EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL DE FORMA CRUDA

Universidad Nacional de Colombia - Sede Manizales

Biología Celular, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Guarín, J y Cañas, M.R

I. OBJETIVO solución, esto se hizo evitando la formación de

burbujas.
● Conocer los principios básicos para la 5. Se transfirieron 5mL de la solución que quedó
extracción de ADN de forma cruda y en el mortero a un vaso de vidrio.
aplicarlos. 6. Se adicionaron 10mL de etanol frío despacio
por las paredes del vaso de vidrio.
II. EQUIPO UTILIZADO 7. Se observó la formación de dos fases.
8. Se removió el ADN usando un palillo de
● Material vegetal del cual se va a hacer la
madera las estructuras qué flotaban en la
extracción de ADN, fresas y bananos en solución.
este caso.
● Sal de cocina NaCl IV. RESULTADOS
● Detergente líquido de cocina. • Se llevó a cabo la maceración del material
● Agua en botella (500mL) vegetal, se utilizó la licuadora y se le añadieron
● 2 tubos de 1,5mL o recipientes de vidrio. los 10 mL de agua.
● 1 pipeta de 10 mL o algún instrumento de
medida volumétrica (Jeringa)
● 1 mortero con su mango, también se puede
usar un instrumento para macerar.
● 2 beackers de 50 mL o recipiente de vidrio.
● Un agitador de vidrio o un instrumento para
revolver.
● 10 mL de etanol (75%) frío.
Imagen 1. Maceración del material vegetal, fresa.
III. PROCEDIMIENTO

1. Se tomó una porción de material vegetal y se

depositó en el mortero, después se le
adicionaron 10 mL de agua.
2. Se macero el tejido vegetal hasta que se obtuvo
una solución homogénea.
3. Se preparó en un vaso de vidrio la solución de
lisis, para esto se disolvieron en 20mL de agua,
5 gr de sal y 5 mL de jabón de cocina, esta
solución se llevó a cabo evitando la formación
de burbujas Imagen 2. Maceración del material vegetal, hoja de
4. Se adicionó a la muestra vegetal macerada 10 plátano.
mL de la solución de lisis y sí homogenizó la
En este paso se hace una ruptura celular; para
poder recuperar ADN es necesario romper las
células que lo contienen. Como las fresas se
congelaron, las hojas de plátano y las fresas se
licuaron, las células que contienen el ADN se
rompen y así se puede acceder a la parte interna de
las células.
• Adición del alcohol frío por las paredes del vaso,
• Preparación de la solución de lisis, proceso de
ruptura celular.
Cuando se realiza lo mostrado en la Imagen 3, se
rompen las membranas celulares, los lípidos al
reaccionar con el jabón se solubilizan, que es lo
que se hace cuando se lavan los platos llenos de
grasa, de esta manera se permite la salida del ADN
al exterior.
obtención del ADN.

Imagen 5. ADN obtenido de fresas

Imagen 3. Solución de lisis.

La solución de lisis permite romper la membrana

celular. Los detergentes rompen la barrera lipídica
solubilizando las proteínas e interrumpiendo la
interacción lípido-lípido, lípido-proteína y
proteína-proteína. Al momento de romperse las
membranas celulares el ADN sale.
Cuando se adiciona la sal esta actúa disminuyendo Imagen 6. ADN obtenido de hojas de plátano.
la capacidad de solubilidad de las proteínas, lo que
El alcohol hace que el ADN pierda contacto con
hace que se separe de manera mas sencilla el
las moléculas de agua que lo rodean y lo aísla de
ADN; la sal reacciona con los terminales
la solución acuosa. El ADN es soluble en agua,
negativos, de esta manera los fosfatos negativos se
pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla
unen a la sal.
precipita en la interfase entre el alcohol y el agua
En la Imagen 4 se alcanza a percibir material de
color verde, y semillas, esto ocurre porque el
proceso de preparación de la muestra no fue
bueno, se pudo haber filtrado mejor, o bien al
momento de agregar el alcohol la cantidad no fue
la necesaria. Se evidencia que hay ADN, pero no
se percibe como debería ser, que es de color claro,
transparente.
Imagen 4. Solución de lisis reacciona con la muestra
vegetal.
Para el caso de la Imagen 6, no se pudo sacar el cuando una molécula con un anillo se enlaza con
ADN del recipiente, pero se evidencia que el ADN una molécula con dos anillos, la distancia entre las
está de color transparente. dos cadenas se mantiene constante. Esto mantiene
la forma uniforme de la doble hélice de ADN.
Para obtener una buena muestra de ADN hay que
Ambas cadenas del ADN están siempre
hacer muy bien los procesos de filtrado de la
equidistantes, por esto la cantidad de adenina y
muestra, tratar de hacer los procedimientos de una
timina, guanina y citosina es de la misma
manera muy delicada para así tener resultados
proporción.
excelentes.
Mediante un gráfico explique las principales
De acuerdo con el artículo “Molecular
diferencias entre ADN y ARN.
Structure of Nucleic Acids: A Structure for
Deoxyribose Nucleic Acid” publicado en ADN ARN
Nature volume 171, pages737–738 (1953); Actúa como
Lleva la información
¿Cuáles son los elementos estructurales del transmisor de dicha
genética de padres a
ADN? información.
hijos.
• Las dos hebras están enrolladas una alrededor Se encuentra en el Se encuentra en el
de la otra formando una doble hebra núcleo citoplasma
helicoidal. 2 cadenas 1 cadena
Tiene cuatro bases:
• Las dos cadenas de polinucleótidos se Tiene tres bases G, A
Guanina (G), adenina
mantienen equidistantes, al tiempo que se y C, la timina se
(A), citosina(C) y
enrollan en torno a un eje imaginario. sustituye por el U.
timina(T)
• El esqueleto azúcar-fosfato (formado por una El peso moléculas del Contiene la base
secuencia alternante de desoxirribosa y ADN es generalmente nitrogenada uracilo,
mayor que el del mientras que el ADN
fosfato, unidos por enlaces fosfodiéster 5'-3')
ARN presenta timina.
sigue una trayectoria helicoidal en la parte
Es una pentosa
exterior de la molécula. Es una pentosa ribosa
desoxirribosa
• Las bases se dirigen desde cada cadena al eje
central imaginario. Las bases de una hebra REFERENCIAS
están enfrentadas con las de la otra, formando
los llamados pares de bases (PB). Las bases
Watson, J. D., & Crick, F. H. (1953). Molecular
interaccionan entre sí mediante puentes de
structure of nucleic
hidrógeno. Las dos bases que forman un PB
acids. Nature, 171(4356), 737-738.
están en el mismo plano y dicho plano es
perpendicular al eje de la hélice.
Extracción. Tomado de:
¿Cuál cree que sea la razón para que exista la
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2
misma proporción de adenina y timina?, ¿Pasa
/libros/710/extraccion.pdf
lo mismo con la guanina y la citosina?, explicar.
Si la adenina se enlazara con la guanina y la
citosina con la timina, la distancia entre las dos
cadenas de ADN sería variable. Sin embargo,