PRIMER PARCIAL CINETICA ENZIMATICA

1) La b-galactosidasa (b-D-galactosida galactohidrolasa, EC 3.2.1.23) cataliza la hidrólisis de la

lactosa en glucosa y galactosa y es una enzima muy utilizada en la industria láctea. Una preparación
de b-galactosidasa líquida comercial de Kluyver-omyces marxianus var lactis se utiliza en la
producción de leche baja en lactosa. Se sabe que se requieren 500 UI de b-galactosidasa por litro de
leche para reducir el contenido de lactosa en la leche en un 80% durante el almacenamiento (se
considera satisfactorio) y se debe calcular la dosis de enzima requerida (se agrega mL de
preparación de enzima por L de Leche).
Para ello, la actividad b-galactosidasa de la preparación enzimática debe ser determinado. El ensayo
enzimático se basa en la determinación de la glucosa en un sistema de HPLC con un detector de
índice de refracción. El procedimiento analítico consiste en agregar 0,3 ml de la preparación
enzimática, diluida tres veces, a 1,2 ml de 150 g de solución de lactosa L -1 e incubar la mezcla a 35
° C y pH 6,4. Las muestras se toman a diferentes tiempos de reacción y se someten a inactivación
enzimática mediante ebullición y luego Filtrado previo al ensayo de HPLC. Se obtuvieron los
siguientes resultados: (1.5)

t (mins) 0 2 4 6 8 12 18 26 36 48
g (Mm) 0 150 307 461 597 912 942 976 999 1015

2) Se obtuvieron los resultados que se muestran debajo, con una glucosa 6 fosfatasa (G6P), obtenida
a partir de extracto de higado de rata, la enzima cataliza la hidrolisís de G6P aglucosa (G) y fosfato
inorganico (Pi). Ademas del efecto de de la [G6P], se evaluó el efecto de la inulina (I) como
inhibidor y el efecto de la temperatura (Tx). Para esto y utilizando el método de las velocidades
iniciales se midieron las concentraciones de G en un tiempo de reacción de 8 min. Con base a esta
información, determine el tipo de inhibición ejercida por la inulina (I), los valores de las energías de
activación necesarias, calcule los cambio de entalpia para la disociacion de todos los complejos
enzimaticos y proporcione una ecuación de velocidad para la sintesís de G que sea función de la
[G6P] y de la [I]. Asuma el R=1,98 cal/mol*K (3.5). lineweaver-Burk inhibición.

35°C
[I]= 0 mmol [I]= 50 mmol
tiempo [G6P] [G6P] [G6P] [G6P] tiempo [G6P] [G6P] [G6P] [G6P]
(min) 5mmol 10mmol 20mmol 40mmol (min) 5mmol 10mmol 20mmol 40mmol
0,0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,0 0,00 0,00 0,00 0,00
2,0 89,95 140,04 193,92 240,07 2,0 53,40 86,33 124,76 160,52
4,0 141,13 219,73 304,25 376,67 4,0 83,79 135,44 195,75 251,85
6,0 215,79 335,96 465,21 575,93 6,0 128,11 207,09 299,3 385,09
8,0 365,35 568,81 787,64 975,10 8,0 216,90 350,63 506,75 651,99

50°C
[I]= 0 mmol [I]= 50 mmol
tiempo [G6P] [G6P] [G6P] [G6P] tiempo [G6P] [G6P] [G6P] [G6P]
(min) 5mmol 10mmol 20mmol 40mmol (min) 5mmol 10mmol 20mmol 40mmol
0,0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,0 0,00 0,00 0,00 0,00
2,0 97,60 151,94 210,40 260,48 2,0 57,94 93,67 135,36 174,16
4,0 153,13 238,41 330,11 408,69 4,0 90,91 146,95 212,39 273,26
6,0 234,13 364,52 504,75 624,88 6,0 139,00 224,69 324,74 417,82
8,0 396,40 617,16 854,59 1057,98 8,0 235,34 380,43 549,82 707,41