ACTIVIDAD MICROBIANA: METANOGÉNESIS

Microbial activity: methanogenesis

Bertha Quintero* Andrés Felipe Rodríguez*, Luisa Daza Espinosa*

Erika Pamela Fernandez1

Resumen
Introducción:
La metanogénesis es el proceso de producción biológica del metano, realizado por
organismos metanogénicos y archeas estrictamente anaerobios, usando dióxido de
carbono como aceptor final de electrones para su producción.
Existen varios tipos de metanogénesis los cuales difieren en los compuestos iniciales
oxidados.

Objetivo
Evaluar la actividad metanogénica de la comunidad presente en los lodos anaerobios de
la planta de tratamiento de agua San Fernando.

Materiales y métodos:
Se realizó el montaje de siete reactores metanogénicos, tres correspondientes a
controles y cuatro a ensayos con lodo activado. Para generar las condiciones óptimas del
proceso de la metanogénesis, el lodo fue suplementado con medio mineral, vitaminas, un
agente reductor y sustrato, además de esto se adicionaron algunos ácidos grasos
volátiles como fuente de carbono. Se calculó la cantidad de cada elemento en el medio,
teniendo en cuenta la capacidad total de cada reactor.

Resultados:
Se obtuvieron valores de actividad metanogénica específica de
6.081 x 10(−5) ( g DQOCH 4 )/(g SSV ) para el control, y 0.001(g DQO CH 4 )/¿ para los
reactores.
Conclusiones:
La realización del montaje de los reactores permitió obtener la actividad metanogénica
presente en los lodos anaerobios de cada una de las comunidades

Palabras claves: Acetogenesis, Actividad metanogénica, carbono, fermentación, metano,

metanogénesis, metanógenos, lodos activados, solidos suspendidos totales.

*Estudiantes del pregrado Microbiología Industrial y Ambiental, Escuela de Microbiología, Universidad de Antioquia, Medellín,
Colombia, 1 Docente – Microbióloga Industrial y Ambiental, Grupo CIBIOP, Asistente de investigación, Universidad EAFIT
INTRODUCCIÓN Existen diferentes coenzimas que
participan en el proceso de la
El carbono es un elemento químico metanogénesis, como el metanofurano
fundamental que forma parte de todas (MF), metanopterina (MP), M (CoM),
las moléculas orgánicas como la glucosa, F430, F420, B (CoB), las cuales poseen
las proteínas y los ácidos nucleicos, es diferentes funcionalidades [ CITATION
renovado cada 20 años mediante la Uni151 \l 9226 ].
acción de los microorganismos y las
plantas. Existen dos tipos de carbono, El metano es uno de los gases
orgánico e inorgánico, los cuales se contaminantes más importantes después
almacenan dependiendo del flujo del del dióxido de carbono y es necesario el
elemento[ CITATION Gar14 \l 9226 ]. estudio de su producción y efectos en el
ambiente, por lo anterior, el objetivo de
El ciclo del carbono es un ciclo este trabajo es evaluar la actividad
biogeoquímico primario en la naturaleza, metanogénica de la comunidad presente
ya que este elemento hace parte de los en los lodos anaerobios de la planta de
organismos[ CITATION Tor07 \l 9226 ]. Uno tratamiento de aguas San Fernando.
de los componentes más importantes del
ciclo es el metano, siendo el gas más MATERIALES Y MÉTODOS
abundante en la atmosfera después del
Componentes del medio
CO2 [ CITATION Fer04 \l 9226 ]. Este gas se
produce por la descomposición Para llevar a cabo el proceso de
anaerobia de la materia orgánica en metanogénesis, se elaboró un medio
medios relativamente anóxicos y por la específico que contenía componentes
excreción de organismos, desde termitas necesarios como sustratos en la
hasta el humano y los animales producción de metano. A continuación se
domésticos [CITATION Gun \l 9226 ], su mencionan cada uno de los
formación esta favorecida por altos componentes de dicho medio:
niveles de materia orgánica y bajos
Tabla 1: relación de las cantidades agregadas de
niveles de nitrato y sulfato [ CITATION sustratos al medio para el proceso metanogénico.
Man06 \l 9226 ]. La producción de metano (cálculos no mostrados)
a partir de la descomposición de
Sustratos Volumen
compuestos orgánicos en un ambiente
agregado
anaerobio, es conocida como Control Ensayo
metanogénesis[ CITATION Sta962 \l 9226 ]. Lodo 208 g 208 g
La metanogénesis se presenta en ácidos grasos 0 g 6.86 g
volátiles
digestión anaerobia, es un proceso
vitaminas 17.5 g 17.5 g
degradativo donde la materia orgánica
solución 87.5 g 87.5 g
contenida en sustrato es convertida en
reductora
una mezcla de gases, entre ellos el Medio mineral 1436 ml 1429 ml
metano [ CITATION Mar06 \l 9226 ]. Es
realizado por microorganismos
conocidos como metanógenos (archaeas Montaje de los reactores
y anaerobias estrictas), usando el
Para el montaje experimental, se tuvo en
carbono como aceptor final de
cuenta que el volumen efectivo de cada
electrones [ CITATION Uni15 \l 9226 ].
reactor no sobrepasara el 70% de su
volumen total.
A cada reactor se le agregaron los
componentes previamente mencionados,
teniendo en cuenta que a los reactores
control no se les adiciono sustrato
(ácidos grasos). Cada uno de los
reactores se dejó en reposo durante
media hora con el fin de homogenizar los
componentes del medio. Los recipientes
utilizados como reactores fueron sellados
en los puntos de unión a las mangueras,
evitando así el escape de metano
producido y la interferencia del oxígeno,
creando un ambiente anaerobio.
Cada reactor fue conectado a una
trampa de gases compuesta por una
columna de NaOH, la cual permite
atrapar el CO2 con el fin de evitar la
interferencia de éste en la toma del
volumen desplazado.
Se realizaron mediciones
aproximadamente dos veces al día por 6
días, en donde se comprobó el volumen
de NaOH desplazado que es
correspondiente al metano producido.

RESULTADOS
Tabla 2. Se muestran los volúmenes desplazados de NaOH en cada uno de los reactores durante el tiempo
de medición, así como el promedio de volumen entre los controles y el ensayo. Los volúmenes mostrados son
acumulativos por cada día.

Volumen desplazado acumulado

Controles Ensayos

Día Tiempo Reactor Reactor Reactor Reactor Reactor Reactor Reactor

1 5 6 2 3 4 7
1 3 1 18 7 78 106 140 46

2 22 6 26 10 78,5 205 174 46

3 50 6 26 10 128,5 233 211 74

56 6 26 13 141,5 263 241 92

4 74 6 26,2 13 156,5 315 273 111

80 6,5 26,7 13,3 177,5 345 299 135

5 99 8,5 27,7 13,3 206,5 371,5 332 162

105 17,5 27,7 13,3 213,5 379,5 356 174

6 123 17,5 27,7 13,3 235,5 385,5 418 189

127 17,5 27,7 13,3 236,2 400,5 450 204,2

Gráfica 1. Producción de metano en función del tiempo del experimento para los 3 controles y 7 reactores
utilizados.

Producción de metano
500
450
400
volumen de metano (ml)

Control 1
350
Control 2
300 Control 3
250 Reactor 1
200 Reactor 2
150 Reactor 3
100 Reactor 4
50
0
0 20 40 60 80 100 120 140 160
Tiempo (horas)

Gráfica 2. Producción de metano en función del tiempo del experimento para los reactores y control que
presentaron un mejor comportamiento en la práctica

Producción específica de metano Control 3

Linear
250 (Control 3)
Linear
f(x) = 1.21 x + 57.21 (Control 3)
R² = 0.97 Reactor 1
200 Linear
f(x) = 1.18 x + 18.76 (Reactor 1)
Volumen de metano (ml)

R² = 0.93
150

100

50

0 f(x) = 0.04 x + 8.37

0 R² = 0.7720 40 60 80 100 120 140 160

Tiempo (horas)
Tabla 2. Pendientes obtenidas a partir del análisis gráfico de los reactores en buen estado

Reactor Pendiente Promedio

Control 3 0.0403 0.0403
Reactor 1 1.215 temperatura de Medellín además de la
1.1956 ley de los gases ideales.
Reactor 4 1.1762
PV =nRT

Cálculo de la actividad metanogénica p1 V 1 p1 V 1

específica n R= n R=
T1 T1
Para el cálculo de la actividad
metanogénica específica se utilizó la Debido a que se toma n y R como
siguiente gráfica constantes entonces
p1V 1 p2V 2
R∗24 =
AME= T1 T2
FC∗V∗SSV
P1 V 1 T 2=P2 V 2 T 1
Donde:
Donde P1 y T1 corresponden a las
AME = actividad metanogénica condiciones estándar de temperatura y
específica (g DQOCH4/g de SSV x d) presión y P2 y T2 a las condiciones de
temperatura y presión a las cuales fue
R = tasa de producción de metano en ml realizado el laboratorio.
de CH4/hora
ml
1 atm∗350 ∗309.65 ° K
24 =número de horas en un día g DQO ml
V 2= =432 .737
0.84 atm∗298.15° K g DQO
V = Volumen efectivo del reactor (L)
Con este factor de corrección se calcula
FC = factor de conversión en ml de CH4/ la AME
g DQO: a condiciones estándar este
factor es 350 ml/ gDQO. ml
0.0403 ∗24 horas
Hora
PV = nRT asumiendo n y R constantes. AMEcontrol =
ml g SSV
432 .737 ∗1.75 L∗21
SSV = concentración de sólidos g DQO L
suspendidos volátiles del inóculo en g −5 g DQO C H 4
AMEcontrol =6.081 x 10
SSV/L g SSV
Factor de corrección

Para el cálculo de este factor, se tuvieron

en cuenta las condiciones de presión y
 ml
1.1956 ∗24 horas
Hora
AMEreactores =
ml g SSV
432 .737 ∗1.75 L∗21
g DQO
g DQO C H 4
AMEreactores =0.001
g SSV
ANÁLISIS DE RESULTADOS
Por medio del montaje realizado en este
laboratorio se determinó la cantidad de
metano generado en un lapso de tiempo,
a partir de algunas condiciones
específicas. En primer lugar, se aclara
que para el análisis final de la actividad
metanogénica específica, se utilizaron
solo dos de los ensayos y un control, ya
que se presentaron varias fallas con
respecto al montaje, debido a la
presencia de fugas en las uniones
reactor-escape, que impidieron el buen
funcionamiento del experimento. Estas
falencias representan un margen de error
en las mediciones tomadas y el volumen
desplazado de la columna de NaOH no
corresponde en su mayoría al volumen
producido de metano real.
Cuando el montaje se realiza de forma
correcta, el sistema es adiabático, por lo
que la presión atmosférica externa no
interfiere con la presión interna. Esto
indica que el metano resultante, produce
una fuerza sobre la columna liquida
compuesta por NaOH, permitiendo que al
abrir el escape se desplace cierta
cantidad de líquido de forma controlada,
relacionada con la cantidad de metano
producido al interior del reactor. ( no se
como referenciar eso porque lo hice con
mis palabras)
En cuanto a los reactores en buen
estado, se observa en la gráfica 2 que se
obtuvo el comportamiento esperado en
los reactores evaluados, se evidencia
una corta fase de estabilización, seguida
de un aumento del volumen producido de
metano, inverso al control donde se nota
un mínimo aumento de la actividad
metanogénica.
L Uno de los principales papeles que
cumplen los organismos metanogénicos
al interior de un reactor, es mantener en
baja concentración el hidrógeno, para
dirigir el flujo de carbono hacia la
producción de acetato, de esta forma se
reduce el dióxido de carbono, utilizado
por la mayoría de las especies
metanogénicas para la producción de
metano [ CITATION Ber88 \l 9226 ]. El CH4
es la forma más reducida del carbono, y
la transferencia de electrones para su
producción resulta desde H2 externo, o
desde compuestos como los reductores
carbonados. Son pocos los organismos
metanógenos que utilizan el acetato
como sustrato, a pesar de esto son de
gran importancia en la naturaleza, ya que
generan aproximadamente el 70% del
metano en lodos activados [ CITATION
Cas05 \l 9226 ].
Con relación a lo anterior, algunos
grupos que participan en el proceso de la
metanogénesis son las metanógenas,
dentro de las que se encuentran:
Methanobacteriales,Methanomicrobiales,
Methanosarcinales y Methapyrales, éstas
son arqueas que viven exclusivamente
en ambientes anaerobios y utilizan como
sustratos el acetato, piruvato, metanol-
metilaminas, CO, formiato, entre otros
[ CITATION Cas05 \l 9226 ]. Otro tipo de
bacterias importantes son las
acetogénicas, dentro de las que se
encuentran Syntrophobacter wolinii y
Syntrophomonas wolfei [ CITATION
Uni151 \l 9226 ], éstas últimas tienen la
característica de ser sintróficas, lo que
significa que solo se desarrollan como
productoras de H2 junto a otras bacterias
consumidoras de ésta molécula
[ CITATION Uni151 \l 9226 ].
Con relación a los organismos
anaerobios en el tratamiento de aguas,
se generan lodos tanto en el proceso
aerobio como anaerobio, diferenciado en
la cantidad de lodo generado, pues es
mucho menor en este último proceso.
Por esto, el método anaerobio se
considera el más ventajoso en el
tratamiento de aguas residuales de
mediana y alta carga orgánica [ CITATION
Lor05 \l 9226 ].
Los principales factores que afectan el
proceso de digestión anaerobia son: la
oxidación de reductores complejos
presentes en la materia orgánica, la
temperatura que debe ser superior a la
óptima para el resto de microorganismos,
el pH ácido para favorecer la
acetogénesis, alta salinidad para los
reductores de sulfato, y sustratos
preferentes como el metanol, las aminas
metiladas, y los compuestos metilados
de azufre [ CITATION Cas05 \l 9226 ].
Para la realización de esta práctica se
adicionaron varios componentes al
medio, donde se produjo la digestión
anaerobia en donde fue necesario
realizar el cálculo para la adición de
éstos, ya que la presencia de macro y
micro nutrientes es fundamental para el
desarrollo de las diferentes poblaciones;
este concepto se aplica al macro proceso
del tratamiento de aguas residuales
[ CITATION Ara04 \l 9226 ]. En la literatura
se reporta que es necesario adicionar los
compuestos del medio en las cantidades
adecuadas para que un sistema biológico
como estos funcione correctamente
[ CITATION Ara04 \l 9226 ].
Los compuestos que actúan como fuente
de energía para los metanógenos son
limitados, siendo el H2 y el CO2 los
sustratos que en su mayoría utilizan.
Aunque no se conoce el mecanismo que
acopla la síntesis de ATP con la
metanogénesis, se ha reportado que la
oxidación de hidrogeno tiene lugar en el
exterior de la membrana citoplasmática,
mientras que la reducción de CO2 ocurre
al interior [ CITATION Sta962 \l 9226 ].
Se reporta que el proceso de
metanogénesis a partir de materia
orgánica se presenta en dos fases, una
no metanogénica y una metanogénica.
En la primera los compuestos orgánicos
son degradados a unos más simples
como los carbohidratos, luego ocurre un
proceso de acidogénesis y
posteriormente los ácidos generados son
transformados en acetato, finalmente a
metano durante la fase metanogénica
[ CITATION Cen11 \l 9226 ]. En este caso,
se evidencia gráficamente que no se
presentó una fase no metanogénica,
debido a que en las gráficas 1 y 2 se
apreciaría una línea recta en el primer
momento del proceso que corresponde a
la hidrólisis y por el contrario, las gráficas
muestran una producción de metano
desde el inicio del proceso. Esto es
explicado por la adición de ácidos grasos
volátiles como sustrato, por lo que se
omitió dicho paso.
Para el cálculo de la AME se realizó el
promedio de las pendientes obtenidas en
la gráfica 2 y se obtuvo que el reactor 1
presentó una mayor velocidad en la
producción de metano. Este factor indica
la tasa máxima de DQO convertida a
metano por unidad de biomasa
expresada en sólidos suspendidos
volátiles por día, y depende de la
actividad metabólica del lodo [ CITATION
Sos13 \l 9226 ]. Los SSV están
relacionados directamente con la
biomasa y por su simplicidad el método
de medición de ésta como sólidos
suspendidos se ha generalizado en
diferentes áreas [ CITATION Con05 \l
9226 ].
CONCLUSIONES.
La realización del montaje de los
reactores permitieron obtener la actividad
metanogénica presente en los lodos
anaerobios de las comunidades, así
mismo, la variación de su materia
orgánica que influye en la degradación
de los residuos para producir metano;
éste compuesto se pudo evidenciar
mediante el volumen desplazado del
NAOH, gracias a la trampa de gas que
se utilizó.
En los ensayos realizados y teniendo en
cuenta la adición de los ácidos grasos
como sustrato, se presentó una mayor
producción de metano, ya que estos eran
el material a degradar en la obtención del
gas; Esto indica que los ácidos grasos
contribuyen a la formación de metano en
los ciclos biogeoquímicos llevados a
cabo por diversas especies de bacterias
y arqueas, por medio de sucesiones
biológicas que contribuyen al equilibrio
de los ecosistemas
En esta práctica también se evidenció el
papel fundamental que cumplen las
bacterias metanogénicas, gracias a la
capacidad que tienen de producir metano
con una gran variedad de sustratos,
considerándose así indispensables en la
degradación de la materia orgánica, lo
cual permite una estabilidad a nivel
industrial en el caso de las plantas de
tratamiento, ya que su componente
genera la energía necesaria para su
auto- sostenimiento.

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