AO DE LA INVERSION PARA EL DESARROLLO RURAL Y LA SEGURIDAD ALIMENTARIA UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERA INDUSTRIAL ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL E INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

CURSO: BIOQUIMICA DOCENTE: BLGA. CLAUDIA RUIZ GONZALEZ. TEMA: RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS INTEGRANTES: REQUENA BAUTISTA, JULIO ANDRES RODRIGUEZ GONZALES, LUCIANA SALVADOR HUAMAN, MANUEL TALLEDO YAMUNAQUE, JORGE KENT

MESA DE TRABAJO N: 01 GRUPO DE LABORATORIO: 01 FECHA DE ENTREGA: LUNES 01 DE JULIO

PIURA PERU 2013

Informe de Bioqumica N 07 Blga. Claudia Ruiz Gonzales.

I. Introduccin.Las protenas son compuestos orgnicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en la naturaleza y esenciales para la vida. Actan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulacin, etc. Una manera de evaluar la eficiencia de los mtodos de extraccin de protenas es determinando el contenido de protena solubles que se obtienen despus de la etapa de extraccin. Entre todos los compuestos qumicos, las protenas deben considerarse ciertamente como los ms importantes, puesto que son las sustancias de la vida. Las protenas constituyen gran parte del cuerpo animal; lo mantienen como unidad y lo hacen funcionar. Se las encuentra en toda clula viva. Ellas son el material principal de la piel, los msculos, tendones, nervios y la sangre; de enzimas, anticuerpos y muchas hormonas. Desde un punto de vista qumico, las protenas son polmeros grandes. Son poliamidas y los monmeros de los cuales derivan son los cidos a -aminocarboxlicos. Una sola molcula protenica contiene cientos, e incluso miles, de unidades de aminocidos, las que pueden ser de unos 20 tipos diferentes. El nmero de combinaciones diferentes, es decir, el nmero de molculas protenicas distintas que pueden existir, es casi infinito. Es probable que se necesiten decenas de miles de protenas diferentes para formar y hacer funcionar un organismo animal; este conjunto de protenas no es idntico al que constituye un animal de tipo distinto. Las protenas son necesarias para la formacin y renovacin de los tejidos. Los organismos que estn en perodo de crecimiento necesitan un adecuado suministro de protenas para su aumento de peso. Los organismos adultos que tienen su peso estabilizado estn en equilibrio dinmico, en el que sus protenas se degradan y se regeneran continuamente, aunque su composicin permanece constante. Para ello debe existir en la dieta un suministro regular y continuo de protenas.

II. Marco Terico.PROTEINAS: Las protenas son compuestos orgnicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo. Las protenas actan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de coagulacin, etc. Esta multiplicidad 1 de funciones hace que las protenas resulten esenciales para la vida . CLASIFICACION DE PROTEINAS: Basada en la forma de las Proteinas:

1. Proteinas globulares (esferopreteinas) Estas protenas no forman agregados. Las conformaciones principales del esqueleto peptdico incluyen la hlice, las lminas y los giros. Estas protenas tienen funcin
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Torres. 2010. Manual de Laboratorio- Bioqumica

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metablica: catlisis, transporte, regulacin, proteccin. Estas funciones requieren solubilidad en la sangre y en otros medios acuosos de clulas y tejidos. Todas las protenas globulares estn constituidas con un interior y un exterior definidos. En soluciones acuosas, los aminocidos hidrofobicos estn usualmente en el interior de la protena globular, mientras que los hidrofilicos estn en el exterior, interactuando con el agua. Ejemplos de estas protenas son la Hemoglobina, las enzimas, etc. 2. Protenas fibrosas (escleroproteinas) Estas protenas son insolubles en agua y forman estructuras alargadas. Se agregan fuertemente formando fibras o laminas. La mayor parte desempean un papel estructural y/o mecnico. Tienden a formar estructuras de alta regularidad, lo cual deriva a su vez de la alta regularidad de la estructura primaria. Usualmente son ricas en aminocidos 2 modificados. Ejemplos de estas protenas son la queratina y el colgeno . Basada en la composicin:

a) Protenas Simples: Formadas solamente por aminocidos que forman cadenas peptdicas. b) Protenas conjugadas: Formadas por aminocidos y por un compuesto no peptdico. En estas protenas, la porcin polipeptidica se denomina apoproteina y la parte no proteica se denomina grupo prosttico. De acuerdo al tipo de grupo prosttico, las protenas conjugadas pueden clasificarse a su vez en: Nucleoprotenas Glycoproteinas Flavoproteinas Hemoproteinas De acuerdo a su valor nutricional, las protenas pueden clasificarse en:

1. Completas: Protenas que contienen todos los aminocidos esenciales. Generalmente provienen de fuentes animales. 2. Incompletas: Protenas que carecen de uno o ms de los amino cidos esenciales. Generalmente son de origen vegetal.

PEA, Antonio. 1998. Bioquimica. Editorial Limusa

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Principales mtodos para la cuantificacin de protenas Principales mtodos para la cuantificacin de protenas y sus rangos de Sensibilidad:

Mtodo

Rango de sensibilidad (g)

Coeficiente de extincin o Clculo de la concentracin

Mtodos de Absorcin A280 A205 A280 - A260 A235 - A280 A224 - A236 A215 - A225 Biuret Lowry

100-3000 280 = 1 mL/mg cm 3-100 205 = 31 mL/mg cm Protena (mg/mL) =(1.55A280 0.76A260) 100-3000 Protena (mg/mL) = (A235 A280)/2.51 25-700 Protena (mg/mL) = (A224 A236)/0.6 5-180 Protena (g/mL) = 144(A215 A225) 2-45 Mtodos Derivados Colorimtricos 1000-10000 545 = 0.06 mL/mg cm 25-100 a 500 nm Usar curva estndar 2-30 a 660 nm 1-2 a 750 nm 1-15 595 = 81 mL/mg cm 0.5- 10 Usar curva estndar Mtodos Derivados Fluorimtricos 1-5 excitacin a 340nm emisin a 475 nm Usar curva estndar

Bradford BCA o-ftalaldehido

CONCEPTOS PREVIOS: Mtodos colorimtricos para la determinacin de protenas. Mtodo de Biuret Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. 1Cu2+ se acompleja con 4 NH. La intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y slo se recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados muy concentrados (por 3 ejemplo en suero) . Mtodo de Bradford Se basa en la unin de un colorante, Comassie Blue G-250 (tambin Serva Blue) a las protenas. El colorante, en solucin cida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las protenas se unen a la forma azul para formar un complejo protena-colorante con un coeficiente de extincin mayor que el colorante libre. Este mtodo es sensible (1-15 g), simple, rpido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinacin. Entre las sustancias que interfieren estn los
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THOMPSON, Gabriel. 2011. La bioqumica de los alimentos. Editorial Jubent

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detergentes y las soluciones bsicas.

Mtodo de BCA El cido bicinconnico, sal sdica, es un compuesto capaz de formar un complejo prpura intenso con inones Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de un mtodo analtico capaz de monitorizar el in cuproso producido en una reaccin entre las protenas con Cu2+ en medio alcalino (reaccin de Biuret). La estabilidad del reactivo y el cromforo proporciona un mtodo para la cuantificacin de protenas que es sencillo, rpido, muy sensible, y que muestra una gran tolerancia a compuestos que afectan a otros mtodos.

III. Objetivos.La presente practica tiene como objetivo cuantificar las protenas totales y fraccionarias presentes en jugo de granadilla, maracuy, naranja y uva. IV. Materiales y metodologa. Esta prctica no se llevo a cabo, debido a la falta de materiales pero se puede mencionar a continuacin, el procedimiento que se necesita para que se lleve a cabo:

Protenas Totales Agua destilada Standar Jugo granadilla Jugo maracuy Jugo naranja Jugo Uva Reactivo de trabajo Incubar por 15 minutos a 37C Leer 540 nm o en fotocolormetro 520560 nm

I 20L 2 mL

II 20L 2 mL

III 20L 2 mL

IV 20L 2 mL

V 20L 2 mL

VI 20L 2 mL

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Luego se realizo otra practica, para demostrar cmo se deben dar las reacciones en el anterior experimento. A continuacin, se dan los siguientes pasos: 1. En dos tubos de ensayo, previamente lavados con agua destilada, Verter 1 ml de protena totales (Tubo A) y 1 ml de albuminas (Tubo B), respectivamente.

2. Luego agregar a cada tubo 10 L de suero.

3. Llevar a la incubadora. V. Resultados y Discusiones.5.1 Resultados. En el tubo A, se virti primero 1 mL de protenas totales y esta sustancia era de color celeste, luego se le agrego 1 L de suero, y repentinamente se dio un rpido cambio de color y este es azul paco, lo que quiere decir que sin llevar a la incubadora fcilmente nos podemos dar cuenta que la reaccin es positiva.

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En el tubo B, se virti primero 1 mL de Albmina y esta sustancia era de color amarillo , luego se le agrego 1 L de suero, y repentinamente se dio un rpido cambio de color y este fue verde, lo que quiere decir que sin llevar a la incubadora fcilmente nos podemos dar cuenta que la reaccin es positiva.

5.2 Discusiones. La protena total en suero, tambin llamada protena total en plasma o protena total, es una prueba bioqumica para medir la cantidad total de protena en plasma sanguneo o suero. La protena en el plasma est compuesta de albmina y globulina. La globulina, a su vez, est compuesta de globulinas 1, 2, , y . Estas fracciones pueden ser cuantificadas usando electroforesis de protenas, pero el examen de protena total, que estima el total de todas las fracciones juntas, es ms rpido y barato. El mtodo tradicional para medir la protena total usa el reactivo de Biuret, pero ahora, hay disponibles otros mtodos qumicos. Usualmente la medida es realizada junto con otros exmenes de laboratorio en analizadores automticos. DAZ PORTILLO, Jacobo, FERNNDEZ DEL BARRIO, Mara Teresa, PAREDES SALIDO, Fernando. 2003. Aspectos bsicos de la biquimica aplicada. Editorial reverte. Esta prueba se llevo a cabo, con otro tipo de metodologa distinta al uso del reactivo de Biuret, debido a la falta de reactivos en el laboratorio, pero se obtuvo la demostracin que se necesitaba y era corroborar si se encontraban protenas en el suero sanguneo, tales como la globulina o la albmina, aunque era necesario llevar estas muestras a la incubadora, no se dio esto debido a que la reaccin se llevo a cabo rpidamente y sin hacer uso de esta. Como conclusin se tiene, que existen muchos mtodos para determinar si hay protenas o no en una sustancia, y que depende mucho de la correcta manipulacin de los reactivos e instrumentos para obtener el resultado esperado.

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VI. Cuestionario.1. Cules son los valores normales con relacin a las siguiente protenas: Albuminas y globulinas? Valores normales de protenas en suero Los valores normales en adultos son entre 6 y 8,3 gramos por decilitro. Los valores normales en prematuros son entre 4,2 y 7,6 gramos por decilitro. Los valores normales en recin nacidos son entre 4,6 y 7,3 gramos por decilitro. Los valores normales en lactantes son entre 6 y 6,7 gramos por decilitro. Los valores normales en nios son entre 6,2 y 8 gramos por decilitro. VII. Conclusiones. Se lleg a la conclusin que las prueba de identificacin mediante reactivos tiene como fin evidenciar la presencia del compuesto que se desea encontrar en una muestra gracias a las propiedades cualitativas que presente esta al momento de reaccionar, como en el caso de la prueba que se llevo a cabo para encontrar protenas en el suero sanguneo.

VIII. Recomendaciones. Utilizar para cada reactivo una pipeta diferente con el fin de no mezclarlos y alterar los resultados que se deseen obtener en la prctica. Rotular los tubos de ensayo para evitar confusiones al momento de la prctica.

IX. Referencias Bibliogrficas.-. Robert K. Murray, MD, PhD; Victor W. Rondwell, PhD; Daryl K. Granner, MD en Harper. Bioqumica Ilustrada, 17a Edicin, Edit El Manual Moderno Nelson D. y Cox M. (2007). Lehninger: Principios de Bioqumica. 5ta edicin. Madrid, Editorial Omega. Plumer D. (1981). Introduccin a la Bioqumica Prctica. Editorial McGraw Hill. Stryer L. (1995). Bioqumica. 4ta edicin. Barcelona, Editorial Reverte.

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