Estudio de implante de polímero semiconductor en lesión de médula espinal

en rata mediante análisis de imágenes.

Axayacatl Morales1, A.O. Rodriguez1, A. Diaz3, C. Ríos4, H. Salgado4,5, G.J. Cruz6, M.G. Olayo6,
J. Morales7, A.L. Alvarez1, R. Mondragón1, A. Escalona1, R. Baheza2, R. Olayo7
1
Dep. Ingeniería Eléctrica, UAM Iztapalapa, DF, México.
2
Vanderbilt University Institue of Imaging Science, Nashville, TN, United States.
3
Dep. Neuroquímica, INNN-MVS, SS, DF, México.
4
Unidad de Investigación Médica en Enfermedades Neurológicas, Centro Médico Nacional, DF, México.
5
Centro de Investigación del proyecto CAMINA A.C., DF, México.
6
Departamento de Síntesis y Caracterización, Instituto Nacional de Investigaciones
Nucleares, Estado de México, México.
7
Departamento de Física, Universidad Autónoma Metropolitana Iztapalapa., DF, México.

Abstract— Different plasma-synthesized polymers have re-
cently been implanted in rats with spinal cord injury to inves-
tigate their feasibility to restore mechanical movements. The
spinal cord injury can be studied using both computerized
tomographic imaging and high field magnetic resonance imag-
ing since they offer non-invasively ways to study the evolution
of the lesion in animal models. These imaging modalities offer
advantages over the traditional histological procedures. Ani-
mal models do not have to be sacrificed to study the tissue at
different time points, it is not time-consuming because there is
no need to use very elaborated staining techniques. In this
paper, in vivo computerized tomographic images of a polymer-
implanted rat with spinal cord injury, and preliminary mag-
netic resonance images of a polymer-implanted isolated spinal
cord are reported. A plasma-synthesized polymer was used to
promote the healing of the injured region. Images using both
techniques show a great deal of anatomic information as well
as the clear localization of the implanted polymer in the spinal
cord. MR images are able to show superior quality anatomic
details over the tomographic computerized images, but bone
images acquired CT have a greater bone-tissue contrast. Digi-
tal processing techniques are able improve the visualization of
the anatomic information.
Palabras claves— Lesión de Médula Espinal, Polimerización
por plasma, Tomografía Axial, Resonancia Magnética.
I. INTRODUCCIÓN
La lesión de médula espinal (LME) es un problema de
salud pública que afecta principalmente a la población
económicamente activa. Se estima que la incidencia anual
de daño a la médula espinal es aproximadamente de 40
casos por millón en la población de EE. UU, sin incluir
aquellos que mueren en el accidente [1].
En la actualidad no se cuenta con una estrategia
terapéutica efectiva para reestablecer la función neurológica
normal, esto se debe a la complejidad para regular los
mecanismos de daño secundario, así como la baja capacidad
de regeneración espontánea de las células neuronales [2, 3].
Durante varios años se ha propuesto el posible efecto benéfico
de los implantes en el tejido nervioso después de una LME con
el fin de promover una posible recuperación funcional. Los
implantes pueden estimular el crecimiento axonal, quizá por
la adecuada combinación de diversos tipos celulares y la
interacción con diversos factores de crecimiento. Se han
desarrollado diversos protocolos como cultivos celulares,
implantes de células progenitoras neuronales de embriones,
implantes de polímeros conductores, etc. [4] En estudios
experimentales de LME, se ha incrementado el uso de
roedores como modelo animal [3-7].
Los polímeros conductores sintetizados por plasma e
implantados en ratas adultas con lesión por sección (LPS)
completa de médula espinal favorecen en la protección del
tejido nervioso adyacente a la lesión así como en la
recuperación funcional de los animales de forma
significativa, al compararlos con animales lesionados pero
sin implante [4].
El grado de daño inicial y los eventos patobiológicos
subsecuentes a la lesión son principalmente evaluados
usando métodos invasivos o terminales basados en
histología o inmunohistoquímica para correlacionar con el
comportamiento (generalmente función motora) en los
modelos de LME. Aunque estos métodos tradicionales son
esenciales para establecer los caminos y los mecanismos
A) B)
Fig. 1 A) Muestra el resultado de una lesión por sección completa
de médula espinal, el tren posterior es arrastrado por completo;
B) Animal con mismo procedimiento quirúrgico con implante
de PPY/I. Donde el tren posterior es soportado por las patas traseras.

Carmen Mueller-Karger, Sara Wong, Alexandra La Cruz (Eds.): CLAIB 2007, IFMBE Proceedings 18, pp. 650–653, 2007
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Estudio de implante de polímero semiconductor en lesión de médula espinal en rata mediante análisis de imágenes.
implicados en los acontecimientos postlesión, es necesario
sacrificar a los animales en diferentes etapas para obtener
los tejidos requeridos.
Otras aproximaciones, como tomografía axial
computarzada (TAC) y la imagenología por resonancia
magnética (IRM), ofrecen una manera de sondear la
evolución de la lesión de una manera no invasiva, de modo
que cada animal puede actuar como su control a través del
tiempo in vivo.
II. EXPERIMENTACION
A. Síntesis del Polímero.
El polímero semiconductor Polipirrol/Iodo (PPY/I) fue
sintetizado por plasma [8] como película delgada en un
sustrato de vidrio (cámara de reacción). La síntesis se
realizo en un reactor tubular de vidrio, de 9cm de diámetro
y 20cm de longitud; la distancia entre los electrodos fue de
15cm, aplicando una señal de RF de 13.5Mhz y potencia
promedio de 18W; se mantuvo una temperatura constante
de 365ºK, a una presión promedio de 1.5x10-2Torr con un
potencial de 700V. Durante la síntesis se utilizo Iodo en su
fase de vapor como dopante, el monómero Pirrol y el
dopante se mezclaron libremente dentro de la cámara de
reacción durante 300min de tiempo efectivo de reacción.
Una vez sintetizado el material, se desprendió de las
paredes de la cámara de reacción con la ayuda de un
solvente (acetona); conservando 1cm2 de la película para
los análisis, infrarrojo (IR) y morfológico; se pulverizo y
compacto el resto del material para crear una pastilla
(150mm de diámetro y 1mm de espesor), para la medición
de resistencia eléctrica y el implante.
B. Modelo de Lesión.
El presente trabajo siguió los lineamientos establecidos
en el reglamento de la ley general de salud en materia de
investigación para la salud (título Séptimo: De la
investigación que incluye la utilización de animales de
experimentación).
Se emplearon 16 ratas de la cepa Long Evans, hembras
adultas entre 12–14 semanas de edad con peso corporal de
entre 230-250g, divididas en 2 grupos:
• Grupo Control. Ocho ratas a las cuales se les practico
una sección (LPS) completa de la médula espinal a ni-
vel de la 9a vértebra toráxica (T9).
• Grupo PPy/I. Ocho ratas a las cuales se le aplicó el
mismo procedimiento quirúrgico y se les implantó una
pastilla de polímero PPy/I.
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IFMBE Proceedings Vol. 18
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Los animales fueron anestesiados por vía intramuscular
con una mezcla de 77.5mg de ketamina y 12.5mg de
hidrocloruro de xilacina por Kg. de peso corporal.
Posteriormente fueron sometidos a una cirugía en la que se
les practicó una incisión sagital en la piel seguida de una
disección de los músculos paravertebrales de las apófisis
espinosas. Se extirparon 2 apófisis espinosas de T8-T9 para
observar los procesos laminares de esas vértebras. A
continuación se realizó una laminectomía de 2 niveles,
extendiéndola bilateralmente hasta los procesos facetarios.
Las meninges se mantuvieron intactas. Una vez concluida la
laminectomía se realizó una incisión longitudinal en
meninges de aproximadamente 5mm de largo,
posteriormente se hizo un corte transversal completo de la
médula espinal, y se corroboro mediante microscopio
quirúrgico que ninguna vía nerviosa quedara conectada.
Inmediatamente después justo en el sitio de sección se
introdujo en forma transversal un trozo de pastilla de
polímero de aproximadamente 3mm de diámetro, después
de la implantación se paso una sutura de 10-0 a través de las
meninges con puntos simples de sutura. Finalmente, la
incisión quirúrgica se suturó en 2 planos.
C. Tomografía Axial Computarizada.
Los cortes tomográficos se tomaron semanalmente con el
fin de sondear la progresión de los animales, en cada sesión
se realizaron sacrificios (perfusión vía cardiaca) de un
animal por grupo para obtener la muestra de la médula
espinal y poder comparar a diferentes tiempos de
recuperación.
Los estudios se llevaron acabo con un campo de visión
de 180mm, 500mAs, 120kV con una distancia por corte de
0.2mm. Obteniendo imágenes con una resolución de
512x512 píxeles.
D. Imagenología por Resonancia Magnética.
A un animal perteneciente al grupo PPY/I con 4 semanas
de recuperación se le realizó un proceso de perfusión
cardiaca donde se extrajo una muestra de médula espinal de
2mm de diámetro y 2cm de longitud tomando como
referencia la zona del implante (epicentro de lesión) y fue
depositada en un contenedor con Formaldehído al 10%.
A esta muestra se le realizó un estudio de Imagenología
por resonancia magnética (RMN) con un sistema Bruker de
7T. Se emplearon secuencias estándar de gradientes de eco
con los siguientes parámetros de adquisición:
TE/TR=5/20ms, FOV=8x8cm, ángulo=20°, tamaño de
matriz=128x128, NEX=2.
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