COLUMNA DE WINOGRDSAKY

Diego López Lugo*, Juan Daniel Arias*, Vanessa Oviedo Gallego*.

RESUMEN

Este trabajo tuvo como objetivo lograr identificar los cambios físicos que sufre la
columna de Winogradsky en el tiempo (una de ellas expuesta a la luz y la otra
totalmente a oscuras) y su relación con la aparición de los diferentes grupos
microbianos, las condiciones que favorecen su desarrollo y los cambios químicos
que se producen como consecuencia de las transformaciones bioquímicas de los
diferentes metabolismos y su participación con los ciclos biogeoquímicos. En un
seguimiento de 10 semanas realizado en ambas columnas, se pudo evidenciar la
aparición de: organismos fotosintéticos, bacterias fermentadoras, sulfato
reductoras, oxidadoras del hierro, bacterias verdes del azufre y bacterias púrpuras
del azufre respectivamente.

Palabras claves: columna de Winogradsky, fotosíntesis, ciclos biogeoquímicos

INTRODUCCIÓN microecosistema o microambiente

que ilustra cómo los microorganismos
En la naturaleza, las fuentes de ocupan microespacios altamente
carbono y energía fluyen en ciclos de específicos de acuerdo con sus
tal manera que se determinan necesidades vitales, tales como:
complejas interacciones entre los requerimientos de carbono, energía y
organismos, tanto a escala oxígeno, así como la
macroscópica como microscópica. interdependencia, de forma tal que la
Fueron Sergei Winogradsky y actividad metabólica de un
Martinus Beijerinck, a finales del siglo microorganismo posibilita el
XIX y en la primera mitad del XX, crecimiento de otros y viceversa .
quienes desarrollaron una
representación sencilla y a escala de Las columnas de Winogradsky se
cómo se encuentra formado un preparan con muestras de suelo
ecosistema (columna de colectadas en ambientes húmedos,
Winogradsky) (1). las cuales son enriquecidas con
compuestos orgánicos e inorgánicos
El estudio de las comunidades y finalmente son expuestas a una
microbianas en condiciones de fuente de luz natural. En ellas se
laboratorio puede realizarse observa que después de 3 ó 4
fácilmente en una columna de semanas de incubación aumenta la
Winogradsky, la cual simula un

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia

cantidad de los distintos tipos de
microorganismos, mismos que de
acuerdo con sus características
fisiológicas se establecen en las
diferentes zonas a lo largo de la
columna, lo que se conoce como
sucesión. De esta forma, el resultado
es una columna estratificada (zonas
de diferente color) tanto en el suelo
como en el agua, donde cada estrato
se relaciona con un proceso químico-
biológico (2).
La columna representa un sistema
completo y autónomo. En la columna
se pueden diferenciar claramente tres
zonas que son:
a) Zona aerobia o superficial:
Como su nombre lo indica se
encuentra ubicada en la parte
superior de la columna y se
caracteriza por contener una alta
concentración de oxígeno y una muy
baja de azufre, en ella se puede
encontrar abundantes poblaciones de
bacterias de diferentes clases, que
generalmente se desarrollan en
regiones acuáticas ricas en materia
orgánica como arroyos poco
profundos y estanques. Muchas
especies son flageladas lo que les
permite moverse y establecerse en
diferentes zonas. A pesar de ser una
zona muy baja en concentración de
azufre, pueden llegar pequeñas
cantidades de H2S que permite el
desarrollo de bacterias que se
especializan en oxidar el azufre como
Beggiotoa sp. y Thiobacillus sp., que
además sintetizan el CO2
*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia
Se puede presentar la formación de
una biopelícula microbiológica que
se puede observar en las zonas
superiores formada principalmente
por cianobacterias dándole una
coloración verde y su principal
características es que realizan el
proceso de la fotosíntesis. A
continuación se describe la reacción
que se lleva a cabo en esta fase
aerobia.
CO2 + 2 H2O  (CH2O)n + H2O + O2
Fotosíntesis oxigénica
b) Zona microaerofílica:
Se caracteriza por presentar una
concentración parcial de oxígeno y de
azufre, en ella se desarrollan
principalmente los organismos
facultativos y donde podemos
encontrar algunas bacterias sulfatos
reductores y bacterias foto
heterótrofos como Rhodospirillum sp.
y Rhodospseudomonas sp. que no
se desarrollan bien en
concentraciones altas de H2S.
2 SH2+ O2 2 S +2 H2O Oxidadores
del azufre (quimilitotrofos)
SH2 +2 O2  H2SO4 Oxidadores del
azufre acidófilos (quimilitotrofos)
CO2 + 2 SH2 2 (CH2O)n + 2 S +
H2O Fotosíntesis anoxigénica
C) Zona anaerobia o inferior:
En esta zona se encuentra muy baja
concentración de oxígeno y en ella se
desarrollan diferentes tipos de
microorganismos que crecen en
condiciones anaerobias: los que
presentan respiración anaerobia y
fermentan la materia orgánica
degradándola de manera incompleta.
En la parte inferior de la columna se
desarrollan bacterias que necesitan
de una alta concentración de H 2S. La
coloración negra denota la presencia
de microorganismos sulfatos
reductores como por ejemplo el
Desulfovibrio sp., Desulfotomaculum
sp. ó Desulfomonas sp. (3). La
coloración es debida a la
precipitación de sulfuro de metales
pesados (hierro, manganeso), como
se explica en la siguiente reacción:
(CH2O)a + SO 42-+ 8 H+  3 (CH2O)b
+ CO2 + S2-+ H2O
Tabla sobre coloraciones y microorganismos que las
cusan en la columna
OBJETIVO:
Construir y analizar las columnas de
WInogradsky una expuesta a la luz y
la otra no.
METODOLOGÍA:
Se llenaron ¾ partes de dos
recipiente de plástico (botella de
plástico de gaseosa 2.5 L) de suelo
*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia
extraído del compost de la
universidad de Antioquia, pero para
ello fue necesario retirar la cobertura
vegetal y las piedras u objetos para
impedir la formación de burbujas , al
igual que homogenizar el lodo con un
poco de agua (se le agregó agua,
proveniente del lago del jardín
botánica, hasta que quedó con una
consistencia espesa); mientras se
realizaba la mezcla del suelo con el
agua, se le agregó 10 g de CaCO 3,
10 g de MgSO4 y 20 g de aserrín
mezclando. Luego se procedió a
llenar los recipientes compactando la
mezcla, después de haber llenado el
recipiente se le agregó agua hasta
alcanzar una altura de más o menos
de 5 a 8 cm de agua. Utilizando una
pinza se introdujeron varios
portaobjetos de forma perpendicular
en ambas columnas. A continuación,
se sellaron con papel vinipel para
evitar la vaporización del agua. Una
de las columnas se cubrió con papel
aluminio para evitar la penetración de
luz. La otra se colocó en presencia de
una luz artificial. Ambas se incubaron
a condiciones normales durante 9
semanas.
 Tabla de resultados: Seguimiento semanal de la columna de Winogradsky
** SEMANAS COLUMNA CON COLUMNA SIN MONTAJE EN MONTAJE EN
LUZ LUZ FRESCO,  PLACA A FRESCO, PLACA A
40X y 100XDE LA 40X y 100X DE LA
COMUNA CON LUZ COMUNA SIN LUZ

SEMANA 1 Se observa Producción de Se observan Se observaron

(25-07-14) producción de gas (la tierra presencia de microalgas, bacterias,
gas, no hay se desplazó) microalgas, muy paramecium y
cambios de color, no hay pocos protozoos de euglenas, estas dos
no desprende cambios de tamaño muy últimas no  en gran
olor. color, el agua pequeño. cantidad.
se encuentra Tinción de Gram: No Tinción de Gram: No
turbia y no se realizó re realizó
desprende
ningún olor.

SEMANA 2 Se observa poca Producción de Se observa presencia Abundancia de

(01-08-14) producción de gas gas en la zona de microalgas, protozoos y
en la zona microaerofílica, algunos protozoos. nematodos, al igual
microaerífilica , mas no hubo Tinción de Gram: que microalgas.
además, la cambios de No se identificaron Tinción de Gram:
aparición en la color, sin estructuras claras. No se identificaron
parte anóxica de embargo el agua estructuras claras.
algunas manchas se encuentra un
verdes hacia el poco más turbia,
lado que da la luz , porque se
en la zona encuentra
microaerofílica no pantanosa.
hay ningún
cambio, en la zona
aerobia se nota
turbidez y olor
normal a tierra
húmeda.

COLUMNA CON COLUMNA SIN MONTAJE EN MONTAJE EN

LUZ LUZ FRESCO,  PLACA A FRESCO, PLACA A 40X
40X y 100X DE LA y 100X DE LA
COMUNA CON LUZ COMUNA SIN LUZ

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia

SEMANA 3 Parte anóxica Producción de Microalgas Muchos protozoos más
(08-08-14) poca gases zona filamentosas, grandes, flagelados y
producción de microaerofílica, nemátodos, protozoos otros pequeños, algas
gas, muchas No hay cambios en mayor proporción, pluricelulares, alta carga
manchas de color, el biopelicula de algas, bacteriana.
verdes (hacia el agua se diatomeas,filamentosas Tinción de Gram: No se
lado dirigido a encuentra muy con septos, observa ninguna
la luz) por el turbia, mucho Rhodophytas. estructura con claridad,
otro lado no se lodo, el suelo Tinción de Gram: solo manchas rosadas.
observan empezó Bacilos gram (+).
cambios de absorber agua.
color. En la
parte
microaerofílica
hay otras
manchas
verdes de
mayor
proporción con
otro tono verde
más claro. El
agua se
encuentra
mucho más
turbia hay
burbujas y olor
a tierra.

SEMANA 4 Puntos verdes Se perdió casi Abundancia de Se observaron pocos

(15-08-14) alrededor de toda el agua de protozoos, ramillete de protozoos nadando
toda la zona la superficie, no algas filamentosas, rápidamente y
anóxica, en la se observan diatomeas. presencia de materia
parte donde no grandes Tinción de Gram: orgánica.
hay luz también cambios, se bacilos gram (+). Tinción de Gram:
mayormente en percibe olor cocos gram (+)
la parte que desagradable y
recibe luz, hay hay gran
producción de producción de
azufre por el gas y
olor, presencia desplazamiento
de hierro del suelo.
(aparición de
manchas
negras) en la
parte inferior y
una sola
mancha en el
centro de la

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia

 columna, el
agua esta turbia
y con burbujas

COLUMNA CON COLUMNA SIN MONTAJE EN MONTAJE EN FRESCO,

LUZ LUZ FRESCO,  PLACA PLACA A 40X y 100X
A 40X y 100X DE DE LA COMUNA SIN
LA COMUNA CON LUZ
LUZ

SEMANA 5 Poca producción Escasa agua Se observan algas Presencia de mucha

(22-08-14) de gas, partes en la superficie filamentosas, materia orgánica y
verdes más de la columna, diversidad de protozoos.
uniformes en toda olor protozoos y Tinción de Gram : cocos
la columna en la desagradable, nematodos. gram (+) y gram (-)
parte inferior, en no hay Tinción de Gram: Se
la parte media se cambios de observan microalgas
encuentran color, hay teñidas y bacterias
manchas como producción de gram (+) y gram (-)
amarillas y gas y
blancas, negras y desplazamient
diversidad de o de tierra
verdes, olor
desagradable, en
la parte superior
se empiezan a
formar
biopeliculas, el
agua permanece
bastante turbia
casi pantanosa.

SEMANA 6 Diversidad de Hay olor a Se identifican gran Se observan pocos

(29-08-14) manchas verdes podredumbre, abundancia de nematodos y mucha
y amarillas, en la gran cantidad microalgas, algas cantidad de materia
parte inferior de burbujas, no filamentosas y gran orgánica.
parches verdes hay cambios de cantidad de Tinción de Gram: no se
pequeños al igual color, pantano protozoos. logra evidenciar
que manchas en la parte Tinción de Gram: se estructuras claras
naranjas y pocas superior observan bacilos
manchas negras, gram (+)
en la parte media
verde muy
intenso y grandes
parches,
manchas blancas,
amarillas y

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia

 naranjas, en la
parte superior
gran producción
de gas, parches
verdes y una gran
mancha negra (se
cree q es hierro).

SEMANA 7 Manchas verdes No se observan Presencia de gran Gran cantidad de materia

(12-09-14) predominantes, en general variedad de algas orgánica , presencia de
manchas cambios filamentosas y nemátodos y rotiferos,
pequeñas negras aparentes protozoos. Tinción de Gram: bacilos
y blancas en la significativos. Tinción de Gram: gram (+)
zona anaerobia Stafilococos gram
presencia de un (+), bacilos gram (+).
pequeño punto
rojo, en la zona
microaerofílica
manchas verdes
metálicas, la
mancha negra se
ha extendido,
presencia de
burbujas y
producción de
gas, formación de
biopelicula en
toda la superficie
de color verde y
presencia de
poca agua

COLUMNA CON COLUMNA SIN MONTAJE EN MONTAJE EN FRESCO,

LUZ LUZ FRESCO,  PLACA PLACA A 40X y 100X DE
A 40X y 100X DE LA COMUNA SIN LUZ
LA COMUNA CON
LUZ

SEMANA 8 Manchas blancas y Olor a Se observa en el Presencia de

(19-09-14) amarillas desde la pantano, biofilm una gran nemátodos, pocos
mitad hacia abajo, burbujas, poca cantidad de protozoos y materia
aparición de cantidad de microalgas orgánica.
manchas negras agua entrerolladas
abajo, parte disponible Se observan stafilo
microaerofílica cocos gram +
mancha negra
grande
permanente,

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia

 manchas verdes y
producción de gas
parte superior
biopelicula, poca
agua, producción
de gas (el ciclaje de
O es menos sin
agua y desde ahí
empezó aparecer la
mancha negra).

SEMANA 9 En la parte Se mantuvo Poca presencia de Presencia de nemátodos,

(03-10-14) anóxica formación igual, mucha protozoos de gran pocos protozoos y
de una mancha producción de tamaño y materia orgánica.
negra, está casi gas y el agua microalgas
en su totalidad de se secó casi filamentosas
color verde, en la totalmente Tinción de Gram:
parte No se realizó por
microaerofílica hay falta de tiempo.
presencia de
manchas blancas
y se redujo la
mancha negra,
hay también
presencia de
manchas verdes
oscuras, hay
aparición de una
mancha
roja/púrpura
pequeña, en la
parte aerobia hay
manchas verdes
oscuras y el agua
se secó por
completo.
**Nota: las semanas no corresponden a las semanas consecutivas sino a las de lectura

DISCUSIÓN.

La Columna de Winogradsky es una necesidades vitales (requerimientos

demostración clásica de cómo los de carbono y energía) y que, además,
microorganismos ocupan ilustra cómo diferentes
"microespacios" altamente microorganismos desarrollan sus
específicos de acuerdo con sus ciclos, y la interdependencia que llega
tolerancias medioambientales y sus a existir entre ellos (4)

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia


En las primeras semanas se hizo
evidente la producción de gas, sin
ningún cambio de color aparente y
esto debido a que en un inicio la
concentración de microorganismos es
baja ya que se encuentran censando
el medio, esta  producción de gas se
da mediante las bacterias
quimiorganotrófas y aneróbicas pues
son capaces de utilizar polisacáridos,
sulfatos e hidrógenos para producir
dióxido de carbono, como lo indica la
siguiente reacción:
(CH2O)2+ SO4 -2+ 8 H+ à3 (CH2O) +
CO2+ S-2+ H2O, este CO2 asciende
por la columna generando grietas por
su desplazamiento (5). El agua en las
primeras semanas se tornó turbia
debido a que esta contiene
abundantes poblaciones de
microorganismos aerobios, que
aparecen normalmente en hábitats
acuáticos ricos en materia orgánica
(estanques poco profundos,arroyos,
etc.). Observando en el microscopio
con el objetivo de 40X, realizando
una muestra en fresco  en la
columnas con y sin luz  se pudo
observar  microorganismos flagelados
como protozoos, lo que les permite
moverse a través de este afluente y
establecerse en nuevas áreas, así
como microorganismos fotosintéticos
como microalgas y cianobacterias,
estos  organismos fototróficos  se
desarrollaron en la columna sin luz
puesto que lograron utilizar la materia
orgánica presente en el medio como
fuente de energía y de carbono (6).
En las observaciones  tinción de gram
utilizando el objetivo de 100X
reportadas en la tabla de resultados
para las semanas de la 1-5  en la
columna con luz se describieron
bacilos gram positivos, pues algunos
géneros que presentan esta tinción
*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia
son de vida libre y es muy usual que
se encuentren en suelos y aguas (7).
La columna con luz  se tornó de color
verde bastante rápido debido al
crecimiento de las bacterias verdes
del azufre, las cuales presentan un
sistema  fotosintético diferente a las
bacterias púrpuras, en primer lugar
este no se encuentra en
invaginaciones de la membrana sino
en vesículas, denominadas
clorosomas, localizadas debajo de la
membrana citoplasmática. los
clorosomas contiene bacterioclorofila
c,d o e, la proporción entre la
bacterioclorofila de las vesiculas y la
bacterioclorofila de lo centros de
reacción es de 1 a 1000, mucho más
alta que en el caso de las bacterias
púrpuras, por tanto los clorosomas
son captadores de luz muy eficientes
de luz, incluso en condiciones de
iluminación muy débil,(8)  por lo que
se le facilitaba crecer en las
condiciones dadas cosa que no pasa
con las púrpuras del azufre, esta es la
reacción de las bacterias del azufre
6CO2 + 6H2S -> C6H12O6 + 6S.
En la parte acuosa de ambas
columnas siempre se observó la
presencia de organismos
fotosintéticos (ver tabla de
resultados), microalgas de gran
variedad y en bastante cantidad,
cianobacterias las cuales en la
columna expuesta a la luz terminaron
alrededor de la semana 5  por formar
una capa superficial de color verde
brillante llamado biofilm adherido a la
superficie en una interfase sólido/
líquida, el cual representa una
antigua estrategia de supervivencia
procariótica. Esto debido a que las
bacterias logran ventajas
significativas al proporcionarles los
biofilms protección frente a sulfuro de hidrógeno. Este sulfuro de
fluctuaciones medioambientales de
humedad, temperatura y pH, al igual
que concentrando nutrientes y
facilitando la eliminación de
desechos(9).  Los organismos
fotosintéticos a su vez usan el agua
como cedente de electrones con
liberación de oxígeno molecular, por
ende se produce una zona oxigénica.
La presencia y variedad de protozoos
flagelados en su mayoría también fue
constante a lo largo de todas las
observaciones , en un principio los
protozoos se encontraban en pocas
cantidades y eran de tamaños
pequeños, al paso de los días el
volumen se incrementó ya que
encontraron las condiciones óptimas
para su desarrollo pues  se alimentan
de bacterias, productos de desecho
de otros organismos, algas y otros
protozoos, en las últimas
observaciones se encontraban en
poca cantidad ya que el agua de la
columna especialmente la que no se
encontraba expuesta a la luz se
perdió por completo.
A partir de la semana 5 hasta el final
de la práctica hubo aparición de una
mancha negra, esto indica presencia
de bacterias sulfato reductoras, estas
bacterias pueden utilizar
subproductos de la fermentación para
su respiración anaerobia, usando
sulfato, u otras formas parcialmente
oxidadas de azufre como el tiosulfato,
generando grandes cantidades de
HIPÓTESIS:
Los  microorganismos obtienen el C
de compuestos orgánicos y además
estos aportan la energía necesaria
para el metabolismo celular.  Los
*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia
hidrógeno reaccionará con cualquier
compuesto férrico presente en el
sedimento, produciendo sulfuro
ferroso, que da color negro (10).
En la columna se presentaron
algunas manchas blancas en la
semana 5 hasta la última semana que
se le hizo el seguimiento, esto pudo
haber ocurrido  porque el carbonato
de calcio CaCO3 es una sal
sumamente insoluble, por lo que
precipitan fácilmente, este calcio se
puede determinar de manera visual,
debido a l color blanco/amarillo que
puede formar (11).
Con respecto a la observación de la
última semana en la zona anóxica de
la columna expuesta  a la luz se
evidenció un cambio importante una
mancha roja aunque no en gran
proporción, esto es evidencia de la
presencia de las bacterias
rojas/púrpuras del azufre las cuales
utilizan el H2S presente en la
columna y lo transforman en S° el
cual lo almacenan al interior de la
célula, la aparición de estas bacterias
tardó en evidenciarse mucho más
que otras ya que su crecimiento
normalmente es lento pues la
bacterioclorofila a que poseen es
almacenada dentro de la célula y les
cuesta más captar la luz para realizar
su fotosíntesis anoxigénica, donde el
SH2 sustituye al agua y se produce S
elemental (12).
microorganismos difieren tanto en
número como en la clase de
compuestos orgánicos que pueden
usar como fuente principal de
energía.  Se esperará que en la
columna  con fuente de carbono
glucosa monosacárido de 6 carbonos cambios en la coloración y de
crezcan más rápidamente las la columna mientras que en la
bacterias anaerobias ( su ubicuidad oscura no se logró evidenciar
es en la parte baja de la columna, es un gran cambio.
decir, la zona anóxica)  a diferencia - El oxígeno juega un papel
de la columna que contenga como muy importante en la columna
fuente de carbono la celulosa un debido a que propicia la
biopolímero pues esta molécula tiene creación de microambientes
una estructura más compleja a que favorecen o no el
comparación de la glucosa, por lo crecimiento de algunos
tanto en la columna que contiene la organismos
fuente de carbono la celulosa se - La fuente de carbono no limitó
tardará en evidenciar tal vez varias el crecimiento de los
semanas  los metabolitos de microorganismos que por su
respuesta al catabolismo de celulosa fisiología requieran de
los cuales se registrará  con un compuestos orgánicos para
cambio de coloración en las llevar a cabo procesos
columnas. metabólicos de obtención de
energía, esto, lo pudimos
La hipótesis no se rechaza, ya que comprobar con la columna A,
haciendo registro de visualización de pues, aunque predominaron
las diferentes columnas, se evidenció las bacterias verdes, purpuras
un cambio de color en la zona de y rojas del azufre, estas, no se
fermentación en las columnas que hubieran desarrollado si un
tenían fuentes de carbono más grupo de bacterias (levaduras)
sencillas para hidrolizar, sin embargo como sulfato reductoras, o
en todas las columnas hubo fermentadoras hubieran
crecimiento en la zona fermentativa. excretado al medio sus
compuestos metabólicos.
- La producción de gases jugo
CONCLUSIONES un papel importante en la
estabilidad que tenía el suelo
- Es importante realizar este de la columna y el agua que se
tipo de simulaciones de encontraba en la superficie de
reacciones que se dan en esta.
ambientes naturales en el
laboratorio, para así
comprender como lo que
producen algunos organismos
pueden beneficiar o no a otros.
- En las comparaciones
realizadas entre la columna
con luz y sin luz se evidencia
que, la luz es un gran
catalizador de las reacciones
biológicas, ya que en la con luz
se evidenciaron grandes

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia

ANEXOS

NOTA:
No hay material fotográfico de todas las semanas debido a la pérdida del celular con la que se habían tomado.
Semana 3

A B C D
En las imágenes A,B,C y D se observa la columna de Winograsky en la semana 3, se observa como ha tomado un color verde en casi toda la marte microaerofilica

N F

En las imágenes N y F se observa la columna sin luz en la semana 3 como se observa no ha habido cambio en comparación a la semana anterior

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia

BIBLIOGRAFIA

(1). Zafra. O, Ecosistemas en una probeta (en línea). Protected by DMRights. México, 11 de febrero de 2011.Disponible
en:http://www.madrimasd.org/blogs/biocienciatecnologia/2008/02/22/85149

(2). Sagardoy. M, Mandolesi E. Biología del suelo. 2006. Págs. 76 - 79 . Disponible en:
http://relacionadoconlaciencia.blogspot.com/2012/08/columna-de-winogradsky.html

(3)Salazar. G, Muñoz. M, Pérez. M. Columna de Winogradshy. Adison Wisly. Cuarta edición disponible en:
http://www.academia.edu/8201405/COLUMNA_DE_WINOGRADSKY_1

(4). J. Passarge and J. Huisman, Encyclopedia of Ecology. Elsevier, 2008, pp. 2328–2334.

(5). Fonte, A. Manual de ecología microbiana, 2010, pp. 1-6. Disponible en:
            https://es.scribd.com/doc/59281261/Columna-de-Winogradsky

(6). Martinez. A, Puesta en marcha de un cultivo de microalgas para la eliminación de nutrientes de un agua residual
urbana previamente tratada  anaeróbicamente.  Universidad politécnica de Valencia , 2011. Disponible en:
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/12831/Ruiz%20Martinez%20Ana%20-%20Tesina%20Fin%20Master%20-
%202011.pdf?sequence=1

(7). Trejo, K. Práctica: estudio de la diversidad en un microambiente .Manual de laboratorio de microbiología

experimental, facultad de química UNAM. 2011. Disponible en:
           https://es.scribd.com/doc/137854396/Practica-Diversidad-Microbiana

(8). Pares Ramon; Juárez Antonio; Bioquimica de los microorganismos; ED. Reverte; 2002; pag 311

(9). Julio Nazar C.Revisión bibliográfica Biofilms bacterianos. Revista scielo 2007. Consultado en línea octubre de 2014.
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0718-48162007000100011

(10). Moreno. R,  Gortii. M, Flores. M, Albarracín .V, (2012). Microbiología ambiental y ecología microbiana en el estudio
de microorganismos en ambientes extremos.  Revista REDUCA. página 94-119.

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia

(11). Filtros y equipos S.A.Precipitación del calcio y el magenesio. Precipitación química. Disponible en :
        http://filtrosyequipos.com/GUEST/sanitaria/calsodaash8.pdf

(12). Julio Ricardo Moreno. Marta Fabiana Gorriti. María Regina Flores. Virginia Helena Albarracín. Microbiología
ambiental y ecología microbiana en el estudio de microorganismos en ambientes extremos. Reduca (Biología). Serie
Microbiología. 5 (5): 94-109, 2012.

*Estudiantes de Microbiología Industrial y Ambiental Universidad de Antioquia