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Manual de Practicas
Manual de Practicas
MANUAL DE PRÁCTICAS DE
LABORATORIO
SERIE BLANCA
ELABORÓ:
Serie Blanca 1
Facultad de Bioanálisis, Veracruz Manual de Prácticas de Hematología
VENTAJAS.
Facilidad
con que puede obtenerse
Especialm
ente útil en pacientes geriátricos y en niños, en particular, recién nacidos.
DESVENTAJAS.
Sólo logra
obtenerse una pequeña cantidad de sangre que puede ser insuficiente.
Es un
método por lo general tardado y que tiende a provocar hemólisis de la muestra
En pacientes inmunocomprometidos puede provocar infecciones, excepto cuando se
realiza la punción después de 8 a 10 min. de contacto con la piel con un buen
antiséptico.
VENTAJAS.
Nos permite hacer múltiples exámenes y en repetidas veces si se desea, con la misma
muestra.
Las alícuotas de plasma y suero pueden congelarse para futura referencia.
DESVENTAJAS
Puede provocar la coagulación de la sangre si el procedimiento lleva mucho tiempo.
Algunos componentes no son estables en sangre anticoagulada.
Puede dificultarse en niños, pacientes obesos ó en estado de shock.
Puede ocasionarse hemólisis de las muestras afectando ciertas determinaciones, por
las siguientes causas:
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Anticoagulantes Empleados.
Estas sustancias impiden la formación de coágulos. El mecanismo por el que se evita la
coagulación, varía según el anticoagulante; por ejemplo, EDTA, citrato y oxalato se unen con
el calcio, mientras que la heparina impide la conversión de protrombina en trombina.
Ejemplos de anticoagulantes son EDTA, citrato de sodio, y heparina en forma de sal de
litio ,Los tubos deben invertirse varias veces para asegurar la mezcla adecuada después e
la recolección, de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
El sitio más práctico para obtener sangre venosa es la flexura anterior del brazo, de
preferencia justo por arriba de alguna de las ramas venosas que allí se encuentran. Las
venas superficiales de la cara anterior del antebrazo son las más comúnes para la
venopunción. Las tres venas principales que se utilizan son:
1) vena cefálica, ubicada en la parte superior del antebrazo y del lado del pulgar de la
mano; 2) vena basílica, ubicada en la parte inferior del antebrazo y del lado del dedo
meñique de la mano; y 3) vena cubital mediana, que conecta las venas basílica y cefálica
en la fosa antecubital ( flexión del codo) y es la vena de elección.Si el paciente aprieta el
puño después de aplicar el torniquete, la vena se tornará más prominente.
El torniquete facilita la obtención. En los niños pequeños se pueden utilizar otros sitios; si es
así, es mejor que la sangre la obtenga alguna persona con experiencia. Usar una aguja
puntiaguda, nunca menor de calibre 21 y una jeringa de 5 ml ó de 10 ml. Tanto la aguja como
la jeringa deberán estar limpias, secas y estériles. Con práctica se puede obtener sangre
usando sólo una aguja con un tubo de goma por el que se deja correr la sangre hasta los
tubos en los que se recoge la muestra. Para esta técnica se utilizan agujas de calibre 19.
3. LISTA DE REQUERIMIENTOS
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4. PROCEDIMIENTO.
4.1.1 Indicaciones.
En lactantes, se realiza en la superficie plantar interna ó externa del talón.En niños de más
de un año, en la superficie palmar de la última falange del segundo, tercero ó cuarto dedo
de la mano.La punción no deberá realizarse en una parte edematosa ó congestionada, ó
donde la piel se encuentra fría y cianótica.
4.1.3 Técnica.
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4.2.1 Indicaciones.
Debe indicarse al paciente la posición correcta, que puede ser sentado ó recostado,
apoyando bien el brazo en posición horizontal.
Elegir la vena adecuada, prefiriéndose la cubital mediana, la vena basílica, la cefálica, las
venas de la muñeca, tobillo y mano, ya que resultan fáciles de palpar.
4.2.2 Técnica
Actividades:
- Practicar la toma de sangre capilar.
- Practicar la toma de sangre venosa.
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-Realizar esquema de los diferentes sistemas de extracción: jeringa y sus partes; sistema
vacutainer y sus partes; tipos de tubos y colores de tapones empleados en el sistema
vacutainer, de acuerdo con el anticoagulante empleado .
- Reporte de resultados.____________________________________________
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2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Los frotis de sangre deben confeccionarse con láminas portaobjetos de vidrio que
previamente se hayan lavado y secado de manera conveniente, con la finalidad de eliminar
cualquier resto de grasa que pudiera quedar en ellos y evitar así una mala calidad en la
tinción. Los frotis de sangre son esenciales para el estudio morfológico y cuantitativo de las
células sanguíneas. Cuando un frotis se encuentra bien realizado, se podrán distinguir en él
tres áreas importantes: la cabeza ó zona de inicio, el cuerpo ó zona media y la cola ó área
final del mismo. Un frotis no deberá ser ni grueso ni delgado, pues en ninguno de ellos se
podrán apreciar bien las áreas antes mencionadas. En un frotis bien realizado, la tinción será
de mejor calidad.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS
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4. PROCEDIMIENTO.
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- Reporte de resultados.____________________________________________
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2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
COLORANTES.
A los colorantes de les puede clasificar en tres grupos:
1) Acidos. Son aquellos constituídos por sales cuya base es incolora y cuyo ácido es
coloreado. A este grupo pertenecen las eosinas. Estas soluciones se usan para la coloración
citoplasmática ó coloración de fondo.
2) Basicos. Son aquellas sales de ácido incoloro y base coloreada como el clorhidrato
de azul de metileno. Estos colorantes tiñen por lo general algunos elementos del núcleo.
3) Neutros. Son aquellas sales con el ácido y la base coloreados, por ejemplo, los
eosinatos de azul y azur de metileno , los más empleados en hematología. El método de
Romanowsky, que emplea estos colorantes, ha sido la base de las coloraciones panópticas
utilizadas en la actualidad ya que ha tenido un gran éxito en la tinción diferencial de la
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ANTICOAGULANTES.
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3. LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos.
NUM. NOMBRE DEL REACTIVO CANTIDAD
1 Colorante de Wright 0.1 g
2 Metanol 60 ml
3 Na2HPO4 2.56 g
4 KH2PO4 6.66 g
5 EDTA 3g
6 Oxalato de amonio 0.8g
7 Agua destilada 1.5L
Balanza Granataria
Balanza Analítica
3.4.1Colorante de Wright:
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Metanol: 60 ml
Se tritura el colorante con el alcohol en un mortero; ésto se hace poco a poco. Esta
operación debe durar 30 min. hasta completar disolución. Se deja reposar dos días y se filtra.
Na2HPO4 2.56 g
KH2PO4 6.66 g
Agua destilada para aforar a 1L
Mezclar las sales con poca cantidad de agua destilada, e ir agregando poco a poco
más agua, hasta aforar a 1 L. Guardar en un frasco ámbar de 1 L.
3.4.3- EDTA.
EDTA 3g
Agua destilada 100 ml
4.PROCEDIMIENTO.
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El alumno deberá ensayar tiempos hasta ajustar aquellos que más convengan para una
óptima coloración. Así, con tres frotis más deberá ensayar: 2 minutos de colorante y 4 de
amortiguador; 6 minutos de colorante y 6 minutos de amortiguador; 6 minutos de colorante y
11 minutos de amortiguador.
Actividades:
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Una vez que se ha hecho y teñido un frotis satisfactorio, éste puede ser evaluado en
búsqueda de anormalidades. Cada examen debería incluir análisis con bajo poder ( 10X ), con
alto poder ( 40 ó 45 X), e inmersión ( 100X ).Un error común consiste en comenzar el examen
con el objetivo de inmersión.Ciertos problemas de la muestra y anormalidades morfológicas
significativas pueden pasarse por alto a menos que todos los objetivos sean empleados.
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confirmarse éste por medio de dicha lectura. Del mismo modo, se buscarán anormalidades en
las células blancas y éstas se reportarán, así como la presencia de células que normalmente
no se ven en sangre periférica, sino únicamente en médula ósea, a menos que exista alguna
patología presente.
Lo mismo aplica para las plaquetas, las células más pequeñas de sangre periférica.Se
puede hacer un recuento indirecto de las mismas cuando así se requiera, y buscar
anormalidades en su forma y en su tamaño. Algunas anormalidades pueden requerir que se
indique le severidad del cambio. Todas estas determinaciones pueden diferir de observador a
observador, conduciendo a una variación considerable en el análisis del mismo frotis de
sangre.
Tan importante como el que haya consistencia entre los observadores, es importante
también la selección de una área apropiada del frotis para la evaluación. En un frotis en "
cuña ", en el área "aplumada" ó terminal del frotis, demuestran cambios que pueden
considerarse patológicos, p.e. macrocitosis, esferocitosis, células en "diana ", etc. En el área
gruesa del frotis, las células pueden interpretarse como microcíticas en forma equivocada, y la
morfología puede ser difícil de evaluar. También tenderán a formar apilamientos ( rouleaux )
en esta área. Por ello, el área ideal para examinar un frotis, es aquella que contiene
aproximadamente 200-250 células por campo a seco fuerte. Esto corresponde a una área en
donde los eritrocitos se tocan pero no se enciman. En el verdadero Roleaux, los márgenes
individuales de las células son difíciles de distinguir y dan una imagen como de pilas de
monedas que han sido empujadas y tiradas, imagen que persiste aún en las áreas más
delgadas del frotis, aunque ahí exista menor cantidad de células. La intensidad de la
formación de "rouleaux" depende de la concentración de las proteínas plasmáticas,
especialmente el fibrinógeno. En enfermedades inflamatorias, los niveles de fibrinógeno
pueden aumentar. También la elevación de gama globulinas, como se observa en el Mieloma
múltiple, provoca formación de "rouleaux".
2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
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filamentos de fibrina, indicando esto que debe realizarse una nueva toma, ya que esta
evidencia de coagulación podría interferir con muchas pruebas hematológicas. Los extremos
laterales y aplumado deben evaluarse en búsqueda de un número desproporcionado de
leucocitos.,Las células más grandes ( por ejemplo los neutrófilos y los monocitos, tienden a
acumularse más en estos lugares y si el frotis está mal hecho, se acumularán más en estas
áreas, las cuales están fuera del área ideal de observación.Si la mayoría de las células se
encuentran en el borde aplumado, el frotis deberá descartarse y prepararse uno nuevo.
El número de plaquetas también puede ser estimado con este objetivo. Empleando la
misma área que para la cuenta diferencial, es decir, donde los eritrocitos se tocan pero no se
sobreponen, deben contarse las plaquetas en al menos diez campos. Este número será
convertido en no. de plaquetas/μl de sangre, como se hizo con la cuenta de leucocitos.
Deberá calcularse el número promedio de plaquetas por campo, y dicho número se
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3. LISTA DE REQUERIMIENTOS.
Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO.
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ACTIVIDADES:
- Reporte de resultados
Metamielocitos _____
Bandas _____
Segmentados _____
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Linfocitos _____
Monocitos _____
Eosinófilos _____
Basófilos _____
100
leucocitos ___________________________________________________________
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Se realizará el recuento diferencial, de acuerdo como se indica en el procedimiento, y se
comparará contra los siguientes valores normales .Se anexan también, además de los valores
normales en %, los valores normales absolutos, que indican el número de cada estirpe celular
expresado por microlitro . ( para obtenerlos, ver práctica no.7 )
-VALORES NORMALES.
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3. LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Equipo de Laboratorio
1. Microscopio de Luz
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO.
Con el objetivo de inmersión, identificar cuando menos 100 leucocitos consecutivos en un
frotis teñido con Wright, y reportar estos valores en por ciento.Se aconseja identificar el
área ideal para la observación: el área del cuerpo del frotis, donde las células se tocan pero
no se sobreponen. El recorrido debe hacerse de manera vertical, para no omitir células de
los márgenes y para no salirse del área ideal para el recuento.
ACTIVIDADES.
Investigar en qué casos pueden encontrarse cada una de las líneas celulares reportadas en
la cuenta diferencial, con valores por arriba y por debajo de lo normal.
REPORTE DE RESULTADOS:
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1.INTRODUCCIÓN.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Las pipetas empleadas para el recuento manual de glóbulos blancos, son similares a
las que se usan para el recuento de glóbulos rojos, pero presentan en su capilar superior, la
grabación 11, y en la inferior, la grabación 0.5, lo cual indica una dilución distinta, que es en
este caso de 1:20. Se emplea la misma cámara cuentaglóbulos llamada cámara de Neubauer,
nada más que el conteo y los cálculos se realizan de diferente manera.
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Reactivos
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CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Cámara de Neubauer
1 Pipeta para recuento de glóbulos blancos
1 Tubo de ensaye de 13 X 100
1 Boquilla
5 PROCEDIMIENTO.
5.1 Técnica.
N______x______20______x______10 = N X 50
4
En donde:
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Y= 35 _ x 15,000
100 + 35
ACTIVIDADES.
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Un cambio en sangre periférica que no está asociado con ningún cambio morfológico
celular pero que está asociado con enfermedad, es un incremento en las bandas.
Esto puede ser referido como una " desviación hacia la izquierda ", particularmente si
formas aún más jóvenes son encontradas en la circulación. Normalmente la cuenta de
neutrófilos también se encuentra aumentada, ya que si no es así, ésto puede indicar un peor
pronóstico para el paciente, por lo que algunos autores se refieren a la primera circunstancia
como un " cambio regenerativo hacia la izquierda ", y a la segunda , con cuenta normal ó
baja de leucocitos, como un " cambio degenerativo hacia la izquierda ".
Ocasionalmente, el aumento en la cuenta total de blancos y la aparición de formas
neutrofílicas jóvenes, es tan marcada, que pareciera la sangre periférica que se analiza en
pacientes con leucemia mielocítica crónica.
Este exceso de salida de estas formas a la circulación, de hecho sí es debido a algún
otro proceso patológico y debe ser distinguido de leucemia. El término " Reacción
Leucemoide " es el indicado en esta situación.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Se deberán buscar tanto en el frotis sanguíneo como por medio del recuento de glóbulos
blancos en el contador electrónico ó por el método manual, el número aproximado de
leucocitos en una muestra que previamente haya sido analizada y de la cual se haya
reportado leucocitosis y desviación a la izquierda. El hallazgo de un número aumentado de
leucocitos y el de formas jóvenes que incluyan principalmente formas en banda y
metamielocitos, confirmarán dicho diagnóstico .
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4.PROCEDIMIENTO.
ACTIVIDADES.
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con colorante de Wright
4. PROCEDIMIENTO.
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ACTIVIDADES.
Realizar una lista de enfermedades en las que se encuentren elevados los eosinófilos.
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1.INTRODUCCIÓN.
Picnosis.
El núcleo del neutrófilo normalmente es algo picnótico, pero pueden distinguirse la
paracromatina y la cromatina.Las células muertas ó las que están a punto de morir, sin
embargo, tendrán un núcleo obscuro y redondo sin evidencia de estructura nuclear. Los
lóbulos pueden estar separados ó puede haber un único y redondo núcleo en degeneración.
Las células pueden distinguirse como neutrófilas porque el citoplasma retiene el tiente rosa
habitual. Estas células también pueden ser identificadas como necrobióticas. En una muestra
fresca, estas células son evidencia de que el organismo está " perdiendo la batalla " en un
paciente con infección; también pueden aparecer en pacientes que reciben quimioterapia.
Estos cambios también pueden encontrarse como resultado de una prolongada exposición al
EDTA.
Organismos intracelulares.
Esta es un tipo de inclusión muy rara de encontrar e indica la presencia del organismo
infectante, ya que una sola célula que presente un microorganismo es significativo. Puede ser
o bien una bacteria, ó bien una levadura, y puede observarse intra ó extracelularmente, e
indica una septicemia abrumadora, de mal pronóstico aunque podría ser un artificio originado
por la toma de la muestra a través de algún catéter contaminado.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Se analizarán muestras en las que exista el hallazgo de picnosis y microorganismos
intracelulares.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright
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4.PROCEDIMIENTO.
ACTIVIDADES.
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Granulaciones Tóxicas.
Este cambio representa la presencia de gránulos primarios no específicos, los cuales se
tiñen de color azul-púrpura con la tinción de Wright como sucede con los del promielocito.
Pueden deberse al menor número de mitosis realizadas durante la maduración celular.
Algunas células pueden contener sólo unos pocos gránulos, otras, pueden contener muchos.
Las granulaciones tóxicas pueden ser vistas en una variedad de desórdenes inflamatorios ó
tóxicos, como por ejemplo, en infección bacteriana, ataque al corazón, insuficiencia renal,
gota, artritis reumatoide, así como en respuesta a una neoplasia.
Una granulación aumentada también puede ser vista cuando el frotis es teñido por mucho
tiempo. Si estos gránulos fueran realmente debidos a un proceso patológico, no serían vistos
en todas las células, y además aquellas que en verdad presenten granulaciones tóxicas, lo
harán en variedad de grados. Si todas las células se ven afectadas y en el mismo grado de
intensidad, ésto debe considerarse como un artificio del frotis.
Vacuolización.
Ya que la principal función de los neutrófilos es la fagocitosis, si existe actividad
fagocítica aumentada, pueden haber numerosas vacuolas dentro del citoplasma como una
evidencia de ésto. Estas son identificadas morfológicamente como " hoyos " dentro del
citoplasma. Sin embargo, ésto también puede ser el resultado de una exposición prolongada
al EDTA. Al igual que en las granulaciones tóxicas, si todas las células se ven afectadas en el
mismo grado, debe sospecharse un artificio del frotis.
La vacuolización puede encontrarse frecuentemente cuando el paciente tiene una
infección bacteriana, especialmente con las bacterias piógenas . También es frecuente
observarlas junto con las granulaciones tóxicas.
Cuerpos de Döhle.
Estas inclusiones son a menudo encontradas junto con las granulaciones tóxicas y/ó
vacuolización, aunque no siempre. A veces pueden ser la única evidencia de un proceso
tóxico ó reactivo en un paciente. Los cuerpos de Döhle son pedazos de RNA residual
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( retículo endoplásmico rugoso ) en el citoplasma. Tienen el característico color azul tenue del
RNA y se les encuentra frecuentemente cerca de la membrana citoplasmática de la célula.
En algunas células, pueden ser muy prominentes, y en otras, pequeños y muy tenues, y
pueden pasarse por alto si el observador no tiene suficiente cuidado en la observación.
En ocasiones pueden observarse los tres tipos de cambios tóxicos en la misma célula.
Agranulación citoplásmica.
En ocasiones, la única evidencia de neutrófilos activados es una área clara agranular
en la periferia de la célula, que indica la formación de un pseudópodo. Estas células también
se distinguen por un borde citoplásmico irregular en contraste con el borde redondo usual del
neutrófilo. También ésto puede ser visto junto con las granulaciones tóxicas, la vacuolización,
y los cuerpos de Döhle, aunque cada uno de ellos puede verse individualmente, y a menudo
estos cambios se asocian con aumento en las formas en banda y cuenta elevada de
leucocitos, aunque no siempre.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Se analizarán muestras con alteraciones en las que exista el hallazgo de varios cambios
morfológico-benignos.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frois de sangre periférica teñido con Wright
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas
alteraciones.
ACTIVIDADES.
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El término " atípico ", ha sido utilizado para describir cualquier forma que varíe del
criterio morfológico empleado para un linfocito normal. Debido a que varias formas son el
resultado de infección viral, el término " reactivo" y el más específico de " virocito " han sido
asociados con esta respuesta. Puede aplicarse el término " linfocitos variantes " ya que no
todos los cambios son " reactivos " ó asociados con infección viral.
La mayoría de las formas variantes están asociadas con infecciones virales,
especialmente con el grupo herpes virus ( por ejemplo, el virus Epstein-Barr-la causa de
mononucleosis infecciosa, citomegalovirus ó herpes simplex tipos 1 y 2 ), y virus de hepatitis
B y C. También pueden encontrarse en casos de toxoplasmosis, sífilis ó tuberculosis.
Debido a que ocasionalmente puede encontrarse algún linfocito atípico y considerarse
normal, algunos laboratorios los reportan como un porcentaje separado de leucocitos, por
ejemplo, un porcentaje de linfocitos normales y un porcentaje de formas variantes. Otros
pueden usar un método semicuantitativo, como " 1+, 2+, 3+ " ó " leve, marcado ó severo ",
para indicar su frecuencia relativa. Siempre que más del 10% sean clasificados como
variantes, el hallazgo es considerado clínicamente significativo y debe ser reportado.
Otra de las formas se asemejan muy a menudo a un monocito. Son grandes, con
citoplasma abundante y a menudo vacuolado, el cual puede ser más gris, comparando con el
usual color azul cielo del linfocito normal. El núcleo puede ser redondo, doblado, indentado ó
lobulado y tiene una apariencia más abierta y color más tenue que lo usual. No presenta
nucleolos. A veces, el citoplasma es predominantemente azul cielo, y contiene áreas de un
azul más intenso, que tienden a irradiar del núcleo ó a concentrarse en la periferia de la
célula, especialmente en donde hace contacto con las células que la rodean. A esta
característica se le conoce como basofilia radial ó basofilia periférica, respectivamente.
Estas células, como puede verse, pueden ser especialmente difíciles de distinguir de los
monocitos. Algunos rasgos útiles para distinguirlos es que los monocitos son células que
empujan a otras y tienden a indentarlas cuando están muy próximas a ellas. En cambio, los
linfocitos más fácilmente sufren esa indentación . El núcleo del monocito, típicamente es más
doblado ó lobulado, y el patrón cromatínico es más delicado y fino. Por otro lado, si se está
en duda, puede seguirse una regla general que menciona que si hay muchos linfocitos en el
frotis, la célula que se sospecha más seguramente es un linfocito también.
En un momento dado, hay quien puede confundir estas células con formas malignas ó
blastos. Debe recordarse entonces que en casos de leucemia, las células tienden a ser muy
similares morfológicamente, dando una apariencia monótona, homogénea, especialmente al
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observarse con pocos aumentos.En contraste, las enfermedades asociadas con formas
variantes, demostrarán una apariencia muy heterogénea.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Se analizarán muestras en las que exista el hallazgo de linfocitos atípicos.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas
alteraciones.
ACTIVIDADES.
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Una de las formas en que se presenta el linfocito atípico, comparte rasgos con la célula
plasmática, la cual no es encontrada normalmente en sangre periférica. Ambas tienen un
citoplasma azul muy intenso y pueden medir de 15-20 µ .Los dos pueden distinguirse por su
patrón de cromatina nuclear. En el linfocito " plasmacitoide ", el núcleo tiene una apariencia
abierta y laxa y tiene un color rojo-púrpura más tenue. Pueden verse también nucleolos. Esto
es en contraste con la apariencia amontonada, abultada del núcleo de la célula plasmática y
su localización excéntrica dentro de la célula. No hay una área clara perinuclear en el linfocito
plasmacitoide como la hay en la célula plasmática.
Los linfocitos plasmocitoides son comúnes de encontrar en ciertas enfermedades
virales como el dengue y las enfermedades exantemáticas de la infancia.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Se analizarán muestras que tengan el hallazgo de linfocitos plasmocitoides.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas
alteraciones.
ACTIVIDADES.
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Se analizarán muestras que tengan el hallazgo de hipersegmentación nuclear en neutrófilos
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
4. PROCEDIMIENTO.
Observar imágenes en laminillas y/ó diapositivas correspondientes con estas
alteraciones.
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ACTIVIDADES.
Serie Blanca 40
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Estudio medular .
El tipo de procedimiento utilizado para el estudio de la médula ósea (aspirado, biopsia
o ambos), depende de la sospecha clínica. En términos generales se plantean cuatro
posibilidades:
Compromiso de precursores hematopoyéticos con alteraciones citológicas, como en las
anemias y leucemias. En estos casos, está mejor indicado el aspirado medular o mielograma.
Compromiso de las estructuras de soporte del tejido hematopoyético o del mismo hueso como
en la mielofibrosis, metástasis o granulomas, o que haya disminución del tejido
hematopoyético y se requiera determinar con certeza la celularidad, como en la anemia
aplástica. En estos casos está mejor indicada la biopsia medular.
Fiebre de origen desconocido, en donde se debe solicitar un estudio de aspirado y biopsia.
Serie Blanca 41
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Sospecha clínica o se desee estudiar una enfermedad infecciosa por bacterias, micobacterias
y hongos. En estos casos, se debe solicitar estudio de cultivos de material medular obtenido
por aspirado.
Algunos pacientes con coagulopatía (especialmente los hemofílicos) requieren terapias de
reemplazo para hacer el procedimiento cuando está indicado hacer el estudio.
Como la médula ósea es un tejido blando, se pueden obtener muestras introduciendo una
aguja adecuada en la médula y aspirando con jeringa. Los sitios donde se puede obtener
médula ósea en los adultos y niños mayores de un años son: el esternón, las espinas ilíacas
superiores anterior o posterior; la cresta ilíaca y las apófisis espinosas de las vértebras.
La punción esternal, hasta donde sea posible, no se debe hacer de rutina, debido al riesgo de
lesión cardiovascular.
En niños menores de un año se puede tomar material medular por aspirado en el tubérculo
tibial. A partir del primer año de vida se toma similar a la del adulto.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
2.1 Principio.
Los extendidos de médula ósea se colorean con Wright siguiendo la técnica usual.
Inicialmente son observados macroscópicamente para determinar la presencia de partículas.
Luego el extendido es examinado en bajo poder (10X) para apreciar la relativa cantidad de
grasa y de contenido celular hematopoyético de acuerdo al cual la médula se puede clasificar
como: hipocelular, normocelular e hipercelular.
Después de la observación en 10X el extendido se examina con objetivo de 100X localizando
los campos donde se hallan las partículas y se procede al análisis de las células sanguíneas
que habitan en la médula ósea. Se establece la relación del número de las células blancas
frente al número de células rojas nucleadas. Esta proporción se denomina “relación mielo -
eritroide” (M:E). Para estimar esta relación es necesario la identificación y tabulación de 300 -
500 células nucleadas. Se observa aumento en la relación mielo-eritroide, cuando se
aumentan los precursores mieloides como sucede en los procesos inflamatorios agudos,
leucemias o cuando se disminuyen los precursores eritroides como en la insuficiencia renal
crónica. Una disminución en la relación mielo-eritroide se presenta cuando se disminuyen los
precursores mieloides como en la anemia aplástica o cuando aumentan los precursores
eritroides como en las anemias hemolíticas y megaloblásticas.
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2.2 Metodología
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Serie Roja
Proeritroblastos 0.2-1.3
Eritroblastos Basófilos 0.5-2.4
Eritroblastos Policromáticos 17.9-29.2
Eritroblastos Ortocromáticos 0.4-4.6
Linfocitos 11.1-23.1
Megacariocitos 0-0.4
Plasmocitos 0.4-3,9
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
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4.PROCEDIMIENTO.
Observar las laminillas ó diapositivas y reportar el mielograma de acuerdo con el formato
que aparece en el reporte de resultados.
ACTIVIDADES.
-Observación de laminillas y/ó diapositivas con imágenes de aspirados de médula ósea
normal .
-Reportar un mielograma normal.
R E P O RT E DE MIELOGRAMA
Serie Blanca
Mieloblastos
Promielocitos
Mielocitos
Metamielocitos
Bandas + segmentados
Serie Roja
Proeritroblastos
Eritroblastos Basófilos
Eritroblastos Policromáticos
Eritroblastos Ortocromáticos
Linfocitos
Megacariocitos
Monocitos + macrófagos
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Plasmocitos
Relación Mieloide-Eritroide
LEUCEMIAS CRÓNICAS
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CFCCTH
GEMM CTH
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La mutación original se produce en una CTH, que madura terminalmente hacia todas las
líneas celulares, pero lo hace de predominantemente hacia la línea granulocítica, y
frecuentemente hacia la megacariocítica.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Presencia de eritroblastos
Datos Citogenéticos :
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas
1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
4.PROCEDIMIENTO.
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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1.INTRODUCCIÓN.
En las leucemias mieloides crónicas, la CTH tienen todavía más capacidad de dividirse que
una CTH normal.
Si la maduración predomina hacia la línea de los eritrocitos, se tendrá:Policitemia vera.
Cuando la proliferación es predominantemente hacia la línea de los megacariocitos, pero
éstos se mueren en la etapa de megacariocito maduro, a esta neoplasia se le llama
Mielofibrosis con Metaplasia Mieloide.
Se origina también en una CTH que madura hacia todas las líneas mieloides pero
predominantemente hacia los megacariocitos
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Proliferación de la CTH hacia todas las lineas con predominio hacia la línea
eritrocítica:plaquetas ,eritroblastos ,basofilia , eosinofilia, granulocitosis
con células no más inmaduras que los mielocitos.Sin embargo la Biometría
Hemática no es definitiva.
Trombocitosis > 400,000/ μl
Leucocitosis > 12,000/ μl sin fiebre ó infección
Aumento de fosfatasa alcalina leucocitaria sin fiebre ó infección.
Aumento de vitamina B12 sérica ó transcobalamina
Cromosoma Philadelphia negativo.
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas
1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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La célula que sufre la mutación neoplásica, es la CTH, que madura hacia todas las
líneas, pero con predominio hacia la línea de megacariocitos-plaquetas.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Serie Blanca 52
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas
1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
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ACTIVIDADES.
LEUCEMIAS AGUDAS
La Leucemia M0, es una leucemia aguda cuya cuenta típica de Médula Osea es la siguiente:
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y /ó diapositivas
1 Aspirad de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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Mieloblastos: 83%
Promielocitos: 3%
Mielocitos: 2%
Eritroblastos: 12%
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
>3% y < 10% de células tienen gránulos MPO positivos ó bastones de Auer
observables con la tinción citoquímica para MPO ó son células con un poco más de
maduración . ( que pueden ser: mieloblastos 1b ( mieloperoxidasa + ) , mieloblastos 2,
promielocitos , mielocitos.
90% de células son mieloblastos sin gránulos ( mieloblastos 1ª =negativos para
mieloperoxidasa )
Hay anemia, granulocitopenia, trombocitopenia
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
Serie Blanca 56
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ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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La Leucemia mieloide aguda M2, presenta la siguiente cuenta típica de Médula Osea:
Mieloblastos: 52%
Promielocitos: 33%
Mielocitos: 7%
Granulocitos más maduros: 3%
Eritroblastos: 5%
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Serie Blanca 58
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas
1 Aspirado de Médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
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MPO Esterasas
M3 +++ -
M5b + +++
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas
1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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Serie Blanca 61
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Serie Blanca 62
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas
1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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Serie Blanca 63
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Monoblastos: 90%
Promonocitos y monocitos: 6%
Eritroblastos: 4%
Monoblastos: 6%
Promonocitos: 85%
Monocitos: 7%
Eritroblastos: 2%
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA.
Serie Blanca 64
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M5a M5b
> 80% de células son de estirpe > 80% de células son de estirpe monocítica:
monocítica: monoblastos, promonocitos y monoblastos, promonocitos y monocitos en
monocitos en una cuenta sin eritroblastos. una cuenta sin eritroblastos.
La M5a poco diferenciada ( equivalente a > 80% de las células de estirpe monocítica
la M0) se forma de monoblastos 1ª y son promonocitos y monocitos; éstos se
constituye el 15% de los casos de distinguen por sus gránulos azurófilos con
M5a.Debe distinguirse de la M0 ó de la Wright
L2:
-usando anticuerpos monoclonales para
CD14
-Demostrando la presencia de esterasas
no específicas en el RER con el
microscopio electrónico, ó la ausencia de
MPO.
La M5a bien diferenciada, se forma de Puede confundirse son la M3 variedad
monoblastos 1b y 2 y ---es positiva para microgranular
esterasas no específicas.
-es positiva para anticuerpos
monoclonales anti CD14, CD36 y CD68.
-MPO negativa, pero ocasionalmente
positiva.
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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Serie Blanca 66
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1.INTRODUCCIÓN.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Serie Blanca 67
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCION
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas
1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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Serie Blanca 68
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
>30% de blastos en Médula osea, de los cuales: >50% deben pertenecer a la línea de
los megacariocitos.
Las células son positivas para los anticuerpos anti CD41 y CD61, que ponen en
evidencia las glicoproteínas plaquetarias. ( técnicas inmunocitoquímicas )
Mieloperoxidasa negativa en los blastos ( megacarioblastos )
Esterasas no específicas positivas focalmente en el aparato de Golgi.
De acuerdo con la etapa hasta la cual llegan a madurar las células se consideran:
Serie Blanca 69
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas
1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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Facultad de Bioanálisis, Veracruz Manual de Prácticas de Hematología
Esta es la más común de las leucemias linfoides.Cursa con linfocitosis notable. En ella, el
resto de la hematopoyesis se conserva normal.Se presenta con crecimiento ganglionar
bilateral.El Linfoma de Linfocitos bien diferenciados es la manifestación tisular
(ganglionar ) de la misma enfermedad.Los linfocitos tienen pocas inmunoglobulinas de
superficie.
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Serie Blanca 71
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Células pequeñas
Citoplasma muy pálido y con muchas microvellosidades filiformes
Núcleos pequeños como los de los linfocitos, pero cromatina no tan densa.
Las células tienen característicamente gránulos con fosfatasa ácida resistente al
ácido tartárico.
La médula ósea es difícil de aspirar, ya que, como es típico, tiene fibrosis.
Inmunofenotípicamente son positivas para CD19 y CD20, CD11 y CD25.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
Serie Blanca 72
Facultad de Bioanálisis, Veracruz Manual de Prácticas de Hematología
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Leucemia L1. Corresponden al tipo más común de leucemia aguda infantil y es la que tiene
el mejor pronóstico de las 3.
Leucemia L2.Tienen un peor pronóstico que las L1
Leucemia L3. Casi todos los casos corresponden a células B.Tienen mal pronóstico
2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
blastos muy pequeños, en donde el núcleo ocupa la mayor parte de la superficie y por
lo tanto hay muy escaso citoplasma, el cual carece de vacuolas ó presenta muy
escasas;
hay homogeneidad en cuanto al tamaño celular y densidad cromatínica;
la cromatina es fina, aunque no tanto como la de los mieloblastos-
Ocasionalmente, la cromatina es gruesa y pueden confundirse con linfocitos pequeños.
Los linfoblastos ocasionalmente adquieren forma de “raqueta de mano”.
Serie Blanca 73
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Las células más grandes tienen cromatina fina y nucleolos bien demarcados, como los
de los mieloblastos; las de tamaño intermedio, tienen cromatina más gruesa, y las más
pequeñas, tienen cromatina condensada.
Con frecuencia, los núcleos tienen múltiples indentaciones “cerebriformes” ( en cuyo
caso, si se acompañan de gránulos positivos a la fosfatasa ácida y a α-naftil acetato
esterasa, corresponden a leucemias T y tienen un mal pronóstico).
Citoplasma más abundante que en las L1, generalmente sin gránulos y con pocas ó
ninguna vacuola.
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
1 Frotis de sangre periférica teñido con Wright y/ó diapositivas
1 Aspirado de médula ósea teñido con Wright y/ó diapositivas
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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Serie Blanca 74
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Serie Blanca 75
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
ACTIVIDADES.
- Reporte de resultados .______________________________________________________
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Serie Blanca 76
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A menudo resulta difícil diferenciar los blastos leucémicos de la leucemia linfoblástica aguda
de los de la leucemia mieloblastica (M1), monoblástica aguda (M5A) y la leucemia
megacarioblástica aguda (M7) utilizando solamente extensiones con las coloraciones de May-
Grünwald-Giemsa.
Serie Blanca 77
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2.PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
3.LISTA DE REQUERIMIENTOS
3.1 Reactivos.
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
2 Vasos de precipitados de 100 ml
2 Matraces aforados de 100 ml
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1 Pipeta graduada de 10 ml
2 Pipetas graduadas de 5 ml
1 Pipeta graduada de 1 ml
2 Frascos de 250 ml
10 Frotis de sangre periférica
Modo de Preparación:
4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Técnica:
4.1.1. Los frotis se fijan por un minuto con la solución formol etanol
4.1.2 Lavar con agua de la llave
4.1.3 Secar al aire PERFECTAMENTE
4.1.4 Sumergir en la solución colorante por 30 segundos.
4.1.5 Lavar con agua de la llave
4.1.6 Contrateñir por 30 segundos con solución acuosa de safranina al 1%
Serie Blanca 79
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Actividades:
-Practicar la tinción citoquímica para Mieloperoxidasa con frotis de sangre periférica.
2. PRINCIPIO Y METODOLOGÍA .
Utilizando como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una esterasa
que es específica de la granulopoyesis neutrófila en la que es positiva a partir del
mieloblasto y se expresa en forma de un precipitado rojo anaranjado muy brillante. Su
utilidad diagnóstica se centra básicamente en el reconocimiento de células blásticas
mieloides, si bien su aparición es más tardía que la de la mieloperoxidasa aunque
iguala a ésta en especificidad.
Utilizando como substrato el naftol-AS-D-acetato, se obtiene una intensa positividad en
la serie monocítica que, a diferencia de las restantes células hematopoyéticas, es
fluoruro sensible. Dada su positividad más restrictiva es preferente usar el substrato α-
naftil-acetato o α-naftil-butirato para marcar la serie monocítica y sus precursores,
cuya positividad es intensa y se manifiesta en forma de un precipitado difuso por todo
el citoplasma.
Serie Blanca 80
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3.LISTA DE REQUERIMIENTOS.
3.1 Reactivos.
Balanza granataria
Balanza analítica
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
2 Vasos de precipitados de 100 ml
2 Vasos de precipitados de 500 ml
2 Probetas de 100 ml
2 Probetas de 500 ml
1 Matraz volumétrico de 50 ml
1 Tubo de 13X100 ml
3 Pipetas de 10 ml
4 Pipetas de 5 ml
2 Goteros de 10 ml
2 Goteros de 100 ml
2 Frascos de 500 ml
10 Frotis de sangre periférica
Soluciones de Fijación
3.4.1 Solución A
Serie Blanca 81
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Na2HPO4 20 mg
KH2PO4 100 mg
Agua destilada 30 ml
Formaldehído al 37% 25 ml
Acetona 45 ml
Solución A ( #1 ) 30 ml
( Esta solución se guarda a 4°C )
a) Na2HPO4 2.366 g
H2O destilada 250 ml
b) KH2PO4 2.267 g
H2O destilada 250 ml
Soluciones de Tinción
Serie Blanca 82
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4.PROCEDIMIENTO.
4.1 Técnica:
Actividades:
-Practicar la tinción citoquímica para Esterasas con frotis de sangre periférica.
Serie Blanca 83
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BIBLIOGRAFÍA
1 .BLOOD CELL MORPHOLOGY. Peripheral Smear Evaluation. Manual 1.Lynn Maedel and
Sandra Sommer.American Society of Clinical Pathologysts.Chicago.
6.Citoquímica.
http://web.udl.es/dept/medicina/citoweb/libro/pass/paginas/contenido/libro/citoquim.htm
Serie Blanca 84