TMV

El virus del mosaico del tabaco, Tobacco mosaic virus o TMV, es un virus ARN que infecta plantas, especialmente al tabaco y a otros miembros de la familia Solanaceae. La infeccin produce manchas caractersticas en las hojas (de ah su nombre). Fue el primer virus descubierto. Aunque desde fines del siglo XIX se saba que esta enfermedad infecciosa daaba las cosechas de tabaco, no fue hasta 1930 que pudo determinarse que el agente infeccioso era un virus. El virus del mosaico del tabaco presenta un agente subvrico denominado virus satlite del mosaico del tabaco, el cual utiliza al TMV para llevar a cabo su reproduccin.
Virus del mosaico del tabaco. Importante enfermedad viral que se presenta con mucha frecuencia en el cultivo del tabaco y de otras especies solanceas. Ocasiona grandes daos econmicos y su transmisin se produce fundamentalmente por medio del pulgn Epitrix hirtipennis muy distribuido en todo el territorio nacional.

TMV, se da en el ambiente o por la transmisin mecnica pasiva de una planta a otra.

INFORMACION APS
Introduccin
Los virus son patgenos infecciosos demasiado pequeos para ser vistos en el microscopio de luz, pero que a pesar de su tamao son capaces de causar un caos. Las formas ms simples de virus estn compuestas por una pequea porcin de cido nucleico rodeado de una cubierta proteica (o envoltura proteica o cpside). Como en el caso de otros organismos, los virus portan informacin gentica en sus cidos nucleicos, los cuales tpicamente codifican tres o ms protenas. Todos los virus son parsitos obligados que dependen de la maquinaria celular de sus hospedantes para reproducirse. Los virus no son activos fuera de sus hospedantes (o husped u hospedero), lo cual ha llevado a que muchos sugieran que no son organismos vivos. Todos los tipos de organismos vivos incluyendo animales, plantas, hongos y bacterias son hospedantes de virus, pero la mayora de los virus infecta solo un tipo de hospedante. Los virus causan muchas e importantes enfermedades vegetales y son responsables por prdidas en el rendimiento y la calidad de los cultivos en todas partes del mundo. El objetivo de este captulo es brindar una sinopsis del fascinante mundo microscpico de los virus vegetales y describir el concepto bsico de virus, la estructura de las partculas y genomas virales, los ciclos de vida de los virus, la evolucin y diversidad de los virus vegetales, as como tambin las ms comunes presentaciones/manifestaciones de las enfermedades virales en plantas y los principales enfoques para el manejo de las mismas. Esperamos poder transmitir al lector nuestra frustrante admiracin por estos pequeos patgenos y su xito en la manipulacin de sus hospedantes.

Historia
Los comienzos de la virologa vegetal se remontan a finales del siglo XIX, cuando el microbilogo holands Martinus Beijerinck y el cientfico ruso Dmitrii Iwanowski investigaban la causa de una misteriosa enfermedad del tabaco (Scholthof 2001). Estos investigadores, en forma independiente, describieron un agente inusual que causaba la enfermedad del mosaico en tabaco (Zaitlin, 1998). Lo que distingua a este agente de otros agentes causales de enfermedades era su tamao mucho menor al de otros microorganismos. Este agente, posteriormente denominado virus del mosaico del tabaco (Tobacco mosaic virus, TMV), fue el primer virus en ser descrito. Desde entonces, un gran nmero de diversos virus han sido encontrados en plantas, animales, hongos y bacterias. El nmero actual de virus reconocidos es cerca de 4,000, de los cuales cerca de 1,000 son virus vegetales. La principal razn por la cual estudiamos los virus vegetales es el impacto negativo que las enfermedades virales tienen en la produccin de los cultivos. Histricamente, los virus han sido percibidos como una amenaza casi exclusiva a la sanidad humana, animal y vegetal. Sin embargo, los recientes progresos como resultado de un mayor entendimiento de las interacciones virushospedante han transformado a los virus en importantes herramientas biomdicas y biotecnolgicas. Por ejemplo, los virus vegetales se usan para producir en las plantas grandes cantidades de protenas de inters (Pogue et al. 2002) y para desarrollar vacunas seguras y de bajo costo contra virus humanos y animales (Walmsley and Arntzen 2000).

Biologa Bsica
Los virus representan no slo otro grupo de patgenos, sino una forma de vida fundamentalmente diferente. A diferencia de otros organismos vivos, los virus son no-celulares. En contraste a las clulas, que se multiplican dividindose en clulas hijas, los virus se organizan a partir de sus propios componentes estructurales. Las partculas virales maduras estn inactivas; se activan y replican slo dentro de las clulas infectadas. En otras palabras, los virus son parsitos obligados que no pueden ser mantenidos en los medios de cultivos apropiados para clulas bacterianas, fngicas, vegetales o animales. Todos los virus estn desprovistos de las maquinarias celulares para sintetizar protenas y producir energa. Como regla general, las partculas virales son inmviles fuera del hospedante infectado; necesitan de la ayuda de otros organismos o del ambiente para su diseminacin.

Morfologa
Hay un simple principio estructural que se puede aplicar virtualmente a cualquier virus en su forma madura. Las partculas virales (viriones) estn compuestas por dos partes principales: el genoma compuesto de cido nucleico, y una cubierta proteica, la cual proteje la particula viral. Adems, algunas partculas virales estn recubiertas por una membrana externa compuesta de lpidos y protenas (o membrana lipoproteica). Las cubiertas proteicas (o cpsides) de los virus vegetales se ensamblan siguiendo uno de dos tipos fundamentales de simetra. El primer tipo de virin es helicoidal (casi elongado). Hay dos variantes principales de virus elongados: los bastones (o barra o vara) rgidos (Figura 1) y los filamentos flexuosos (Figura 2). En ambas variantes, el cido nucleico est altamente organizado: toma la misma conformacin helicoidal que la cpside proteica. El segundo tipo de partcula viral es icosadrica (casi esfrica, Figura 3); las variantes de esta forma bsica incluyen a los viriones baciliformes (Figura 4) y los viriones gemelos compuestos por la unin de dos icosaedros incompletos (Figura 5). En los viriones icosadricos, el cido nucleico genmico forma una esfera parcialmente organizada dentro de la cpside proteica. Tanto

los viriones icosadricos como los elongados pueden auto-ensamblarse en un tubo de ensayo si el cido nucleico y las subunidades proteicas se incuban bajo condiciones.

Figura 2 Figura 1

Figura 3

Figura 4

Figura 5

Los virus son los organismos conocidos ms pequeos. El dimetro tpico de un virus vegetal esfrico es aproximadamente 30 nm. La partculas rgidas, en forma de bastn, del TMV miden 300 x 18 nm y consisten de un genoma de ARN de alrededor de 6,400 nucletidos encapsulados por 2,130 copias de la cubierta proteica del TMV. Algunos de los virus filamentosos alcanzan una longitud cercana a los 2000 nm o 2 m. A modo de comparacin, el tamao tpico de una clula de mesfilo foliar mide alrededor de 50 m.

Replicacin

Como en cualquier otro organismo, la informacin para la replicacin de los virus est contenida dentro de sus genomas (Figura 6).

Figura 6

Aunque el material gentico de la mayora de los organismos consiste en ADN de cadena doble (ADNcd), solo una minora de los virus vegetales posee genomas de ADNcd. Los genomas de otros virus vegetales estn compuestos de ADN de cadena simple (ADNcs). Sin embargo, la mayora de los virus vegetales no utilizan ADN en ningn momento. En cambio, los genomas de casi todos los virus vegetales estn constituidos de ARN. La mayora de estos genomas estn compuestos de ARN de cadena simple (ARNcs) que tienen la misma polaridad (sentido positivo) que las molculas de ARN mensajero de la clula. Algunos virus de ARN utilizan ARNcs de polaridad negativa, y algunos otros tienen genomas compuestos de ADNcd. Debido a la enorme variabilidad en la naturaleza del material gentico de los virus, los ciclos replicativos de diferentes virus son frecuentemente muy distintos entre s. Dado que los virus vegetales son parsitos biotrficos obligados, sus ciclos de vida comienzan con la penetracin del virin a la clula. Los virus vegetales no pueden penetrar por s solos la cutcula y la pared celular de las plantas. Se cree que el virin ingresa al citoplasma de la clula en forma pasiva, a travs de heridas causadas por dao mecnico en la cutcula y pared celular. El paso siguiente en la infeccin viral es la remocin parcial o total de la cubierta proteica del virin en el citoplasma. Luego, la clula interviene en la expresin del genoma viral proveyendo un aparato de transcripcin (para los virus de ADN) y un aparato de traduccin (para todos los virus). Los virus de ADN deben ser transportados al ncleo para la transcripcin y de esta manera tener acceso a las protenas celulares necesarias para la produccin de ARN mensajero a partir de ADN viral. La traduccin de ARN viral en el citoplasma produce protenas virales que son necesarias para completar el ciclo de vida del virus. Todos los virus deben formar al menos tres tipos de protenas: protenas de replicacin esenciales para la produccin de cidos nucleicos, protenas estructurales que conforman la cubierta proteica y otros componentes de los viriones, y protenas de movimiento que sirven de intermediarias en el transporte de los virus entre las clulas vegetales ( Figura 6). Las protenas de replicacin viral se combinan con las protenas celulares para producir un complejo de protenas que fabrican mltiples copias del genoma viral. Estos nuevos genomas interactan con las protenas estructurales para formar nuevos viriones. El siguiente diagrama ( Figura 7) ilustra los pasos que se dan dentro de la clula durante la replicacin del virus del mosaico del tabaco (TMV).

Figura 7

El paso siguiente en el ciclo de reproduccin viral es el movimiento del virus a las clulas vecinas. Dependiendo del tipo de virus, el transporte de los genomas virales o los viriones a las clulas vecinas se produce a travs de pequeos canales, llamados plasmodesmos, que forman conexiones entre las clulas. Muchos virus producen protenas de movimiento que modifican los canales plasmodesmticos y posibilitan el movimiento viral hacia las clulas circundantes. El siguiente diagrama (Figura 8) ilustra el movimiento de TMV desde una clula infectada hacia una clula vecina.

Figura 8

El proceso de movimiento de clula a clula es relativamente lento: el tiempo de multiplicacin viral en una clula y su posterior movimiento a otra vara entre una y varias horas. Para poder colonizar exitosamente toda la planta, el virus necesita ingresar al sistema vascular. El proceso de transporte sistmico o de larga distancia normalmente se da a travs de los tubos cribosos del floema, donde los virus se mueven pasivamente con el flujo de fotosintatos. Luego de una dispersin viral sistmica relativamente rpida (centmetros por hora) en el floema, el virus pasa del floema a las clulas circundantes, donde se reproduce y disemina movindose de clula a clula. El tiempo entre la infeccin inicial de una o pocas clulas y la infeccin sistmica del hospedante vara entre unos pocos das a pocas semanas, dependiendo del virus, el hospedante y las condiciones ambientales. La transmisin de un virus de una planta a otra (ver seccin supervivencia y diseminacin) completan el ciclo de vida del virus.

Sistemtica
Idealmente, la sistemtica (el estudio de las distintas clases de organismos y las relaciones entre ellos) debera reflejar la historia evolutiva de las especies biolgicas. Dicha historia puede construirse a travs del anlisis de antecesores fsiles y por la comparacin de los genes de organismos existentes (anlisis filogenticos). Debido a que no hay registros fsiles virales, su evolucin puede reconstruirse con cierta certeza solo a travs de anlisis filogenticos. Este tipo de anlisis tiene una resolucin relativamente buena a niveles taxonmicos intermedios, tales como gnero y familia del virus. Sin embargo, debido a la propia naturaleza de las formas de vida virales, se vuelve ms complicado o an poco factible a niveles inferiores (especie) o superiores. Debido a que los virus presentan altas tasas de replicacin y mutacin, cada ciclo replicativo produce un nmero de variantes genticamente similares pero no idnticas. La posterior seleccin y evolucin de estos genomas levemente diferentes da como resultado un continuo de variantes que van

desde mutaciones puntuales hasta cepas virales. A diferencia de los organismos celulares, los cuales parecen haberse originado a partir de un ancestro comn, es muy factible que los virus hayan tenido orgenes mltiples. La diversidad de orgenes de los distintos grupos de virus permite que su clasificacin evolutiva pueda hacerse solo dentro de ciertos tipos de virus, tales como los virus que tienen genomas de ARN de sentido positivo, o los virus de genomas pequeos de ADNcs. Al considerar la clasificacin de los virus vegetales, no debemos olvidar que el primer virus vegetal fue purificado y caracterizado a mediados de 1930. Anteriormente, la mayora de los virlogos vegetales daban nombre a los virus en base al hospedante en el cual el virus haba sido encontrado y de acuerdo al tipo de sntoma que ese virus causaba en dicho hospedante. Por ejemplo, el virus del tabaco del mosaico fue descrito por primera vez en plantas de tabaco, en las cuales induca un mosaico en las hojas (Figura 9). Los nombres de los virus son usualmente expresados como acrnimos (nota del traductor: derivados de sus siglas en ingls); por ejemplo el virus del tabaco del mosaico es abreviado TMV (del ingls Tobacco mosaic virus), y el virus del marchitamiento moteado del tomate es abreviado TSWV (del ingls Tomato spotted wilt virus). Los nombres de muchos gneros y familias de virus derivan de algn virus importante dentro de la familia. Por ejemplo, el nombre de la familia Bromoviridae deriva del Brome mosaic virus, el cual est en dicha familia.

Figura 9

Las mayores subdivisiones de virus vegetales estn definidas por la constitucin qumica de sus genomas (Plant Viruses Online http://image.fs.uidaho.edu/vide/refs.htm ). En general, la mayor parte de los virus vegetales poseen genomas de ARN de cadena simple de sentido positivo, y estos virus reciben entonces el nombre de virus de ARN de cadena positiva. Dentro de esta categora, existen numerosos ejemplos de familias de virus de importancia econmica, tales comoBromoviridae, Closteroviridae, Luteoviridae, y Potyviridae. Relativamente pocos virus vegetales, tales como las familias Bunyaviridae y Rhabdoviridae poseen genomas de ARN de sentido negativo. Reoviridae es la familia ms grande de virus de ARN de doble cadena. Solamente los virus de la familia Caulimoviridae (tambin conocidos como para-retrovirus), poseen genomas de ADN de doble cadena y para su replicacin es necesaria la presencia de un ARN intermediario. Los verdaderos virus vegetales de ADN estn dentro de la familia Geminiviridae, la cual es muy amplia y tiene gran importancia econmica. Estos virus poseen genomas de ADNcs, y tienen un ADNcd intermediario en sus ciclos de vida (Hull 2002). Las relaciones evolutivas entre de los virus de cadena positiva, los de cadena negativa y los virus de ARNcd, as como en los pararetrovirus y los virus de ADNcs son extremadamente distantes y probablemente inexistentes.

Supervivencia y diseminacin

La supervivencia a largo plazo (incluso por dcadas) de relativamente pocos virus, tales como TMV, se da en el ambiente o por la transmisin mecnica pasiva de una planta a otra (Ford and Evans, 2003). La mayora de los virus vegetales son transmitidos en forma activa de una planta infectada a otra sana por un organismo vivo, llamado vector. Los artrpodos herbvoros, nematodos, y hongos fitfagos son los principales tipos de vectores de virus vegetales (Walkey, 1991). Entre ellos, los fidos y las moscas blancas (Figuras 10A, B, C) tienen la capacidad de transmitir el mayor nmero de especies de virus. La mayora de los virus se transmiten activamente por vectores a plantas sanas en cuestin de segundos, horas o das. Adems, algunos virus se transmiten a partir plantas infectadas cuando stas son propagadas vegetativamente, por ejemplo, como tubrculos o injertos. Tambin, puede haber transmisin vertical a partir de semillas o polen de plantas infectadas. Este tipo de transmisin es particularmente importante para la supervivencia invernal de los virus.

Figura 10

La transmisin de los virus a travs de un vector es un proceso sumamente especfico. Cada virus puede transmitirse solamente por un tipo de vector (por ejemplo, fido) y no por otro (por ejemplo, mosca blanca). Contrariamente, cada especie de vector (por ejemplo el fido verde del duraznoMyzus persicae) puede transmitir algunos virus (por ejemplo, el virus amarillo de la remolacha, oBeet yellow virus) pero no otros (por ejemplo, el virus de la tristeza de los ctricos, o Citrus tristeza virus), a pesar de que estos virus son genticamente muy similares entre s. La interaccin entre un virus y su vector especifico, y que da como resultado la transmisin viral, vara entre diferentes vectores. Las relaciones que se dan entre los virus y sus vectores son complejas y de gran inters para los virlogos vegetales ya que los vectores proveen el principal modo de dispersin de muchos de los virus que causan importantes prdidas econmicas. Para algunas combinaciones de virus-vector, la interaccin entre el virus y su vector es muy superficial y es el resultado de la fijacin del virus a las superficies externas de las partes bucales del vector. Por ejemplo, los virus del genero Potyvirus producen una protena especial llamada componente ayudante (helper component) que acta como adhesivo entre los viriones y los estiletes de los fidos. En este caso, la adquisicin del virus a partir de plantas infectadas y la inoculacin del virus en plantas sanas toma de segundos a minutos (Pirone and Blanc, 1996). Contrariamente, los virus de la familia Luteoviridae circulan en sus vectores (fidos) movindose a travs de la pared intestinal (o: hemocel) hacia la cavidad corporal, y recin as pasa a la saliva del fido (Figura 11).

Figura 11

A estos virus, les toma cerca de 12 horas circular dentro de su vector (fido) antes de poder ser transmitidos a otra planta (Gray and Gildow, 2003). Para otros vectores de virus vegetales, la relacin es muy ntima y los virus en realidad se multiplican dentro de las clulas de sus insectos vectores. Por ejemplo, el virus del marchitamiento moteado del tomate (Tomato spotted wilt virus) se multiplica en las clulas de su vector (thrips), y una vez que los thrips adquieren el virus lo pueden transmitir mientras vivan (Sherwood et al. 2003). A estos virus vegetales que se multiplican en sus insectos vectores se los consideran virus de plantas y de insectos simultneamente. Debido a que las prcticas de manejo de enfermedades con frecuencia estn diseadas para controlar a los vectores, entender el proceso de transmisin viral es de suma importancia para el desarrollo de estrategias efectivas de manejo de enfermedades causadas por virus vegetales.

Interacciones Planta-Virus
En teora, los virus pueden infectar todas las especies de plantas cultivadas y silvestres. Sin embargo, los rangos de hospedantes de cada virus son variables, pudiendo ser muy reducidos o muy amplios. Por ejemplo, el virus de la tristeza de los ctricos ( Citrus tristeza virus) infecta solamente a pocas especies del gnero Citrus, mientras que el virus del mosaico del pepino (Cucumber mosaic virus) afecta a ms de 1000 especies en 85 familias de plantas. La susceptibilidad o resistencia de las especies y cultivares vegetales a los virus est determinada principalmente por el genotipo del hospedante. Las plantas poseen mecanismos activos y pasivos para prevenir la infeccin viral. Las defensas pasivas se dan cuando la planta no produce uno o ms de los factores requeridos para la reproduccin del virus y su dispersin en el hospedante. Las defensas activas incluyen la deteccin y destruccin de clulas infectadas con el virus, y son producidas por genes de resistencia especficos en la planta. Normalmente, los genes de resistencia son efectivos solamente contra un virus en particular. Adems, las plantas poseen un sistema general de defensa comparable con el sistema inmune animal. La principal diferencia entre ambos es que el sistema inmune animal acta sobre las protenas del patgeno, mientras que el sistema de defensa vegetal, conocido como silenciamiento por ARN ( RNA silencing), detecta y degrada las molculas de ARN viral (Wassenegger and Plissier 1998). Dependiendo de la combinacin especial de virus y hospedante, y de las condiciones ambientales, la respuesta vegetal a una infeccin puede ser desde asintomtica hasta enfermedad severa y muerte de la planta. En algunos casos, en el lugar de infeccin se desarrollan lesiones localizadas (pequeos puntos clorticos y necrticos) (Figura 12) En la mayora de los casos, los virus se dispersan a travs de toda la planta causando una infeccin sistmica.

Figura 12

Los sntomas foliares tpicos de enfermedades virales incluyen patrones de mosaico (Figura 9), lesiones clorticas o necrticas (Figura 13), amarillamiento, estras o franjas (Figura 14 y 15), descoloracin y formacin de bandas en las nervaduras (Figura 16)y enrollamiento y curvatura foliar (Figura 17). Los sntomas florales incluyen deformacin y cambio en el color de las flores, con posible mosaico, llamado corrimiento o quebrado del color (Figura 18 y 19). Los sntomas en frutos y otros rganos vegetales incluyen patrones de mosaico ( Figura 20), achaparramiento, descoloracin o malformacin (Figura 21), y anillados clorticos (Figura 22 y 23). Los tallos de las plantas pueden desarrollar quebraduras, hundimientos y tumores en respuesta a la infeccin viral (Figura 24).

Figura 13

Figura 14

Figura 16

Figura 15

Figura 17 Figura 18

Figura 19

Figura 20

Figura 21

Figura 22

Figura 23

Figura 24

Los sntomas inducidos por los virus vegetales conllevan a una reduccin de la calidad y rendimiento de los cultivos. La importancia de estas prdidas queda demostrada por los tres siguientes ejemplos. En frica, el virus del hinchamiento de los brotes del cacao ( Cacao swollen shoot virus) (Bowers et al. 2001) causa, aproximadamente, prdidas anuales de 50,000 toneladas de granos de cacao lo cual representa un valor estimado de $28 millones de dlares. En el sudeste asitico, la infeccin del arroz con el virus del tungro del arroz (Rice tungro virus) provoca una prdida anual estimada de $1.5 billones de dlares (Hull 2002). El virus del marchitamiento manchado del tomate (Tomato spotted wilt virus) infecta a una amplia variedad de plantas, incluyendo tomate, man y tabaco (Sherwood et al. 2003), y las prdidas anuales mundiales estimadas debido a la infeccin por este virus rondan el $1 billn de dlares (Hull 2002). El resultado final de la infeccin viral es una reduccin en el crecimiento vegetal, disminucin del rendimiento, menor calidad y prdidas econmicas para aquellos que trabajan en la produccin vegetal. La mayora de los sntomas inducidos por los virus pueden darse tambin debido a condiciones ambientales adversas y a enfermedades causadas por otros agentes fitopatgenos. Por esta razn, el correcto diagnstico de enfermedades virales normalmente requiere de pruebas especficas de laboratorio.

Diagnstico de enfermedades causadas por virus vegetale

Debido a que diferentes virus pueden producir sntomas similares, el fenotipo de la enfermedad puede proveer solamente informacin limitada, aunque til, para el diagnstico de la enfermedad. Los mtodos de identificacin viral ms especficos y confiables se basan en diferentes propiedades de los virus. Estas caractersticas y sus correspondientes aplicaciones incluyen: 1. Patogenicidad.Bioensayos que usan plantas indicadoras. Algunos gneros vegetales, tales como Nicotiana (tabaco) y Chenopodium (quinoa) son hospedantes de un gran nmero de virus. Debido a que estas plantas tienen respuestas consistentes y distintivas a las infecciones virales en condiciones de invernculo, es comn usarlas como plantas indicadoras (Walkey 1991). Los dos tipos principales de respuesta son lesiones localizadas (Figura 12), que estn confinadas a las hojas inoculadas (hospedantes de lesiones localizadas), y las infecciones sistmicas que producen sntomas en hojas distantes del sitio de inoculacin (hospedantes sistmicos). Muchos de los virus vegetales son transmisibles a plantas indicadoras por medio de transmisin mecnica (Figura 25) o por injertos.

Figura 25

2. Transmisibilidad. Ensayos de transmisin por vectores. Debido a la especificidad del vector, la identificacin del organismo que transmite al virus provee informacin importante para la identificacin del virus. 3. Arquitectura de las partculas virales. Microscopa electrnica. La forma y tamao de los viriones diferencia partculas en forma de barra, filamentosas, icosadricas o partculas grandes con envoltorios (Figuras 1-5). Por el contrario, es difcil distinguir a los virus que tienen la misma forma y tamao. Por ejemplo, es difcil distinguir entre pequeos virus esfricos, y entre estos y los ribosomas vegetales. 4. Presencia de estructuras especificas del virus en clulas infectadas Microscopa electrnica. Debido a su ntima asociacin con los componentes celulares, frecuentemente los virus producen, como resultado de la infeccin, estructuras inusuales dentro de las clulas vegetales. Por ejemplo, los virus de la familia Potyviridae producen inclusiones en forma de rueda de molino (Figura 26) caractersticas de los virus de esa familia pero que no se encuentran ni en clulas sanas ni en clulas infectadas con otros virus. Las inclusiones especficas de los virus han sido caracterizadas en un gran nmero de familias y gneros de virus, y la deteccin de estas inclusiones indica la presencia de un virus perteneciente a dicho grupo.

Figura 26

5. Propiedades de la cubierta proteica. Tcnicas inmunolgicas. Estos experimentos se basan en la identificacin de un virus (el antgeno) a travs de la reaccin con susanticuerpos especficos. Los anticuerpos especficos son producidos por un animal cuando protenas forneas son introducidas en ste. Para obtener anticuerpos que

reaccionen especficamente con un virus vegetal en particular, los investigadores inyectan una preparacin purificada del virus vegetal en el animal (generalmente un ratn o conejo). Varias semanas despus de la inyeccin, se colecta la sangre del animal y los anticuerpos se separan de ella. Estos anticuerpos reaccionan especficamente con las protenas virales que fueron inyectadas en el animal, y los investigadores usan la ventaja de esta interaccin especfica para disear tcnicas de laboratorio para la deteccin de estos virus vegetales. Uno de los mtodos ms utilizados para el diagnstico de virus vegetales est basado en el uso de anticuerpos. Este mtodo es el ensayo de inmunoabsorcin de enzima ligada, o ELISA (nota del traductor: del ingls: Enzyme-linked immunoabsorbent assay). Un ejemplo de uno de los tipos del mtodo de ELISA se ilustra en la Figura 27. En este ensayo, un extracto de tejido vegetal en evaluacin para la presencia de virus se incuba en uno de los orificios o pocitos (wells) de una placa plstica microtitulada, y los viriones presentes en el extracto se unen a la superficie del orificio. Luego, el anticuerpo del virus es agregado al pocito y el anticuerpo se une a las partculas virales. Un segundo anticuerpo que ha sido conjugado, o ligado, a una enzima es agregado al pocito donde se une al primer anticuerpo. Despus de un lavado para remover el conjugado no ligado de enzima-anticuerpo, se agrega un sustrato incoloro para la enzima. La enzima procesa el sustrato produciendo un compuesto coloreado (por ejemplo, amarillo). La presencia del color indica la presencia del virus, y la intensidad del color puede usarse para estimar la concentracin viral. El mtodo ELISA es, por lejos, la tcnica inmunolgica ms utilizada en agricultura para la identificacin de virus.

Figura 27

6. Propiedades de los cidos nucleicos virales. Amplificacin por PCR. La reaccin en cadena de la polimerasa (nota del traductor: PCR, del ingls: Polymerase Chain Reaction) es una tcnica muy sensible y especfica para la deteccin de virus. Est basada en la presencia de secuencias nicas en el cido nucleico del genoma de cada virus (Bartlett 2003). La secuencia del ADN viral que un investigador quiere amplificar es sometida a alrededor de 30 ciclos de copiado en un pequeo tubo de ensayo. Un ejemplo de un tipo de prueba de PCR se ilustra en la Figura 28. En la prueba de PCR, pedazos cortos de ADN (cebadores, o primers) complementarios a porciones especficas del cido nucleico viral se hibridan (adhieren) al cido nucleico viral. Una enzima polimerasa termoestable es usada para sintetizar mltiples copias de una hebra de ADN (cADN) que es complementaria a la porcin de la secuencia del cido nucleico viral comprendida entre los dos cebadores. Durante la reaccin de PCR, el nmero de molculas de la secuencia de inters se duplica con cada ciclo, y despus de 30 ciclos el resultado es ms de 10 billones de copias de dicha secuencia. El producto de la PCR puede detectarse usando electroforesis en gel, proceso en el cual una corriente elctrica se utiliza para separar en un gel a las molculas de diferente tamao. Luego de la separacin, los fragmentos de

ADN en el gel se tien con un pigmento especfico para cidos nucleicos, y la presencia de una banda del tamao apropiado indica la presencia del virus para el cual los cebadores de ADN fueron diseados. Para los virus de ARN, la hebra de ARN es retro -transcripta a su ADN complementario, seguido de una amplificacin del ADN resultante usando la tcnica de PCR.

Figura 28

Manejo de enfermedades virales vegetales

A pesar de que prcticamente no existen compuestos antivirales capaces de curar las enfermedades virales en las plantas, las medidas de control eficientes pueden mitigar o prevenir sustancialmente su ocurrencia. El primer paso requerido para el manejo de enfermedades virales es la identificacin del virus. La estrategia de manejo subsiguiente depender de la forma por la cual un determinado virus ingresa al cultivo, de cmo el virus es transmitido entre las plantas de un mismo cultivo, y de cmo el virus sobrevive en ausencia del cultivo (Haddidi et al. 1998). Medidas preventivas incluyen el uso de semillas u rganos vegetativos certificados libres de virus, la eliminacin de los posibles reservorios del virus en la vegetacin silvestre circundante, y la modificacin de prcticas de siembra y cosecha. Si el virus tiene un vector de transmisin conocido, el control o exclusin del vector es sumamente importante. Por ejemplo, los nematodos, insectos y hongos vectores pueden controlarse con nematicidas, insecticidas y fungicidas, respectivamente. Una estrategia alternativa para el control de virus es la utilizacin de resistencia a la infeccin viral, sea natural o modificada por ingeniera gentica. Si existen, los genes naturales de resistencia viral pueden introducirse a las variedades de un cultivo por tcnicas de mejoramiento convencional. Frecuentemente, estos genes naturales de resistencia se encuentran en los distintos cultivares disponibles de un cultivo determinado. Tambin, los genes de resistencia se encuentran en plantas silvestres identificadas cerca del centro de origen del cultivo en cuestin. La ingeniera gentica -la transferencia de genes entre organismos especficos usando enzimas y tcnicas de laboratorio y no la hibridacin biolgica- permite la introduccin de dichos genes en especies no emparentadas entre s. Ms an, la resistencia viral puede disearse modificando el sistema de defensa de silenciamiento de ARN en la planta. Esto se consigue introduciendo fragmentos del cido nucleico viral en los cromosomas vegetales. Tal resistencia transgnica confiere inmunidad a la infeccin del virus a partir del cual dicho cido nucleico fue originado. La efectividad de este tipo de resistencia transgnica se pone de manifiesto por el manejo exitoso del virus del anillado de la papaya (Papaya ringspot virus) en Hawaii (Gonsalves et al. 2004). A pesar de que la ingeniera

gentica ofrece oportunidades ilimitadas para la obtencin de cultivos vegetales resistentes a virus, su aplicacin en gran escala ha enfrentado cierta resistencia por parte de los investigadores, agencias de control y el pblico en general. Para poder estimar si las plantas genticamente modificadas para resistencia a virus son seguras, se necesita primero entender en profundidad los riesgos potenciales asociados con la liberacin de plantas genticamente modificadas al ambiente.

Viroides: cidos nucleicos infecciosos

Los viroides son ARNs infecciosos capaces de producir numerosas enfermedades vegetales de importancia econmica (Hull 2002). Estos patgenos son similares a algunos virus vegetales ya que su genoma contiene ARN, pero difieren de los virus de ARN en dos aspectos fundamentales. Primero, los viroides estn compuestos de ARNs desnudos, es decir, no poseen cubierta proteica. Segundo, los viroides no producen ningn tipo de protenas cuando infectan a una clula vegetal, ms all de que estn formados por ARN. El genoma de los viroides es una molcula de ARN pequea y circular que contiene entre 246 y 375 nucletidos. Aunque los viroides no producen sus propias protenas, son capaces de usar la maquinaria celular del hospedante para reproducir su propio ARN y moverse dentro de otras clulas para luego infectar a toda la planta. Muchos aos antes de que se descubriera que los viroides son patgenos especiales y diferentes a los virus vegetales, las enfermedades causadas por viroides eran clasificadas como enfermedades virales. Una razn para esta confusin es que los tipos de sntomas inducidos por viroides en las plantas son similares a aquellos inducidos por virus vegetales. Estos sntomas pueden verse listando los nombres imaginarios otorgados a ciertos viroides (cabe mencionar que los viroides se nombran de manera similar a los virus vegetales, con la diferencia de que el nombre terminar en d): el viroide del tubrculo ahusado de la papa ( Potato spindle tuber viroid, PSTVd), el viroide de la piel cicatrizada de la manzana ( Apple scar skin viroid, ASSVd) (Figura 29), el viroide de la quemadura de sol del aguacate (o palto) ( Avocado sunblotch viroid, ASBVd), y el viroide del cancro pustuloso de la pera (Pear blister canker viroid, PBCVd) A pesar de ser muy pequeos, la importancia econmica de los viroides puede resultar devastadora. Se estima que ms de 30 millones de palmas cocoteras en las Filipinas han muerto como resultado de la enfermedad causada por el viroide cadang-cadang del cocotero (Coconut cadang-cadang viroid, CCCVd) (Figura 30 ).

Figura 29

Figura 30

Los viroides se clasifican en dos grandes familias, Pospoviroidae y Avsunviroidae, dependiendo del lugar de la clula en el cual se replica el viroide (Tabler and Tsagris, 2004). Los viroides de la familiaPospoviroidae se replican en el ncleo mientras que los viroides de la familia Avsunviroidae se replican el cloroplasto. Debido a que los viroides no producen ninguna de sus propias protenas, dependen de alguna de las ARN polimerasas de la planta y de otras protenas vegetales para su replicacin. Las pruebas de diagnstico que se utilizan para la deteccin de viroides no estn basadas en ensayos inmunolgicos debido a que los viroides no producen ninguna protena durante la infeccin. Los protocolos de diagnstico para los viroides se basan en ensayos biolgicos, tales como la transmisin mecnica a plantas indicadoras que producen sntomas de utilidad diagnstica, y en tcnicas de deteccin basadas en el ARN del viroide. Las pruebas basadas en los cidos nucleicos incluyen la electroforesis en gel para detectar el ARN del viroide, pruebas de hibridacin de cidos nucleicos y pruebas por la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). Los viroides se diseminan de una planta a otra a travs de propagacin vegetativa, contaminacin mecnica, por polen o por semilla. Las estrategias de manejo de enfermedades causadas por viroides son similares a aquellas usadas para las enfermedades virales, e incluyen el uso de material de propagacin y semilla libre de viroide, la prevencin de contaminacin mecnica y el uso de plantas resistentes a la infeccin de viroides.

Conclusiones
Los virus vegetales y los viroides son grupos de agentes fitopatgenos diversos e inusuales que infectan y causan enfermedades en muchos cultivos vegetales. Debido a que estos patgenos dependen de la maquinaria celular normal de sus hospedantes para poder reproducirse, es difcil eliminarlos sin daar al hospedante. Por lo tanto, la mayor parte de estrategias de manejo para las enfermedades causadas por virus vegetales y viroides estn apuntadas a prevenir la infeccin de la planta.

Referencias
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Tabla 1. Sitios web de inters con informacin de virus fitopatgenos (en ingls)
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http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/Ictv/ fr-fst-g.htm http://www.virology.net/dvnreg.html http://www.danforthcenter.org/iltab/ geminiviridae/about.htm http://www.atcc.org/common/catalog/ plantVirology/plantVirologyIndex.cfm

Virologa Vegetal

Toda la virologa en Internet Gemininet Informacin de Geminivirus Coleccin americana de cultivos tipos (American Type Culture Collection) Virus vegetales Descripciones de virus vegetales Programa de certificacin de virus para rboles frutales

http://www.dpvweb.net

http://plantdisease.ippc.orst.edu/articles.cfm?article_id=23