RESUMEN HISTOLOGIA

1. Datos del autor de revisión y resumen

APELLIDOS Y NOMBRES: VELAZCO TEJADA MARIO DARWIN

CODIGO: 013100780-D

CAPITULO Y TEMA DE HISTOLOGIA: SANGUIENEO Y LINFATICO

2. Titulo idioma original

Aminolevulinate siéntase 2 mediates erythrocyte differentiation by regulating larval globin expression

during Xenopus primary hematopoiesis

3. Autor y/o autores originales

Asako Ogawa-Otomo, Akira Kurisaki, Yuzuru Ito

4. Fecha de Publicación

Recibió 16 noviembre de 2014, disponible en línea 04 de diciembre 2014

5. Referencia de búsqueda revista publicada

PUBMED. EE.UU. Biblioteca Nacional de Medicina de los Institutos Nacionales de Salud

6. Titulo traducido

Aminolevulinato sintasa 2 media la diferenciación de eritrocitos por regulación de la expresión de

globina durante el estado larval de Xenopus en la hematopoyesis primaria

7. Palabras clave

Xalas2; hemoglobina; eritrocito; hematopoyesis; Xenopus

8. Objetivo de la investigación

El objetivo fue lograr la observar que en el Xenopus, encontrar la función de la XALA2 gen, si se expresa
antes que la HBA3, durante la hematopoyesis primaria y en los posteriores islotes sanguíneos ventrales
en la etapa de tailbud. También si la hemoglobina va a ser detectable por tinción de o-dianisidina y si los
niveles de transcripción de hba3 van a disminuir en las Xalas2 de los embriones del Xenopus.

9. Materiales Métodos

1. Animales: Este estudio se realizó de conformidad con las Directrices para el buen desarrollo de
Experimentación Animal del Consejo de Ciencias de Japón y fue aprobado por el Instituto Nacional de
Ciencia Industrial Avanzada y Tecnología.
2. El cultivo de embriones y la manipulación: X. laevis huevos se obtuvieron mediante la inyección de
ranas adultas fertilizados artificialmente

3. La extracción de RNA y reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR)

ARN total fue extraído de embriones y órganos adultos por métodos de fenol .Primera línea de cDNA fue
sintetizado a partir de 1 ug ARN total utilizando un oligo (dt). El ADNc (2 l) se utilizó como una plantilla
para RT-PCR.

4. Diseño y actividades MO: La completa codificación de la secuencia de Xalas2 se amplificó por RT-PCR,
se digirió conBam HI y Xho I, y se ligó en el plásmido pCS2. Identificamos la Xalas2 ' de secuencia no
traducida de la región (UTR) de 5' rápida amplificación de cDNA extremos. Amplificamos la codificación
de la secuencia Xalas2 con el 5'UTR o cinco mutaciones puntuales en el sitio de unión del morfolino-por
RT-PCR con el ADN de alta fidelidad de la polimerasa.

5. Construcciones sonda de ARN y todo el montaje in situ hibridación: El Xalas2 completa secuencia de

ARNm clon se adquirió como pCMV- SPORT6 Xalas2 de Thermo Fisher Scientific. pCMV-SPORT6 Xalas2,
pGEM T hba3, pBluescript II GATA1, y pBluescript II SCL se transcribieron con T3 o T7 RNA polimerasa y
ARN DIG. Los embriones fueron procesados para todo el montaje in situ hibridación; algunos se
incluyeron en parafina, se seccionaron a 10 um, y se tiñeron con eosina.

6. La hemoglobina tinción de embriones: Tinción Whole-embrión para la expresión de hemoglobina se

realizó utilizando o-dianisidina de acuerdo con los métodos descritos anteriormente. Después de la
tinción, los embriones fueron fijadas en MOPS / EGTA / sulfato de magnesio / tampón de formaldehído
(MEMFA) durante 3 h y se incubaron en benzoato de bencilo / alcohol bencílico (BB / BA).

10. Resultados
En el uso de 5 'RACE, se identificaron dos secuencias codificadas Xalas2 ( Xalas2a yXalas2b ) y
comparamos sus secuencias de aminoácidos con los de otros vertebrados. Estaba claro
que Xalas2 contiene hemo reguladores (motivo CP) compuesto de cinco residuos.

Xalas2a la expresión de ARNm aumentó de etapa 15 y se mantuvo hasta la etapa 42; en

contraste, Xalas2b expresión comenzó en la etapa 34 ( Fig. 2 A). Xalas2 expresión se analizó por in
situ hibridación para caracterizar su relación con la eritropoyesis. Xalas2expresión comenzó en el
mesodermo ventral anterior en la etapa de neurula ( Fig. 2 B, C ), similar a SCL ( Fig. 2 K), que codifica un
factor de transcripción que regula factores hematopoyéticos [21] y actos a principios del mesodermo
ventral para especificar las células madre hematopoyéticas en X. laevis.

Para demostrar el papel de Xalas2, que inhibió la traducción de los dos tipos de ALAS:
Diseñada Xalas2 un-MO y Xalas2b -MO de traducción inhibida. Tinción de la hemoglobina con o-
dianisidina confirmó X función ALAS2 como una sintasa de hemo en el Xenopus embrión. La
hemoglobina era casi indetectable en embriones inyectados conXalas2 OM.

11. Conclusiones
  Sugerimos que Xalas2 comparte las mismas funciones y sistema de regulación como otros
vertebrados y que su actividad puede ser regulada por hemo.
 Xalas2 se expresó en hemangioblastos y eritrocitos
 La inhibición de la traducción ALAS2 también inhibió la síntesis de hemoglobina embrionaria

12. COMENTARIO DEL ALUMNO

La diferenciación de los eritrocitos por medio de la ALA2 en la hematopoyesis primaria, en un proyecto

para el desarrollo de órganos y la aplicación de la tecnología de diferenciación, es muy importante ya
que la tecnología ha llegado a avanzar a tal punto, que ahora con este proyecto podemos llegar a
solucionar patologías que antes no se podían solucionar, de igual manera para lograr identificarlas a
tiempo y poder prevenirlas.

Con el desarrollo de órganos, se lograra cubrir la demanda de órganos que existe y se salvaran más
vidas, las personas tendrán una mejor calidad de vida, mejor desarrollo en los ámbitos sociales
(empleo); y con la tecnología de diferenciación se detectara a inicios y de mejor manera enfermedades
que solo se identificaban en sus estadios terminales, cuando ya no se podía hacer nada por las personas.