Transcripción (Martes 25 de abril 2017)

Evaluación de la respuesta inmune - Andrés Felipe Zea

La gran mayoría de las técnicas que utilizamos para evaluar la respuesta

inmune se basan en interacciones Ag-Ac​, hay disponibilidad de gran cantidad de
Ac comerciales.

Los inmunoensayos, entonces, tienen la característica de que son rápidos,

reproducibles, fácilmente estandarizables y relativamente baratos. Tienen muchos
beneficios, y se basan en la capacidad que tenemos de generar Ac contra las cosas
que queramos. Esos Ac pueden ser policlonales o monoclonales:

Ac Policlonales:

Acs que reconocen múltiples epítopes dentro de un Ag determinado​. Y que

pueden ser diferentes subclases, por ejemplo: IgG1, IgG2, IgG3. podemos generarlo
prácticamente en cualquier especie, entonce uno tiene Ac monoclonales generados
en ratón, cabra, caballo. Podemos generarlos contra prácticamente cualquier Ag,
entonces tenemos Ac policlonales contra el veneno de las serpientes, el ​suero
antiofídico​, que son Ac policlonales generados en un caballo y ese es el principio de
la inmunización pasiva.

Ya para evaluar la respuesta inmune podemos generar Ac contra diferentes

fracciones de patógenos o también contra inmunoglobulinas, entonces yo también
puedo generar un Ac en una cabra que sea anti-humano y usarlo en una ELISA, y
más adelante veremos por qué sería útil generar un Ac de cabra anti-humano.

Recalca el concepto: Los Ac van a tener diferentes especificidades, van a estar

dirigidos contra diferentes epítopes antigénicos.

¿Cómo es la forma clásica de generarlos? ​Inmunizamos al animal con el Ag​, si

Ud. quiere generar suero antiofídico lo que tiene que hacer es inmunizar caballos y
pues se vale usted del principio de que los caballos tienen cierta resistencia natural
al veneno de algunas serpientes y que además tienen un gran tamaño y van a
producir una cantidad importante de Ac, y que le puedo hacer una aféresis para
retirarle el suero, le devuelvo las células para no matarlo desangrado, y ese suero lo
puedo purificar, extraer el específico antiofídico y entonces lo guardo liofilizado
(liofilizado así como el café), para ponerlo después en un humano.

Ventajas de los anticuerpos policlonales:

● Alta afinidad
● Estables
● Fáciles de producir

Uno puede producir sueros policlonales hasta en gallinas, le inocula el antígeno a la

gallina de interés y los anticuerpos se los recupera en la clara, la clara está llena de
anticuerpos de gallina y no porque coma huevo crudo se inmunice el intestino, pero
la forma de recuperar anticuerpos policlonales en un gallina es en la clara de huevo,
cuál sería la desventaja no va a haber buena reproducibilidad, entre más inmunice
el animal pueda que mejore la afinidad de los anticuerpos, puede que mejore el
título, o puede que en algún punto produzca alergia, entonces usó otro animal que
apenas le de las primeras dosis etc.. etc... hay más variabilidad y pobre
reproducibilidad.

Como hay tantos problemas con esos policlonales estos señores se ganaron
el nobel por una idea genial que era crear anticuerpos de una sola
especificidad es decir monoclonales
Ventajas de los anticuerpos monoclonales:

● Específicos
● Alta afinidad
● Y vivir por más tiempo

Pero son más costosos de

generar porque se basan en
principios de biología celular
mucho más elaborado que
coger un animal inocularle un
antígeno y recogerle el suero.
Se basa en un principio que se
llama la formación de
hibridomas ​(híbridos).
Entonces ¿qué es lo que hacen hibridomas?

Hibridomas: es coger una célula B y fusionarla con una célula plasmática inmortal,
una célula de un mieloma múltiple, y eso es una genialidad, eso es lo mejor que se
le pudo ocurrir a una persona porque convertimos una célula en una célula inmortal
productora de anticuerpos del interés que nosotros queremos.

¿Entonces cómo funciona?, inmunizamos al ratón porque la mayoría de anticuerpos

monoclonales son de ratón, los que se utilizan en diagnóstico, los hibridizamos con
una célula de mieloma múltiple de ratón que no produce inmunoglobulina, hay
mielomas que no producen inmunoglobulina, al fusionarse los dos el mieloma le da
la capacidad de sobrevivir indefinidamente al linfocito B con que se fusionó y ahora
tenemos una célula productora de inmunoglobulina de interés que nunca se va a
morir.

¿Como la amplificamos? pues le damos el antígeno de interés, entonces la

ponemos en un cultivo, le ponemos el antígeno otra vez y la que prolifere frente al
antígeno que nos importa pues es la que es específica a ese antígeno, entonces
eso es lo que pasa con los hibridomas y la generación de anticuerpos
monoclonales.

Esa estrategia nos permite generar anticuerpos de una única especificidad, en las
cuales obviamente todos son idénticos por lo tanto todos tienen el mismo isótopo y
podemos tenerlos dirigidos contra el blanco que queramos. Esta técnica de
anticuerpos monoclonales se comenzó a depurar, al principio solo era de ratón, se
trató de usar en los humanos porque esa es una idea también genial, si yo tengo un
anticuerpo dirigido contra una molécula específica como el TNF alfa en la artritis
reumatoide pues modifico el curso de la enfermedad, el problema es que si eso es
de ratón ¿como lo voy a percibir yo? ¿cómo lo va a percibir mi sistema inmune?
como algo extraño, entonces le monto una respuesta y terminó perdiendo ese
anticuerpo por anticuerpos dirigido contra ese isótopo de ratón.

En ese orden de ideas entonces para que lo podamos usar en humanos hagamos
una ​Quimera (mezcla de dos animales): la porción de reconocimiento de
antígenos sigue siendo la que generamos en el ratón, pero el resto del
anticuerpo (ya por biología molecular) lo convirtieron en humano, entonces ya
es una quimera, un pedazo de ratón y el otro de humano​.

​ so le cambió la vida a la reumatología pasó de ser tal vez la subespecialidad más

E
vilipendiada y de los pobres, porque los reumatólogos sabían demasiado pero nada
más tenían esteroides, metotrexato, cloroquina y azatioprina. Podían saber todas las
enfermedades del mundo, las cosas más complejas del mundo, pero tenían nada
más esas 4 drogas. Entonces pasaron de andar en Renault 4, ahorita ya tienen
Audi, BMW. En los dos sentidos, que ganan ya muchisimo más (la industria
farmacéutica jala mucho) y además ahorita tenemos moléculas biológicas
monoclonales dirigidas contra blancos específicos de la respuesta inmune y
modulamos específicamente la respuesta inmune, y en eso es en lo que estamos en
este momento; esos conceptos se utilizan también para diagnóstico, para evaluar la
respuesta inmune, pero yo les cuento todo esto porque es también de lo que va a
venir en las clases subsiguientes.

Entonces claro, ya tenían una quimera mejor, 75% humano - 25% raton, eso ya se
tolera mejor, pero así y todo sigue habiendo problema, 25% de ratón en una
inmunoglobulina es mucho, entonces ahí fue cuando ​se humanizaron los
anticuerpos​, dijeron -bueno ¿que es lo que reconoce? -los CDR, las regiones
determinantes de complementariedad -listo, generemos eso en el ratón y el resto lo
ponemos humano, entonces eso ya no es quimérico, eso ya es humanizado porque
ya es 98% humano - 2% ratón, sólo el reconocimiento es de ratón, y después
dijeron: ​generemoslos ya directamente de humanos​, y ya tenemos disponibles
algunos biológicos, anticuerpos monoclonales generados en humanos.

Pregunta de compañero​: es que, antes vimos que ¿esos eran los que terminaban
en MAb, cierto? sin embargo habían unos que se unían a los receptores, los que se
unen a los receptores…

Respuesta de profesor​: terminan en Cept

Pregunta de compañero​: que terminan en Cept, sí, esos ¿si son anticuerpos
monoclonales o no?

Respuesta de profesor​: esos son biológicos, pero no son monoclonales, son

medicamentos biológicos, ¿listo? pero no son monoclonales, monoclonal es el que
termina en ​MAb (monoclonal antibody)​, si no termina en MAb no es monoclonal,
¿listo?

Estudiante: el humanizado...

Profesor: no, humanizado son las siglas que vienen antes, por eso ustedes van a
ver que hay -ximab, hay -zumab, hay -mumab, pero eso ya es harina de otro
costal…

Entonces los “humanos” (anticuerpos generados en humanos) se supone que tienen

el mínimo potencial de reactogenicidad, pero ustedes saben que igual los humanos
entre nosotros tenemos algunas diferencias y pueden haber también algunas
reacciones pero eso ya es lo mínimo que podemos tener; en un futuro serán
anticuerpos propios de uno modificados para que no generen ningún tipo de
reacción y con la especificidad que uno quiera, y esos ya no van a generar
problemas, entonces “humanizados del propio humano” que va a ser el recipiente de
la terapia.

Cuando usted habla entonces de policlonal está hablando de que tiene diferentes
epítopes, por ejemplo, si usted inmuniza a un caballo con albúmina de humano
entonces él va a tener diferentes epítopes y va a tener diferentes anticuerpos
reconociendo esos diferentes epítopes; ya cuando usted habla de que es
monoclonal es un único epítope que es albúmina humana, la que está siendo
reconocida por ese anticuerpo.

¿Para qué utilizamos estas estrategias de inmunodiagnóstico? que son las que
vamos a utilizar en la evaluación de la respuesta inmune:
● En primer lugar, queremos determinar la producción de autoanticuerpos
o determinar la producción de anticuerpos, ​entonces anticuerpos contra
varicela, anticuerpos contra hepatitis B -después de la vacuna- o anticuerpos
contra antígenos nucleares extractables (ENA’s), anticuerpos contra
antígenos nucleares (ANA’s), anticuerpos contra el DNA bicatenario; esos
últimos serían ejemplos ya de autoanticuerpos.
● También para determinar enfermedades infecciosas, por ejemplo el
cambio de títulos de anticuerpos entre una fase aguda y una fase
convaleciente, ​entonces, ​por ejemplo, Cali - Colombia: zona endémica para
dengue ¿si o no? entonces si yo les hago a ustedes unos anticuerpos contra
dengue y me sale IgG positivo yo no puedo saber si ese sindrome febril que
tienen ahorita es por dengue o no, porque además es muy probable que la M
no se positivice, puede tener dengue pero como ya tiene infecciones previas
por otros serotipos puede que esa M ya ni siquiera se positivice (en el rango
de detección de las técnicas de las técnicas de laboratorio, me refiero yo)
entonces ¿qué podría hacer? les tomo una nueva muestra en 10 a 14 días, si
lo que usted tuvo fue dengue en la fase aguda 10 a 14 días después que es
la fase convaleciente yo espero que sus títulos de anticuerpos se eleven y
por lo general se van a elevar mínimo 4 veces con respecto a los niveles de
base, y eso aplica por ejemplo para las microaglutinaciones de leptospira (el
MAT para leptospira), eso lo hacemos en dengue porque como ustedes
sabrán el grueso del diagnóstico para agentes infecciosos no se hace con la
detección del patógeno, lo que hacemos es detectar la respuesta inmune del
individuo frente a ese patógeno ¿listo? esa es una diferencia importante,
nosotros no detectamos casi siempre el patógeno, detectamos la respuesta
que el individuo botó frente a ese patógeno.
● Nos sirve para el seguimiento de enfermedades infecciosas ¿cierto? nos
sirve por ejemplo un VDRL para saber si la persona tuvo respuesta al
tratamiento con penicilina o no, por ejemplo, también nos sirve para saber
 cuándo alguien deja de ser infeccioso en hepatitis B o nos sirve para saber
respuesta a las vacunas.
● Y nos sirve cuando las otras pruebas microbiológicas no son útiles que
es en un grupo considerable de patologías; en un porcentaje muy alto de
patologías el diagnóstico se hace a través de la respuesta inmune.

Entonces estos inmunoensayos tienen una gran utilidad ​en infecciones ya sean
bacterianas, virales, infecciones por sífilis, ahora veremos algunas particularidades
del VDRL (​Venereal Disease Research Laboratory), aglutinación para criptococo,
infecciones virales y el diagnóstico de Toxo.

Todas son técnicas basadas en anticuerpos, se puede detectar el Ac específico o

puedo detectar Ag pero es lo que vamos a utilizar en todas la pruebas
inmunoreumatológicas, como es el caso de los anticuerpos anti-nucleares que se
ven en la parte superior o el ELISA que es lo que se ve en la parte inferior. ¿En qué
tipo de enfermedades? pues en las enfermedades que vamos a hablar en lo que
queda del curso. El curso lo que queda va a ser ​enfermedades autoinmunes y
deficiencias de la respuesta inmune. Mañana vacunas.
Anemias inmunohemolíticas, ahí el Coombs es importantísimo, ANA’s Y ENA’s para
LES​, el VDRL, los Ac anti-cardiolipina, Ac anti-beta2 glicoproteina para el Sd.
antifosfolípidos, para Sd. de Sjogren los ENA’s (​no se escucha bien lo que sigue​) y
para las vasculitis, hay vasculitis ANCA positivo y ANCA negativas entonces la
detección de los Ac contra el citoplasma de los neutrófilos todos son auto-Ac,
entonces cuando hablamos de inmunodiagnóstico o evaluación de la respuesta
inmune pues tenemos que entender cuales son las técnicas que se utilizan para
ello. y la mayoría se fundamenta en que son Ac específicos en Ac monoclonales o
policlonales, por eso arranca la clase con eso.

¿Qué muestra se usa? casi siempre es suero, cuando es suero se usa un tubo tapa
roja osea sin anticoagulante un tubo seco se ha cambiado por uno que es amarillo
con la goma roja que tiene un gel de separación, es importante eso no se los voy a
enseñar acá pero ustedes tienen que saberlo, cuando ustedes vean que la jefe está
tomando la muestra arrímese y pregúntele este tubo que es lo que tienen, aquí que
es lo que montan, que procesan y que mandan. Porque es una boleta total que los
médicos no saben ni siquiera en que tubos se toman las muestras, lo mínimo es que
sepa en qué tuvo toman la muestra que usted está pidiendo y qué tipo de muestra
es la que usted está pidiendo, la mayoría de las veces va a ser suero, es decir el
fluido extracelular libre de factores de coagulación, si tuviera los factores de
coagulación sería plasma. Pueden ser también células frecuentemente, en
citometría de flujo, la medición de células de linfocitos se puede hacer en la sangre
o en la médula, uno puede medir cuantos LT CD4+ tiene una persona y eso lo
utilizamos en el seguimiento de un paciente VIH positivo. eso nos determina junto
con la supresión de la replicación viral es decir con la carga viral indetectable que la
persona va bien porque nos dice que el sistema inmune se está reconstituyendo,
necesito que ese concepto les quede muy claro porque todo el tiempo van a estar
viendo pacientes VIH positivo, 0,7 % de la población es VIH positivo y en los grupos
de riesgo puede llegar al 5-6%. Y ya por ley desde hace 6-8 meses se supone que
el médico general va a manejar los pacientes VIH +. No entiendo como, pero se
supone que los va a manejar. No los maneja ni uno ahora ustedes, pobre gente,
pobre gente los 2, ustedes y ellos. cualquier fluido corporal y también se pueden
utilizar tejidos. biopsias o autopsias para hacer evaluación de la respuesta inmune.
Cuando uno habla de inmuno ensayos se habla de estos ​2 grupos grandes​: usted
puede utilizar reacciones 1) Ag-Ac sin marcar o 2) Ag-Ac marcadas​. Entonces
Ag-Ac sin marcar ​precipitación, aglutinación y floculación​. Ese nombre tan
pendejo es de floculación pero bueno.

Aglutinación, a todos nos han hecho una prueba de aglutinación, cuando a uno le
van a hacer el tipo de sangre, le hacen una prueba de aglutinación si uno tiene Ag A
pues aglutina cuando adicionan el Ac anti-A, si uno tiene el Ag B pues aglutina
cuanto adicionan el Ac anti B y para la mayoría que estamos aquí que somos O
pueblerino no aglutinamos porque no tenemos ni A ni B.

Entonces por allá en mis tiempos por ahí en el 2000 que saque la cédula, en la
registraduría había un sitio donde uno le determinaban el grupo sanguíneo era un
man como de la edad mía en ese momento, él no había recibido ni siquiera esta
clase, el man llegaba y con un goterito te chuzaba con un aguja que creo no era
estéril, lamento eso en ese momento no lo entendí pero creo que tengo hepatitis C
por eso, osea creo, podría tener. Y uno ponía 3 gotitas de sangre y se ve como se
da esa reaccion de aglutinacion, con un anticuerpo anti-A, anti-B y anti RH dirigido
por el antígeno D, y le daban una tarjetita a uno y uno iba a la registraduría , lo
media a veces al man le daba pereza y le decía: ¿ud cuánto mide? yo tengo un
amigo mas bajito que yo que mide 1.90 y yo: ¿huevón pa’ que pusiste eso? ​-uno
nunca sabe, uno crecía más​-. esos son no marcados o pueden ser marcados.

¿Cómo los puede uno marcar? o con ​enzimas que producen reacciones
cromogénicas, que generen cambio de color, o con ​fluorocromo​, es decir
sustancias fluorescentes. ¿Cuáles son los ejemplos de fluorocromo? R/ citometría
de flujo e inmunofluorescencia. Una se hace con un citómetro, y ahora vamos a ver
algunas cosas respecto al citómetro e inmunofluorescencia (que se hace por
microscopía) y ​los inmunoensayos​, que el ejemplo clásico es ELISA.

El ELISA para cualquier cosa. Lo primero que van a borrar de sus cerebros de que
el elisa es solo para VIH, eso dejenselo al de la droguería. Ustedes ya tienen que
entender que el elisa es una técnica con la que determinamos un poco de cosas en
el laboratorio, de hecho la mayoría de las cosas cuantitativas que le mandan a uno
en el laboratorio clínico son por ELISA, listo.

Ensayos de floculación
El clásico ensayo de floculación es el VDRL. que llaman vulgarmente la serología.
Es la interacción entre un anticuerpo y un antígeno que es insoluble en este caso es
un lípido ¿Qué lípido? R/ ​Cardiolipina​, ​lecitina y ​colesterol ¿De dónde venía eso?
cuando crearon la técnica en los años 40, en el siglo pasado, del corazón de un
buey. Entonces como ustedes se podrían imaginar, si hay una técnica que utiliza
cardiolipina lecitina y colesterol, ​eso puede dar falsos positivos con personas que
tengan reactividad contra esa lecitina cardiolipina y colesterol, ​como es el caso del
síndrome antifosfolípido​.

Entonces uno de los signos del síndrome antifosfolípido es un VDRL falsamente

positivo, pero hay muchos factores que generan un VDRL positivo:

● Edad
● Embarazo
● Infecciones recientes,
● Lupus eritematoso sistémico,
● Neumonía,
● Otras infecciones por otros treponemas

Es una prueba ​no treponémica ¿Porque se necesita una prueba no treponémica?

Porque hacer crecer el treponema era un problema difícil. No se logró hasta hace
poco tiempo, en los años cuarenta dijeron qué cosa se parece pues una mezcla de
lípidos entonces como esta muestra de lípidos se parece, entonces hagamos una
reacción contra esta muestra de lípidos.
Estos anticuerpos van a generar flóculos. Flóculos para mi son esas aglutinaciones,
entonces ¿Cómo se marca? Porque se le hecha carboncito. Aquí no flóculo, reactivo
o no reactivo, flocula o no flocula (​Ojo que los VDRL no son positivos o
negativos, son reactivos o no reactivos​) ​¿Uno que determina? Diluciones.
Entonces a usted le dicen tal paciente tiene un VDRL positivo 1 en 8, 1 en 16…
¿Qué es lo que le están diciendo ahí? 1 en 2 (½) tomo una parte de suero le
adiciono una parte de agua, de esa tomo una parte y le adiciono una parte de agua
y queda 1 en 4 (¼) y así
sucesivamente. Entonces entre
más alto sea el título de la
dilución es porque tengo mas
del anticuerpo, del antígeno o
lo que sea que me esté
midiendo el. Aquí es del
anticuerpo entonces un VDRL
positivo de 1 en 16 significa
que hasta la dilución de 1/16 ,
es decir una parte de suero y
quince partes de agua o salina,
hasta ahí se dio la reacción
positiva, ya en 1/32 ya no se dio la reacción, no se flóculo.

Entonces, lo que se informa es la dilución inmediatamente anterior en la cual se da

la reacción de floculación, inmediatamente anterior a la cual ya no se dio o la última
en que sí se dio, como lo quieran mirar. En la que se dio la reacción, la última que
se dio la reacción, listo; En una dilución que es seriada.

En ese orden de ideas, usted dice que una dama tiene anticuerpos nucleares
positivos 1/320 diluciones, eso qué quiere decir, que una parte de suero más 319 de
salina, usted mezcla eso, y la reacción sigue dando positiva y que 1/640 ya no le
dió.

A veces, ustedes van a encontrar que les reportan mayor a 1/1024, eso qué quiere
decir, que ya no se van a gastar más reactivo, porque es que está muy positivo, ya
le dio pereza a la bacterióloga y dijo no más esto está muy positivo, pero mayor a
1/1024 pues pues ser 1/ 1048, o puede ser 1/4096, etc.

¿Cuáles son los falsos positivos? ya habíamos hablado, embarazo. pero como
ustedes van a ser sensatos, cuando a ustedes les llegue un ​VDRL positivo, mujer,
30 semanas de embarazo, ​usted la va a tratar como si tuviera sífilis​, y le manda
la prueba treponémica, osea la confirmatoria; ¿por qué? porque como estamos en
un sistema de salud de *** usted no puede decir “ay no, mandemosle la prueba y si
te sale positiva, cuando te salga positiva te ponemos la penicilina” porque eso
¿Cuándo puede llegar? en nuestro país, en nuestro sistema perfectamente llega
cuando la señora ya va para el segundo embarazo. Entonces el niño nació con los
dientes de Hutchinson, las tibias en sable, osea con​ sífilis congénita.

Entonces usted lo trata y lo confirma, si la prueba confirmatoria, que es la que

vamos a ver a continuación, que se llama ​FTA-ABS es negativa, se trata entonces
de un ​falso positivo​. falsos positivos son inducidos.

Cosas que producen a ​corto plazo falsos positivos​: neumonía, fiebre escarlatina,
tifo, tuberculosis, endocarditis bacteriana, y ojo que en endocarditis bacteriana
subaguda (osea, la que tiene más de dos semanas) al igual que el factor
reumatoideo se pueden considerar de un VDRL falsamente positivo como un criterio
menor de “Duke”, chancro blando. A largo plazo Lupus, síndrome antifosfolípido
(hace parte de los criterios de diagnostico del sindrome antifosfolipido),
hiperglobulinemias, diabetes, Lupus inducido por medicamentos, linfomas,
leucemias. Causas para un VDRL falsamente positivo hay un listado. Después
cuando veamos síndrome antifosfolípido, nos vamos a dar cuenta que es uno de los
criterios, pero por sí solo, no hace el diagnóstico, y menos cuando se evalúa durante
el embarazo.

Entonces, si ese VDRL es reactivo, no estamos seguros si es una infección por

Treponema pallidum​, ​no hay forma de que estemos 100% seguros, pues se
indican pruebas treponémicas, pruebas treponémicas que ya se basan en un
principio de fluorescencia. Entonces hay que hacer una prueba treponémica, esa si
nos va a decir que el individuo tiene, ​tuvo​, ese es el veneno de esa prueba
treponémica, una infección por ​Treponema pallidum, ​porque hay otros treponemas,
eso puede dar reacciones ahí, sobre todo con el VDRL y potencialmente también
con esta treponémica, pero dejemos que la treponémica es casi confirmatoria para
sífilis.

Si una persona tiene un VDRL reactivo, ½ diluciones, ¼ , ⅛ , generalmente son

diluciones bajitas, esa persona le confirmamos con una treponémica, un FTA - ABS,
y ese FTA-ABS sale negativo, eso es un falso positivo del VDRL. Entonces tenemos
que pensar en las causas que mencione anteriormente.

Yo les insisto mucho con esos falso positivos del VDRL, porque es una herramienta
super útil en el diagnóstico de Lupus, hace parte de los criterios inmunológicos del
SLICC (CLASSIFICATION CRITERIA FOR SLE) del 2012, o sea, los criterios que
reemplazaron a los del colegio Americano de Reumatología; este paraclínico que es
una baratija le ayuda a hacer el diagnóstico de Lupus y de síndrome antifosfolípido.

ENSAYOS DE AGLUTINACIÓN

Se basan en que el antígeno es insoluble o está particulado y es capaz de formar

complejos inmunes. Esta aglutinación va a depender de unas variables como son el
pH, la temperatura y esa relación antígeno-anticuerpo.

Ejemplo de hemoaglutinación, los que se inducen por algunas infecciones virales,

como es el caso de la influenza, entonces hay una gran cantidad de virus que son
capaces de inducir la aglutinación de los eritrocitos. Entonces esto da origen a unas
técnicas para cuantificar la presencia del virus en diferentes tipos de soluciones u
otras para verificar el nivel de anticuerpos como es el caso de la ...(No se logra
escuchar)... de la hemaglutinación, entonces muy útiles en virus y eso es
aglutinando eritrocitos, porque hay virus que tienen hemaglutinina una proteína de
membrana que es capaz de aglutinar eritrocitos.
Hay otras pruebas de aglutinación que se basan es en el principio de reconocer
antígenos sobre la membrana eritrocitaria, que es lo que hacía el muchacho al lado
de la registraduría, más exactamente basado en que las personas A tienen
antígenos A, que las personas B tienen antígenos B, que los O no tienen ninguno de
los dos antígenos, que las personas AB tienen los dos y que las personas con RH+
tienen el antígeno D entonces se hace esto, se pone una gota de sangre en cada
circulito de esos, se adiciona anticuerpos anti-A, anti-B y anti-D; como pueden ver
en la parte superior en el ejemplo a, la persona a aglutina (forma grumos) para A,
aglutina para B y aglutina para D, o sea que esta persona es AB RH+; el de abajo
aglutina para A, pero no aglutina para B y aglutina para D por lo que esa persona es
A+.

Pregunta de compañero: ​no se escucha.

Respuesta de profesor: ​en inhibición de la hemaglutinación lo que uno hace es ver

si hay anticuerpos que inhiben la hemaglutinina. en la hemaglutinación directa que
es para cuantificar el virus, usted mira la cantidad de aglutinación que produce la
muestra que usted tiene; basado en que el virus tiene hemaglutinina. Entonces hay
dos, si es hemaglutinación directa entre mas aglutinación es porque usted tiene mas
virus; entonces la otra cosa que usted podría hacer es inhibir la hemaglutinación
basado en el principio de que una persona puede tener anticuerpos que neutralizan
esa hemaglutinina.
Test de Coombs

El directo y el indirecto también se basan en el principio de la aglutinación, lo vamos

a ver mas en detalle cuando estemos hablando de hipersensibilidad tipo II y
reacciones post-transfusionales.
Pero cuando a uno le hablan del test de Coombs nos están hablando del directo, de
la herramienta más importante para el estudio de las anemia hemolíticas​;
porque un test de coombs directo positivo nos habla de que es una anemia
inmunohemolítica, es decir, que la hemólisis está siendo mediada por la respuesta
inmune, por autoanticuerpos; porque el ​test de coombs directo lo que me detecta
es la presencia de anticuerpos sobre la membrana eritrocitaria​; entonces se
cogen los eritrocitos se adiciona un anticuerpo que se une a la fracción cristalizable
de las inmunoglobulinas y me genera una aglutinación si hay anticuerpo ahí, si el
eritrocito está libre de pecado no se va a producir la aglutinación. En este orden de
ideas el coombs va a ser positivo o negativo.

Mientras que el ​coombs indirecto se basa en la presencia de anticuerpos en el

suero​, entonces, por eso vamosa ver que cada uno tiene unas indicaciones
diferentes, eso lo vemos en detalle cuando veamos las reacciones
post-transfusionales.

Y las otras técnicas de aglutinación, como es el caso de la aglutinación del ​látex

para criptococo​, entonces no solamente nos permite medir anticuerpos sino que
también nos permitirá medir algunos componentes del microorganismo por ejemplo.

La ventaja de los ensayos de aglutinación es que como ustedes lo pueden ver, si lo

hacía el man de la registraduría pues es fácil de hacer, no requiere mayor
entrenamiento, es de bajo costo, interpretable. La desventaja es que no va a dar
una idea real de la cantidad de reacción que hay ahí, y puede haber algunas
diferencias subjetivas entre lo que visualice un técnico y el otro.
Otras aplicaciones de los ensayos de aglutinación, lo que les decía, Látex para
Criptococo, Antígenos Capsulares de diferentes Patógenos, Factor Reumatoideo y
Proteína C Reactiva (ya casi no se usan las técnicas de cuantificación de Proteína C
Reactiva y Factor Reumatoide porque ahora ya se utilizan técnicas ultrasensibles
que nos permiten evaluar de forma cuantitativa cuáles son los valores de Proteína C
Reactiva y Factor Reumatoide).

Todos estos eran Anticuerpos SIN marcar, ahora: ​ANTICUERPOS MARCADOS​.

Los Anticuerpos Marcados con ​Fluorescencia ​(como en el caso de la Citometría de

Flujo y en la Inmunofluorescencia) o con ​Enzimas ​(como en el caso del Inmunoblot
y del ELISA).
¿Qué es un fluorocromo? Es un hidrocarburo policíclico o poliaromático capaz de
formar enlaces covalentes con las proteínas sin afectar significativamente el sitio de
unión del Anticuerpo a su Antígeno, y que cuando usted le da energía (luz) de
determinada longitud de onda, la emisión de energía es en otra longitud de onda
que puede ser detectada.

Siempre que hablamos de fluorescencia, hablamos de microscopios con una

lámpara que imprime energía sobre la muestra para luego emitir fluorescencia,
hablamos de un citómetro (que es un láser) que emite luz sobre una célula que tiene
Anticuerpos marcados con Fluorocromo que emiten fluorescencia.

Hay Fluorocromos de distintos espectros de emisión, por lo tanto de diferentes

“colores”; el verde es Fluoresceína y el rojo es Rodamina. Como tienen diferentes
espectros de absorción (primera longitud de onda) y diferentes espectros de emisión
(segunda longitud de onda), ello se interpreta como “colores” diferentes. Hay
equipos que son capaces de sensar o detectar esas diferentes longitudes de onda.

Una ​Inmunofluorescencia ​(y éste concepto también se aplica para los ELISA)
puede ser ​Directa ​o puede ser ​Indirecta​.

¿Cómo es ​Directa​? Mi antígeno de

interés es reconocido de forma
directa por un Anticuerpo que está
marcado con la sustancia
fluorescente. Yo quiero saber si los
Eritrocitos tienen el Antígeno A, por
lo cual yo utilizaría un Anticuerpo de
ratón marcado con Proteína Verde
Fluorescente (Fluoresceína) que
reconozca el Antígeno A; si tiene el
Antígeno, el Anticuerpo se va a unir,
pero si no lo tiene, no se une nada,
entonces no se observa nada que
alumbre.

La mayoría de las Inmunofluorescencias NO son Directas, tal vez la del diagnóstico

del Virus de la Rabia. La mayoría de las técnicas de la inmunología se basan es en
la ​Inmunofluorescencia Indirecta​.

Inmunofluorescencia
Indirecta
En la inmunofluorescencia indirecta lo
que usamos es un anticuerpo marcado
que va a reconocer a otro anticuerpo.

En este caso por ejemplo el anticuerpo

azul podría ser el suero del paciente, en
los ANA’s el principio es este los
anticuerpos antinucleares detectan
anticuerpos dirigidos contra antígenos del
núcleo, utilizando una
inmunofluorescencia indirecta.
Entonces el suero del paciente se pone a reaccionar contra células “células G2000”
que son un cultivo celular estándar, se pone a incubar con el suero del paciente y si
el antígeno de interés está en las células de (se olvida); retoma: en este caso el
antígeno va a ser de una línea celular de un cultivo que expresa una cantidad
abundante de antígenos de núcleo, pongo a reaccionar ese suero del paciente con
las células del cultivo, si el suero del paciente tiene anticuerpos contra esos
antígenos del núcleo se van a pegar y si no tienen no se pegan; si se pegan yo
adiciono un anticuerpo secundario que puede ser dirigido contra la fracción
cristalizable o la porción FAB el punto es que no interfiera con el reconocimiento del
antígeno y ese anticuerpo secundario viene marcado con un fluorocromo, ese
fluorocromo cuando yo le incida luz va hacer que emita fluorescencia y eso se va a
poder detectar usando un microscopio de fluorescencia o si se está hablando de
que la energía la incide un láser la va a poder detectar un citómetro de flujo y así el
citómetro de flujo nos va a decir cuántos LTCD4+ tiene esa persona, cuanto LTCD8,
ETC. Es lo que vamos a utilizar para evaluar paciente VIH+ en tratamiento o sin
tratamiento, va a permitir evaluar el paciente con inmunodeficiencias, con sospecha
de inmunodeficiencia severa combinada etc.

La inmunofluorescencia
indirecta es la que nos
permite ver el
treponema, entonces
como se hace, ya ahora
hay formas de cultivar el
treponema. Sobre la
lámina está el
treponema , le pongo
suero del paciente y lo
lavo si los anticuerpos
del paciente
reconocieron el
treponema y se
quedaron hay pegados
le adiciono un anticuerpo secundario fluorescente verde y si yo logro ver el
treponema al microscopio es porque el paciente tiene anticuerpos contra el
treponema.
Ventajas de la inmunofluorescencia:
● Alta sensibilidad.
● Puede detectar anticuerpos, antígenos, porque podría detectar por ejemplo
en la membrana basal de un glomérulo renal un depósito de
inmunoglobulinas, por ejemplo en un pedazo de biopsia de riñón y eso lo
usamos para diagnóstico en lupus, para nefritis lúpica.

Desventajas de la inmunofluorescencia
● El que lo lee debe ser experto.
● Es difícil de automatizar, sin embargo de anticuerpo antinucleares hay
algunos aparatos y los han automatizados y funcionan bastante bien.
● La interpretación puede ser subjetiva.

ELISA

Por favor ​ELISA es una técnica

no es la prueba de VIH​, se puede
utilizar en herpes, hepatitis c,
toxoplasmosis, entre otras.

ELISA significa un ensayo de

inmunoabsorción ligado a
enzimas, eso es ELISA, un
ensayo que utiliza anticuerpos y una reacción enzimática que genera un cambio de
color y ese cambio de color se puede cuantificar, es decir entre más color cambie
(más oscuro se ponga) es porque hay más de lo que yo estoy midiendo pero como
es enzimas eso hay que hacerlo en un tiempito, porque si yo le doy un sustrato a
una enzima por mucho que sea una en un sistema no saturable al final la enzima va
a consumir todos el sustrato, por lo que aunque se haya pegado un anticuerpo con
una enzima si se queda por tiempo indefinido se va a comer todo el reactivo,
entonces todo se va poner súper oscuro y cuando digo súper oscuro de refiero a
esto, miren los colores de los
pozos, por ejemplo en el B allí es
muy bajita comparado con el A.
Tiene que ser fluidos, no se
puede evaluar una cosas
distinta a un fluido​.

Hay formas de ELISA directo,

indirecto, de captura. Los directos
casi no se usan, vamos a hablar
del indirecto. ¿Cómo funciona el
ELISA, cuál es el concepto? Ej:
Hepatitis C. El diagnóstico de la
Hepatitis C tiene dos niveles: 1.
Determinar si la persona tiene
anticuerpos para Hepatitis C y 2.
Si tiene anticuerpos para VHC
positivos se hace una carga viral
de VHC en sangre.

En una ​ELISA INDIRECTA para Hepatitis C se haría poniendo en el fondo el

antígeno del VHC, adiciono el suero del paciente; si el suero del paciente tiene
anticuerpos para el VHC esos anticuerpos se van a quedar pegados porque va a
haber una reacción de antígeno-anticuerpo. Lavo, cuando digo lavo es que remueve
el exceso de anticuerpos para quitar el que no se haya pegado específicamente.
Adiciono un anticuerpo que está marcado con una enzima que es capaz de
degradar una sustancia cromogénica, es decir, una sustancia que produce cambio
de color; vuelvo y lavo, entonces lo que no se haya quedado pegado lo remuevo;
adicionalmente en esos pasos intermediarios y en los lavados yo uso sustancias
que produzcan bloqueo, para que no se metan por un lado y me genere una
reacción sin que haya interacción realmente con el antígeno. ¿Qué se usa para
bloquear?Leche en polvo, descremada, condensada, suero que es generalmente de
la misma especie que el anticuerpo secundario. Entonces si el anticuerpo
secundario es una Inmunoglobulina de caballo anti inmunoglobulinas humanas,
entonces yo uso aquí suero de caballo para ocupar los sitios donde se pueda dar un
reconocimiento inespecífico. Lavo de nuevo todo el exceso y allí si le echo el
sustrato, el sustrato en presencia de la enzima cambia de color, entonces entre más
enzima haya, más color hay, pero también entre más tiempo haya, más cambio de
color, por eso los ELISA’s se hacen con tiempo, entonces esta ELISA era para
incubación de 30 minutos, a los 30 minutos toca echarle una solución que inactive la
enzima porque si no sigue activa clivando al sustrato, es decir, cambiando el color.
Si usted deja un ELISA,de una persona que así sea negativo para VHC, lo deja de
un día para otro, al otro día está negro, hizo todo el cambio de color.

Ese es el indirecto. ​El DIRECTO sería que no hubiese nada de por medio y
generalmente se da para detectar o la inmunoglobulina o el antígeno, pero ese no
funciona muy bien porque no amplifica muy bien.
Pregunta de compañero​: En el caso de que el paciente sea negativo y salga la
prueba positiva, si se hizo el lavado por qué el anticuerpo va a…
Respuesta de profesor: Porque pueden tener anticuerpos que se unan de forma
inespecífica al plato, porque el tiempo se pudo haber pasado, porque la prueba no la
utilizaron para diagnóstico sino para tamizaje. Me explico, una cosa es el punto de
corte para considerar positivo una prueba de Hepatitis C en un banco de sangre y
otra cosa diferente es en un laboratorio clínico. En el laboratorio clínico el punto de
corte es 3. En banco de sangre se baja a 2. Por eso es que esos genios que se van
a donar sangre y omiten que tuvieron 20 compañeros sexuales año, mes y van y
donan, el punto de corte debe ser más bajo, pero así y todo si usted está en ventana
no lo alcanza a coger. Cuando usted va a donar, ese tipo de prueba que le hacen a
la unidad de sangre es para cuidar al receptor, no para diagnosticar al donante.

Entonces para yo cuidar al receptor le bajo lo umbrales a todo, entonces el ELISA

en una persona de la Calle + es más de 3 (se refiere a que en un laboratorio la
positividad del ELISA es un resultado mayor a 3), en una bolsa de sangre (en el
banco de sangre) + es más de 2. Entonces comienza Cristo a padecer porque usted
bien desordenado y comienza ha hacerse exámenes a la loca en vez de ir al
médico, en vez de coger juicio sí o no, uno diría que es lo más adecuado. Entonces
esas son causas de un Falso Positivo, uno siempre debe de saber quien le tomo las
pruebas.

Cuenta la anécdota del señor que se le arruinó el matrimonio por un Falso Positivo,
el cual obtuvo unos resultados mal hechos en el banco de sangre y al final lo
hicieron confesar que era gay…. En esa epoca habian muchos falsos positivos
porque eran técnicas basadas en Anticuerpos, esta forma y tanto la manera en
cómo se obtienen los antígenos se han ido depurando así que ahora estos errores
pasan menos pero aún pueden ocurrir.

Pregunta de compañero:​ ¿Los primeros inmunoensayos fueron los enzimáticos?

Respuesta profesor: Los primeros inmunoensayos fueron los inmunoblots en
realidad. Los no marcados fueron primero (aglutinación, floculación…) antes que los
enzimoinmunoensayo.

Ahora habla de la paciente con la cual tenía un problema por la confusión con su
nombre, tenía una criptococosis meníngea severa. Ella quería que el profesor la
llamara por su verdadero nombre pero no era el que correspondía al que aparece en
la cédula. “yo simplemente no adivino que si usted se llama en la cédula de un
nombre, quiere que la llamen de otro, si quiere la llamo Andrea, Fernanda. Pues es
que ya hemos llegado a un punto en el que pues, uno no le está vulnerando nada,
¿Uno como se llama? R//: pues como dice en la Cédula.
Continua la idea de la clase: el ​ELISA DE CAPTURA permite que usted con un
anticuerpo específico contra un antígeno, detecta ese antígeno y después utiliza un
anticuerpo secundario que está marcado y ya reconozcan antígenos de ustedes,
ahí va a quedar como ensanduchado el antígeno, por eso se llama ​Elisa tipo
sándwich​, porque lo que usted detecta queda ahí capturado por arriba y por abajo.

Pregunta de compañero:​ ¿Profe un ejemplo de aplicación de ELISA en sandwich?

Respuesta de profesor: Si usted quiere detectar por ejemplo ​proteína p24 del
virus de VIH​, usted coge un anticuerpo que detecte la proteína p24, adiciona el
suero del paciente, detecta el antígeno, lava, después utiliza un anticuerpo
secundario contra la proteína p24 y va a unirse solamente a los que tengan proteína
pegada, por eso queda la proteína en la mitad, el anticuerpo está pegado aquí al
plato, y el antígeno acá, y el anticuerpo secundario acá (ver imagen arriba).

La lectura se hace por un ​espectrofotómetro​, que lo que hace es medir qué tan
oscuro está el pozo, y esto nos va indicar o nos va a decir tambien concentración,
porque? porque uno en simultánea corre una curva estándar. ¿Que es una ​curva
estándar​? Es una ​solución que uno conoce cual es su concentración​. Entonces
es más fácil si yo se que la densidad óptica de la muestra es 2 por decir algo, yo se
que la densidad óptica es 100 miligramos también es 2 en mi curva estándar,
cuando uno hace el plano cartesiano, se acuerdan que uno podía reemplazar una
ecuación por esas de Y igual a 2X (Y=2x) por decir algo, eso es una curva
estándar, aca hay siempre son logaritmos no son lineales.

Entonces usted sabe para una densidad óptica determinada cual es la

concentración a la que corresponde, entre más densidad óptica, osea mas oscura
este la cosa, más reacción ocurrió y pues si hay más reacción es porque había más
o anticuerpo o antígeno o lo que sea que estuviera ahí. Por eso es que eso es
cuantitativo, porque usted puede cuantificar la densidad óptica y compararla contra
un estándar.
Las ​ventajas esto es: simple, rápido, se puede leer en un equipo que no es muy
costoso, es bastante sensible y eso está disponible en todos los laboratorios, todo
laboratorio tiene un lector de Elisa.

ELECTROFORESIS
La ​Electroforesis se basa en el principio de que las ​proteínas del plasma migran
y son capaces de migrar en un gradiente eléctrico.
Es una herramienta simple y rápida, que permite el estudio de las proteínas
plasmáticas, que se ponen a correr en un gel y sabemos que la composición de las
proteínas plasmáticas son dos grandes grupos:

1. Albúmina
2. Globulinas

(Esas son las proteínas del plasma). ​Albúmina que es el grueso de las proteínas,
4,5 gramos de albúmina tiene un adulto sano y ​globulinas que son como 3 gramos,
pero esas globulinas tienen fracciones, hay ​alfa globulinas (​α​1 y ​α​2) hay ​beta
globulinas se habla también de (​β​1 Y ​β​2) y hay ​gamma globulinas y en esa
región gamma es donde están las ​inmunoglobulinas​; por eso se llaman
inmunoglobulinas, gammaglobulinas, anticuerpos, todo son lo mismo.
Región de albúmina es el grueso así se vería como se corre en un gel; es la más
abundante

Región alfa 1: esta la α 1 antitripsina, que esa es un deficiencia que produce

enfermedad enfisematosa en pacientes jóvenes, con un cigarrillo una persona con
deficiencia de α 1 antitripsina tiene para hacer un EPOC

Región alfa 2​: α2 macroglobulina, ​ceruloplasmina, haptoglobina y las alfa

lipoproteínas como las de los triglicéridos.

Región beta​: hemopepsina, transferrina, plasminógeno, componente C3 y

β-lipoproteínas.

Región gamma​: esta fibrinógeno, proteína C reactiva (PCR) y las

inmunoglobulinas.

La electroforesis de proteínas es un examen barato de $70.000 nos permite

entender todos estos escenarios clínicos.
La primera es una normal

● Hipoalbuminemia:​ tiene la albúmina reducida con todo lo otro normal

● Síndrome nefrótico albuminuria una pérdida de albúmina por orina con

hypertriglyceridemia por la dislipidemia, miren como hay un pico relativo de
beta y de alfa por la dislipidemia y albúmina baja.

● Mieloma múltiple: células plasmáticas productoras de anticuerpos entonces

generan un pico en la región gamma

● α1 antitripsina deficiencia: ​no hay región alfa, esta solo la alfa 2 no hay alfa
1

● Gammapatía policlonal​: por ejemplo los pacientes con lupus tienen

hipergammaglobulinemia osea exceso de producción de inmunoglobulinas,
lo predominante allá es la gamma elevada. ​Eso ya fue pregunta por alla de
un parcial
 ❖ ¿Este que tendría?
Una agammaglobulinemia; tiene albúmina, α1, α2,β y no tiene 𝜸 (región gamma)

❖ Si les digo: hombre 1 año de edad, neumonías y sinusitis que tiene?

Agammaglobulinemia de bruton ​hasta que se demuestre lo contrario.

Con $70.000 y ni siquiera le cuantificamos cuantos LB y ya sabemos que esta en

una agammaglobulinemia

WESTERN BLOT O
INMUNOBLOT
ya casi no me gusta hablarles de eso
porque de acuerdo a la guía nacional
dice: diagnóstico de VIH son dos
pruebas inmunoensayos basados en
una técnica diferente que sean
positivos ELISA de 4 generación con
prueba rápida, ELISA de cuarta
generación con ELISA de tercera
generación, ELISA de tercera con
prueba rápida etc.

Ya no se habla de western blot como confirmatorio​; si usted tiene un ELISA positivo

y uno negativo. EL western blot lo puede utilizar para desempatar
Ojo que cada prueba tiene que hacerse de una muestra diferente porque q tal se
equivoque en el laboratorio no puedo repetir el error por ejemplo que “rotule mal el
tubo” como voy hacerle el mismo examen al tubo mal marcado.

El western blot ​detecta anticuerpos contra proteínas específicas del virus

En el western está la tira del papelito donde se puso a correr las diferentes proteínas
virales (extracto de proteínas del virus) y ellas migran de acuerdo al peso molecular
Pero lo que se pone a reaccionar es el suero del paciente contra esa tira entonces
por ejemplo si la persona tiene anticuerpos contra P17 ahí se va a formar una
reacción antígeno anticuerpo y luego yo revelo esa acción y veo la banda.

Pregunta de compañera: ¿cómo se llamaba la prueba para saber si un niño tiene

agammaglobulinemia?
Respuesta de profesor: La electroforesis de proteínas puede ser esa utilidad pero
miramos ahí todos los ejemplos para que sirve una electroforesis

Se le piden medición de anticuerpos IgG IgM IgA y se le hace cuantificación de LB,

como los linfocitos B van a quedar detenidos en la médula y no pueden continuar su
maduración porque ​no tienen tirosina quinasa de Bruton ​(Btk) entonces no hay
linfocitos B en sangre periférica. Entonces una agammaglobulinemia le
diagnosticamos así, con la ​ausencia de inmunoglobulinas y la ausencia de
linfocitos B en sangre periférica​. El diagnóstico molecular es mandar a secuenciar
el gen de la tirosina quinasa de bruton, ese es el ​diagnóstico confirmatorio​.

Lo que uno pone a interaccionar es el suero del paciente con esa tira que tiene los
diferentes antígenos. Por eso lo que detectamos es ​anticuerpos contra diferentes
proteínas del VIH. Por eso cuando ustedes hablen de ELISAs, deben tener en
cuenta que hay ELISAs para mil cosas.

Citometría de flujo

Se basa en el mismo principio del hemocitómetro que es la máquina con la que

hacen el hemograma nivel III y nivel IV. Cuando el hemograma viene sin valores de
referencia es porque se hizo con un hemocitómetro. Se basa en un sistema óptico
que evalúa la complejidad (​granularidad​) de las células sanguíneas y el tamaño,
eso es lo que hace un hemocitómetro. El citómetro de flujo se basa en el principio,
además del de tamaño y complejidad, en la capacidad de detectar fluorescencia,
entonces eso amarra el concepto de la inmuno fluorescencia.
Uno puede tener un anticuerpo que reconozca CD3, CD4 y CD8 y adicionarlo a la
muestra y eso me permitiría saber qué proporción de linfocitos T CD4+ y CD8+ tiene
un paciente. Vemos tamaño, complejidad y fluorescencia. El sistema es óptico; un
láser emite fluorescencia, hay un fluorocromo y sin este no hay fluorescencia. Es un
sistema fluídico laminar, es decir que tiene un flujo laminar. Y tiene una parte
electrónica que es capaz de sensar qué tanta fluorescencia se emite.

Así es como se ve (imagen).

Tamaño en el eje de la Y.
Complejidad en el eje de la X

¿Cuáles son las células (leucocitos)

menos complejas y más pequeñas?
Los linfocitos, tienen núcleo y no
gránulos y son pequeños. Más
complejos y más grandes, los
monocitos. Y más complejos todavía y
un poco más grandes, los neutrófilos.
Los más grandes y complejos que
todos, los basófilos, que estarían casi
por fuera de la gráfica.

Así se verían respecto al tamaño en el eje de la Y, complejidad en el eje de la X

Pregunta de compañero: ​No sé escucha claramente. Habla respecto a añadir

anticuerpos contra CD3
Respuesta de profesor Zea: Porque yo puedo seleccionar la región de los
linfocitos, y quiero saber cuántos son linfocitos T CD4+. Yo necesito ir a mirar en
otro tipo de análisis cuántos son
CD4+ y cuántos son CD8+.

Los que están en el cuadrante

superior izquierdo van a ser
linfocitos CD4+ y los que están en
el cuadrante superior derecho son
CD8+, los que están acá abajo son
doble negativo (cuadrante inferior
izquierdo) y el manchón (bulto) está
arriba, en el superior derecho, es
decir que es una muestra de timo.

Si fuese muestra de sangre

periférica se va a ver así (imagen),
no hay doble positivos, la mayoría
deben ser linfocitos T CD4+, en
segundo lugar linfocitos T CD8+ y
muy pocos deben ser doble
negativos. Esto es lo que hacemos
para el seguimiento de los
pacientes VIH positivo. Claro que
este es un paciente que tenía una
inmunodeficiencia común variable,
es un artículo de Colombia Médica.

Lo normal es que uno tenga ​1000 linfocitos T CD4+ y 400 linfocitos T CD8+.

Nefelometría
Es la técnica que se basa en la
turbidez y nos permite cuantificar
proteínas. La mayoría de la detección
de anticuerpos y proteínas es por
turbidimetría.