Universidad Nacional Autónoma de

México
Facultad de Estudios Superiores
“Zaragoza”
Carrera: Médico cirujano

Modulo: Sistema Nervioso y Órganos de los Sentidos

Microbiología – Laboratorio

Meningitis Bacteriana
Grupo: 1307

Dra. Verónica Torres Caballero

Integrantes:
Benito Victorino María Nataly (Introducción)
Cruz Zepeda José Eduardo (Introducción)
De Jesús Pérez Erika Jocelyn (Introducción)
Diaz Sánchez Alba Lizeth (Objetivos, Material, Procedimiento, Conclusión)
Flores Avila Luis Ramon (Introducción)
Lorenzo Santos Pedro (Cuestionario Extra)
Mendoza Ocampo Edgar (Resultados)
Ortiz Avila Leonardo Uriel (Cuestionario del Manual)
Rocha Arevalo Fabiola Yamilet (Análisis de resultados)
Rodríguez Morales Yareli (Análisis de resultados)
OBJETIVO

Conocer las características morfológicas y de tinción, así como los métodos de

cultivo e identificación de las principales bacterias causantes de meningitis
bacteriana

INTRODUCCIÓN

La meningitis se define como un proceso inflamatorio agudo del sistema nervioso

central causado por microorganismos que afectan las leptomeninges, los cuales
incluyen bacterias, virus, hongos y parásitos. Un 80% ocurre en la infancia,
especialmente en menores de 10 años. (1)

La importancia de identificar el agente el etiológico influye en la elección precoz de

la antibioticoterapia, y como resultado limita las complicaciones y secuelas. Se
conoce la asociación de diferentes formas bacterianas con la edad del niño, la
enfermedad de base que pueda padecer y su estado inmunitario (Cuadro 1). (1)

Los tres agentes etiológicos bacterianos reportados con mayor frecuencia en la

etapa pediátrica son S. pneumoniae, Neisseria meningitidis y Haemophilus
influenzae tipo B, este último agente asociado con menor incidencia debido a la
administración de vacuna conjugada contra Hib. (1)

En el periodo neonatal predominan los microorganismos Gram negativos. (1)

Al implementar la administración de la vacuna conjugada contra Hib, Streptococcus

pneumoniae es el principal agente causal de meningitis bacteriana en niños que
pasan el periodo neonatal. (1)
Debemos considerar agentes bacterianos asociados a enfermos con comorbilidad
y situaciones especiales de base. Algunos pacientes con dispositivos externos,
como válvulas de derivación ventriculoperitoneal, se ven afectados con mayor
frecuencia por Staphylococcus (coagulasa negativos) y Staphylococcus aureus,
inmunodeficiencia de tipo humoral, Streptococcus pneumoniae, Neisseria
meningitidis y H. influenzae. En caso de trauma penetrante, varía la etiología de
acuerdo al mecanismo de lesión. Y de acuerdo al estado inmunológico del paciente,
hay agentes oportunistas como Listeria monocytogenes. (1)

La meningitis bacteriana afecta principalmente en la edad pediátrica a menores de

un año de edad, con alta incidencia después del periodo neonatal, principalmente
en pacientes de tres y ocho meses. (1)

El desarrollo de la meningitis bacteriana se puede explicar a partir de cinco etapas:

(1)

1. Colonización bacteriana de nasofaringe. (1)

2. Daño a la mucosa y penetración a torrente sanguíneo. (1)

3. Multiplicación bacteriana en el espacio intravascular e invasión a barrera

hematoencefálica. (1)

4. Respuesta inflamatoria dentro del espacio subaracnoideo. (1)

5. Daño a células del sistema nervioso y nervio auditivo. (1)

La sintomatología varía de acuerdo a la edad del paciente, la virulencia del agente

bacteriano involucrado, el estado inmunológico del huésped, entre otros;
presentándose desde sintomatología inespecífica como vómitos, hiporexia,
irritabilidad, astenia, hasta datos específicos como crisis convulsiva, cefalea y
alteración del estado de alerta. (1)

Ante esto, la sintomatología descrita se puede caracterizar en síndromes,

reconociéndose cuatro que a continuación se describen: (1)

1. Síndrome infeccioso: Caracterizado por la presencia de fiebre. (1)

2. Síndrome encefálico: Se reconocen alteraciones del estado de alerta,
somnolencia, estupor, delirio o coma. Crisis convulsivas, irritabilidad e hipertonía.
(1)

3. Síndrome meníngeo: Rigidez de nuca, signo de Brudzinski y Kerning. (1)

4. Síndrome de hipertensión endocraneal: Vómitos, cefalea, edema de papila,

fontanela abombada, separación de suturas; estas dos últimas son más comunes
en neonatos y lactantes. (1)

La sospecha clínica de un proceso infeccioso en el sistema nervioso central nos

obliga a realizar el análisis del líquido cefalorraquídeo (LCR) obtenido por punción
lumbar, con determinación de: (1)

• Medición de la presión del líquido cefalorraquídeo. (1)

• Estudio citoquímico. (1)

• Tinción de Gram. (1)

• Cultivo. (1)

• Exámenes inmunológicos (coaglutinación o aglutinación de látex). (1)

• Determinación de reacción en cadena de polimerasa (PCR). (1)

En el análisis del líquido cefalorraquídeo en meningitis bacteriana encontraremos

aumento de la presión, aspecto turbio o purulento, aumento de la celularidad con
pleocitosis a expensas de mononucleares en la etapa inicial del padecimiento, con
variación en las primeras 24 horas a polimorfonucleares (Cuadro 2). (1)

La muestra adecuada para el diagnóstico microbiológico de la meningitis es el LCR,

que normalmente se obtiene mediante punción lumbar. La punción se realizará de
ordinario en los espacios intervertebrales L3-L4 o L4-L5. El LCR se recogerá en
tubos estériles, siempre que sea posible se obtendrán dos tubos, uno para análisis
citoquímico y otro para estudio microbiológico, seleccionando siempre el más turbio
para la realización de pruebas de diagnóstico microbiológico. (2)
Para el estudio de bacterias o virus habituales se necesita 1 ml en cada caso, y si
además deben investigarse hongos o micobacterias es necesario disponer de 2 ml
adicionales para cada uno de estos estudios, e idealmente llegar a los 10 ml en
total. (2)

Cuadro 2. Características de LCR.

Una herramienta importante en la elección del tratamiento antibiótico es la tinción

de Gram, que nos orienta acerca de la probable etiología. Encontrando una relación
directa entre el número de bacterias y el porcentaje de identificación por tinción de
Gram. (1)

Además, podemos mencionar falsos negativos en la tinción de Gram por falta de

penetración de los colorantes al encontrarnos ante una muestra con exceso de
polimorfonucleares o bacterias; y falsos positivos por efecto de contaminantes en la
tinción. (1)

Debido al tipo de bacterias implicadas en la etiología de la meningitis, para el cultivo

deben emplearse medios enriquecidos, como el agar sangre y el agar chocolate. (2)

S. pneumoniae es un coco Gram positivo, encapsulado, lanceolado, que

frecuentemente se presenta en cadenas rectas y cortas. En caldos tiene un
crecimiento difuso, y en agar muestra colonias pequeñas, grisáceas y mucoides
(acuosas), rodeadas de una zona verde de hemólisis parcial (hemólisis ) en el agar
sangre ovina al 5%. Una lupa o un microscopio (30X-50X) es útil para diferenciar
morfológicamente las colonias de neumococos de las de Streptococcus viridans,
que también producen una zona verde de hemólisis en el agar sangre ovina a 5%.
(3)

Las colonias jóvenes de neumococos son abultadas, como las de S. viridans, pero
después de 24 a 48 horas de cultivo, las colonias se achatan y puede formarse una
depresión en el centro de cada una de ellas (apariencia umbilicada), esto no ocurre
con S. viridans. El aspecto mucoide de S. pneumoniae dependerá del tiempo del
medio y de la atmósfera de incubación. Cuanto más fresco sea el medio, más
mucoides parecerán los cultivos. (3)

Haemophilus influenzae es una de las 8 especies de Haemophilus que residen

como organismos comensales en faringe humana. (4)

Es un coco bacilo gramnegativo pequeño que mide 0,2-0,3 por 0,5-0,8 µm, inmóvil,
no formador de esporas, perteneciente a la familia Pasteurellaceae. Está
ampliamente distribuido y afecta exclusivamente a humanos. (4)

Haemophilus influenzae requiere del punto de vista nutricional un medio complejo y

factores de crecimiento que se encuentran presentes en los eritrocitos: factor X o
factor termoestable del hierro, que suministran protoporfirinas (hemina) y factor V o
factor termolábil (NAD o NADP). (4)

Crece a 35-37ºC en un pH óptimo de 7,6 en condiciones aeróbicas o con 5% CO2.

El medio de elección es agar chocolate que libera los factores X and V que necesita
para su desarrollo. En la tinción de Gram pueden verse pleomórficos y gram
variables. Se describe satelitismo, ya que crece alrededor de colonias de S. aureus
hemolítico (fuente de factor V). (4)

Las colonias tienen una forma convexa, circular, granular o transparente, levemente
opaca; de 0,5-0,8 mm a las 24 h y 1-1,5 mm a las 48 h. Las colonias de las cepas
capsuladas son de mayor tamaño y de aspecto más mucoide, alcanzado los 3 mm.
Presenta un olor característico. (4)
Neisseria meningitidis. Se presentan como diplococos Gram negativos arriñonados.
(5)

N. meningitidis presenta una morfología macroscópica caracterizada por colonias

de mayor tamaño que N. gonorrhoeae, convexas, lisas, borde entero, brillantes y
grisáceas. (5)

N. meningitidis crece tanto en agar sangre como agar chocolate, no así N.

gonorrhoeae que crece sólo en agar chocolate en los aislamientos primarios. (5)

Las cepas de Escherichia coli presentan un característico brillo metálico, en EMB

agar (con Eosina y Azul de Metileno). Este medio es utilizado para el aislamiento
selectivo de bacilos Gram negativo de rápido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de Enterobacteriaceae. (6)

La piedra angular del diagnóstico la constituye la identificación microbiológica del

agente, esto logrado a partir de la solicitud del cultivo de líquido cefalorraquídeo,
que a la vez brinda apoyo terapéutico al momento de la elección del tratamiento
antibiótico específico a partir del antibiograma. (1)

El tratamiento se establece de manera empírica, tomando en cuenta la posible

etiología para el grupo etario (Cuadro III) hasta la obtención del agente específico a
partir del análisis del líquido cefalorraquídeo (LCR) y su cultivo. Una vez identificado
el agente causal se puede determinar el tiempo que se recomienda mantener el
tratamiento. (1)

MATERIAL

1. Asa bacteriológica.
2. Microscopio.
3. Juego de colorantes para tinción de Gram.
4. Placa de Agar Sangre.
5. Placa de Agar Chocolate.
6. Placa de Agar EMB.
7. Cepa de Escherichia coli.
8. Cepa de Neisseria sp.
 9. Cepa de Streptococcus pneumoniae.

PROCEDIMIENTO

1- Sembrar las cepas en las placas correspondientes por la técnica de estria

cruzada. Reportar la morfología colonial a las 24 y 48 horas.
2- Realizar preparaciones y teñir con la técnica de Gram. Observar a 100X.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el aspecto del líquido cefalorraquídeo que procede de una

infección bacteriana?

En el análisis del líquido cefalorraquídeo en meningitis bacteriana encontraremos

aumento de la presión, aspecto turbio o purulento.

Referencia bibliográfica

Robledo-Leija MR. Meningitis bacteriana. Evid Med Invest Salud 2013; 6 (1): 18-21.

2. ¿Cuántos tubos de muestra se extraen para el análisis del LCR?

Justifique su respuesta.

La muestra adecuada para el diagnóstico microbiológico de la meningitis es el LCR,

que normalmente se obtiene mediante punción lumbar. La punción se realizará de
ordinario en los espacios intervertebrales L3-L4 o L4-L5. El LCR se recogerá en
tubos estériles, siempre que sea posible se obtendrán dos tubos, uno para análisis
citoquímico y otro para estudio microbiológico, seleccionando siempre el más turbio
para la realización de pruebas de diagnóstico microbiológico.

Referencia bibliográfica

SEIMC [en línea]. España. Soc Esp Enf Inf Microbiol Clin; [citado 27 Agosto]
Diagnóstico microbiológico de las infecciones del sistema nervioso central; [38 pant].
Disponible en: https://n9.cl/5qzo
 3. ¿Qué valores de referencia se tienen para cada uno de los aspectos que
comprenden el examen físico de LCR?

Referencia bibliográfica:

Robledo-Leija MR. Meningitis bacteriana. Evid Med Invest Salud 2013; 6 (1): 18-21.

4. ¿Qué aspectos comprende el examen citológico del LCR?

Presencia de leucocitos, linfocitos o polinucleares, glóbulos rojos, bacterias, restos

de fibrina, células neoplásicas y la presencia de sustancias extrañas introducidas
en el LCR.

La presencia de leucocitos provoca diferentes grados de turbidez que dependen, no

sólo del número, sino también de la calidad de esos elementos.
Referencia bibliográfica

SEIMC [en línea]. España. Soc Esp Enf Inf Microbiol Clin; [citado 27 Agosto]
Diagnóstico microbiológico de las infecciones del sistema nervioso central; [38 pant].
Disponible en: https://n9.cl/5qzo

5. ¿Qué aspectos comprende el examen del LCR?

Presión, aspecto, células, tipo de células, proteínas, lactosa, lactato, Ph.

Referencia bibliográfica

Robledo-Leija MR. Meningitis bacteriana. Evid Med Invest Salud 2013; 6 (1): 18-21.

RESULTADOS

Agar Sangre Agar Chocolate Agar EMB

Escherichia coli Se observa alfa No hay Colonias negro
hemolisis. crecimiento. azuladas de brillo
metálico.
Neisseria sp Colonias Colonias Colonias del color
convexas, lisas, convexas, lisas, del medio
bordes enteros, bordes enteros, incoloras.
brillantes y brillantes y
grisáceos. grisáceos.
Streptococcus Se observa alfa Aspecto mucoide. No hay
pneumoniae hemolisis. crecimiento.
ANALISIS DE RESULTADOS

Escherichia coli

En el agar sangre se observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia de

estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina por el
peróxido de hidrogeno generado por el microorganismo. En agar chocolate no hubo
crecimiento notorio por que los eritrocitos se encuentran lisados para su crecimiento.
En el EMB se formaron colonias de color negro azuladas de brillo metálico ya que
son capaces de fermentar lactosa.

Neisseria sp

En agar sangre y agar chocolate se formaron colonias convexas, lisas, bordes

enteros, brillantes y grisáceos, ya que no necesita de un medio enriquecido para su
desarrollo. En agar EMB no hubo cambios en el medio porque es un
microorganismo que no fermenta lactosa.

Streptococcus pneumoniae

En el agar sangre se observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia de

estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina por el
peróxido de hidrogeno generado por el microorganismo. En agar chocolate se
observa un aspecto mucoide debido a su capsula.

CONCLUSIONES

El diagnóstico de laboratorio de las Meningitis Bacterianas a través de la tinción de

Gram y los medios de cultivo resuelven el problema de la elección medicamentos
antimicrobianos, pero aun así continúan los problemas terapéuticos. Las decisiones
del manejo con respecto al momento de administración y la elección del tratamiento
empírico antimicrobiano, gracias a la tinción de Gram como una prueba rápida en el
microscopio, la necesidad de la toma de imágenes craneanas y los beneficios del
tratamiento adjunto con glucocorticoides siguen siendo motivos de controversias. La
implementación de campañas de vacunación contra H. influenzae y el uso de
antibióticos en todo el mundo han dado lugar a que hayan ocurrido cambios en la
epidemiología de la meningitis y a una situación de emergencia con la resistencia a
los antibióticos. A medida que la curación microbiológica en el líquido
cefalorraquídeo se vuelve más difícil, aumenta la necesidad de vacunas
contra N.meningitidis y S. pneumoniae.

Referencias Bibliográficas

1- Robledo-Leija MR. Meningitis bacteriana. Evid Med Invest Salud 2013; 6 (1):
18-21.
2- SEIMC [en línea]. España. Soc Esp Enf Inf Microbiol Clin; [citado 27 Agosto]
Diagnóstico microbiológico de las infecciones del sistema nervioso central;
[38 pant]. Disponible en: https://n9.cl/5qzo
3- OPS [en línea]. Colombia. Instituto Nacional de Salud [citado 27 Agosto 2020]
Procedimientos para el diagnóstico de Neumonías y Meningitis Bacterianas
y la caracterización de cepas de Streptococcus pneumoniae y Haemophilus
influenzae, SIREVA II; [121 pant]. Disponible: https://n9.cl/5slk
4- Sakurada A. Haemophilus influenzae. Rev Chilena Infectol 2013; 30 (6): 661-
662.
5- Instituto de Higiene [en línea]. Uruguay. Uni Rep Mateos [citado 27 Agosto
2020] Gram negativas exigentes: Aspectos prácticos; [3 pant]. Disponible:
https://n9.cl/0kx2e
6- BRITANIA [en línea]. Argentina: Britania Lab; [citado 28 Agosto 2020] EMB
agar (con Eosina y Azul de Metileno); [2 pant.]. Disponible en:
https://n9.cl/b127
CUESTIONARIO ADICIONAL

1- La presencia de Leucocitos Mononucleares se presenta en este tipo de

Meningitis EXCEPTO.
a) Vírica.
b) Bacteriana.
c) Tuberculosa.
d) Criptocócica.

Referencia bibliográfica

SEIMC [en línea]. España. Soc Esp Enf Inf Microbiol Clin; [citado 27 Agosto]
Diagnóstico microbiológico de las infecciones del sistema nervioso central; [38 pant].
Disponible en: https://n9.cl/5qzo

2- Los valores de glucosa en la meningitis bacteriana tiene un intervalo

>45 mg/dL.
a) Verdadero.
b) Falso.

Referencia bibliográfica

SEIMC [en línea]. España. Soc Esp Enf Inf Microbiol Clin; [citado 27 Agosto]
Diagnóstico microbiológico de las infecciones del sistema nervioso central; [38 pant].
Disponible en: https://n9.cl/5qzo

3- El valor de proteínas en la meningitis bacteriana tiene un intervalo de

100-500 mg/dl.

Referencia bibliográfica

SEIMC [en línea]. España. Soc Esp Enf Inf Microbiol Clin; [citado 27 Agosto]
Diagnóstico microbiológico de las infecciones del sistema nervioso central; [38 pant].
Disponible en: https://n9.cl/5qzo
 4- Haemophilus influenzae requiere desde el punto de vista nutricional un
medio complejo y factores de crecimiento que se encuentran en el
medio:
a) Agar Sangre.
b) Agar McCONKEY.
c) Agar Chocolate.
d) Agar Sabouraud.

Referencias bibliográficas

Sakurada A. Haemophilus influenzae. Rev Chilena Infectol 2013; 30 (6): 661-662.

5- Neisseria meningitidis crece tanto en agar sangre como agar chocolate.

a) Verdadero.
b) Falso.

Referencias bibliográficas

Instituto de Higiene [en línea]. Uruguay. Uni Rep Mateos [citado 27 Agosto 2020]
Gram negativas exigentes: Aspectos prácticos; [3 pant]. Disponible:
https://n9.cl/0kx2e

6- Tipo de hemolisis que genera el Streptococcus pneumoniae en medio

agar sangre.
a) Alfa.
b) Beta.
c) Gamma.
d) Doble hemolisis.

Referencia bibliográfica

OPS [en línea]. Colombia. Instituto Nacional de Salud [citado 27 Agosto 2020]
Procedimientos para el diagnóstico de Neumonías y Meningitis Bacterianas y la
caracterización de cepas de Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae,
SIREVA II; [121 pant]. Disponible: https://n9.cl/5slk
 7- El Haemophilus influenzae tipo B, es el agente asociado con menor
incidencia debido a la administración de esta vacuna conjugada.
a) SABIN.
b) Neumococica conjugada.
c) Pentavalente.
d) Influenza.

Referencia bibliográfica

Santos JI. El Programa Nacional de Vacunación: orgullo de México. Rev Fac Med
UNAM 2002; 45 (3): 142-153.

8- El factor X o factor termoestable del hierro, que se encuentra presente

en los eritrocitos suministra principalmente.
a) Hemina.
b) NAD.
c) Epoetina.
d) Darbepoyetina alfa.

Referencia bibliográfica

Sakurada A. Haemophilus influenzae. Rev Chilena Infectol 2013; 30 (6): 661-662.

9- Neisseria meningitidis y Haemophilus influenzae tipo B comparten la

característica de ser microorganismos Gram (-).
a) Verdadero.
b) Falso.

Referencia bibliográfica

Instituto de Higiene [en línea]. Uruguay. Uni Rep Mateos [citado 27 Agosto 2020]
Gram negativas exigentes: Aspectos prácticos; [3 pant]. Disponible:
https://n9.cl/0kx2e

Sakurada A. Haemophilus influenzae. Rev Chilena Infectol 2013; 30 (6): 661-662.

 10- En EMB agar (con Eosina y Azul de Metileno) es un medio donde pueden
desarrollarse los siguientes microorganismos EXCEPTO.
a) Neisseria meningitidis.
b) Haemophilus influenzae tipo B.
c) Escherichia coli.
d) Streptococcus pneumoniae.

Referencia bibliográfica:

BRITANIA [en línea]. Argentina: Britania Lab; [citado 28 Agosto 2020] EMB agar
(con Eosina y Azul de Metileno); [2 pant.]. Disponible en: https://n9.cl/b127