (GSH):
48
de Sen la lista y c aceptor de energía
ROOH + 2GSH GSSG + ROH + H2O proveniente de los que están por encima. Así,
H2O2 + 2GSH GSSG + 2H2O un ciclo ATP/ADP conecta estos procesos
que generan a las reacciones que la utilizan
La glutatión peroxidasa está localizada en (Fig. 1.44).
el citosol y las mitocondrias, pero no en
los peroxisomas. Esta enzima ayuda a
mantener muy baja la concentración de
peróxido de hidrógeno en los tejidos:
convierte ácidos grasos peróxidos en
derivados hidroxilados y también puede
revertir la oxidación de grupos
sulfhidrilos.
El glutatión oxidado es reducido por
acción de la glutatión reductasa, enzima
que utiliza NADPH como dador de
equivalentes de reducción:
Utilización de ATP
49
El monóxido de carbono (CO) e un gas
incoloro e inodoro, con gran afinidad por la
hemoglobina (200-300 veces más que el
oxígeno) y por el cit a3. Los efectos serios se
presentan a dosis bajas de monóxido (0.02% a
0.03%) cuando 40% de la hemoglobina se ha
Fig. 1.45. Sitios de inhibición en la cadena transformado en carboxihemoglobina (CO-
respiratoria Hb). Este gas se produce en la combustión
incompleta de los hidrocarburos como en la
Otro grupo de compuestos llamados inspiración del escape de un vehículo de
desacoplantes o desacopladores impiden la gasolina o un calentador de leña o carbón en
síntesis de ATP pero permiten el flujo de espacios cerrados. Los síntomas de
electrones por la cadena respiratoria. En intoxicación incluyen alteraciones visuales,
efecto, existen sustancias naturales, tales cefalea, taquicardia, taquipnea y finalmente
como el dicumarol y las hormonas tiroideas, y coma y muerte. La piel muestra coloración
algunos sintéticos como el dinitrofenol (DNP) rojo cereza, sobra todo en los labios por CO-
capaces de desacoplar (―desconectar‖) la Hb.
respiración de la fosforilación. La adición de
estas sustancias a una suspensión
mitocondrial provoca un marcado aumento REGULACIÓN DE LA RESPIRACION
del consumo de oxígeno, sin que exista CELULAR
síntesis de ATP.
La proximidad intracelular física y funcional
El efecto desacoplante de la tiroxina ha del ciclo del ácido cítrico y la cadena
permitido explicar, por un lado, el efecto de respiratoria determinan que la actividad de
esta hormona sobre el metabolismo basal en uno dependa de la otra y viceversa, A su vez,
el hipertiroidismo y, por otro, su uso, al igual ambas vías metabólicas están reguladas por
que el dinitrofenol, en el tratamiento de la las concentraciones relativas de ATP/ADP y
obesidad. NADH/NAD+.
El antibiótico oligomicina bloquea El rendimiento del ciclo corresponde al
completamente la oxidación y la fosforilación número de equivalentes reducidos y al ATP
en mitocondrias intactas. Actúa uniéndose al formado:
tallo de la ATPasa, lo que provoca el cierre
del canal y por ende, el flujo de protones y la 3 NADH x 3 ATP (fosforilación oxidativa) = 9 ATP
síntesis de ATP. Sin embargo, en presencia de 1 FADH x 2 ATP (fosforilación oxidativa) = 2 ATP
dinitrofenol, la oxidación procede sin 1 GTP x 1 ATP (nivel del sustrato) = 1 ATP
fosforilación, indicando que la oligomicina no Total = 12 ATP
actúa en la cadena respiratoria, sino a través
de su unión con la proteína OSCP. A esta cantidad habría que agregar 3 ATP
más en caso de considerar la formación de
Intoxicación por cianuro acetil-CoA, a partir de piruvato donde se
forma 1 NADH intramitocondrial. Es
La ingestión de cianuro de potasio (KCN) evidente que la acumulación excesiva de
produce una rápida inhibición de la cadena compuestos de alta energía (ATP y NADH)
respiratoria a nivel de la citocromo oxidasa. inhiban ciertas reacciones del ciclo, y la
El cianuro se fija al Fe3+ del hemo del cit aa3 e acumulación de ADP y NAD determinan la
impide que el oxígeno reaccione con éste. estimulación de ciertas enzimas. De modo
Cesan la respiración mitocondrial y la general, el ciclo no puede funcionar más
generación de energía (ATP) y se produce la rápidamente que o que le permite la
muerte rápida por hipoxia tisular, muy utilización del ATP generado.
especialmente en el sistema nervioso.
Efecto de la concentración de ATP/ADP
50
deshidrogenasa es activada por ADP e Se han encontrado dos tipos de regulación del
inhibida por ATP, y la KM de la citrato complejo de la piruvato deshidrogenasa. El
sintetasa para la acetil-CoA es aumentada por primero se realiza por inhibición competitiva
el ATP. Además, el ATP y las acil-CoA de por parte de la acetil-CoA y el NADH; de esta
cadena larga son inhibidores alostéricos de la manera, cuando el aporte de acetil-CoA es
citrato sintetasa. suficiente a expensas de los ácidos grasos, la
enzima es inhibida, evitando así el
En resumen, un aumento de la relación desperdicio innecesario de piruvato derivado
ATP/ADP inhibe la actividad del ciclo de de la glucosa. El segundo tipo de regulación
Krebs. se lleva a cabo por la existencia de dos formas
interconvertibles de la piruvato
En la cadena respiratoria, la fosforilación del deshidrogenasa: una fosforilada, o forma
ADP es también dependiente de esa relación. inactiva, y la otra desfosforilada, la forma
activa. La existencia de una u otra es
Control a nivel de la relación NAD+/NADH catalizada por dos enzimas: la piruvato
Una disminución de la cadena respiratoria deshidrogenasa cinasa, que requiere ATP, y la
disminuye la regeneración de NAD, lo que piruvato deshidrogenasa fosfatasa. De hecho,
inhibe las reacciones de la isocitrato ambas enzimas forman parte del complejo,
deshidrogenasa, -cetoglutarato deshidroge- asociadas a la dihidrolipoil transacetilasa (Fig.
nasa, al acumularse la coenzima NADH 1.46).
reducida común a estas deshidrogenasas. La
activación alostérica de la isocitrato La principal función reguladora es ejercida
deshidrogenasa mitocondrial por el ADP es por la cinasa, que al fosforilar a piruvato
contrarrestada por el NADH y el ATP. La deshidrogenasa con hidrólisis de ATP la
succinato deshidrogenasa es inhibida por el convierte en su forma inactiva: esto ocurre
oxalacetato, y la disponibilidad de oxalacetato cuando hay exceso de ATP en la célula. Cabe
es controlada por la malato deshidrogenasa y, destacar el papel estimulador que ejercen
en última instancia, por el cociente sobre la cinasa la acetil-CoA y el NADH, y el
NAD+/NADH. papel inhibidor del piruvato y el ADP. Por el
contrario, si baja el ATP celular, la fosfatasa
remueve un fosfato a la piruvato
Control a nivel de la piruvato deshidrogenasa y la reactiva.
deshidrogenasa
La fosfatasa es inhibida por exceso de
El piruvato ocupa una posición clave en el NADH: esta inhibición es revertida por el
metabolismo, ya que puede ser reconvertido NAD+.
en glucosa, reducido a lactato, transaminado
para formar alanina, o finalmente ser La actividad del complejo piruvato
descarboxilado oxidativamente hasta acetil- deshidrogenasa también es regulada por
CoA. Es, por lo tanto, importante el control algunas hormonas. Entre ellas, cabe destacar
de su metabolismo a nivel de esta enzima, la la insulina, que incrementa la forma activa
piruvato deshidrogenasa, que determina su (desfosforilada) en tejido adiposo; las
entrada al ciclo. catecolaminas como la adrenalina pueden
activar la piruvato deshidrogenasa en el tejido
La mayor parte del piruvato se oxida a acetil- cardiaco. Estos efectos hormonales no están
CoA, pero una cierta cantidad se convierte en mediados por cambios en los niveles de
oxalacetato (proceso anaplerótico), AMPc tisulares ya que la cinasa y la fosfatasa
permitiendo que la acetil-CoA se combine son insensibles a éste (Fig. 1.47).
con este último para que el ciclo de Krebs
funcione adecuadamente. Así, la acetil-CoA Niños con deficiencia de algunas de las
proveniente de los ácidos grasos o de ciertos subunidades reguladoras del complejo
aminoácidos (cetogénicos), no puede entrar al piruvato deshidrogenasa presentan en suero
ciclo a menos que esté ya presente el cifras elevadas de piruvato y alanina, lo cual
oxalacetato proveniente de la carboxilación les causa acidosis láctica crónica. Estos niños
del piruvato. muestran, además, graves trastornos
51
neurológicos como ataxia (de Friedrich) y
convulsiones, que en la mayoría de los casos
pueden conducir a un desenlace fatal. El
tratamiento consiste en dar una dieta alta en
lípidos y megadosis de tiamina.
52
de hipoxia neonatal prolongada con cianosis.
Las niveles de biotina en plasma se
encontraron en el límite inferior de lo normal
(261.5 pg/ml; normal 500±200). Nunca ha
tenido manifestaciones clínicas ni químicas
de acidosis metabólica ni cetosis.
ENZIMOLOGIA Y
BIOENERGETICA Estudios metabólicos demostraron elevación
anormal, en plasma y orina, de alanina y
CASOS CLÍNICOS CON APLICACIÓN ácidos pirúvico y láctico. Las anormalidades
BIOQUÍMICA bioquímicas se corrigieron con dosis altas de
biotina, pero no de tiamina.
CASO CLINICO 1
Cuestionario:
Paciente varón de 45 años, bebedor de 1. Explique bioquimicamente los signos y
diversos licores desde los 20 años a síntomas principales
consecuencia de una decepción amorosa. 2. ¿De qué deficiencia enzimática se trata?
Manifiesta que desde hace unos dos meses 3. ¿Cómo explicaría las convulsiones
presenta dolor tipo ardor en el epigrastrio, observadas en este caso?
pero cada vez que él ingiere alimentos su 4. ¿A qué atribuiría el daño neurológico?
dolor disminuye. Hace un día acudió a una
fiesta familiar donde ingirió abundante
comida y alcohol, intensificándose su dolor a CASO CLINICO 3:.
nivel de epigastrio y mesogastrio con Un recién nacido nació a término después de
irradiación hacia la espalda, y mostró vómitos una gestación y un parto normales. A los dos
biliosos por lo que es conducido al hospital meses de edad fue trasladado al hospital
porque no ganaba peso y era hipotónico. Una
Los exámenes de laboratorio revelaron muestra de sangre reveló que el lactato
leucocitosis, hiperglicemia, amilasa sérica de sanguíneo, el piruvato y la alanina estaban
650 U/L y la lipasa sérica en 110 U/L. muy elevados, Se intentó tratamiento con
tiamina, lo cual redujo el valor de lactato en el
Cuestrionario plasma. Sin embargo, a los cinco meses de
edad se incrementó el lactato, por lo que tuvo
que aumentarse la dosis de tiamina.
1. Explique la importancia de las enzimas en
el metabolismo El complejo PDH de los extractos de células
2. Explique las funciones de la amilasa y la linfoblastoides tenía una actividad muy
lipasa séricas, y su importancia médica reducida y mostraba afinidad por el TPP
3. Defina isozimas y determine la (pirofosfato de tiamina).
importancia que tendría para este paciente
que se pudieran determinar las isozimas Cuestionario
de la amilasa y la lipasa séricas. 1. Explique bioquimicamente los signos y
4. Analize la probable relación entre la síntomas principales determinados
ingesta de alcohol y los signos y síntomas 2. Esquematice las vias metabólicas
observados. involucradas en el caso, explicitando sus
enzimas y formas de regulación
3. Explique la importancia de la PDH para
CLINICO Nº 2 la obtención de energía
4. Relacione el caso con el ciclo de Krebs,
Paciente femenino de 4 años de edad con cadena respiratoria y fosforilación
retraso somático y psicomotor profundo con oxidativa
problemas de deglución, tetraparesia
espástica, convulsiones tónicas con frecuencia Caso adaptado de Bioquímica: casos y texto, de
Montgomery, Conway, Spector y Chappell, 6ª edición,
de varias crisis al día y atrofia cortical y Harcourt Brace editores. 1998 p. 167
subcortical (microcefalial). Hay antecedentes
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