FORMATO No.

1
PRESENTACIÓN DEL ANTEPROYECTO DE TRABAJO DE GRADO
A. INFORMACIÓN GENERAL DEL PROYECTO
Título del Trabajo de Investigación:

Evaluación de fitotoxicidad y citotoxicidad del Glifosol mediante Allium test.

Modalidad: Trabajo de investigación

Facultad: Ciencias Ambientales y Desarrollo Sostenible
Programa: Ingeniería Ambiental y Sanitaria
Tipo de Investigación: Aplicada
Grupo de Investigación: GITA
Línea de Investigación: Gestión Ambiental
Director del Proyecto: Diana Muñoz S. Biol. Mg.
Estudiantes: Sergio Camilo Cerón Riascos, German Alberto Morera.

B. INFORMACIÓN ESPECÍFICA DEL PROYECTO

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
El uso de herbicidas a nivel mundial ha estado presente de manera industrial
desde la segunda guerra mundial provocando un mejor desempeño en la
producción y una rentabilidad considerable al no utilizar mano de trabajo para la
limpieza de los cultivos. [1]
Colombia al ser un gran productor agrícola no se ve exento del uso de
herbicidas en múltiples áreas de las actividades agrícolas, además un factor
clave para el uso de herbicidas en el país son los cultivos ilícitos los cuales
presentan una mayor demanda a su uso. Estos herbicidas se acumulan y
permanecen en el medio ambiente, siendo peligrosos para los ecosistemas y la
salud de la población humana.[2]
Una de las principales actividades agrícolas que se desarrollan en nuestro país
es el cultivo de papa con una representación de 10 departamentos con 100 mil
familias que se dedican al cultivo. La agricultura de la papa demanda una gran
cantidad de insumos químicos que aceleran el desarrollo y productividad de las
plantas, que a su vez afecta el suelo, el agua, el aire y la salud de las personas.
[3]
El Glifosol es un herbicida no selectivo de acción sistémica con amplio espectro
de acción[4], el cual es muy utilizado en los cultivos ya que la mano de obra
utilizada para la eliminación de malezas es mayor con respecto a la utilización
del herbicida resultando eficiente y económico para el control de malezas.

Teniendo en cuenta lo anterior es necesario y pertinente realizar bioensayos

como Allium test ya que este método es rápido y eficiente para determinar el
detrimento de una sustancia presente en el ambiente además los factores a
analizar son empleados como modelos de ensayo in vivo utilizados para
determinar el daño producido por sustancias contaminantes. Este ensayo evalúa
el crecimiento de las raíces, el flujo del ciclo celular y las mutaciones
cromosomaticas. [5]
Además, el ápice radical de la cebolla (Allium cepa) puede ser usado como un
indicador biológico ya que es sensible a sustancias contaminantes, los datos
pueden ser extrapolados para evaluar la fitotoxicidad y la citotoxicidad del
glifosol en células meristemáticas de Allium cepa mediante Allium test.[5]
2. ESTADO DEL ARTE O MARCO REFERENCIAL
2.1 MARCO CONCEPTUAL
COMPOSICIÓN / PROPIEDADES INFORMACIÓN
INFORMACIÓN FÍSICAS Y QUÍMICAS TOXICOLÓGICA
Nombre: ASPECTO: Líquido
CAS amarillo POR INGESTION: DL50
Contenido OLOR: inodoro (rata) = 4050 mg/kg
Glifosato: Sal PUNTO DE POR INHALACION:
isopropilamina de N- EBULLICIÓN: No aplica CL50 (rata) > 1.3 mg/L
(fosfonemetil) Glicina PRESIÓN DE VAPOR: POR CONTACTO
38641-94-0 480 g/L No aplica DERMICO: LD50
Agua, SOLUBILIDAD EN (conejo) > 5.000 mg/kg.
tensos activos y otras AGUA: Totalmente IRRITACION: Causa
impurezas soluble irritación severa en los
cts. 1 /L GRAVEDAD ojos. Es irritante para la
ESPECIFICA: 1.17 piel.
pH: 4,4-4,9 SENSIBILIZACIÓN: No
sensibilizante dérmico.
No mutágeno,
teratógeno ni
carcinógeno.
GLIFOSATO
El Glifosato compuesto base del Glifosol, es una sal isopropilamina de N-
(fosfonemetil) glicina, con un peso molecular de 228,18 g/mol, el cual es un
herbicida no selectivo, sistémico de acción foliar, es decir, que ingresa a la
planta a través de las hojas para después migrar a otras partes del tejido vegetal
donde será mínimamente metabolizado. El mecanismo de acción del glifosato
es por medio de la inhibición de la biosíntesis de aminoácidos aromáticos en las
plantas (triptófano, fenilalanina y tirosina) mediante la inhibición de la enzima 5-
enolpiruvilshikimato-3-fosfato-sintetasa (EPSPS), con lo que se reduce la
producción de proteína y el desarrollo de la misma. El uso de herbicidas
basados en glifosato como por ejemplo Roundup, o Glifosol, entre otros, afecta
la calidad del agua y a organismos no considerados, modificando con esto la
estructura y funcionalidad de ecosistemas acuáticos. Estas afecciones incluyen
retardo en el crecimiento de organismos como algas y peces, inhibición de la
eclosión en erizos, cambios histopatológicos en branquias de tilapia como
proliferación de células filamentosas e hiperplasia celular, vacuolación de
hepatocitos y picnosis nuclear en hígado y en riñón, dilatación del espacio de
Bowman y acumulación de gotas de hialina en las células del epitelio tubular de
tilapia, alteraciones de parámetros enzimáticos como acetilcolinesterasa,
butirilcolinesterasa, carboxilesterasa y glutatión S-transferasa (GST) en R.
arenarum, alteración de la actividad sexual y de transaminasas en peces (TGO,
TGP), así como distorsiones metabólicas, hematológicas y bioquímicas de
algunos órganos y constituyentes de tejidos como lípidos totales, glucosa, entre
otros. Dichas alteraciones dependen de la especie u organismo, tipo de
compuesto, la concentración de glifosato en agua y el tiempo de exposición.[6]
ENSAYOS BIOLÓGICOS PARA DETERMINAR TOXICIDAD DE
COMPUESTOS QUÍMICOS
La importancia de la implementación de los bioensayos es que son técnicas de
rápida evaluación para los efectos tóxicos agudos o crónicos, tanto de
sustancias químicas conocidas como de muestras ambientales de composición
incierta. Estas pruebas de toxicidad tienen como objetivo medir el efecto de uno
o más contaminantes sobre las especies y consiste en la exposición de los
organismos de ensayo a concentraciones crecientes de un agente tóxico con el
objetivo de determinar algún cambio en éstos en un cierto período de tiempo.[7]
BENEFICIOS DEL BIOENSAYO ALLIUM TEST
El método Allium incluye parámetros sugeridos para el uso estándar, resultados
de varias áreas de aplicación y comparaciones con una serie de otros sistemas
de prueba. La prueba de Allium es una prueba a corto plazo con muchas
ventajas: bajo costo, fácil manejo, buenas condiciones cromosómicas para el
estudio del daño cromosómico o la alteración de la división celular, incluida la
evaluación de los riesgos de aneuploidía. La capacidad de las células de la raíz
para activar promutágenos (el sistema MFO) amplía aún más las áreas de
aplicación de la prueba Allium. El uso de series de cebollas para cada
concentración del producto químico de prueba permite consideraciones
estadísticas y, a partir de las curvas de crecimiento, se obtienen los valores de
Efecto-Concentración. La prueba de Allium es, por último, una prueba sensible
que muestra una buena correlación con otros sistemas de prueba. Por lo tanto,
los resultados positivos en la prueba de Allium deben considerarse como una
advertencia y también como una indicación de que algún producto químico
probado puede ser un riesgo para la salud humana y para nuestro medio
ambiente.[8]
REGISTRO Y ANALISIS ESTADISTICO
PROFASE
En esta etapa ocurren los siguientes
eventos: la cromatina se condensa
para formar cromosomas, se forma el
huso mitótico y desaparece la
envoltura nuclear.[9]

fuente propia
METAFASE
En esta etapa es en la que
generalmente se realizan los estudios
cromosómicos, debido a que su
morfología es muy clara.
La condensación cromosómica
iniciada en la profase continúa, por lo
que los cromosomas metafásicos se
observan con una cromatina
perfectamente empaquetada que le Fuente propia
permite al material genético mantener
su integridad durante el estrés
mecánico de los movimientos de
anafase.[9]
ANAFASE
Una vez que todos los cromosomas
se encuentran en el ecuador
formando la placa metafásica, los
centrómeros, que mantenían unidas a
 las cromátidas hermanas, se
escinden permitiendo que cada
cromátida migre hacia el polo que
estaba encarando, iniciándose así la
anafase, que se divide en anafase A y
anafase B.[9]

Fuente propia
TELOFASE
En la telofase, los microtúbulos
cinetocóricos desaparecen y los
cromosomas quedan libres en ambos
extremos celulares. En ese momento,
los cromosomas comienzan a des
condensarse y la envoltura nuclear se
reintegra. Durante la telofase tardía
los cromosomas empiezan a
transcribir y se restablece el nucléolo, Fuente propia
marcando el término de la mitosis.[9]
2.2 ANTECEDENTES
Durante el año 2017 la agricultura colombiana registró un crecimiento importante
gracias a la recuperación productiva, luego del fuerte golpe que representó el
fenómeno de El Niño. Las cifras según lo proyectado, seguirá en aumento. En el
tercer trimestre del año pasado la agricultura presentó un crecimiento anual del
7,1 por ciento. Frente al trimestre inmediatamente anterior, el crecimiento fue de
3,7 por ciento y durante lo corrido del año de 6,3 por ciento. Este incremento es
proporcional al uso de agroquímicos empleados para proteger los cultivos de
plagas y de igual manera garantizar un óptimo crecimiento.[10]. Hasta ahora en
Colombia los registros sobre la realización de bioensayos están encaminados a
evaluar la capacidad tóxica de las aguas residuales provenientes de actividades
agrícolas mas no en ensayos en laboratorio además no hay mucha
documentación generando dificultades para encontrar información relacionada,
se tiene conocimiento del empleo de Allium test para evaluación de aguas
contaminadas a nivel internacional con otro tipo de sustancias. Algunos de estos
estudias se evidencian en el anexo 1.

2.3 MARCO NORMATIVO

Como referente normativo se presenta la siguiente tabla 1, la cual presenta un
listado de las normas que establecen y regulan el empleo de agroquímicos y se
determinan parámetros e índices de calidad del agua.
Tabla 1. Normatividad ambiental aplicada para agroquímicos
NORMAS MAS IMPORTANTES
Resolución 0631 de 2015 Instituto Colombiano Agropecuario
ICA Enero 21 de 2003[11]
Resolución No. 00150 de 2003 Instituto Colombiano Agropecuario
ICA Enero 21 de 2003[12]
Decreto 1594 Derogado por D-3930 Ministerio de Salud Junio 26 de
de 2010 salvo art 20-21 1984[13]
Guías para el manejo de urgencias Ministerio de la protección social[14]
toxicológicas
JUSTIFICACIÓN
En la actualidad la contaminación de los ecosistemas se ha incrementado de
manera alarmante debido al uso de herbicidas de forma indiscriminada.
Asociados a estos se encuentran contaminantes cuya presencia en el medio
receptor puede ocasionar problemas de toxicidad tanto a plantas como
animales[15].
El glifosato tiene una gran variedad de usos a nivel agrícola. En Colombia su
uso está registrado para diversidad de cultivos. De igual manera en el año 2000
fue autorizada la fumigación aérea con glifosato por medio del programa de
erradicación como medida de mitigación para el incremento en el número de
cultivos ilícitos, ya con la resolución 1214 de 2015 se suspendieron las
aspersiones acatando las alertas de la OMS sobre los efectos nocivos de este
producto.[2]
Teniendo en cuenta lo anterior es pertinente, la realización de una evaluación en
cuanto a la citotoxicidad y fitotoxicidad del glifosato (en este caso Glifosol),
mediante la prueba de Allium Test, con el fin de determinar si existe daño celular
o inhibición de las fases mitóticas al interior de células de Allium cepa de igual
manera describir el grado del efecto tóxico que este compuesto químico tiene
sobre el crecimiento radicular de las mismas. También como fundamento teórico
para la realización de esta investigación es que casi no se han realizado
investigaciones que justifiquen la prohibición para el uso agrícola de este
herbicida a nivel nacional ya que sigue siendo un producto de venta libre en el
mercado y que representa el 40% de la industria agroquímica a nivel mundial, a
pesar de que la OMS lo ha catalogado como potencialmente cancerígeno.[16]
La mayoría de las investigaciones realizadas por muchos autores concuerdan
en que los bioensayos son eficientes y confiables para pruebas de detección
rápida y efectos sobre las células de productos químicos relacionados con
mutagenicidad, efectos citotóxicos y aberración cromosómica, la especie Allium
cepa L. ha demostrado ser eficaz, altamente sensible y menos costosa, utilizado
para las potenciales pruebas tanto en los procesos celulares mitóticos como
meióticos [17].
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Evaluar..analizar… la fitotoxicidad y la citotoxicidad del Glifosol en células
meristemáticas de Allium cepa mediante Allium test.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
1. Analizar el efecto fitotóxico de Glifosol en raíces de Allium cepa.
2. Establecer la concentración letal CL 50 y concentraciones Alta, media y
baja del Glifosol en Allium cepa.
3. determinar el efecto citotóxico del Glifosol en células meristemáticas de
raíz de Allium cepa, mediante el índice mitótico IM.
METODOLOGÍA
Determinación del efecto fitotóxico de Glifosol en raíces de Allium cepa.
A continuación, se presenta una imagen ilustrativa en forma de collage de los
pasos a realizar propuestos en la metodología
Imagen 1
Metodología a seguir

Fuente propia
Paso 1
Criterio de selección de bulbos
Se realizo la selección de los bulbos de Allium cepa (Cebolla) de 1.5 a 2 cm de
diámetro, secos y sin formación de hojas o raíz. Éstos pueden ser obtenidos del
mercado local o adquiridos a través de algún proveedor. Previo al montaje de la
prueba, los bulbos deben limpiarse eliminando la epidermis seca y removiendo,
con un bisturí o instrumento punzante el resto de tejido y raíces del área
radicular
[18]
Análisis preliminar de las replicas
Un factor importante en la elaboración de las pruebas es el proceso de limpieza
de los bulbos, durante este procedimiento debe evitarse el daño del anillo
radicular. Igualmente, se debe trabajar con un alto número de réplicas para
controlar la variabilidad de las pruebas.
Paso 2
se colocan en exposición las cebollas con sus diferentes concentraciones y su
control para este caso se va a utilizar 3 réplicas por concentración para su
preparación se emplea el método de dilución en forma secuencial aplicando un
factor de 0.2 o 0.3. Cuando se va a llevar a cabo una evaluación exploratoria,
puede emplearse una serie de diluciones logarítmicas (por ejemplo: 100; 10; 1;
0.1; 0.01), lo cual permitirá establecer el intervalo de concentración conveniente
para la determinación de la concentración Inhibitoria Media (CI50).[18] y a partir
de ella se establecerá de la siguiente manera:
Las concentraciones alta, media y baja del efluente a evaluar, como se muestra
a continuación:
C. Alta = 80% (CL50) = Concentración máxima tolerada (CMT)
C. Media = (80% CL50) /2 La mitad (CMT)
C. baja = (80% CL50) 4 Parte de (CMT)
, con el fin de descartar por lo menos 2 de los valores más extremos.
En el caso que exista un bajo desarrollo radicular en más de 2 bulbos del
control, se considera que el lote de bulbos tiene problemas, por tanto, los
resultados no serán válidos. Al igual que en todas las pruebas, se debe
establecer la sensibilidad de los bulbos a los compuestos de referencia; se
registra la sensibilidad mediante la comparación con la muestra control.
Resultados por encima o por debajo de la sensibilidad establecida son
indicativos de problemas con el material biológico utilizado.[18]

Paso 3 y 4
Se procede a contar el número de raíces y su respectiva longitud durante las
primeras 24,48 y 72 horas con el fin de promediar los datos para sus posteriores
gráficos
Pasos 5 y 6
se observa la adición de la orceína acética en las raíces la cual necesita un
flameo para que la tinción de las fases mitóticas sea mejor y posterior a esto se
corta el ápice de la raíz para llevarlo al cubre objetos donde se hace una
pequeña presión

pasos 7 y 8
se llevan las placas para ser observadas en el microscopio a 10,40 y 100x
posterior a esto se cuentan y se anotan las diferentes fases de la mitosis con
estos valores se construye una gráfica de concentración en función del
porcentaje de inhibición y se calcula la CI 50 mediante cualquiera de los
siguientes métodos: Probit, promedios móviles o Sperman y Karber.[18]

ESTABLECIMIENTO DE LA CONCENTRACIONES ALTA, MEDIA Y BAJA

DEL GLIFOSOL EN ALLIUM CEPA.
Se van a emplear una serie de 3 concentraciones (Alta, media y baja)
seleccionadas a partir de la CL50 y un control; este último contiene agua
destilada. Para su preparación se emplea el método de dilución en forma
secuencial aplicando un factor de 0.2 o 0.3. Cuando se va a llevar a cabo una
evaluación exploratoria, puede emplearse una serie de diluciones logarítmicas
(por ejemplo: 100; 10; 1; 0.1; 0.01), lo cual permitirá establecer el intervalo de
concentración conveniente para la determinación de la concentración Inhibitoria
Media (CI50).[18] y a partir de ella se establecerá de la siguiente manera:
Las concentraciones alta, media y baja del efluente a evaluar, como se muestra
a continuación:
C. Alta = 80% (CL50) = Concentración máxima tolerada (CMT)
C. Media = (80% CL50) /2 La mitad (CMT)
C. baja = (80% CL50) 4 Parte de (CMT)
Para este caso el método Probit es un modelo estadístico que analiza las
pruebas de toxicidad. El método consiste en la aplicación de correlaciones
estadísticas para estimar las consecuencias desfavorables sobre una población
a los fenómenos físicos peligrosos; nos da una relación entre la función de
probabilidad y una determinada carga de exposición.[19] Para su análisis se
emplean tres métodos (gráfico, manual, programas de computación), donde el
método grafico (extrapolación) consiste en graficar los porcentajes de mortalidad
observados en función del logaritmo de las dosis aplicadas, una vez graficados
los puntos o valores de mortalidad se traza la línea recta que se encuentre más
cercana a los valores de mortalidad observados y posteriormente se extrapola
una línea horizontal desde el punto 50% en el eje Y hacia la recta que contiene
los valores de mortalidad esperados; en ese punto de corte, se traza otra recta
perpendicular a la anterior dirigida hacia el eje X. el punto de corte en dicho eje
nos indicará la dosis que produce un 50% de mortalidad o DL 50. Por el método
manual se hace uso de calculadoras u hojas de cálculo donde se realiza una
estimación de las DL50 – DL95 o TL50 – TL95, mediante la relación que existe
entre la dosis o tiempo de exposición y porcentaje de mortalidad. Dicha relación
se ajusta más exactamente a una línea recta, cuando las dosis son
transformadas a logaritmo (base 10) y los porcentajes de mortalidad a unidades
Probit.[19]
EVALUACIÓN DEL EFECTO CITOTÓXICO DEL GLIFOSOL EN CÉLULAS
MERISTEMÁTICAS DE RAÍZ DE ALLIUM CEPA, MEDIANTE EL ÍNDICE
MITÓTICO IM.
El índice mitótico permite conocer si existe inhibición en el proceso de división
celular, si se obtienen valores inferiores a los de la solución control se puede
decir que existe inhibición, caso contrario si se obtienen valores mayores lo cual
indicaría que existe un aumento en la división producto de la aplicación de los
compuestos o sustancias químicas. [17]
Se realizarán pruebas para mitosis en los ápices radiculares, se calculará el
índice mitótico general y por fases, y se identificaran las anomalías celulares,
cortando los ápices radiculares (3 mm) y se sumergen en orceína acética y se
lleva a flameo hasta evidenciar 3 humos. Posteriormente se coloca en la lámina
se cubre con la laminilla se realiza una pequeña presión y se observa al
microscopio. La lectura de las láminas se realiza a aumentos de 10x y 40x y se
observa metafases, anafases, telofases interfase y profases [ CITATION Cum13 \l
9226 ]. Se utilizan las siguientes fórmulas: índice mitótico general (IMg) = número
de células en división/número de células totales; índice mitótico profase (IMp) =
número de células en profase/número de células en división; índice mitótico
metafase (IMm) = número de células en metafase/número de células en división;
índice mitótico anafase (IMa) = número de células en anafase/número de células
en división; índice mitótico telofase (IMt) = número de células en telofase/
número de células en división.[17]

Los datos se registrarán en cuadros individuales para cada prueba. Para la

prueba de letalidad CL50, los datos referentes las observaciones de toxicidad
serán registradas en cuadros diseñados para un análisis eficiente
Luego los datos serán ingresados a programa Excel y una vez organizados se
transferirán al paquete estadístico SPSS (Statiscal Package for to Social
Scientific), para el análisis estadístico referencial y descriptivo. Se aplicarán
pruebas de normalidad, independencia y homogeneidad de varianza para
determinar si los datos cumplieron con los requerimientos para aplicar pruebas
paramétricas o no paramétricas.[17]

PRODUCTOS ESPERADOS
1. Se presentará ante el comité académico y a los jurados del proyecto un
documento final de Evaluación Fitotóxica y citotóxica del Glifosol en Allium cepa.
2. Se escribirá un artículo para la publicación en donde se evidencie todo el
proceso metodológico con sus correspondientes resultados.
3. Socialización del trabajo de investigación en eventos de carácter científico y/o
académico a nivel regional y nacional.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] universidad del bio-bio chile, e. zamorano-ponce, and gilda v. mac-carte,
“theoria,” vol. 17, no. 2, 2008.
[2] c. campuzano cotina, luisa maria feijoo fonnegra, k. manzur pineda, m.
palacio muñoz, j. rendon fonnegra, and juan pablo zapata diaz, “efectos
de la intoxicación por glifosato en la población agrícola: revisión de tema,”
rev. ces salud pública, vol. 8, no. 1, pp. 121–133, 2017, doi:
10.21615/4427.
[3] ministerio de agricultura y desarrollo rural (madr), “la producción de papa
en 2018 podría llegar 2 millones 690 mil toneladas,” 2018. .
[4] “plan de manejo ambiental erradicación de cultivos ilícitos. glifosato,”
2000.
[5] estela monica lopez sardi, beatriz noemi garcia, v. larroude, r. picicelli, c.
yayina reynoso, and e. ramirez martinez, “uso de allium cepa test como
indicador de eficacia para el tratamiento de efluentes,” vol. 115, pp. 81–89,
1900.
[6] norma julieta salazar lopez and maria lourdes aldana madrid, “herbicida
glifosato: usos, toxicidad y regulación,” biotecnia, vol. 13, no. 2, p. 23,
2011, doi: 10.18633/bt.v13i2.83.
[7] j. silva, c. fuentealba, e. bay-schmith, and a. larrain, “estandarizacion del
bioensayo de toxicidad agudacon diplodon chilensis usando un toxico de
referencia,” gayana, vol. 71, no. 2, pp. 135–141, 2007, doi: 10.4067/s0717-
65382007000200001.
[8] g. fiskesjo, “the allium test as a standard in environmental monitoring,”
hereditas, vol. 102, no. 1, pp. 99–112, 1985, doi: 10.1111/j.1601-
5223.1985.tb00471.x.
[9] a. de jesus rodríguez gómez and s. frias vázquez, “la mitosis y su
 regulacion,” acta pediatr. mex., vol. 35, no. 1, pp. 55–68, 2014.
[10] juan jose perfetti del corral, “crecimiento de la agricultura.”
[11] mads, resolución 631 de 2015, vol. 2015, no. 49. 2015.
[12] i.c.a, por la cual se adopta el reglamento técnico de fertilizantes y
acondicionadores de suelos para colombia, vol. 00150, no. 00150. 2003,
pp. 1–18.
[13] ideam, decreto 1594 de 1984 usos del agua y residuos líquidos, no.
alexander 1975. 1984, p. 576.
[14] ministerio de la proteccion nacional.universidad nacional, “guías para el
manejo de urgencias toxicológicas grupo de atención de emergencias y
desastres.” p. 348, 2008.
[15] a. m. del puerto rodríguez, s. suárez tamayo, and d. e. palacio estrada,
“efectos de los plaguicidas sobre el ambiente y la salud,” rev. cubana hig.
epidemiol., vol. 52, no. 3, pp. 372–387, 2014.
[16] instituto nacional de salud, “apreciacion reporte iarc clasificacion herbicida
glifosato,” p. 22, 2015.
[17] l. a. causil vargas, j. l. coronado, l. f. verbel, m. f. vega j, k. a. donado e,
and c. pacheco g, “efecto citotóxico del hipoclorito de sodio (naclo), en
células ápicales de raíces de cebolla (allium cepa l.),” rev. colomb.
ciencias hortícolas, vol. 11, no. 1, p. 8, 2017, doi:
10.17584/rcch.2017v11i1.5662.
[18] maria consuelo diaz baez, a. ronco, and y. pica granados, “ensayo de
toxicidad aguda con bulbos de cebolla allium cepa l mediante la
evaluación de la inhibición del crecimiento promedio de raíces,” g. castillo,
pp. 33–40, 2004.
[19] c. patricia and b. santiago, “determinación de la concentración letal media
(cl 50-96 ) del glifosato roundup,” 2008.
[20] t. lopez arias et al., “índices de calidad ambiental de aguas del arroyo
caañabe mediante tests microbiológicos y ecotoxicológico,” rev. ambient. e
agua, vol. 9, no. 3, pp. 445–458, 2014, doi: 10.4136/1980-993x.
[21] c. m. monroy, a. c. cortés, d. m. sicard, and h. g. de restrepo, “citotoxicidad
y genotoxicidad en células humanas expuestas in vitro a glifosato.,”
biomédica, vol. 25, no. 3, p. 335, 2005, doi:
10.7705/biomedica.v25i3.1358.
[22] r. contero and o. felicita, “utilización de bioensayos para la determinación
de contaminación en agua de riego en la cuenca del río granobles,” la
granja, vol. 4, no. 1, p. 38, 2006, doi: 10.17163/lgr.n4.2005.05.
[23] o. m. felicita nato, a. campaña karolys, and a. yassi, “aplicación de
bioensayos con bulbos de cebolla (allium cepa) en la determinación del
grado de toxicidad del agua y su aplicación en comunidades.,” 2008.
[24] antonia paola vera, jesus t olivero v, beatriz e jaramillo, and e.
stashenko, “efecto protector del aceite esencial de lippia alba (mill.) n.e.:
brown sobre la toxicidad del mercurocromo en raíces de allium cepa l.,”
rev. cuba. plantas med., vol. 15, no. 1, pp. 0–0, 2010.
[25] a. s. bertan, f. p. baumbach, i. b. tonial, t. s. pokrywiecki, and e. düsman,
“assessment of phytoremediation potencial of allium cepa l. in raw sewage
treatment,” brazilian j. biol., no. ahead, jul. 2019, doi: 10.1590/1519-
6984.214278.
[26] c. c. cabuga jr et al., “allium cepa test: an evaluation of genotoxicity,” proc.
int. acad. ecol. environ. sci., vol. 7, no. 1, pp. 12–19, 2017.
[27] c. banti and s. hadjikakou, “evaluation of genotoxicity by micronucleus
assay in vitro and by allium cepa test in vivo,” bio-protocol, vol. 9, no. 14,
2019, doi: 10.21769/bioprotoc.3311.
[28] e. bonciu et al., “an evaluation for the standardization of the allium cepa
test as cytotoxicity and genotoxicity assay,” caryologia, vol. 71, no. 3, pp.
191–209, 2018, doi: 10.1080/00087114.2018.1503496.
[29] n. s. d. y s. v. p. a. a. oudalova, s. a. geraskin, “allium-test as a tool for
toxicity testing of environmental radioactive-chemical mixtures,” j. phys.
conf. ser., vol. 755, no. 1, 2016, doi: 10.1088/1742-6596/755/1/011001.
[30] m. a. d. silveira et al., “mutagenicity of two herbicides widely used on
soybean crops by the allium cepa test,” cytotechnology, vol. 68, no. 4, pp.
1215–1222, 2016, doi: 10.1007/s10616-015-9881-x.
[31] d. singh and b. k. roy, “evaluation of malathion-induced cytogenetical
effects and oxidative stress in plants using allium test,” acta physiol. plant.,
vol. 39, no. 4, 2017, doi: 10.1007/s11738-017-2391-z.
[32] s. a. s. mercado and j. d. q. caleño, “cytotoxic evaluation of glyphosate,
using allium cepa l. as bioindicator,” sci. total environ., vol. 700, 2020, doi:
10.1016/j.scitotenv.2019.134452.
C. PRESUPUESTO Y CRONOGRAMA DEL PROYECTO

D. PRESUPUESTO DEL PROYECTO

CANTIDA VALOR VALOR

ITEM D DESCRIPCIÓN UNITARIO TOTAL
INSUMOS DE OFICINA
CAMARA
FOTOGRAFICA 1 Evidencias $250.000 $250.000
PAPELERÍA 1 Resma de papel $13.000 $13.000
Búsqueda de
información (servicio
de internet por 6
INTERNET 6 MESES meses) $ 50.000 $300.000
80 COPIAS=
COPIAS Y $100
IMPRESIONES Y 2 Cartucho tinta negra POSTERS
POSTERS POSTERS – tinta de color = $15.000 $38.000
SUBTOTAL $601.000
TALENTO HUMANO
DOCENTE
DIRECTOR
TRABAJO DE Costo horas de
GRADO 25 asesoría $30.000 $750.000
Gastos de Proyecto
2 ESTUDIANTES 6 MESES de grado $30.000 $5.475.000
SUBTOTAL 6.225.000
PASAJES Y VIATICOS
POPAYAN -
TOTORO Desplazamiento
(CALVACHE) 10 VECES Popayán - TOTORO 15.000 150.000
TOTORO – Desplazamiento
ZONA RURAL TOTORO – zona
(CHUSCALES, rural(CHUSCALES,
AGUA BONITA Y AGUA BONITA Y
TABACO ) 20 VECES TABACO) 15.000 300.000
Desayuno-
ALIMENTACION 30 almuerzo- cena 6000 180.000
SUBTOTAL $630.000
$
TOTAL 7.456.000
CRONOGRAMA DEL PROYECTO
 febrero marzo abril

HORARIO

x 1Semana
No. 2Semana
No. 3Semana
No. 4Semana
No.1Semana
No.2Semana
No. 3Semana
No. 4Semana
No. 1Semana
No. 2Semana
No. 3Semana
No. 4Semana
No. 1Semana
No.2Semana
No.3Semana
No.4Semana
Activid
ades
No.
Solicitu 9a
d del m
Primer 9a
montaje m
x

del a
Lectura 9a
x

de las m
Segund 9a
x

o m
Lectura 9a
x

de las m
Montaje 9a
final m
x

a
Lectura 9a
final de m
x
x

las a
Entrega 9a
e m
x

implem a

ANEXO 1. Tabla de estudios realizados

Conclusion
Tema o Resultado es y Refere
Objetivos Métodos
Titulo s Recomend ncias
aciones
Evaluació Realizar Se colectaron Los Los
n de la un muestras en los resultados recuentos [20]
calidad diagnóstic meses de Julio y indican de
ambiental o de las Setiembre del año que las coliformes
del arroyo condicione 2014. Se aguas del fueron
Caañabe s estudiaron tres arroyo superiores
mediante ambiental sitios presentaro en el
pruebas es de las denominados S1, n segundo
microbioló aguas de ubicado en aguas característi muestreo,
gicas y este arriba de la cas de aunque
ecotoxicol cause, Ciudad de clase II y dentro lo
ógicas. mediante Carapegua; S2 en de clase III establecido
el análisis la intersección del según el por la
de arroyo con la Ruta padrón norma. La
parámetro 1, y S3, en la zona establecid presencia
s límite de las o por la de P.
fisicoquími ciudades de Secretaría aeruginosa
cos, Carapegua y del en los tres
microbioló Nueva Italia. Se Ambiente puntos
gicos y realizaron ensayos del constituye
ecotoxicol de toxicidad aguda Paraguay. un riesgo
ógicos, en con Daphnia El índice para la
zonas de magna, Lactuca de calidad salud.
influencia sativa, y alevines de agua Ensayos
con la de Daniorerio; (ICA) ecotoxicológ
Ciudad de además de arrojó icos agudos
Carapegu ensayos crónicos valores mostraron
á, y en comprendi que las
comparar Tetradesmuswisco dos entre aguas
estos nsinenesis, D. 52 y 62 lo presentan
parámetro rerio y Allium que otorga escasos
s con cepa. Se la efectos
normativa evaluaron los clasificació letales, no
s de grupos y especies n de obstante los
regulación microbianos “regular”; ensayos
nacional e siguientes: mientras crónicos en
internacio aerobios que el A. cepa y el
nales. mesófilos, índice de test de
enterobacterias, contamina micronúcleo
coliformes totales, ción trófica s en D.
coliformes fecales, (ICOTRO) rerioindican
E. coli, presentó potenciales
Pseudomona valores efectos
aeruginosa, entre 0,12 citotóxicos y
 mohos y
levaduras; genotóxicos
y 0.26,
además se de las
indicando
determinaron aguas del
“eutrofizaci
índices de calidad Arroyo
ón”.
y de Caañabe.
contaminación.
Citotoxicid El objetivo La citotoxicidad En la Se sugiere [21]
ad y del aguda y crónica se citotoxicida que el
genotoxici presente determinó al d crónica mecanismo
dad en estudio exponer las las células de acción
células fue células en cultivo a GM38 y del glifosato
humanas evaluar la diferentes las no se limita
expuestas citotoxicid concentraciones HT1080 únicamente
in vitro a ad y la de glifosato, y se presentaro a las
glifosato genotoxici analizó la n un efecto plantas,
dad del viabilidad celular dependient sino que
glifosato con cristal violeta y e de la puede
en células colorante de dosis alterar la
humanas exclusión azul de después estructura
normales tripano, del del ADN en
(GM38) y respectivamente. tratamiento otros tipos
en células La genotoxicidad con de células
humanas se determinó por glifosato como son
de medio del ensayo en las de los
fibrosarco del cometa y los concentrac mamíferos
ma datos se iones de
(HT1080) analizaron usando 5,2 a 8,5
la prueba de mM y 0,9 a
Dunnet 3,0 mM,
respectiva
mente. En
la
citotoxicida
d aguda,
las células
GM38 y
las
HT1080
expuestas
a un rango
de
concentrac
iones de
 4,0 a 7,0
mM, 4,5 a
5,75 mM y
4,0 a 7,0
mM,
respectiva
mente,
presentaro
n una
viabilidad
mayor al
80%. Se
evidenció
daño en el
ADN
después
del
tratamiento
con
glifosato
en
concentrac
iones de
4,0 a 6,5
mM para
las células
GM38 y de
4,75 a 5,75
mM para
las células
HT1080.
Utilización Instalación Se utilizan 5 Las La
de y puesta soluciones, soluciones investigació [22]
bioensayo en marcha tomando en se n se está
s para la de un cuenta los límites prepararon realizando
determina laboratorio permitidos en utilizando en las
ción de para la normas para agua. agua de instalacione
contamina realización Soluciones de vertiente y s de la
ntes en de sulfato de cobre se han Unidad
agua de estudios para el caso de la tomado en Educativa
riego en la piloto en cebolla y de cuenta los Domingo
cuenca las aguas sulfato de zinc límites Savio, en un
del río superficial para el caso de la permitidos cuarto que
granobles es de la lechuga. Se en normas mantiene
 una
temperatura
promedio de
15°-17°C
con una
para
temperatura
diferentes
mínima de
usos de
13°C y
agua de
máxima de
acuerdo a
18.5°C y
los datos
una
presentado
realizaron seis humedad
s a
repeticiones para relativa
continuaci
cada bioensayo, promedio de
ón.
incluyéndose en 58%, con
Se utilizan
todos los casos una mínima
cuenca de 15 a 20
agua de vertiente de 52%.
del río mide
como testigo y Para el caso
Granobles solución
para control de la
para de Cu+2
positivo, agua de cebolla se
determinar para el
la toma. Al término utilizaron
el nivel de caso de la
de la incubación, tubos de
toxicidad cebolla, en
se procede a ensayo de
mediante las
medir la longitud 10 mi y 1.5
bioensayo diferentes
de las raíces de cm de
s. concentrac
los bulbos, y de diámetro, y
iones, más
las semillas se trabaja
los
germinadas en con luz
controles.
cada disolución y indirecta. En
Para el
de los controles. Allium cepa,
caso de
las raicillas
Lactuca
deben
sativa se
mantenerse
utilizan 6-
siempre
7ml de
húmedas,
solución
este control
de Zn+2
se realiza
con un
intervalo
mínimo de 2
horas.
Aplicación Determina La primera fase Partiendo Gracias al
de r el nivel del estudio se la de los trabajo [23]
bioensayo de dedicó a optimizar resultados desarrollado
s con toxicidad la producción de obtenidos en esta
bulbos de del agua, bulbos de cebolla en las investigació
cebolla y su que garanticen las pruebas n, podemos
(Allium aplicación características con aseverar
Cepa) en en 2 necesarias para la agroquímic que el uso
la comunida aplicación en la os y de técnicas
determina des de la prueba de muestras simplificada
ción del Cuenca bioensayos, ya ambientale s de
grado de del Río que una de las s detección
toxicidad Granobles hipótesis plateada realizadas de la
del agua y , Ayora, se refiere a que la en contaminaci
su en la zona heterogeneidad de laboratorio, ón del agua
aplicación alta media los bulbos puede se puede
en caracteriz ser la responsable procedió a considerars
comunida ada por de la baja diseñar e una
des producció sensibilidad y una herramienta
n especificad de los batería, muy útil,
campesin bioensayos con aplicable como
a y bulbos de cebolla, en y por recurso de
Cananvall en esta etapa era las screening y
e, en la fundamental no comunidad de
zona baja utilizar es. Para complement
caracteriz agroquímicos en asegurar la ación de
ada por la producción. La implement sistemas
producció segunda fase se la ación, se mas
n de realizo en el realizaron complejos
flores. laboratorio, y talleres de
estuvo dirigida a teórico - monitoreo
identificar y prácticos de
cuantificar la sobre el contaminaci
sensibilidad manejo de ón de
mediante la bioensayo pesticidas.
inhibición del s y su
crecimiento aplicación
radicular de los con la
bulbos de cebolla participaci
al ser tratados con ón de la
productos comunidad
agroquímicos .
preparando
soluciones de
productos
comerciales
utilizados en las
 actividades
agrícolas de la
cuenca.
Efecto se evaluó los parámetros el los datos
protector el efecto evaluados fueron mercurocr presentados [24]
del aceite protector alteración del omo a 10, en esta
esencial del aceite índice mitótico, 250 y 500 investigació
de Lippia esencial inhibición del µM mostró n mostraron
alba (Mill.) obtenido crecimiento efecto que
N.E. de tallos y radicular e tóxico disminuyó la
Brown hojas inducción de sobre las aparición de
sobre la frescas de  aberraciones células aberracione
toxicidad L. cromosómicas en meristemát s
del alba sobre ausencia y icas de A. cromósomic
mercurocr la presencia del cepa. El as y
omo en toxicidad aceite esencial. aceite a cambios
raíces del 100 µM, morfológico
de Allium mercurocr produjo un s
cepa L. omo en efecto producidos
raíces protector por la
de A. demostrad exposición
cepa. El o por la de células
mercurocr disminució meristemáti
omo a 10, n de cas de A.
250 y 500 aberracion cepa a
µM mostró es mercurocro
efecto cromosómi mo, lo cual
tóxico cas, así indica un
sobre las como efecto
células aumento protector o
meristemá de la antigenotóxi
ticas de A. longitud y co del
cepa. El peso de aceite
aceite a las raíces esencial
100 µM, expuestas de L. alba.
produjo un a
efecto mercurocr
protector omo 10 y
demostrad 500 µM.
o por la
disminució
n de AC y
aumento
de la
 longitud y
peso de
las raíces
expuestas
a
mercurocr
omo 10 y
500 µM.
Evaluació Evaluar la Los parámetros las se deben [25]
n del actividad fisicoquímicos pruebas realizar
potencial de analizados fueron: fisicoquími nuevos
de fitorremedi el pH y la cas en un estudios
fitorremedi ación de temperatura se efluente de que
ación de A. cepa , evaluaron aguas busquen
Allium después utilizando un residuales una mayor
cepa L. en de 24 medidor de pH sin tratar, eficiencia de
el horas de microprocesado encontrand fitorremedia
tratamient contacto DLA (Del Lab.), La o datos de ción de las
o de con aguas demanda química DBO 5 y cebollas u
aguas residuales de oxígeno (DQO) DQO otras
residuales recolectad se realizó a través similares a plantas,
crudas as de del método los de este aumentando
Sanepar, colorimétrico de estudio; el período
así como reflujo cerrado, la sin de
los efectos demanda embargo, exposición
tóxicos de bioquímica de el de las
este oxígeno (DBO 5 ) nitrógeno aguas
efluente utilizando la total y el residuales a
en los dilución método de fósforo las raíces
bioindicad incubación, fueron, de la
ores de A. basado en la respectiva cebolla,
cepa y A. diferencia de la mente, reduciendo
salina . concentración de 1.62 y el volumen
oxígeno disuelto 16.56 de aguas
en el período de veces más residuales
cinco días y la altos que por bulbo,
temperatura de 20 los del evaluando
° C, el oxígeno estudio la
disuelto se midió actual concentraci
con el HI 98186 (nitrógeno ón de
(Hanna), = 18.11 ± metales
coliformes totales 4.29 mg / pesados en
usando el método L, fósforo = la muestra y
de fermentación 0.32 ± 0.17 verificando
multitubo, para mg / L). En si están
nitrógeno total. El los correlaciona
método macro estudios dos con la
Kjeldahl y el de Marguti citotoxicidad
fósforo se et al. , analizando
midieron utilizando (2008) y la
el método de Rodrigues acumulació
digestión, de et al. n de
acuerdo con las (2009) , los compuestos
metodologías datos de como
recomendadas en fósforo y nitrógeno,
Métodos estándar. nitrógeno fósforo y
Los bulbos de también algunos
cebolla, que fueron más metales
pesaban 70 altos que para
gramos por los de este verificar la
unidad, se estudio. capacidad
acomodaron para Además, al de
enraizar en vasos comparar bioacumula
desechables de la DQO y ción de las
plástico con agua la DBO plantas o si
filtrada a 5Los datos lo que ha
temperatura obtenidos sido
ambiente en un por absorbido
espacio aireado y Passamani se degrada
oscuro. La prueba et al. en el
de citotoxicidad (2014) , los metabolism
con A. cepa valores de o de la
(cebolla de pera) DBO 5 planta y,
se realizó con fueron finalmente,
células similares, verificando
meristemáticas de pero los la
raíces de cebolla, valores de citotoxicidad
que se prepararon DQO y toxicidad
mediante la fueron de la
reacción de 1,48 veces materia
Feulgen y se más altos. prima y
tiñeron con Sin aguas
reactivo de Schiff. embargo, residuales
los datos tratadas
de la para los
prueba de bioindicador
citotoxicida es A. cepa y
d realizada A. salina .
 con raíces
de cebolla
en el
presente
estudio
( Figura 1 )
muestran
que el
tratamiento
de los
bulbos con
aguas
residuales
sin tratar,
después
de 24
horas,
fueron
citotóxicos
para A.
cepa
porque
disminuyó
estadística
mente el
índice
mitótico
(IM :
1.2%), en
comparaci
ón con el
índice de
división
celular del
control
negativo
por el
mismo
tiempo (24
horas)
Prueba de describir Para este estudio La Este estudio [26]
Allium varias se tuvo en cuenta concentrac muestra la
cepa: una aberracion cinco métodos ión de importancia
evaluación es procesos el H2O2 de Allium
de cromosóm primero es la (peróxido cepa L. en
genotoxici icas en las identificación del de la prueba de
dad células de área de estudio el hidrógeno) sustancias
la raíz de cual especifica muestra genotóxicas
la cebolla que se encuentra estadística . La
(Allium entre la regiones mente indicación
cepa L.) de Caraga y significativ de
que Barobo Surigao a (P <0.05) aberración
funciona del Sur en Flipina; en cromosómic
como el el segundo es la comparaci a y mitótica
biomarcad recolección y ón con en las
or de los tratamiento de las CH2O células de la
diversos muestras de agua (formalina) punta de la
tipos de en donde por . Se raíz sugiere
contamina medio de observó un genotoxicid
ntes recipientes crecimient ad. Por lo
ambiental esterilizados se o máximo tanto, el
es. recolectó muestras de la raíz índice
de agua por en el mitótico es
triplicado y se control un
conservaron en (1.367 ± marcador
hieleras, los 1.072) y no de aumento
controles positivos se y
se trataron con encontraro disminución
peróxido de n de células
hidrogeno y deformidad durante la
formalina, para los es mitosis. El
controles morfológic ANOVA
negativos se usó as. Las unidireccion
agua de grifo; en raíces eran al muestra
el tercero se hizo de color que el agua
la recolección del blanquecin simple
material vegetal o, tratada con
(Allium cepa) y su ininterrump H2O2 fue
tratamiento para el idas y estadística
cual se utilizaron rectas, mente
cebollas de color Esto indica significativa
purpura de que la (P <0.05) en
tamaño moderno a inhibición comparació
las cuales se les del n con
realizo una crecimient CH2O,
adecuada o radicular mientras
limpieza; cuarto se debe que la
método es la relativame muestra de
maceración de las nte a la agua
puntas de las acción de recolectada
raices y la la actividad de las áreas
preparacion para meristemát mineras
microscopia donde ica apical y muestra
se cortaron las al estadística
puntas de las alargamien mente no
raices y se to celular significativa.
pusieron a un en el El resultado
flameo en vidrio proceso de indica que
reloj con acido diferenciac H2O2
acetico y acido ión De (peróxido de
clorhídrico, hecho, la hidrógeno) y
después pasaron supresión CH2O
a una caja de Petri de la (formalina)
con solución de actividad fue un
safranina para la mitótica transportad
tinción por último causada or potencial
se colocaron en constante de
un portaobjetos mente por aberración
para microscopia; la cromosómic
por último se genotoxici a. Las
realizó un análisis dad y la anormalidad
de datos donde se citotoxicida es
presentaron datos d. En observadas
como media ± consecuen se
error estándar cia, el mostraron
medio (SEM) y se índice en la
calcularon mitótico morfología
utilizando el también es de las
software y el raíces.
estadísticas resultado Asimismo,
paleontológicas de la la respuesta
(PAST). El análisis depresión del material
de varianza de la genético
unidireccional mitosis Allium cepa
(ANOVA) también durante la ayuda a
se usó para probar división identificar el
la diferencia celular. La efecto de
significativa de las respuesta posibles
concentraciones del sustancias
entre el agua crecimient genotóxicas
tratada y de las o de la raíz que pueden
muestras identifica presentar
 anormalidad
es
genéticas.
sustancias
Además,
genotóxica
este
s que
enfoque
posibleme
avanza en
nte sean el
recogidas. el monitoreo
factor que
de una
afecta la
condición
aberración
ambiental,
cromosómi
especialme
ca
nte en
entornos
acuáticos.
Evaluació evaluar el En cuanto al El El [27]
n de potencial desarrollo de este micronúcle micronúcleo
genotoxici toxico in estudio se tienen o se (MN)
dad por vitro e in en cuenta dos identificó también se
ensayo de vivo de fases, la primera de acuerdo puede
micronúcl pequeñas que es un ensayo con los observar en
eos in moléculas de micronúcleos criterios las células
vitro y por bioactivas que comprende la previament hijas como
prueba de (SBAM) o preparación e una
Allium conjugado celular en donde establecid estructura
cepa in s de se hace un cultivo os: (1) el similar, pero
vivo metales de células, una área de de tamaño
con cosecha de las MN debe reducido al
medicame células que son correspond núcleo
ntos dispuestas en er a 1/256 principal.
(CoMeDs placas para luego y 1/9 del Iconos
para enviarse a una área de los seleccionad
verificar incubadora, núcleos os de
sus después se realiza principales células
riesgos una fijación con , (2) la meristemáti
potenciale una solución forma del cas Allium
s. hipotónica (KCl) micronúcle cepa en las
enjuague con o debe ser que se
ácido acético y redonda u muestran
metanol y una ovalada , profase,
tinción con naranja (3) el anafase,
de acridina así se micronúcle metafase,
podrá observar o debe telofase,
por microscopio de distinguirs aberracione
fluorescencia. La e s
segunda fase en fácilmente cromosómic
cuanto al ensayo de los as,
de Allium cepa, artefactos, anormalidad
donde se debe (4) el es
seleccionar las micronúcle nucleares y
cebollas con las o no está micronúcleo
cuales se va a vinculado s normales.
trabajar, después o
se debe hacer una conectado
limpieza y quitar el al núcleo
material seco, principal,
deben colocarse (5) el
en tubos de micronúcle
ensayo con la o puede
solución de tocar, pero
metalodrug a no
diferentes superpone
concentraciones y rse con el
se pone a encubar núcleo
las raíces por 24 principal y
h, paso seguido es el límite
escoger las raíces micro
y obtener la punta nuclear
la cual se le debe
realiza una fijación distinguirs
con ácido acético e del
para ser llevado al nuclear
microscopio de límite y (6)
fluorescencia. el
micronúcle
o debe
tener la
misma
intensidad
de tinción
que los
núcleos
principales
. Se
observan
aberracion
es
cromosómi
cas (CA)
en las
diferentes
fases de la
división
celular
(profase,
metafase,
anafase y
telofase).
CA puede
observarse
como
puentes y
roturas
cromosómi
cas,
pérdidas
cromosómi
cas,
retrasos,
adherencia
,
multipolari
dad y
metafases
C. Se
pueden
observar
anormalida
des
nucleares
(NA) en las
células
hijas como
una
estructura
similar al
núcleo
principal,
pero en un
tamaño
reducido
(núcleos
 lobulados,
núcleos
portadores
de brotes
nucleares,
células
polinuclear
es, mini
células).
Una Esteblecer Este estudio El género Una [28]
evaluación un establece las Allium estandariza
para la mecanism características de pertenece ción del
estandariz o la matriz biológica a la familia material
ación del estandariz del Allium cepa y Alliaceae utilizado en
Allium ado para su variación subf. todos los
prueba de evaluar la intraespecífica, Allioideae. estudios
cepa citotoxicid especifica los Es un permitiría
como ad y caracteres género una mejor
citotoxicid genotoxici observados para grande, generalizaci
ad y dad con la evaluar los efectos que ón de los
ensayo de prueba citotóxicos y comprende resultados,
genotoxici Allium genotóxicos en más de ya que no
dad medienate presencia de 800 podemos
microscopi ciertos estimulos especies y estar
a externos, de igual está absolutame
electrónic manera se ampliamen nte seguros
a de determina la te de que
transmisió ultraestructura de distribuido todos los
n TEM. los efectos de en el cultivares
TEM en células de hemisferio darán la
Allium cepa en norte. Un misma
pruebas de análisis respuesta si
citotoxicidad, filogenétic se someten
también establece o basado a un
un tratamiento de en determinado
estadístico de los secuencias agente
datos citológicos espaciador genotóxico.
de la prueba as Un uso más
Allium como transcritas frecuente de
bioindicador de internas la
efectos herbicidas. (ITS) investigació
mostró que n TEM,
Allium incluso si
cepa, parte lleva mucho
de la tiempo y no
sección está
Cepa, disponible
estaba en todos los
estrictame laboratorios,
nte puede
relacionad ayudar a
a con A. comprender
vavilovii, mejor el
una mecanismo
posición de
confirmada citotoxicidad
por , ya que
secuencias muchos
de caracteres
cloroplasto morfológico
s. En s utilizados
presencia en la
de ciertos recopilación
estímulos de datos
externos, pueden ser
el progreso morfológica
celular mente
puede similares,
bloquearse pero
en una de pueden
las fases surgir de
del ciclo procesos
celular o muy
división diferentes y
celular, y pueden ser
su acción También
se llama morfológica
mitoinhibici mente
ón. Los distinto a
mitógenos nivel
actúan ultraestructu
para ral.
superar los Además,
mecanism algunos
os de datos solo
frenado se pueden
intracelular observar
que con TEM.
bloquean Se pueden
la usar
progresión pruebas que
del ciclo no sean chi
celular, y cuadrado en
su acción caso de una
se llama cantidad
mitostimul reducida de
atoria. datos. Las
Cualquier pruebas
desviación también
de la deben
progresión usarse para
ordenada y evaluar la
dirigida del dimensión
ciclo mínima de
celular y, la muestra
respectiva para
mente, de obtener
la mitosis y significación
la , ya que la
citocinesis, recolección
se refleja de datos
en un (observació
estado de n con
citotoxicida microscopio
d y ) parece ser
genotoxici el cuello de
dad. Estos botella de la
son prueba
evaluados Allium cepa.
por el
índice
mitótico
(MI; una
medida
para
determinar
el
porcentaje
de células
que sufren
mitosis), el
porcentaje
de células
en cada
fase de
mitosis
(profase,
metafase,
anafase e
índice
telofásico),
así como
una serie
de
clastogénic
o,
aneugénic
o y
cambios
turbagenic
os. El
análisis de
los
cambios
ultraestruct
urales en
las células
de
meristemo
apical de
las raíces
de cebolla
(Allium
cepa L.)
sujetas a
tratamiento
con ambos
compuesto
s de
selenio
(Ślusarczy
k et
al.2015)
fue una
valiosa
adición a
los
estudios
descritos
anteriorme
nte.
Confirmó
la alta
toxicidad
del
selenato
de sodio
(IV), que
se
manifiesta
por la
degradació
n del
núcleo, los
orgánulos
celulares y
el
citoplasma
. El
tratamiento
con
selenato
de sodio
(IV), en
casi todas
las
concentrac
iones
probadas y
los
tiempos de
incubación
, causó
cambios
drásticos
en la
ultraestruct
ura celular,
mostrando
claramente
 su efecto
tóxico.
Prueba de Evaluar el En este estudio se Los En ambos [29]
Allium impacto establecieron dos resultados sitios de
como ambiental zonas la primera del estudio,
herramient de las se implementó en bioensayo durante la
a para posibles una vecindad de la obtenidos operación
pruebas fuentes de instalación de en la de las El
de contamina almacenamiento germinació ensayo de
toxicidad ción de residuos n de los puntas de
de química radiactivos bulbos de raíz a base
mezclas radiactiva (RWSF) en la cebolla en de Allium de
radioactiv combinad parte europea de el agua aberracione
as a en dos Rusia, donde se muestread s
químicas sitios de realizó una a del cromosómic
ambiental estudio la estimación de la RWSF y el as en
es. instalación afectación para el territorio anafase-
de medio ambiente y cercano se telofase se
almacena su población con muestran ha utilizado
miento de una encuesta en la figura en muchos
residuos radioecologica 1. La estudios
radiactivos integral Se actividad para evaluar
(RWSF) y tomaron muestras mitótica en la
un sitio de 7 pozos de el genotoxicid
para el monitoreo meristemo ad de aguas
almacena (Muestras 5-7) y de la raíz residuales,
miento cuerpos de agua cambió del suelos
temporal cercanos 55 al 190% contaminad
(STS) de (Muestras 3, 4, 8, del nivel os, técnicas
desechos 9). El agua de un de control. de
radiactivos arroyo forestal se El efecto remediación
y consideró como inhibitorio , nuevas
combustibl control, también se se observó sustancias,
e nuclear. analizó el agua para el etc. No fue
destilada. En las agua tan
aguas más recogida ampliament
contaminadas, las de un e explotado
actividades pantano en las
específicas de pequeño y pruebas de
90Sr fueron agua medios
aproximadamente destilada; contaminad
10 veces ambas os con
superiores al nivel muestras radionúclido
de intervención (IL fueron s o mezclas
= 5.0 Bk / kg) obviament de
e radionúclido
desfavorab s-químicos,
les para y esta
una mayor brecha se
ontogénesi ha cumplido
s de la en parte por
planta. La los
muestra 4 hallazgos
se tomó de presentados
un arroyo aquí.
que fluye
cerca de la
valla
RWSF;
Esta
muestra
contenía
altas
cantidades
de 90Sr,
Zn y Cu.
Para las
perturbacio
nes
citogenétic
as, se
mostró un
efecto
transparen
te de la
contamina
ción del
agua para
todas las
muestras
de agua
tomadas
de y cerca
del
territorio
de la
RWSF, ya
que la
 presencia
de células
aberrantes
en el
meristemo
de la raíz
de Allium
cepa fue
significativ
amente
mayor que
el control,
lo que
indicó un
potencial
Impacto
adverso
sobre el
medio
ambiente
.
La Evaluar La dilución / El Las [30]
mutagenic los efectos concentración tratamiento aberracione
idade dos mutagénic indicada (utilizada con s
herbicidas os de dos en el cultivo de Clorimuro cromosómic
ampliame herbicidas soja) en la m Nortox as
nte : etiqueta de cada mostró que (anafases
utilizados Clorimuro herbicida se tomó el IM fue multipolares
en cultivos m Nortox como 100% significativ , puentes de
de soja e (Clorimurom amente anafases,
por la Imazaqui Nortox - 60 menor a rotura y
prueba m Ultra gramos / hectárea concentrac pérdida
Allium Nortox (g / ha), iones de cromosómic
cepa ampliame Imazaquim Ultra 75, 100 y a,
nte Nortox - 1 Litro por 125% en metafases
utilizados ciento / ha (Lpc / comparaci C y
en cultivos ha)), que se diluyó ón con el micronúcleo
de soja en aún más a las control s)
Brasil. concentraciones negativo y observadas
de 75 y 50%. La sin en este
concentración del recuperaci ensayo
125% es una ón. La sugieren
extrapolación (en frecuencia que los dos
la etiqueta) para la de CA fue herbicidas
soya, y se incluyó significativ ejercen un
porque se sabe amente efecto
que todos los alta en mutagénico
pesticidas todas las / citotóxico.
probados son concentrac Las
ligeramente o iones. No concentraci
moderadamente hubo ones /
tóxicos, lo que a recuperaci diluciones
menudo conduce ón de CA indicadas
a una menor en las en la
dilución de la raíces etiqueta del
misma por parte después producto
de los agricultores del causaron
que intentan tratamiento daños
potenciar la acción . El MN no mutagénico
de Los herbicidas. fue s en A.
Las semillas se significativ cepa, lo que
trataron (1 ml) o en respalda la
cada 8 h, para ninguna opinión de
evitar que el papel concentrac que este
de filtro en las ión bioensayo
placas de Petri se estudiada, funciona
seque, primero y se bien para
con agua destilada atribuyó al evaluar la
hasta que la raíz bajo IM. mutagenicid
alcance 1 cm de El ad de los
longitud, y luego tratamiento compuestos
con la con químicos
concentración Imazaquim que afectan
respectiva del Ultra el medio
herbicida. Las Nortox ambiente.
semillas de A. mostró que Además, 48
cepa se la h en agua
germinaron a concentrac destilada a
temperatura ión del menudo era
ambiente (25 ± 5 125% era insuficiente
C) cubiertas con citotóxica para
papel de filtro en para las restaurar las
placas de Petri. raíces de células a la
Los brotes se A. cepa. normalidad,
mantuvieron Además lo que
húmedos con de afectar indica que
agua destilada el IM, hubo el producto
hasta que desregulac puede ser
alcanzaron 1 cm ión de bioacumulat
de longitud. otros ivo y puede
Después de esto, parámetro afectar al
se reemplazó el s a esta hombre a
papel de filtro y se concentrac través de la
inició el ión. Con dieta. Por lo
tratamiento con respecto a tanto, el
cada herbicida. las otras manejo y
Después de 72 h concentrac uso de
de tratamiento, iones, la estos
algunas de las concentrac productos
plántulas se ión del nocivos
repararon 100% debe seguir
mientras que el aumentó todos los
resto se recuperó, significativ procedimien
lo que consistió en amente tos de
un tratamiento con (p \ 0.05) precaución
agua destilada la apropiados,
durante 48 h frecuencia ya que hay
adicionales (papel de MN sin varios casos
de filtro fresco) recuperaci en la
antes de ón literatura
repararlas. La observada, sobre la
fijación se realizó mientras correlación
con Carnoy que la entre
durante 24 h, concentrac enfermedad
después de lo cual ión del es,
los portaobjetos se 75% tuvo especialme
tiñeron según el un efecto nte cáncer y
protocolo de Grant estadística exposición
(1982), con mente laboral a
modificaciones, significativ estos
utilizando el o en la compuestos
reactivo de Schiff frecuencia no
durante 1 h y de CA (en biodegradab
Carmín acético en comparaci les.
los portaobjetos ón con el
para contrarrestar control
las manchas. Se negativo),
evaluaron tres pero se
réplicas biológicas, observó
totalizando 15,000 recuperaci
células ón.
meristemáticas Clorimuro
analizadas por m Nortox e
muestra. Se Imazaquim
evaluaron tres Ultra
parámetros Nortox son
genéticos, el herbicidas
índice mitótico de los
(MI), la frecuencia grupos
de micronúcleos químicos
(MN) y las sulfonilure
aberraciones a e
cromosómicas imidazolino
(CA). Se usó agua na, y el
destilada como modo de
control negativo y acción
MMS (metil afecta la
metanosulfonato, síntesis de
4 9 10-4 M, la enzima
ACROS, Geel, ALS /
Bélgica) como AHAS. Se
control positivo. sabe que
los niveles
de
toxicidad
de un
agente
pueden
determinar
se
mediante
aumentos
o
disminucio
nes en el
IM. Tener
un IM que
es
significativ
amente
más bajo
que el
control
negativo
indica
inhibición
en la
proliferació
n celular
(por la
acción de
una
sustancia
química).
La
tendencia
en los
datos
indicó que
el IM se
vio
afectado
en algunas
concentrac
iones de
ambos
herbicidas,
lo que
indica una
inhibición
en la
proliferació
n celular,
que se
asocia a
una menor
frecuencia
con
aberración
cromosómi
ca y
micronúcle
os. De
acuerdo
con Cotelle
et al.
(1999),
hay
evidencia
de
inhibición
severa en
células
mitóticas
de A. cepa
sometidas
a diversos
contamina
ntes del
suelo,
como
metales
pesados y
ciertos
herbicidas.
Bolle y col.
(2004)
mostraron
un
aumento
en las
frecuencia
s de CA y
una
inhibición
de MI en
un estudio
que evaluó
la
genotoxici
dad de un
herbicida
de
atrazina, lo
que indica
que la
atrazina
también
era un
agente
clastogénic
o debido a
la
presencia
 de una
frecuencia
significativ
a de
roturas
cromosómi
cas. Liman
y col.
(2015)
mostraron
un
resultado
similar,
pero con
un
herbicida
de
imidazolino
na llamado
Imazetapyr
.
Evaluació Evaluar el Los bulbos de A. El el presente [31]
n de los efecto de cepa L. (2n = 16) crecimient estudio
efectos toxicidad se obtuvieron del o radicular reveló que
citogenétic del mercado local. retardado el malatión
os malatión Para cambios sirve como induce
inducidos en las morfológicos como monitor de efectos
por plantas el crecimiento, los toxicidad mitodepresi
malatión y usando la bulbos germinaron por vos y
el estrés prueba de principalmente en malatión. genotóxicos
oxidativo Allium. un tanque que Aunque, la en las
en plantas contenía arena, y concentrac raíces de A.
usando la se transfirieron ión cepa, lo que
prueba de plántulas de 2 a 3 creciente se indica
Allium. cm de largo en disminuyó por la
recipientes con la longitud reducción
diferentes de la raíz. del IM y las
concentraciones La anomalías
(50, 125, 250 y concentrac cromosómic
375 ppm) de ión as
malatión en la efectiva inducidas.
solución nutritiva (CE50) El inicio de
de Hoagland. La para el los efectos
solución nutritiva crecimient citotóxicos y
de Hoagland sin o de la raíz genotóxicos
malatión se usó se puede estar
como control. Las encontró a relacionado
raíces de doce 250 ppm, con la
bulbos de cada mientras formación
tratamiento se que la de MDA. En
midieron y inhibición la etapa
registraron más fuerte inicial de
después de 72 h. del alta
Se trazó un gráfico crecimient concentraci
entre la longitud o de la raíz ón de
de la raíz y las se observó malatión,
concentraciones a 375 ppm. las raíces
tomando el 100% El efecto podrían
de la longitud de la del activar
raíz como control malatión rápidamente
estándar. El punto sobre el el sistema
que muestra un índice de defensa
crecimiento del mitótico antioxidante
50% se interpretó (IM) varió para
como con la combatir el
concentración concentrac estrés
efectiva (CE50). ión y el oxidativo
Para estudios período de inducido por
citológicos y tratamiento el malatión.
fisiológicos, los . Los Sin
bulbos se resultados embargo, la
cultivaron en aclararon expresión
arena durante 4 que el enzimática
días. Luego, las aumento a nivel de
plántulas se de la genes y los
transfirieron a concentrac estudios de
soluciones de ión de degradación
malatión de 50, malatión mediante la
125, 250 y 375 junto con detección
ppm durante 3, 9 y los de los
18 h. Las períodos compuestos
preparaciones de intermedios
citológicas se tratamiento en el
llevaron a cabo disminuye metabolism
mediante la la actividad o, son los
fijación de raíces mitótica. problemas
en una mezcla de La para futuros
ácido acético concentrac estudios.
glacial y etanol (1: ión más
3). Después de la alta (375
hidrólisis en HCl 1 ppm) para
N (5 min), las el
puntas de las tratamiento
raíces (1 mm) se de 18 h
lavaron y se indujo un
tiñeron con IM más
acetocarmina al bajo
2% (Misˇı´k et al. (3.41%)
2014). El índice que el
mitótico se control
expresó en (10.96%).
porcentaje El análisis
contando las de los
células de resultados
diferentes fases mostró
mitóticas en el grandes
número total de alteracione
células (* 1000 s en la
células por distribució
portaobjetos). Las n de las
fases mitóticas fases
también se mitóticas
expresaron como durante el
porcentaje del tratamiento
número total de con
células. Las malatión.
aberraciones La
cromosómicas se frecuencia
registraron como de profase
adherencia, disminuyó
fragmentos, c- significativ
mitosis, amente (p
rezagados, B 0.05) en
puentes, células las raíces
binucleadas, tratadas
anafase / telofase con
alterada, malatión
multipolaridad y que el
brotes nucleares, y control.
se representaron Alcanzó la
como porcentaje frecuencia
de células en mínima
división. La tasa (45.13%) a
de división relativa 375 ppm
(RDR) se enumeró después
utilizando el de 18 h de
método de Hoda. tratamiento
Todos los en
experimentos se comparaci
recitaron tres ón con el
veces y los datos control
agrupados se (52.29%).
tabularon como Por el
promedio ± DE. El contrario,
software (SPSS la
16.0) se usó para frecuencia
evaluar la de
significancia en p metafase
B 0.05 por análisis aumentó
de varianza moderada
unidireccional mente y
(ANOVA) seguido alcanzó un
de la prueba t de máximo de
Dunnet. 30.55% a
375 ppm
después
de 18 h de
tratamiento
en
comparaci
ón con el
control
(22.16%).
Sin
embargo,
la
frecuencia
de anafase
disminuyó
con el
aumento
de la
concentrac
ión y el
tiempo de
tratamiento
 , y el valor
mínimo
(12,31%)
se observó
a 375 ppm
después
de 18 h de
tratamiento
. Mientras
que la
frecuencia
de la
telofase
aumentó
moderada
mente y
alcanzó el
máximo
(12.01%) a
375 ppm
después
de 18 h de
tratamiento
en
comparaci
ón con el
control
(8.33%).
Evaluació Evaluar la Se prepararon Durante 72 Se concluye [32]
n actividad cinco soluciones horas, los que el uso
citotóxica citotóxica de glifosato de tipo bulbos de de glifosato
de del comercial (360 A. cepa causa una
glifosato, glifosato mgL-1), cuyas fueron alta tasa de
utilizando en el concentraciones expuestos núcleos
allium meristemo fueron: 5, 10, 15, a alargados
cepa l de la raíz 25 y 30 mg / L diferentes (EN), la
como de A. (ppm), y una concentrac aparición de
bioindicad cepa, solución de control iones de una gran
or utilizando (agua glifosato, cantidad de
el índice desionizada). tomando micronúcleo
mitótico y Estas dosis se medicione s a partir de
la usaron teniendo s cada 24 la
inhibición, en cuenta estudios horas. Se concentraci
las previos sobre el observó ón mínima
anormalid daño del ADN por que el utilizada.
ades especies reactivas mayor Además, un
celulares y de oxígeno (ROS) crecimient número
la tasa de que aumentan la o considerabl
anormalid producción, y la longitudina e de
ad metilación del l en el hendiduras
cromosóm ADN disminuye período de nucleares y
ica. con el uso de 42 24 h fue de células con
mg de glifosato l-1. 3 cm en ausencia
La implementación las total de
del método concentrac núcleos
descrito por Causil iones de 5 (NA), entre
et al. (2017), con y 10 mg L- otras
ciertas 1, sin anomalías
modificaciones. Se diferencias cromosómic
utilizaron diez significativ as, capaces
bulbos de cebolla as con el de generar
en perfectas control (2,8 daño
condiciones cm). Del permanente
fitosanitarias sin mismo en el ADN,
ningún rastro de modo, se causando la
patologías, con observa inhibición
catafilas externas que el total de la
blancas. Las crecimient telofase. Del
cebollas utilizadas o más bajo mismo
tenían un tamaño encontrado modo, se
de diámetro a las 24 h ratifica la
promedio de 6.30 fue de 1 idoneidad
± 0.08 cm con un cm para el de la prueba
peso promedio de tratamiento Allium cepa,
78.33 ± 0.87 g con 30 mg debido a su
según lo descrito de L-1. La bajo costo y
por Ogeleka et al. medición practicidad
(2016) Luego, los realizada a como
bulbos se lavaron las 48 h bioindicador
en agua corriente muestra un de
y se colocaron en mayor citogenotoxi
recipientes crecimient cidad. Es
desechables o para el aconsejable
(capacidad de 150 tratamiento realizar
ml) esterilizados de control nuevas
con una solución (5,2 cm) y investigacio
de cloro al 5% mantiene nes con
durante 10 una gran concentraci
minutos, dejando diferencia ones más
el área de la raíz con el bajas de
en contacto con el tratamiento glifosato,
agua de cada de 30 mg así como
tratamiento a L-1 con tiempos de
temperatura una exposición
ambiente. La longitud de más cortos.
longitud de la raíz 2 cm. Debido al
se registró durante Después daño del
72 horas midiendo de 72 ADN
su crecimiento horas, la encontrado,
cada 24 horas. última se
Posteriormente, a medición recomienda
las 72 horas, se mostró que implementar
realizaron pruebas el acciones
para medir la tratamiento para reducir
mitosis en los de control su impacto
ápices de la raíz, obtuvo, en en la fauna
se calculó el índice promedio, y la flora, ya
mitótico para cada 7,2 cm, que esto
dosis y se con podría
identificó el diferencias compromete
número de significativ r el
anormalidades as en equilibrio de
celulares para comparaci los
cada tratamiento. ón con los ecosistemas
El procedimiento 2,6 cm del .
para la prueba de tratamiento
mitosis se lleva a con 30 mg
cabo a L-1. El
temperatura análisis
ambiente y estadístico
consistió en Tukey
sumergir 3 mm de HSD
las puntas de las (P≤0.05)
raíces en ácido permitió
clorhídrico 1 N observar
durante 15 diferencias
minutos para significativ
romper las as entre
paredes celulares. las
Luego, las concentrac
muestras se iones de 5
transfirieron a una y 10 mg L-
placa donde se 1 con
tiñeron con respecto al
acetoorceína 1 N tratamiento
durante 10 de 30 mg
minutos. Una vez L-1 en
teñidas, las raíces todos los
se colocaron en tiempos de
portaobjetos y se exposición.
cubrieron con un En este
cubreobjetos, estudio, se
luego se realizó la pudo ver
técnica de la una
calabaza para tendencia
hacer visibles clara para
cada una de las cualquiera
fases celulares. de los
Posteriormente, se índices
observaron en un mitóticos
microscopio óptico analizados
Leica DME 500. (GMI, PMI,
Se evaluaron MMI, AMI
cinco réplicas de y TMI). El
1000 células cada tratamiento
una (5000 por de control
tratamiento). tuvo los
Posteriormente, se valores
realizó un análisis más altos
de varianza en todas
(ANOVA) y se las dosis
compararon los (Tabla 2).
promedios El TMI fue
utilizando la menor en
prueba de rango la
múltiple HSD tendencia
(Diferencia con 2.4.
significativa En
honesta) de Tukey general, el
para determinar tratamiento
las diferencias de control
significativas a un tuvo una
nivel de P ≤ 0.05 mayor
(Tukey, 1994). El actividad
software mitótica de
estadístico acuerdo
Statgraphics con los
Centurion XVI resultados
versión se utilizó observado
para crear y editar s. De
los gráficos. acuerdo
con lo
anterior,
existe una
clara
influencia
del
aumento
en la
concentrac
ión de
glifosato
en cada
fase de la
división
celular en
las células
meristemát
icas de A.
cepa.
Asimismo,
el
tratamiento
de 30
mgL-1
tiene tasas
mitóticas
más bajas.
Es de
destacar
que el uso
de
glifosato
inhibió
completam
ente el TMI
siendo 0
para todas
las
concentrac
iones
probadas.