IPN

Escuela Nacional de Ciencia Biológicas

Departamento de Bioquímica
Laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular

Curva tipo de azucares reductores

Grupo: 3IM2 SECCIÓN: 4
Profesor: Saúl Espinosa Gómez
Alumnos:
Canova Ortega Sharon Michel.
Ponce Fontela Sara
Zúñiga Juárez Adrián

Micromoles nm
de azúcar
Introducción reductor
El método DNS (técnica de miller) es una técnica colorimétrica 0 0
que emplea ácido 3,5 dinitrosalicílico para la hidrólisis de 1 0.0862
polisacáridos presentes en una muestra. Determina las 2 0.181
absorbancias por medio de un espectrofotómetro a 540nm.
4 0.359
Esta técnica sirve para cuantificar los azucares reductores
producidos durante una fermentación o para cuantificar los 8 0.775
productos de una reacción enzimática. La curva de calibración 10 0.908
es la representación gráfica en un eje de coordenadas, de la Tabla 2 RESULTADOS POR SECCION
Absorbancia (eje de ordenadas: Y) frente a la Concentración
(eje de abscisas: X). Se ensayan varias soluciones de
concentración conocida y se determinan sus absorbancias,
construyéndose la curva de calibrado, que es una recta. La *el tubo 0 corresponde al tubo blanco, o tubo de referencia con
concentración de una solución problema (desconocida), se el que se calibrara el espectrofotómetro.
averigua por interpolación de la Abs de la solución en la curva
de calibración, o a través de la ecuación de la recta (y = mx Cálculos
+b) donde: Absorbancia (y) = constante (m) x concentración +
Si hay 0.01 mol por cada 1000 mL de solución de azúcar
absorbancia del blanco.
reductor, entonces por cada 0.1 mL de solución de azúcar
El DNS reacciona únicamente con los azúcares reductores. La
reductor hay 1x10-6 moles de azúcar reductor, entonces:
sacarosa es un0*
reactivo/t disacárido
1 no reductor,
2 pero
3 tras 4su hidrólisis
5
en
ubomedio ácido se liberan glucosa y fructosa que sí son
Tubo µmoles de azúcar reductor
reductores y reaccionan con el DNS generando un producto 1 1
Glucosa, La intensidad
coloreado. 0 0.1del color,
0.2 que se
0.4puede 0.8
medir por1.0 2 2
fructosa
métodos espectrofotométricos es proporcional a la 3 4
0.005 M
concentración de sacarosa. 4 8
(mL)técnica es aplicable a todos los procedimientos de
Esta 5 10
sistemas de cultivos de medios líquidos y sólidos cuya Tabla 3 MICROMOLES DE AZUCAR REDUCTOR EN CADA TUBO
Sacarosa
molécula 0.5 sean
de sustrato 0.5 azúcares
0.5 reductores
0.5 0.5 glucosa,
como 0.5
0.2 M entre otros.
xilosa, Velocidad inicial de la reacción=
(mL) µmoles de azucar reductor
Objetivos 10
Regulado 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
 Construir una curva tipo de azúcares reductores.
r de
 Interpretar una curva tipo de azúcares reductores
acetatos 1
 Tubo 1= = 0.1
0.05M Analizar el funcionamiento de una curva tipo. 10
(mL)
Resultados
Agua 1.0 0.9 0.8 0.6 0.2 0
2
Tubo 2= = 0.2
En la práctica se obtuvieron los siguientes resultados, al
(mL) 10
realizar las serie de tubos, y medir su absorbancia en el
3,5-DNS 0.5
espectrofotómetro. 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 4
Tubo 3= = 0.4
Absorban 0 0.074 0.219 0.433 0.778 1.018 10
cia
Absorbancia
Azúcar 0 1 2 4 8 10
reductor
(µmoles)
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8 cantidad adecuada para cada tubo, o porque algo en los

Tubo 4= = 0.8 reactivos fuese contraproducente para los ensayos, sin
10
embargo es una gráfica que será de ayuda para las
posteriores prácticas.
10
Tubo 5= = 1.0
10 Al hacer la comparación de la gráfica que se obtuvo en nuestro
equipo y la gráfica que se obtuvo por toda la sección se puede
observar que el dato de R2 que nos sirve para saber que tanto
se acerca a la línea de tendencia, podemos de decir que la
Discusión de resultados gráfica de grupo que tiene como R2 =0.9977 es más cercana a
la línea de tendencia y por lo tanto es un poco más útil para
Al calcular la actividad de la enzima en unidades de invertasa, ser una referencia al interpolar que nuestra grafica donde se
se puede observar que se requiere menos cantidad de la tiene una R2 = 0.9966.
enzima para hidrolizar un µmol del azúcar reductor en un
minuto en el tubo uno (0.1 U.I) y esa cantidad va aumentando Conclusiones
al aumentar los µmoles de sacarosa hasta el tubo 5 (1 U.I).
Por medio de una serie de ensayos con cantidades conocidas
En base a los datos obtenidos de absorbancia y µmoles de para llevar a cabo la reacción de identificación de la formación
azúcar reductor se construyó una gráfica, la cual será de de azucares reductores, sirven para construir una curva tipo.
ayuda, para interpolar los datos relacionados con esta, y así
poder interpretarlos.

La grafica obtenida en nuestro equipo, por los resultado de

absorbancia obtenida para cada ensayo y los µmoles de
azúcar reductor, no muestra una tendencia completamente
lineal, por factores como no haber adicionado en cada tubo la
Bibliografía
J. Weininger, S., & R. Stermitz, F. (1998). Azucares, nuecleosidos y acidos nucleicos . En S. J. Weininger, & F. R. Stermitz,
Química orgánica (pág. 824). España : REVERTE.

Mc Murry, J. (2008). Biomoléculas: carbohidratos. En J. Mc Murry, Química Orgánica (7a ed., págs. 992-993). México:
Cengage Learning.

https://www.clubensayos.com/Ciencia/Azucares-
Reductores/556322.html (03-10-2015)

http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
mol/pdfs/31%20INVERTASA%20ENSAYO.pdf

Pregunta extra:
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Reacción enzimática

Reacción química

Absorvancia vs micromoles de azucar reductor seccion III

1

0.9 f(x) = 0.09 x − 0

R² = 1
0.8

0.7
Absorbancia nm

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 2 4 6 8 10 12
micromoles de azucar reductor
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Grafica absorvancia vs μmoles de azùcar reductor del equipo

1.2

1
f(x) = 0.1 x + 0
R² = 1

0.8
Absorbancia

0.6

0.4

0.2

0
0 2 4 6 8 10 12

µmoles de azúcar reductor