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DISEÑO DE
BIOREACTORES
TITLE
Lic Evelin Urquieta

Introducción
• La descripción cuantitativa de los
procesos celulares es una herramienta
indispensable en el diseño de los
procesos de fermentación.
• Los parámetros mas importantes en el
diseño cuantitativo son:
a) Rendimiento
b) Productividad

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Modelo celular Modelo del reactor

Especificar la complejidad del modelo

Estequiometria

MODELO
Cinéticas Balance de masas
Modelo revisado

Estimación de los parámetros

Simulación de los procesos de fermentación

Diferentes etapas en la descripción cuantitativa de los procesos de
fermentacion.

Substratos
(glucosa, almidón, sacarosa etc.)
Reacciones de combustión

Metabolitos precursores
• Glucosa 6P, piruvato, acetil CoA, etc
Reacciones de biosintéticas
Bloques fundamentales
Aminoacidos, nucleotidos, ácidos grasos etc.

Reacciones de polimerización
Macromoleculas
(proteínas, DNA, RNA, lípidos, etc.)

Reacciones de ensamblaje

Célula funcional
Diferentes reacciones implicadas en la conversión global de los sustratos en una
célula funcional

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Estructuración a nivel celular

Estructuración a nivel de población

No estructurado Estructurado
No segregado No segregado

No estructurado Estructurado
segregado segregado

Complejidad de los modelos cuantitativos

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Valores típicos de ks para diferentes células creciendo sobre distintos

azucares
Especie Substrato K (mg l -1)
Aerobacter aerogenes Glucosa 8
Aspergillus oryzae Glucosa 5
Escherichia coli Glucosa 4
Klebsiella aerogenes Glucosa 9
Glicerol 9
Klebsiella oxytoca Glucosa 10
Arabinosa 50
Fructuosa 10
Penicillium chrysogenum Glucosa 4
Saccharomyces cerevisie Glucosa 180

Parámetro Ks para todas las reacciones implicadas en la conversión

de sustrato en biomasa

El modelo de Monod no es la única expresión cinética ,

existiendo además otros modelos cinéticos no estructurados

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Microorganismos industriales
o Su fuente es la naturaleza (No todos tienen uso
industrial).
o Los hongos y algunos procariotas son los más
usados.
o Son seleccionados los que producen uno o mas
productos de interés.
o Se modifican genéticamente por mutación o
recombinación para incrementar el producto de
interés.
o Las vías metabólicas menores se reprimen o
eliminan.

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Microorganismos industriales
o Las cepas modificadas son conservadas en
laboratorios de microbiología de industrias y en
distintas colecciones nacionales de
microorganismos tipo.
o Las cepas con los mejores rendimientos (con
derechos de propiedad son patentadas) No están
en colecciones.

Abreviatura Nombre Localidad

ATCC Colección americana de cultivos tipo EUA
CBS Oficina central de cultivo de hongos HOLANDA
CCM Departamento checoslovaco de agricultura CHECOSLOVA
QUIA
CDDA Departamento Canadiense de Agricultura CANADA
CIP Colección del Instituto Pasteur FRANCIA
CMI Instituto micológico de la Mancomunidad REINO UNIDO
DSM Colección alemana de microorganismos ALEMANIA
FAT Facultad de agricultura de la Universidad de JAPON
Tokyo
IAM Instituto de microbiología Aplicada JAPON
NCIB Colección nacional de bacterias industriales ESCOCIA
NCTC Colección nacional de cultivos tipo REINO UNIDO
NRRL Laboratorio de investigación regional del EUA
norte

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Requisitos de un microorganismo
industrial
1. Producir la sustancia de interés.
2. Obtenerse en cultivo puro.
3. Ser genéticamente estable.
4. Poder desarrollarse en cultivos a gran escala.
5. Poder mantener el cultivo de MO durante periodos
largos en el laboratorio y la planta industrial,
6. Tener un tiempo de duplicación bajo y fabricar el
producto deseado en un tiempo corto.
7. Ser susceptible de manipulación genética
8. Crecer en un medio de cultivo relativamente barato y
que se obtenga en grandes cantidades.

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Condiciones que NO debe tener un

microorganismo industrial
1. Ser peligrosos para el hombre, animales y plantas de
interés económico.

2. Liberar toxinas o si lo hacen poder ser eliminadas

fácilmente.

Productos de interés
1. Las células propiamente dichas (las
levaduras cultivadas para alimentos,
panadería o cerveza).
2. Las sustancias producidas por las
células..… Enzimas : glucosa isomerasa
Agentes farmacológicos activos como
los antibióticos, esteroides y alcaloides
Productos químicos y aditivos
alimentarios aspartame (L-fenilalanina
mas acido aspartico), L glutamato
(utilizado para reforzar el sabor y ablandar

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PRODUCTOS DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL O BIOCATALISIS

Productos de interés
Varias Enzimas de uso comercial son producidas
por MOs, incluyendo enzimas que digieren el
almidon (amilasas), proteínas (proteasas, renina) y
las grasas (lipasas), Penicilina acilasa que es
usada para producir penicilinas sintéticas.

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Metabolitos microbianos estos pueden

ser productos de la fermentación como
el etanol, acido acético o acido láctico;
factores de crecimiento como aa,
vitaminas, antibioticos, esteroides
alcaloides, etc.

• Primario: proceso en el cual el producto de

interés se forma durante la fase primaria de
crecimiento, por ejm. El etanol es un
producto del metabolismo anaeróbico de la
levadura y de ciertas bacterias y se forma
como parte del metabolismo energético, la
producción de etanol ocurre paralelamente
con el crecimiento.
• Secundario: los metabolitos producidos
durante la fase estacionaria, conforman la
mayoría de los antibioticos

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Características metabolismo
• Cada metabolito secundario sólo lo forman
relativamentesecundario
pocos organismos.
• Los metabolitos secundarios No son esenciales
para el crecimiento y reproducción.
• La formación de metabolitos secundarios
depende de las condiciones del cultivo y sobre
todo de la composición del medio.
• Se producen como un grupo de estructuras muy
relacionadas (Streptomyces produce 30
antibioticos distintos pero relacionados a la
antracina)

Escalado de la fermentación
• Cambio de escala: es la adaptación de un proceso
industrial desde las condiciones de un pequeño
laboratorio a las de una fermentación comercial a
gran escala.
• La mezcla y la aireación son mucho más eficientes
en el matraz de laboratorio / fermentador industrial
• Relación superficie/volumen
a) Transferencia de gases
b) Dinámica de fluidos. Ing. Bioquímico
c) Termodinámica

d) Parámetros para fermentación exitosa Microbiologo

e) Cepas microbianas apropiadas

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Etapas de escalado son :

1. Experimentos en el matraz de laboratorio (si
es posible un proceso industrial).
2. Fermentador de laboratorio, fermentador a
escala pequeña de vidrio de 5- 10 l de
capacidad (ensayar variaciones en el medio
de crecimiento, temp, pH,etc)
3. Etapa en planta piloto, equipos de 300-
3000 lts, es deseable una cuidadosa
instrumentación y un control con
computadora.
4. Fermentador industrial (10.000 a 400.000
litros)

Fermentador/ Biorreactor
o “Es el centro de todo proceso
biotecnológico.”
o “Es un recipiente o sistema que mantiene un
ambiente biológicamente activo.”

o “Recipiente en el que se lleva a cabo un

proceso químico que involucra
organismos o sustancias activas
derivadas de estos organismos”

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Fermentador/ Biorreactor
 Diseño de un biorreactor es complejo y difícil depende
de:
Cinética de reacciones biológicas
Características del organismo (crecimiento, división
celular, tipo de operación, modo de operar y/o proceso
de cultivo)

Balances de materia y energía

Biorreactor ideal
• Mantener las células distribuidas en todo el volumen del
cultivo.
• Mantener constante y homogénea la temperatura.
• Minimizar los gradientes de concentración de nutrientes.
• Prevenir la sedimentación y la floculación.
• Permitir la difusión de gases a la velocidad requerida por el
cultivo.
• Mantener el cultivo puro.
• Mantener un ambiente aséptico.
• Minimizar el gasto y los costos de producción.
• Reducir al máximo el tiempo.

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Clasificación.
a) Por su forma y tipo de agitación
 Agitación mecánica: utilizan equipos mecánicos.
 Agitación neumática: utilizan gas a presión

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Clasificación.
• Por el tipo de Operación:
Discontinuo (Batch)
carga total/proceso
tiempo de retencion

Semidiscontinuo
pto alimentación F1
biomasa crec. /max.

Continuo.
F1 y F2 linea salida
flujos iguales

Ventajas e inconvenientes de los distintos modos de operación de un

biorreactor

Reactor Ventajas Inconvenientes

Discontinuo •Versátil puede usarse para muchos
procesos diferentes
•Bajo riesgo de contaminación
•Es posible la conversión completa de
substrato
•Alto coste de mano de obra
•Mucho tiempo parado debido a la limpieza y
esterilización después de cada fermentación

Continuo •Alta eficiencia de la capacidad del •Problemas de contaminación

reactor
•Se puede mantener una lata
productividad durante un largo periodo
de tiempo
•La automatización es sencilla
Control contante de la calidad del
producto
•Posibilidad de que aparezcan mutantes de
baja producción durante operaciones a
tiempo largo
•Poco flexible ya que rara vez pueden ser
utilizados para diferentes procesos sin una
adaptación substancial
•El procesamiento posterior ha de ajustarse al
flujo a través del birreactor (o bien se han de
utilizar tanques de almacenamiento)

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Ventajas e inconvenientes de los distintos modos de operación de un

biorreactor

Reactor Ventajas Inconvenientes

Discontinuo •Permite operar en condiciones bien
alimentado controladas mediante el control de la
adición de la alimentación.
•Permite obtener densidades de células
muy altas y por tanto altos títulos
finales de producto
Algunos de los mismos problemas que para
los reactores continuo y discontinuo, pero
generalmente las desventajas son menos
pronunciadas con este modo de operación

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Clasificación.
d) Bioreactores especiales: de estado sólido y foto
reactores.

Clasificación.
• Biológica:
Anaeróbico

Facultativo

Aeróbico.

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Diseño de un fermentador aeróbico

• Cilindros de acero
inoxidable cerrados
que presentan varias
válvulas y tubos,
presentan un cubierta
de enfriamiento a
través del cual se hace
pasar vapor o agua de
enfriamiento
(serpentines internos )

Diseño de un fermentador aeróbico

• Equipo a gran escala se debe:
a)Optimizar el sistema de aireación
(transferencia de O2 de gas a líquido / O2
poco soluble en agua).
b)Se usan dispositivos: dispositivo de
aireación (difusor), dispositivo de
agitación (impulsor)
c)Aumentar la eficiencia se usan deflectores

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Fermentadores: a) de laboratorio b) esquema de

fermentador c) interior de un fermentador industrial

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Diseño de un fermentador aeróbico

• Los factores ambientes controlados mas
frecuentes son:
a)Concentración de oxígeno
b)pH
c)Masa celular OBTENCIÓN
DE DATOS
d)Temperatura (Adquisición inmediata)
CONTROL DE VARIOS
e)Concentración del producto FACTORES
AMBIENTALES

f) Formación de espuma

• Computadoras
controlan el proceso
para asegurar
rendimientos
satisfactorios de los
productos que se
desean.

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Aireación y agitación
• Directa / Indirecta o como efecto 2dario de la
agitación es necesaria por:
1. Incrementa la velocidad de transferencia de O2
de las burbujas al medio líquido (O2 disuelto).
2. Incrementa la velocidad de transferencia de O2 y
nutrientes desde el medio a las células
(microorganismos).
3. Impide la formación de agrupaciones de células o
agregados de micelio
4. Aumenta la velocidad de transferencia de
productos metabólicos de células al medio.
5. Aumenta la tasa o la eficiencia de la transferencia
de calor entre el medio y las superficies de refrigeración
del fermentador

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Afectan al suministro de O2
 Tipo de agitación: forma, numero y disposición de los
impulsores y deflectores.
 Velocidad de agitación: 1000rpm, ejm penicilina 50
rpm (poco rentable)
 Profundidad del líquido en el fermentador: burbujas se
mantienen mas tiempo en un fermentador alto
(profundo) y la presión hidrostática en el difusor
mejora la disolución de O2.
Relación altura /diámetro 3:1 ó 4:1
 Tipo de difusor: numerosos orificios ó una abertura
única

Afectan al suministro de O2
 Flujo de aire: La eficiencia en la aireación se
incrementa aumentando la velocidad de flujo de aire
expresada en vvm (volumen de aire/volumen de
medio/minuto). Vel aire 0,5-1,0 vvm (No)
 Propiedades físicas del medio: la T °, viscosidad,
tensión superficial y la naturaleza del organismo
afectan a la disolución de O2 directamente o por
tamaño de burbuja o turbulencia.

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• La aireación permite reducir la

cantidad de calor producida
durante la fermentación.

• Las burbujas de aire van

aumentando de tamaño
conforme ascienden por el tubo
interior por lo que su relación
superficie /volumen disminuye
y la transferencia de O2 al
cultivo es menor.

A Difusor en anillo B Difusor en rejilla C Conducto abierto simple

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Esterilización de fermentadores
 A medida que la escala de operación se incrementa, la
esterilización debe ser mas rigurosa , aumentando el
tiempo, T°, o ambos para mantener la probabilidad de
contaminación de 1 en 1000 considerada aceptable.

Esterilización del fermentador y

el medio conjuntamente
a) Inyección de vapor en el medio
Medio se prepara ligeramente concentrado para compensar la
dilución por el vapor condensado.
Controlar aditivos a la caldera

a) Medio se calienta por conducción

Haciendo pasar vapor por la camisa de termostatización
(serpentín)
• 120-150 ° C

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Esterilización por separado del

fermentador y el medio
a) Esterilización del medio en una caldera
del mismo tamaño que el fermentador

b) Esterilización en continuo
Intercambiador de calor
• 120-150 ° C

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Inoculación en fermentadores
Stock de cultivos

a) Liofilizados
b) Congelados por inmersión en N liquido
c) Silica gel
d) Otros

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Factores que afectan la velocidad de

crecimiento

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Inoculación en fermentadores
Inoculación en el
estadio final es
alto a menudo
1/10 y 1/5 del
volumen del
fermentador

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Tamaño del fermentador Producto

[lts]
1-20. 000 Enzimas para diagnostico,
sustancias para Biología
molecular
40 – 80.000 Algunas enzimas ,
antibióticos
100- 150.000 Penicilina, antibióticos,
aminoglicósidos, proteasa,
amilasas, transformacion de
esteroides, aminoácidos,
vino, cerveza.

200.000- 500.000 Aminoácidos (ácido

glutámico), vino, cerveza

Equipos accesorios
• Valvula de seguridad
• Manometros
• Valvulas de control
• Tuberias
• Control de temperatura
• Control de pH
• Control de espumas
• Puntos de muestreo

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Formas de medición del crecimiento

microbiano
• Peso seco celular
• Absorción
• Peso húmedo
• Volumen
• Número de células
• Mediciones físicas

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Características de la fermentación
en gran escala
• Fermentación : proceso microbiano
aeróbico ó anaeróbico a gran escala.
• La mayor parte de las fermentaciones
industriales son aeróbicas.
• El tanque es el fermentador y el
microorganismo es el fermento.
• Proceso pueden ser continuos o
discotinuos

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Características de la fermentación
en gran escala
• Los fermentadores industriales se pueden
dividir en dos clases principales, para
procesos aeróbicos y anaeróbicos.
• Los fermentadores aeróbicos requieren
equipo más elaborado para asegurar la
correcta mezcla y aereación.

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