UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

E.A.P. DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

ASIGNATURA
Fisiología y genética bacteriana

TRABAJO DE PRÁCTICA
Fototrofia: Columna de Winogradsky y reconocimiento de las
poblaciones bacterianas.

INTEGRANTE
Morales Hilario, Brenda Katerin

ASESOR
Zavaleta Verde, Edgar David

CICLO
VI – Sección “B”

TRUJILLO – PERÚ

2022
 FOTOTROFIA: COLUMNA DE WINOGRADSKY Y RECONOCIMIENTO
DE LAS POBLACIONES BACTERIANAS.

I. INTRODUCCIÓN

Sergio Winogradsky, inventó un método mediante el cual se logró estudiar una variedad
de procesos microbianos a nivel de laboratorio, este microbiólogo Ruso utilizó esta
columna por primera vez con la finalidad de estudiar los microorganismos procedentes
del suelo. Este método consiste básicamente en una columna o tubo de vidrio con
material acuático, que se encuentra suplementado con distintos compuestos químicos
necesarios para el crecimiento de los microorganismos. (Madigan et al., 2000)

La sucesiva oxidación de la superficie de la tierra presenta analogía con respecto al

orden de la formación de capas microbianas que se van formando en esta columna, es
decir, de la parte inferior hasta la superior (Bacchetti et al., 2015). En la zona inferior
se logra visualizar las bandas de los microorganismos anaerobios, considerado el
ambiente reductor, y en la zona superior se ve el crecimiento de los microorganismos
aerobios, llamado ambiente oxidante.( Marcelo & Sagardoy, 2013)

Las algas verdes azuladas, también llamadas cianobacterias son organismos que
realizan una fotosíntesis oxigénica esto quiere decir que es productora de oxígeno.
Además, se encuentran en distintas condiciones ambientales, desde aguas naturales,
como el suelo, mares o incluso líquenes. Estos llegan a utilizar el agua como fuente de
electrones, logrando la realización de reducción de 𝐶𝑂2 . Este produce ATP a través de
la fotofosforilación, pero utiliza los compuestos orgánicos para obtener átomos para
construir sus estructuras y otras biomoléculas. (Roset et al., 2001)

Cuando la columna se expone a la luz solar o la luz proporcionada por la incandescencia

de un filamento de tungsteno de una bombilla, la abundancia de luz roja e infrarroja es
absorbida por las clorofilas y bacterioclorofilas, desarrollándose las poblaciones de
microorganismos fotosintéticos. En una columna de Winogradsky el fenómeno ocurre
a escala local y en poco tiempo, lo mismo ha sucedido a escala global a lo largo de los
tiempos geológicos. (Schlegel & Zaborosch , 1993)

II. OBJETIVOS
• Preparar una columna de Winogradsky.
• Extraer muestras a distintos niveles de la columna para describir las
características de la composición bacteriana.
 • Comparar la distribución bacteriana que se establece en la columna con los
• requerimientos de carbono, energía, oxígeno y tipo de metabolismo.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1. Materiales
3.1.1. Material biológico
- Lodo de pozo de oxidación.

3.1.2. Material de laboratorio

- Tubos de ensayo
- Gradilla
- Mechero
- Lamina porta objeto
- Asa bacteriológica
- Encendedor
- Set de coloración Gram (Cristal violeta, Lugol, alcohol acetona y
Safranina)

3.1.3. Equipos
- Microscopio

3.2. Método
Se llenó las columnas (tubos de ensayo) con lodo de la laguna de oxidación hasta
las ¾ partes de esta y completó el llenado con agua de la misma laguna. Se tapó,
selló, y rotuló, posteriormente se registró el aspecto inicial de la columna (color del
sedimento y del líquido). Luego se incubó a temperatura ambiente (25 a 30°C)
cerca de una ventana para que reciba iluminación de luz natural o artificial, por 2 a
3 semanas.

Para el monitoreo se observó la columna y registró el aspecto final de la columna

(color del sedimento y del líquido) respecto al aspecto inicial. Sucesivamente se
extrajo muestras de la parte superior (zona superficie), media e inferior (zona más
profunda) de la columna. Finalmente se procedió a hacer frotis y coloración
(Gram)- Por último, se observó al microscopio y se registró las diferentes
poblaciones bacterianas.
IV. RESULTADOS

Figura 1. Antes/ despues/ producción de gas

Figura 2. Cianobacterias 100 x

Figura 3. Figura 3. Célula microbiana (coloración gram)

Figura 4. Superficie: bacilos gram positivos (100x)

Figura 5. Parte Media: formas bacilares.

V. COMENTARIO
Los procesos de descomposición, en la zona anóxica, en el lodo conducen a la
producción de ácidos orgánicos, alcoholes y protones, que se evidencia el sustrato de
color negro intenso por la descomposición de dichos sustratos que a su vez es adecuado
para las bacterias reductoras de sulfato. Citando a Madigan el sulfuro generado por los
reductores de sulfato provoca el desarrollo de bacterias púrpuras y verdes del azufre
(fotótrofos anoxigénicos), que utiliza el sulfuro como donador de electrones para la
fotosíntesis; provoca la pigmentación en los sedimentos debida a la precipitación de
sulfuro de metales pesados como hierro, manganeso, entre otros. En la parte superior
de la columna, cuando la producción de sulfuro de hidrógeno no es muy abundante, se
desarrolla toda una variada comunidad microbiana caracterizada por cianobacterias y
microalgas, que determinan la producción de oxígeno en su entorno más
inmediato.(Pacheco et al., 2012)

La evidencia del consumo del sustrato se denota por la presencia de halos alrededor de
las colonias, esto a la vez es por la adición de carbonato de calcio que actúa como fuente
carbonada con producción de ácido acético, el cual disuelve al carbonato de calcio.
Otros medios con los cuales se puede desarrollar estos organismos son el medio GYC,
el medio Manitol, el medio Agar Carbonato. (Atlas y Bartha, 2005)
En la zona media pueden desarrollarse aquellas bacterias púrpuras que no utilizan el
azufre, principalmente las especies de los géneros Rhodospirillum y
Rhodopseudomonas. Su mayor o menor abundancia dependerá de la cantidad de sulfuro
de hidrógeno que se haya producido y de la cantidad no utilizada por otros organismos,
que difunda hacia arriba, debido a que su presencia inhibe a estas bacterias. Son
anaerobios fotoorganótrofos, es decir, sólo pueden realizar la fotosíntesis en presencia
de una fuente de carbono orgánico. (Atlas y Bartha, 2005)
La fase inferior o fango, de color negro intenso, denota la presencia de microorganismos
anaerobios que utilizan la luz infrarroja y reducen el sulfato, este es el caso de los
géneros Desulfovibrio, Desulfotomaculum o Desulfomonas. La coloración se debe a la
precipitación de sulfuro de metales pesados como el hierro y el manganeso. (Atlas y
Bartha, 2005)
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Marcelo, A.; Sagardoy; E. (2013). Biología del suelo, guía de estudio. Editorial de la
Universidad Nacional del Sur.

Roset J, Aguayo S, , Muñoz M. J. (2001). Detección de cianobacterias y sus toxinas.

Una revisión. Revista de Toxicología [Internet]. 18(2):65-71. Recuperado de:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=91918202

Madigan M, Martinko J, Dunlap P, Clark D. (2000). Biología de los microorganismos.

12va edición. Ed. Pearson Educación, S.A., pp. 723-725.

Bacchetti, T., Barroeta, B., & Esteve Nuñez, A. (2015). La columna bioelectrogénica:
una herramienta para introducir conceptos de ecología microbiana y electroquímica en
la educación secundaria. Revista Eureka sobre Enseñanza y Divulgación de las
Ciencias, 12(3),529-535.

Madigan, M. (2004) “Brock: Biología de los microorganismos.” 10ª Edición. Editorial

Pearson/Prentice Hall.

Schlegel HG, Zaborosch C. (1993) General microbiology. Cambridge University Press,

UK.

Atlas, R.M. y Bartha, R. (2005) Ecología microbiana y microbiología ambiental. 4ª

edición. Ed. Addison Wesley.

Pacheco, J., Maldonado, M., & Peña, J. (2012) Metabolismo del azufre de aislados
bacterianos provenientes de un humedal artificial empleado para el tratamiento de
efluentes de la industria curtidora. Revista Internacional de Contaminación Ambiental,
28 (3),195-201.
ANEXO

Figura 2.- Dibujo esquemático de la construcción de una columna de Winogradsky

Tabla 1.- Cuadro de identificación de potenciales microorganismos en base a la

coloración de los estratos.

COLOR MICROORGANISMOS

Verde Algas y Cianobacterias

Rojo/Marrón Cianobacterias o Tiobacilos

Rojo/Púrpura Bacterias púrpuras no del azufre

Blanco Bacterias sulfo-oxidadoras

Rojo/Púrpura Bacterias púrpuras del azufre

Verde verdes del azufre

Negro Bacterias sulfo-reductoras o

fermentadoras