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BANCO DE SANGRE
MÓDULO IV (13 de Setiembre de 2015)
CLASE 6
INVESTIGACIÓN DE
ANTICUERPOS IRREGULARES
2
GENERALIDADES
5
GENERALIDADES
6
¿Qué son Anticuerpos Irregulares?
Son aquellos capaces de inducir reacción hemolítica con
acortamiento “in vivo” de la vida de los hematíes incompatibles o en
la EHRN.
Sinónimo: Aloanticuerpos.
Incidencia:
– Población general 0,3 a 2,0%.
– Politransfundidos 9%.
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¿Son importantes?
Ac. considerados importantes o potencialmente
peligrosos de significado clínico:
– Anti-D (D, C, c, E, e), Kell, Duffy, SsU, Diego
(Dla)
Ac. que pueden ser de significado clínico o
importancia cuestionable:
– Anti-Lea, Leb, -M, -N, -P1, I, Cartwright.
Ac. que casi nunca presentan significado clínico
o sin importancia:
– Anti-Ch/Rg (Chido/Rodgers), York (yka),
Sda, Xga, Bg. 8
¿Cuándo estudiarlos?
Suministro de sangre compatible: Type & Screen
(GS + Detección anticuerpos).
Evaluación prenatal: Mujer Rh- sin anti-D
(inmunoprofilaxis) ó ↑↑ título (evaluación fetal).
Evaluación de la EHRN: Identificar la causa.
Evaluación de anemias hemolíticas: Causa,
clasificar, sangre compatible, aloanticuerpos
escondidos.
Resolución de reacciones transfusional hemolítica:
Investigación de la causa, reacción tardía (10
Ac/GR) 9
Objetivos de Investigar Anticuerpos
17/09/2015 10
ELEMENTOS QUE INFLUYEN EN LA REACCIÓN
Ag-Ac EN LA BÚSQUEDA DE ANTICUERPOS
IRREGULARES
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IDENTIFICACIÓN DE
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS
ANTICUERPOS POR CÉLULAS
POR CÉLULAS PANTALLA
PANEL
Reactivos: Reactivos:
NaCl 9% NaCl 9%
Suspensión de GR del Suspensión de GR del
donante 5% donante 5%
Célula Pantalla I Células Panel
Célula Pantalla II Albúmina 22%
Albúmina 22% Antiglobulina humana
poliespecífico
Antiglobulina humana
poliespecífico Célula Control de Coombs
Célula Control de Coombs
Sinónimos:
Detección, pantalla, escrutinio, pesquisa, rastreo,
screening, tamizaje, Coombs indirecto. 13
CÉLULAS PANTALLA CÉLULAS PANEL
17/09/2015 14
Panel
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS POR
CÉLULAS PANTALLA
17/09/2015 16
Técnica en Tubo
Enumerar los tubos como I, II, III según sea el caso 2 ó 3 células.
Fase Salina
2 gotas de suero + 1 gota de GR,
centrifugar y leer.
En un microtubo
(LISS/Coombs):
- 50 ul de GR
- 25 ul de suero/plasma
- Incubar 37°C x 15
minutos
- Centrifugar y leer.
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Interpretación de los Resultados :
Células Pantalla
Negativo:
La reacción negativa en todas las células indica
la ausencia de anticuerpos irregulares.
Positivo:
Una reacción positiva en 1 ó 2 células y un
autocontrol (-) hace pensar la presencia de un
aloanticuerpo.
Donde hay una reacción positiva en todas las
células de la prueba y un autocontrol (+), puede
ser debido a un autoanticuerpo.
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IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS POR
CÉLULAS PANEL
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Técnica en Tubo
Enumerar tantos tubos como muestras tenga el panel (1,2,3,4, hasta
11 o según sea el caso más células).
Fase Salina
2 gotas de suero problema + 1 gota de GR del reactivo panel, en cada uno
de los tubos rotulados.
En el tubo para el autocontrol colocar 1 gota de GR al 5% del propio
paciente, mezclar, centrifugar y leer.
POSITIVO:
La aglutinación presente en 1 o más tubos del panel con
autocontrol (-). Nos indica la presencia de 1 o más Ac de
los Ag presentes en el panel.
NEGATIVO:
Ninguna aglutinación en todos los tubos indica la
ausencia de Ac perceptibles a los Ag listados en el panel.
AUTOCONTROL POSITIVO:
Indica presencia de autoanticuerpo.
TÉCNICAS ESPECIALES:
Como autoabsorción (elución) pueden ser requeridas
para revelar el aloanticuerpo subyacente. 22
INVESTIGACIÓN DE ANTICUERPOS
IRREGULARES
Ejemplo:
I II III
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DETECCION DE ANTICUERPOS IRREGULARES
4 posibilidades
F F F F
S A 3 C
7
°
- - + +
- - - -
24
descartados
F F F FC
S A 3
7
- - + +
- - + +
- - - -
- - - -
- - + +
- - - -
- - - -
- - - -
- - + +
- - + +
- - - -
- - - -
- - - -
- - - -
- - - -
- - - -
25 37°C Y
EN ESTE PANEL SE IDENTIFICA QUE EL ANTICUERPO TIENE ACTIVIDAD EN FASE
CON EL SUERO ANTIGLOBULINA HUMANO: ES TIPO Ig G.
¿ES LO MISMO UN AUTOANTICUERPO QUE
UN ALOANTICUERPO?
Un autoanticuerpo : anticuerpo que esta
dirigido contra antígenos propios del paciente,
pueden ser específicos (el paciente presenta
un fenotipo Rh: EeC y presenta anti-e, anti-E) e
inespecíficos (panaglutininas: aglutinan todo
con una característica homogénea).
FINALIDAD
* Detección de Anticuerpos Incompletos (IgG)
dirigidos contra antígenos del Glóbulo Rojo.
LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
FINALIDAD
C3d C3b
C3b
En resumen:
Elprincipio de la prueba de
A.G.H es detectar
inmunoglobulinas de la clase
Ig G y/o fracciones del
Complemento unidos a los
glóbulos rojos.
LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD)
o TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)
FINALIDAD
=
Suero de Coombs
poliespecífico
(Anti-IgG
GR sensibilizados REACCIÓN
Anti-C3d)
“in vivo” POSITIVA
LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
PRUEBA DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (PAD)
o TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)
APLICACIONES DEL TEST DE COOMBS DIRECTO (TCD)
1.- Investigación de Reacc. Hemolíticas Transf.
2.- Investigación de E. H. R. N.
3.- Investigación de A. H. A. I.
4.- Investigación de Anemias Hemolíticas
inducidas por Drogas.
Interpretacion:
Si la prueba muestra aglutinación , se
interpreta POSITIVA, significa que
hubo sensibilización IN VIVO de los
eritrocitos y se informa:
PAD Positiva , señalando en cruces la
intensidad de la reacción, por ej. 4 +
Si no hubo aglutinación, la prueba es
NEGATIVA, y significa que no hubo
sensibilización IN VIVO
LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
TÍTULO Y SCORE DEL TEST DE COOMBS
EQUIVALENCIA ENTRE EL
GRADO DE AGLUTINACIÓN Y EL SCORE
Grado de Aglutinación Score
4+ 10
3+ 8
2+ 6
1 + 4
1/2 + visibles a simple vista 3
1/2 + visible al microscopio 1
0 o ausencia de aglutinación 0
LA PRUEBA DE ANTIGLOBULINA HUMANA
TÍTULO Y SCORE DEL TEST DE COOMBS
IMPORTANCIA DEL TÍTULO Y SCORE
Caso 1
TÍTULO del test 2 4 8 16 32 64 SCORE
de Coombs (Anti-
IgG)
MUESTRA 1 4+ 4+ 3+ 3+ 2+ 1+ 46
MUESTRA 2 3+ 3+ 2+ 1+ 0 0 26
Caso 2
TÍTULO del test 2 4 8 16 32 64 SCORE
de Coombs (Anti-
IgG) 4+ 4+ 4+ 3+ 2+ 1+ 48
MUESTRA 1
MUESTRA 2 4+ 4+ 3+ 3+ 1+ 1+ 44
CD: 2+
CD Monoespecífico
IgG IgA IgM C3c C3d Ctl
2+ 0 0 0 0 0
Existen una serie de técnicas que permiten
realizar procedimientos que proporcionan
ayuda en ciertas determinaciones.
La detección de un Ac y su identificación,
constituyen una de las prácticas más
interesantes en el campo de la
Inmunohematología.
Muchos de éstos Ac son problemas
complejos, que requieren ciertas facilidades
en el laboratorio para su resolución y de
parte del investigador, exigen tiempo y
experiencia.
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