MANUAL DE PRACTICAS DE BIOQUÍMICA R.

Navarro
B. Mestas
G. Sucasaca
F. Romero

PRACTICA N° 4

EXTRACCION DE ÁCIDOS NUCLEICOS

Los ácidos nucleicos son polímeros de nucleótidos unidos por enlaces fosfodiéster. Por su
composición química, los ácidos nucleicos se han clasificado en dos tipos: el ácido desoxirribonucleico
(DNA) y el ácido ribonucleico (RNA). Los nucleótidos que forman el DNA están constituidos por el
azúcar 2-desoxirribosa unido mediante un enlace glucosídico a una base nitrogenada (adenina,
guanina, timina, citocina), las cuales a su vez forman dos cadenas de polímeros generando una
molécula de doble hélice. Los nucleótidos de RNA se encuentran formados por el azúcar ribosa que se
une con enlace glucosídico a una base nitrogenada (adenina, guanina, uracilo y citocina) formando
moléculas de una sola cadena.

La función del DNA es la de almacenar y transferir la información genética que constituye a un

organismo y a su descendencia. El genoma de un individuo comprende la totalidad de la información
genética contenida en el DNA. El DNA junto con los tres tipos de RNA (rRNA, tRNA y mRNA) participa
en la biosíntesis ordenada de los componentes de la célula codificando la expresión espacio-temporal
de las proteínas respondiendo a los estímulos del medio ambiente.

El genoma se encuentra organizado en forma diferente en las células procariotas y eucariotas,

presentándose en estas últimas un mayor grado de complejidad. El genoma de las células procariotas
es una sola molécula de DNA circular, dispuesto de modo compacto en una zona nuclear denominada
nucleoide.

El genoma de las células eucariotas se encuentra organizado en cromosomas, los cuales son
estructuras del DNA asociados a proteínas básicas denominadas histonas y proteínas no histonas; las
histonas están cargadas positivamente a pH fisiológico y neutralizan las cargas negativas del fosfato de
los nucleótidos, lo cual confiere estabilidad y permite el empaquetamiento del DNA en el núcleo.

Según el tipo de célula en estudio, el aislamiento de los ácidos nucleicos requiere el romper la
membrana y la pared celular mediante el empleo de métodos físicos, químicos o enzimáticos con el fin
de liberar las moléculas de DNA al medio extracelular. Posteriormente, realiza la purificación de los
ácidos nucleicos extrayendo las proteínas y los lípidos con solventes orgánicos, para finalmente
recuperarlos mediante la precipitación con alcohol (isopropanol o etanol).

PARTE EXPERIMENTAL

EXPERIMENTO N° 1. EXTRACCION DE DNA DE ALETAS DE PESCADO

1. Ingrese al siguiente enlace: https://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=77&sim=218&cnt=2129
2. Esquematice lo observado

EXPERIMENTO N° 2. EXTRACCION DE DNA A PARTIR DE BULBO DE CEBOLLA

Material
Rallador
Probetas
Gasa
Vasos de precipitados de 250 ml
Varilla de vidrio o cuchara descartable
Cebolla mediana
Solución de lisis (mezclar 0.1% de dodesilsulfato de sodio (detergente SDS) en 25
mmol/L de EDTA pH 8.0)
Alcohol etílico frío al 95%

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Procedimiento
1. Tener en cuenta que este experimento lo realizará en casa. La solución de lisis
puede ser reemplazada por lava vajilla, champú o detergente. El alcohol debe
ponerlo en el congelador para poder usarlo.
2. Descascarar una cebolla de tamaño medio
3. Rallar la cebolla con un rallador común. Es importante que no haya grandes
pedazos de cebolla.
4. Pesar unos 10 g de cebolla rallada y adicionar 10 ml de la solución de lisis.
5. Dejar la mezcla a temperatura ambiente por 10 a 20 minutos.
6. Filtrar la suspensión a través de una doble capa de gasa, y recoger el filtrado en
un vaso de precipitado.
7. Adicionar 2 volúmenes de etanol frío al 95%, procurando no mezclar las dos
soluciones. Observar en la interface, la formación de un precipitado blanquecino.
Con la ayuda de una varilla de vidrio o una cuchara descartable enrollar o recoger
el material blanquecino.
8. Esquematice lo realizado.

EXPERIMENTO N° 3. EXTRACCIÓN DE DNA DE FRUTOS EMPLEANDO UN

MÉTODO CASERO
Materiales
Bolsas tipo ziploc
Filtros para café o gasa
Recipiente de colecta de 200 ml
Tubos tipo Falcón de 50 ml
Embudo
Probeta de 100 ml
Frutos frescos o congelados (fresa y/o kiwi)
Buffer de lisis casero (para 100 ml, mezclar 10 ml de shampoo Pantene Pro-V u otro,
¼ de cucharada de sal común y 90 ml de agua).
Alcohol al 95% (adquirido en la farmacia).

Procedimiento
1. Preparar 100 ml de buffer de lisis casero.
2. Colocar el fruto en una bolsa tipo ziploc, cerrarla muy bien y triturar el tejido hasta
homogenizar la muestra.
3. Agregar 10 ml del buffer de lisis a la bolsa.
4. Continuar triturando por 2 minutos más.
5. Pasar el contenido de la bolsa al filtro de café o gasa para separar el tejido triturado
y obtener la fase líquida en un recipiente de 200 ml. Filtre la muestra por lo menos
10 minutos.
6. Colocar 25 ml de la fase líquida filtrada en un tubo tipo Falcón de 50 ml, y agregar
25 ml de etanol al 95% frio.
7. Esperar unos minutos a que precipite el DNA.
8. Recuperar el DNA con ayuda de una varilla de vidrio. Colocar la madeja de DNA
en un tubo tipo eppendorf de 1.5 ml que contenga 50-100 µl de agua destilada.
9. Esquematice lo realizado.

CUESTIONARIO
1. Investigue la composición química de las sustancias que utilizó en la práctica, y
explique detalladamente ¿Por qué fue posible realizar la extracción de DNA con
dichas sustancias?

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2. Además del shampoo ¿Qué otras sustancias podemos emplear en métodos

caseros de obtención de DNA?

3. Para la extracción de DNA se puede utilizar proteinasas?. Si su respuesta es

afirmativa, explique a que componente podría reemplazar o en que paso sería
apropiada utilizarla durante la extracción de DNA.

4. ¿Qué condiciones físicas conducen a la desnaturalización del DNA?. ¿Por qué se

observa un incremento en la absorción de luz UV (efecto hipercrómico) al
desnaturalizarse el DNA?