Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Práctica No. 6 Cinética Enzimática. Efecto de la concentración de la
enzima sobre la velocidad de reacción"
Granados Rivas Brenda, Pérez Cabrera Ana Karen
3FM1 Laboratorio de Bioquímica

c
Objetivos Para la obtención de la concentración de la enzima se
utilizo una regla de tres:
Analizar y comprender uno de los factores
(concentración de la enzima) que afectan la velocidad 10 microgramos = 1 mL
de reacción. X = mL de enzima
Demostrar que la velocidad de la reacción enzimática
es directamente proporcional a la concentración de Cálculos:
enzima.
Para el tubo 1: Para el tubo 2:
Resultados
0.1 mL(10 ug)
Tub Absorbancia Azú. R Velocidad [E] x= =1ug
L o (umoles/2mL) (UI) (ug/2mL) 1 mL
1 0.169 0.891 0.0891 1 0.2 mL(10 ug)
x= =2ug
2 0.331 2.141 0.2141 2 1 mL
3 0.670 4.757 0.4757 3
4 0.840 6.069 0.6069 4 Para el tubo 3: Para el tubo 4:
5 0.950 6.917 0.6917 5 0.3 mL(10 ug)
Los valores de los micromoles de azúcar reductor se x= =3 ug
1 mL
obtuvieron mediante la ecuación de la curva tipo de
azúcares reductores antes elaborada:
0.4 mL(10 ug)
x= =4 ug
1 mL
y=0.1296
Se x +0.0535
anexan graficas de los integrantes
Para el tubo 5:
Debido a que conocemos el valor de la variable Y
(Absorbancia) se despeja la variable X; tenemos: 0.5 mL(10 ug)
x= =5 ug
Vo (UI) 1 mL
y−0.0535
X=
0.1296 Gráfica
Para el tubo 1: Para el tubo 2:
Vo vs [E]
0.169−0.0535
x= =0.891 0.8
0.1296 0.7
0.331−0.0535 0.6 [E] (ug/2mL)
x= =2.141
0.1296 0.5
0.4 Discusión de resultados
Para el tubo 3: Para el tubo 4: 0.3
0.2
0.670−0.0535 0.1
x= =4.757 0
0.1296 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 5.5
0.840−0.0535
x= =6.069
0.1296
Par el tubo 5:
En la gráfica que se muestra anterior se puede observar
0.950−0.0535 que los puntos siguen una línea de tendencia lineal, lo cual
x= =6.917 nos indica que existe que la velocidad de reacción tiene
0.1296 cierta reacción con la concentración de la enzima
directamente proporcional, aun cuando no todos los puntos
Para obtener la velocidad de reacción en unidades
se encuentran sobre la línea de tendencia se puede
internacionales (UI) utilizamos la siguiente fórmula: observar que la distribución de los puntos alrededor de la
 l Murry J. 2008. Química orgánica. Biomoléculas
Mc
carbohidratos. 7ª edición. Editorial Cengage Learning.
Cuidad de México, México. 992-993 p.

Bello D, et al. 2006. Determinación de azucares reductores

en jugos de caña azúcar utilizando el método del ácido 3,5-
dinitrosalicílico. Revista Instituto Cubano de
Investigaciones de los Derivados de la Caña de Azúcar
40:45-50.
 Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Práctica No. 6 Cinética Enzimática. Efecto del pH sobre la velocidad de
l reacción"
Granados Rivas Brenda, Pérez Cabrera Ana Karen
3FM1 Laboratorio de Bioquímica
c
Objetivos Tubo 6; Vo: 0.00.

 Analizar y comprender uno de los efectos sobre la Gráfica

velocidad de reacción.
 Analizar la importancia del pH del medio sobre la
velocidad de una reacción enzimática
 Analizar el efecto del pH sobre el carácter iónico
de la enzima y del sustrato.

Resultados
Tub Absorbanci Azú. R. Velocidad pH
(umoles/2mL) (UI)
o a
1 0.037 0.127 0.0127 3.0
2 0.214 1.238 0.1238 4.0
3 0.563 3.931 0.3931 4.5
4 0.421 2.836 0.2836 5.0
5 0.397 2.650 0.2650 6.5
6 0.000 0.000 0.000 7.5
Los valores de los micromoles de azúcar reductor se
obtuvieron mediante la ecuación de la curva tipo de
Discusión de Resultados
azúcares reductores antes elaborada: Para poder determinar el efecto del pH se trabajó en
un rango que va de 3 hasta 7.5, manteniendo la
y=0.1296 x +0.0535 concentración de la enzima y la temperatura
Debido a que conocemos el valor de la variable Y constante, a partir de los datos obtenidos se obtuvo
(Absorbancia) se despeja la variable X; tenemos: una gráfica de velocidad vs pH. En la gráfica se
puede observar que en el punto que corresponde a
y−0.0535 un pH de 4.5 la enzima presenta una velocidad de
X=
0.1296 reacción mayor que en cualquier otro punto de pH, lo
que indica que el pH de 4.5 es el pH al que la enzima
Para el tubo 1: Para el tubo 2:
tiene la mayor actividad catalítica, este valor de pH
0.0535−0.037 también se conoce como pH optimo el cual la
x= =0.127 literatura define como el valor de un pH en donde la
0.1296
enzima presenta máxima actividad, esto se debe a
0.214−0.0535
x= =1.238 que a enzima presenta la conformación
0.1296
tridimensional que le permite la mayor actividad
Para el tubo 3: Para el tubo 4: catalítica.

0.563−0.0535 Martínez J & Morales F (2007) en su caracterización

x= =3.931 cinética de la hidrolisis de sacarosa con invertasa
0.1296
0.421−0.0535 libre e inmovilizada obtuvieron que el pH óptimo de la
x= =2.836 enzima oscila entre 4.5 y 5 debido a que obtuvieron
0.1296
los valores mas altos de actividad enzimática
Para el tubo 5: Para el tubo 6: expresada en unidades de invertasa, si comparamos
este rango de pH óptimo con el valor que nosotros
0.397−0.0535 obtuvimos podemos observar que nuestro valor de
x= =2.650 x=0
0.1296 pH óptimo es semejante al de los autores ya que el
valor de 4.5 obtenido por nosotros se encuentra en
Para obtener la velocidad de reacción en unidades de
el rango que ellos establecen, la variación del
invertasa (UI) utilizamos la siguiente fórmula:
de deberse a la técnica que se emplea para este  Martínez J, Morales F. 2007. Caracterización
experimento ya que ellos realizaron un número más cinética de la hidrólisis de sacarosa con
amplio de lecturas por lo cual obtuvieron mas puntos invertasa libre e inmovilizada. Proyecto de
para realizar la gráfica, mientras que nosotros solo investigación. Unidad Profesional
realizamos la lectura de 6 tubos. Otros autores Interdisciplinaria de Biotecnología. Instituto
también mencionan haber obtenido valores de pH Politécnico Nacional. Cuidad de México,
óptimos de hidrolisis de sacarosa de entre 4.5 y 5 y México. 53 p.
temperaturas óptimas de hidrolisis de sacarosa de 54
°C a 56 °C, estos valores nuevamente concuerdan
con nuestro valor obtenido ya que en nuestra grafica
se observa al valor de pH 4.5 con mayor velocidad de
reacción, por lo cual podemos afirmar que la técnica
que estamos utilizando para la caracterización de la
enzima y para poder analizar los factores que
intervienen en la velocidad de reacción de una
enzima, es efectiva.
En la gráfica podemos observar que conforme se
aumenta el pH la velocidad de la reacción aumenta
hasta llegar al punto del pH óptimo en donde la
velocidad de reacción será máxima, después de este
punto la enzima comenzara a perder sus propiedades
debido a que se empieza a desnaturalizar lo que
provoca que la enzima pierda su actividad por lo cual
la velocidad de reacción disminuirá hasta que la
enzima ya no presente actividad.
Cada enzima tiene sus propios rangos de pH al que
presenta actividad catalítica y al cual se
desnaturaliza, en el caso de la invertasa presenta
una actividad catalítica entre pH de 3.5 y 5.5 con un
pH óptimo de 4.5 como se observa en la gráfica
después de esos rangos la enzima empieza a
desnaturalizarse y pierde su actividad catalítica.

Conclusiones
La invertasa presenta una actividad catalítica en un
rango de pH de 3 a 5.5 con un pH óptimo de 4.5.
Las enzimas en su estructura poseen grupos
químicos ionizables y según el pH del medio pueden
tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra, por
lo que al variar el pH del medio estos grupos
químicos cambian de carga. En el pH óptimo la
enzima presentara la conformación más adecuada
para tener la actividad catalítica.

Bibliografía
 Mathesws CK, et al. 2002. Bioquímica.
Hidratos de carbono. 3ª edición. Editorial
Pearson Educación. Madrid, España.
 Deylin TM. 2004. Bioquímica. 4ª edición.
Editorial Reverté. Barcelona, España.