ATLA 46, 317-333, 2018 317

Aplicación de Humane Endpoints y métodos humanos de sacrificio de Propuestas de

Investigación Animal: Una revisión retrospectiva

Kathrin Herrmann 1a y Paul Flecknell 2

1 Universidad Libre de Berlín, Departamento de Medicina Veterinaria, Instituto de Farmacología y Toxicología, Berlín, Alemania; 2 Universidad de
Newcastle, la Escuela de Medicina, Biología Comparada Centre, Newcastle upon Tyne, Reino Unido

Resumen - Refinamiento se refiere a la utilización de métodos que ayudan a minimizar el sufrimiento animal en el labo- ratorio. La investigación en
esta área ha aumentado significativamente en las últimas dos décadas. Sin embargo, el grado en que refinamientos se aplican en la práctica es
incierto. Para proporcionar una indicación de la puesta en práctica y el conocimiento de refinamientos, se revisaron las técnicas experimentales para
684 intervenciones quirúrgicas descritas en las solicitudes de investigación 506 animales enviados a las autoridades competentes para su aprobación
en alemán
2010. En este trabajo se describe y se discute la idoneidad de los puntos finales propuestos y los métodos de matanza. Hemos encontrado que,
cuando los investigadores incluyeron puntos finales en su aplicación, éstos eran a menudo carecen de detalle y / o se deberían aplicar en una etapa
tardía del sufrimiento. Además, la elección del método para matar a los animales podría ser mejorado en la mayoría de las aplicaciones.
Proporcionamos recomendaciones para mejoras futuras, basado en la literatura reciente. Para garantizar el rigor científico, evitar el sufrimiento
innecesario de los animales y permitir un análisis preciso de daños y beneficios, los investigadores animales tienen que estar bien informados acerca
de los métodos de refinamiento y aplicar de manera efectiva. Para evaluar el cumplimiento y asegurar que sólo aquellos estudios en los que los
beneficios potenciales superan los daños se llevan a cabo, comentarios como el nuestro

- así como las evaluaciones retrospectivas de daños y beneficios reales - debe ser conducidos amplia y regular, y los resultados
deben ser publicados.

palabras clave: aplicación de refinamiento, dióxido de carbono (CO 2), valoración de daños y beneficios, puntos finales, los métodos de matanza,
requisitos legales, el refinamiento, la evaluación retrospectiva.

Dirección para la correspondencia: Kathrin Herrmann, Universidad Johns Hopkins, Escuela Bloomberg de Salud Pública, Centro para Alternativas a
la Experimentación con Animales (CAAT), 615 North Street Wolfe, W7032, Baltimore, Maryland 21205, EE.UU..

Email: kherrma1@jhu.edu

Introducción sólo cinco trabajos de investigación han encontrado que se centraron en

el enriquecimiento ambiental, un aspecto de alojamiento de los animales refinamiento
hasta completa reemplazo de los animales en la ciencia se logra, la que ayuda a satisfacer las necesidades básicas de comportamiento. Por
tercera R de la experimentación animal, el contrario, en 2016, había alrededor de 160 artículos publicados en la
refinamiento, restos de gran importancia, ya que se busca “para investigación de enriquecimiento ambiental para los roedores de
reducir al mínimo la cantidad de sufrimiento impuesto a los laboratorio por sí solas (3). Sin embargo, los animales sólo se benefician
animales ” que todavía se utilizan (1). definiciones de estos esfuerzos si el conocimiento recién adquirido se aplica en la
contemporáneas de práctica. Varias revisiones tura literaturas estructurada y sistemática han
refinamiento tomar la primera descrip- ción de Russell y Burch un dado una idea con respecto a ciertos refinamientos experimentales, en
paso más allá, e incluye “cualquier enfoque que evita o minimiza particular el uso de anestésicos y analgésicos (por ejemplo, 4-11), y los
el dolor real o potencial, angustia y otros efectos adversos métodos de matanza (7, 8, 11). Sin embargo, incluso las más recientes
experimenté en cualquier momento durante la vida de los revisiones de la literatura no se puede confiar, ya que la inclusión de
animales involucrados, y que mejora su bienestar”(2). animales de información Vant bienestar perti- en las publicaciones sigue
Afortunadamente, la investigación de refinamiento métodos ha siendo incompleta. Recomendaciones para la mejora en este reporte
aumentado sustancialmente desde Russell y Burch introdujeron fueron hechas en 2007 (14), y más- detallan los documentos de
sus principios tres R de REEMPLAZO, reducción y refinamiento, especialmente
orientación para informar Están-
en las últimas dos décadas. Por ejemplo, en el año 2000,

un Dirección actual: Johns Hopkins University, Escuela Bloomberg de Salud Pública, Centro para Alternativas a la Experimentación con Animales (CAAT), 615
North Street Wolfe, W7032, Baltimore, Maryland 21205, EE.UU.. E-mail: kherrma1@jhu.edu
318
Dardos de investigación basada en animales, tales como la
publicación Gold Standard lista de control (GSPC; 12) y las
Directrices llegar (13), se publicaron en
2010. Sin embargo, las publicaciones de investigación todavía se carece de
información sobre el refinamiento métodos empleados (por ejemplo, 9, 10).
En vista de este déficit de información en publicaciones
científicas, un enfoque diferente fue tomada en el estudio actual.
En lugar de centrarse en las publicaciones cientıficos, las
solicitudes presentadas para obtener licencias para la
investigación básica y aplicada animales fueron revisados, a fin de
evaluar la cual se propusieron mejoras experimentales. Se
evaluaron 506 solicitudes presentadas a las autoridades
competentes alemanas en 2010. En Alemania, los investigadores
deben proporcionar descripciones completas de todos los
procedimientos, incluyendo todo planeado refinamiento métodos
(secciones Ver 8 y 9 [15]). La ley requiere que los ani- mals son
tratados de la manera más humana posi- ble, asegurando al
mismo tiempo la generación de resultados científicos válidos.
Cuando menos de protocolos óptimos deben ser aplicadas - por
ejemplo, a finales del experimento mental,
puntos finales - los investigadores deben demostrar
que los beneficios de los experimentos propuestos todavía superan
los daños infligidos a los animales. El análisis de daños y beneficios
(HBA) ha sido una piedra angular de la normativa de investigación
mal ani- alemanas desde 1986 (15). Para este trabajo, se revisaron
las propuestas para obtener información sobre el uso de los puntos
finales, y se evaluó si los puntos finales planificados se consideró
apropiada. Un criterio de valoración humana, o “menos inhumano
punto final” (16), es el “indi- cador más temprana en un experimento
animal de (potencial) del dolor y / o angustia que, dentro de su
contexto científico y aceptabilidad moral, se puede utilizar para evitar
o limitar los efectos adversos mediante la adopción de medidas tales
como el sacrificio humanitario, terminando el estudio o alleviat- ing el
dolor y la angustia”(17). Además, valoramos, desde una perspectiva
de bienestar, lo adecuado de los métodos previstos para matar a los
ani- males, ya sea al final del experimento o antes en el caso de
sufrimiento inesperado que justifica matanza antes de término.
Desde 1972, la Ley de Protección de los Animales Alemán
(Deutsches Tierschutzgesetz) tiene dic- tated que los vertebrados
sólo deben ser asesinados después de ser aturdidos / anestesiado o,
si razonable bajo las circunstancias, bajo la estricta evitación de
caus- ing ellos dolor ( Sección 4, párr. 1; 18). Para los animales
usados ​en la ciencia, el método de matanza de elección también
requiere la consideración del impacto que el método podría tener
sobre los resultados de la investigación (19). Por lo tanto, si el
método más humano no se planteó pro-, nos fijamos en la
justificación de esta elección por los investigadores.
Hemos publicado recientemente los resultados de nuestra revisión de
la analgesia y anestesia regímenes (20), y nuestras conclusiones sobre
la clasificación de la severidad de los procedimientos quirúrgicos y
propuso Monitor-salud
K. Herrmann & P. ​Flecknell
ing estrategias dentro de las propuestas de la muestra (21). El objetivo
de este estudio retrospectivo fue criti- camente evaluar el uso previsto
de mejoras en la práctica, determinar las áreas en las que parece
necesario seguir avanzando, y dar las recomendaciones para mejorar
la práctica en proyec- tos de investigación futura. Nos hemos centrado
en dos de las especies más comúnmente utilizados en la ciencia:
ratones y ratas (22). A lo mejor de nuestro conocimiento, esta es la
primera evaluación de este tipo, ya que se basa en el análisis de las
propuestas de investigación ani- mal en lugar de los estudios
publicados ani- mal.
Métodos
En Alemania, la evaluación y autorización de propuestas de
investigación con animales caen bajo la autoridad de cada uno de
los estados federales que tienen sus propias 'autoridades
competentes' para esta tarea. El estado de Berlín de Protección de
Datos y Libertad de Comisionado de Información (Berliner
Beauftragter für Daten - Schutz und Informationsfreiheit) fue
informado de nuestra solicitud de datos para este estudio y no
tuvieron objeciones (Caso Nº 5.612,145). Para ciertos fines de
investigación científica, las unidades de almacenamiento de datos
se permite el paso de datos personales sin el consentimiento de las
personas afectadas, si: a) los intereses que requerirían protección
no se ven afectados por el tipo de datos que se solicitan, su publica-
ción y su uso ; o b) el interés público en la realización del proyecto
científico supera los intereses tección que requieren pro de las
personas con- cerned. La transmisión de datos debe ser aprobado
antes de tiempo por las más altas autoridades de los estados
federales (23). Después de negociar con las máximas autoridades
de los estados federales, 14 de los 16 acordó conceder a acceder a
las propuestas de investigación básica y aplicada para la evaluación
de los refinamientos propuestos para experimentos que implican el
uso de ratones y ratas.
El estudio se realizó de forma anónima (es decir, los grupos de
investigación individuales no fueron identificados en los análisis). De
acuerdo con el método descrito anteriormente en Herrmann y Flecknell (20),
506 aplicaciones fueron seleccionados mediante el uso de los criterios
enumerados a continuación. Todas las propuestas se presentaron para su
autorización en 2010. Se incluyeron 684 de recuperación de procedimientos
quirúrgicos (422 en ratones y 262 en ratas). Por lo tanto, las propuestas de
investigación que se incluyeron en este estudio:
- fueron propuestas de investigación con animales sometidos a las
autoridades competentes de Alemania en 2010;
- fueron estudios de investigación básica o aplicada;
- implicado el uso del ratón o la rata;
- procedimientos quirúrgicos y de recuperación que se trate; y
- fueron propuestas originales que se concede una licencia de
proyecto.
Una revisión de los puntos finales y los métodos de matanza
Las propuestas de investigación que fueron excluidos de este estudio
reunido al menos una de una serie de cri- terios específicos, a saber,
que:
- eran aplicaciones para la generación de ratones camente alterado
genética-;
- implicado la experimentación con animales requerido por el gobierno,
por ejemplo, los ensayos de toxicidad de las drogas, vacunas, pesticidas;
- especies usadas, excepto el ratón y la rata;
- procedimientos que no implican recupera- ción de la cirugía
descrito; o
- fueron propuestas pre-evaluados o rechazadas por los
miembros de las autoridades competentes. En la propuesta de
investigación, los experimentadores tienen que elaborar sobre la
intensidad esperada y la duración del dolor y el sufrimiento, así
como sobre las acciones adoptadas para aliviarlos. Por lo tanto,
además de proporcionar infor- mación sobre la analgesia y otros
medios para aliviar el sufrimiento, para el caso de imprevisto (así
como probable) complicaciones que excederían la estimación
acoplado máxima cantidad de sufrimiento (y así la categoría de
gravedad autorizado), puntos finales debe aparecer. Se evaluó si los
puntos finales humanas fueron incluidos en las propuestas y si ellos
estaban claramente definidos. Se seleccionaron todas las
aplicaciones de investigación con las intervenciones quirúrgicas que
fueron calificados por los investigadores como 'grave', y revisado si
habían incluido puntos finales humanas y si aparecían específica y
apropiada para los procedimientos previstos. Fuimos a ver la
duración de la gravedad, así como la gravedad acumulada causada
por intervenciones adicionales realizadas en el mismo animal. Sin
embargo, para el alcance de este estudio, sólo se evaluaron los
efectos acumulativos inducidos por quirúrgicamente Cal
intervenciones y no los efectos de cualesquiera otros
procedimientos que los animales se planificaron para someterse.
La legislación alemana ha establecido desde 1986 que cuando los
animales tienen que sufrir larga duración o repetitivo, dolor o
sufrimiento sustancialmente severo, el investigador debe dar una ción
científica sentación de por qué el esforzado para la meta de
investigación es presumiblemente de gran importancia a las
necesidades esenciales de los seres humanos y animales, incluyendo
para la solución de problemas científicos ( Sección 7, párr. 3;
24). Por lo tanto, cuando se prolonga el sufrimiento intenso parecía
ser una característica de la propuesta de investigación, buscamos
la justificación por el investigador en términos de importancia
científica. A continuación, se criti- camente aprecia los métodos
investigadores previstas para uso para matar a los animales, tanto
en el final del experimento y cuando se alcanzó un punto final
humano. políticas de cuidado de animales en muchos países, entre
ellos muchos Ger, estipulan que la muerte debe ser sin dolor, y que
el miedo y anxi- ETY deben reducirse al mínimo. Eutanasia prises
com- el uso de los más pequeños y menos angustiante
319
métodos dolorosos que causan una rápida pérdida del conocimiento y la posterior
muerte (por ejemplo, 19, 25-27). Además, los animales inconscientes antes de la
matanza de representación se considera generalmente que es el enfoque humano más
(18). Para los animales utilizados en ENCE cien-, el método de matanza de elección
también requiere una consideración del impacto que el método de matanza podría tener
sobre los resultados de la investigación, y una HBA debe ser llevado a cabo para
encontrar el método más apropiado bajo las circunstancias dadas . Por lo tanto, se
evaluó si los investigadores justificaron su elección del método y realizaron un HBA, con
estos puntos en mente. Para simplificar, se describen los procedimientos aquí como si
fueran definitivamente llevaron a cabo de acuerdo con la propuesta de investigación
presentada. Es importante señalar que se revisaron las propuestas que se presentaron
originalmente por los investigadores, ya que esto refleja la aplicación prevista de
mejoras en la práctica, y por lo tanto, presumiblemente, su nivel de conciencia y
conocimiento de cómo perfeccionar los procedimientos experimentales. Todas las
propuestas que se incluyen en esta revisión se les concedió una licencia de proyecto.
Sin embargo, es posible - y en muchos casos muy probable - que los miembros de la
autoridad competente, requerido modificaciones a los protocolos propuestos antes de la
autorización. licencias de proyectos generalmente se otorgan por un máximo de tres
años, con posibilidad de prórroga de hasta cinco años. es posible - y en muchos casos
muy probable - que los miembros de la autoridad competente, requerido modificaciones
a los protocolos propuestos antes de la autorización. licencias de proyectos
generalmente se otorgan por un máximo de tres años, con posibilidad de prórroga de
hasta cinco años. es posible - y en muchos casos muy probable - que los miembros de
la autoridad competente, requerido modificaciones a los protocolos propuestos antes de
la autorización. licencias de proyectos generalmente se otorgan por un máximo de tres
años, con posibilidad de prórroga de hasta cinco años.
Resultados y discusión
Que haya presentado originalmente, algunas aplicaciones carecían de la
información requerida. Por ejemplo, para 45% ( n =
309/684) de los procedimientos quirúrgicos, no se mencionaron puntos
finales humanas, y el 7% (47/648) de los experimentos que terminarían
con la matanza ( n = 648), no se especificó el método de matar. Sin
embargo, cabe esperar que los investigadores están sujetos ALS propues-
que contienen toda la información requerida legalmente. Nuestra muestra
estudio contenía una gama de procedimientos quirúrgicos de recuperación
(Figura 1). Fuera de los 684 erie surg-, 422 se realizaron en ratones y 262
en ratas. Las las intervenciones quirúrgicas realizadas más
frecuentemente en ratones y ratas eran laparotomías, seguido de
craneotomías en ratas. Para los ratones, los procedimientos quirúrgicos
más comunes segundo pertenecían a una categoría general de las
cirugías que no implican el ing abierto de una cavidad corporal ( 'Otros' en
la Figura 1); ejemplos incluyen el modelo de isquemia del miembro
posterior, oclusión de la arteria cerebral media modelo (MCAO) y modelos
de dolor ropathic neu-.
puntos finales
Tras 55% (375/684) de los procedimientos quirúrgicos, los
investigadores indicaron que los animales morirían prematuramente
cuando se alcanzaron criterio de valoración humana (s). Para las otras
intervenciones quirúrgicas, hay
320 K. Herrmann & P. ​Flecknell

Figura 1: Los tipos y cantidades de los procedimientos quirúrgicos realizados en ratones y ratas

120

100

80
número de procedimientos

60

40

20

0
laparotomía otro craneotomía toracotomía piel incisión osteotomía laminectomía

= Ratón; = Rata.

Se realizó un total de 684 procedimientos quirúrgicos, 422 en ratones y 262 en ratas. 'Otros' se refiere a una categoría general de las cirugías que no implicara la
apertura de una cavidad corporal, por ejemplo, compresión o la ligadura de los nervios, o cirugía para causar una oclusión de la arteria cerebral media (adaptado de
Herrmann y Flecknell [20]).

era o ninguna mención de puntos finales en absoluto, o se dijo,
por ejemplo, que el experimento sería “sólo se termina si
sufrimientos graves se produjo”, “si es necesario, los animales
gravemente sufren los iban a matar” o “si se ha producido que
requieren complicaciones un veterinario que entonces no podía
con- trol de la situación [entonces el animal matarían]”.
Se seleccionaron todos los usos de la investigación en la que los
investigadores habían rated intervenciones quirúrgicas como 'graves' y
estrechamente examinados ellos por la inclusión de puntos finales.
Aquellas propuestas que tenían puntos finales mencionado, fueron
elegidos para una revisión detallada en cuanto a la idoneidad de los
criterios de valoración. También se evaluó la información disponible
sobre las estrategias de vigilancia de la salud, de esperar efectos
adversos y la duración de la iment exper- (de la cirugía hasta que se
alcanzó el punto final experimental). Además, cuando esté disponible y
relevante para la discusión de la propuesta, se analizó el tratamiento
del dolor planificada y otras instrucciones de cuidado. Fuera de 684
cirugías, 51 (7%) fueron calificados como 'graves' por los
investigadores; de estos 51 cirugías graves, puntos finales eran
hombres-cionado para su uso después de 17 procedimientos
quirúrgicos, se describe en 12 propuestas de investigación
independientes. Los detalles relevantes de estas cirugías pueden ser
graves
encontrado en la Tabla 1, y se discuten en más detalle a continuación.
modelos de infarto de miocardio
Propuestas 1 y 2 ambos modelos infarto de miocardio
comprenden. En la Propuesta 1, el seguimiento parecía
inadecuado, especialmente teniendo en cuenta la gravedad de los
procedimientos. Además, no había tificación jus- para los puntos
finales en etapa tardía que fueron propuestos. La gradación de los
signos clínicos en la hoja de puntuación de la salud no se ha
definido claramente, por ejemplo “pelo sin brillo, orificios costra,
ojos apagados” fue dado una puntuación de 2 a 3. Una
puntuación de 9, que era el punto final humano, podría no tener
ha alcanzado hasta que el animal había dejado de comer, había
perdido más del 20% de su peso corporal, tenía una capa sucia,
orificios sin limpiar, postura anormal, ojos apagados, ser
vocalización inusualmente, haciendo ruidos cuando ing exhal- y
auto-mutilación. En la Propuesta 2, la frecuencia Toring moni- fue
mayor, pero todavía parecía inapropiado para un procedimiento
tan severa.
Una revisión de los puntos finales y los métodos de matanza
Tabla 1: Los puntos finales que figuran en las propuestas que comprenden procedimientos quirúrgicos que
fueron calificados como 'graves' por los investigadores
Propuesta Nombre del modelo y tipo de
(Especies) intervención quirúrgica (s)
Propuesta 1 Grupo experimental C UN: modelo de infarto de
(ratones GM y miocardio; toracotomía; ligación de Ramus
WT) interventricularis anterior (RIVA); el tamaño del
infarto previsto alrededor del 40%
Experimental grupo B: Modelo para la presión de la
hipertrofia cardiaca inducida por sobrecarga y la
insuficiencia cardíaca; toracotomía; transversales
constricción de la aorta (TAC)
Experimental grupo C: extremidad posterior modelo de
isquemia, la ligadura de la arteria femoral derecha
propuesta 2 Miocardio modelo de infarto,
(Ratones WT) toracotomía; la ligadura de Ramus
interventricularis anterior (RIVA);
isquemia-reperfusión después de 1 hora
propuesta 3 modelo de enfermedad cardíaca hipertensiva;
(Ratones WT) toracotomía; transversal aórtica
constricción (TAC)
propuesta 4 modelos de trauma
(Ratones WT) Grupo experimental A: politraumatismo
modelo; fractura de fémur, el pecho bilateral Supervisión: directamente después de la intervención cada 2 horas; después de que el tejido trauma y que rodea
suave
trauma; romo torácica trauma
inducción dejando caer un hueco
peso cilíndrico desde una altura en la inyección sc con metamizol; terapia de fluidos: 1 ml / animal 2 × / d pecho, además de fémur
cerrada
fractura (aguja insertada en el comportamiento anormal fémur, como letargo o agitación, que no es el canal como clavo
intramedular; cierre de
herida; inducción fractura de fémur usando un dispositivo
de guillotina romo)
Experimental grupo B: modelo monotrauma; fractura
de fémur cerrada y trauma del tejido blando (ver
descripción anterior)
Ver final de la tabla para la plena leyenda.
321
Planeado intervalo de supervisión, la duración de la
experimentar un, información adicional y humana
criterios de valoración que conducirían a matar antes de término si
Supervisión: Primera semana posterior a la cirugía × 1 / d; después: 2 x / semana
Duración: Los grupos A y B: 2 o 6 semanas, respectivamente; Grupo C: 3 semanas
Hoja de puntuacion comprendida tres criterios principales que serían de verificación:
peso corporal, estado general y el comportamiento espontáneo. animales gravemente
afectados (puntuación de 9) serían asesinados si se llegó a las siguientes condiciones
para los tres criterios de verificación:
Peso corporal: ingesta de alimentos y de agua reducido; la pérdida de peso de 10 15% (puntuación 2-3) o
negativa para comer; pérdida de peso corporal> 20% (puntuación 3-4)
Condición general: pelo sin brillo; orificios costrosa; ojos apagados (puntuación 2-3) o capa
sucia; orificios sin limpiar; postura anormal; ojos apagados (puntuación 3-4)
El comportamiento espontáneo: comportamiento anormal, la reducción de la actividad motora
o hiperquinesia, no responde, animales yacen aislados uno de otro, sin ritmo circadiano
(puntuación 2-3) o la expresión vocal inusual; suene cuando exhalando; auto-amputación,
desviándose el cuidado del cuerpo (puntuación 3-4)
puntos finales adicionales para animales con isquemia de las extremidades posteriores: ulceración
post-quirúrgico; necrosis o la amputación de una extremidad auto underperfused
Duración: 30 dias
Supervisión: durante varias horas, después de la cirugía, alguien sería
presente; a continuación, el seguimiento está prevista cada 12 horas
Hoja de puntuacion indicó que animales matarían si llegaron ya sea la
puntuación de III o IV de IV
Los criterios para la puntuación III (pasiva): severamente comportamiento alterado (movimientos
lentos inactivos), déficits obvias de salud (no la ingesta de alimentos y agua, capa de volantes,
letargo, cuidado del cuerpo ausente, aislamiento de compañeros de jaula, alterado comportamiento
de respiración, etc.)
Los criterios para la puntuación IV (letargo): comportamiento muy severamente alterada (sin movimiento o
reacción a los estímulos) y no la ingesta de alimentos
tasa de fracaso estimado de la cirugía (= mortalidad) por experiencia
cirujanos: 10%
Duración: 21 días
Seguimiento de la gestión / dolor: primeros 5 días después de la cirugía cada 8 horas,
la aplicación ip de buprenorfina (0,1 mg / kg); peso diario y la inspección de la herida
puntos finales: signos de deterioro severo; pérdida de peso (> 10% dentro de 2 días) o el
comportamiento llamativo (flemático, no comer / beber, capa de volantes) o una herida
problemas de cicatrización
Duración: 0, 6, 12 y 24 horas; 3, 7, 14 y 28 días,
respectivamente, post-cirugía
1×/d
la analgesia postoperatoria y la atención de: 0,8 mg / ml metamizol añadido
al agua potable para los primeros 3-5 días después del trauma. Si es necesario,
puntos finales: la pérdida de peso> 20%; Infección en la herida;
explicable por factores ambientales externos
322 K. Herrmann & P. ​Flecknell

Tabla 1: continuado

Planeado intervalo de supervisión, la duración de la

Propuesta Nombre del modelo y tipo de experimentar un, información adicional y humana
(Especies) intervención quirúrgica (s) criterios de valoración que conducirían a matar antes de término si

propuesta 5 modelo Paraplejia para inducir heterotópico Duración: 2 semanas a varios meses
(ratas) osificación (HO), compuesto de dos Supervisión: diario
intervenciones quirúrgicas Otra información: vejiga (3-4 × / d) y el abdomen masajes
En primer lugar la cirugía: laminectomía; 2-Francés funciones para orinar y defecar deteriorados por hasta 2 semanas;
catéter Fogarty inserta en el control de peso 2 × / d; sc líquido si es necesario
dorsal espacio epidural a través de una pequeña La analgesia postoperatoria: primero 3 días buprenorfina 2 × / d (0.03-
agujero hecho en T10 arco vertebral, y 0,05 mg / kg sc), seguido de carprofeno 2 × / d (5 mg / kg sc); si el dolor
inflado y se dejó durante 20 minutos a Se detecta el régimen de analgesia obtiene prolongados
causa la contusión bilateral puntos finales: En caso de dolor intenso que dura (> 12 días),
En segundo lugar la cirugía: osteotomía del fémur; entre otros caracterizados por uno o más signos (de acuerdo con
2 mm defecto óseo diafisaria causada por grupo de trabajo FELASA sobre el dolor y el sufrimiento): auto-mutilación, utilizando una placa de
osteosíntesis persistente postura encorvada, vocalización de dolor mientras descansa, apatía completa, el
aislamiento de grupo, capa de volantes obvio con signo de deshidratación (estancias piel
plegada), pérdida de peso corporal severa (> 25% de desviación del peso normal) o la
pérdida completa del apetito para 72 horas

propuesta 6 Hepatectomía y trasplante de hígado Duración: 7 días

(ratas) (Seguido de la extracción de sangre diaria Supervisión: 3 × / d
bajo isoflurano para comprobar trasplante La analgesia postoperatoria: tramadol través del agua potable (ingesta
función) supervisado)
puntos finales generales: complicaciones durante la anestesia de inducción y las
complicaciones quirúrgicas más grandes, tales como sangrado prolongado, necesidad de
reanimación, paro cardíaco etc.
puntos finales humano durante la implantación de órganos: complicaciones de
los vasos (por ejemplo, trombosis, las fugas que conduce a insuficiente
reperfusión del trasplante)
puntos finales después de la cirugía: insuficiencia hepática completa o el fracaso de otro
órgano vital

propuesta 7 modelo de accidente cerebrovascular isquémico (cerebral focal Mortalidad Debido a la cirugía: espera que sea el 15%
(ratas) isquemia); arteria cerebral media Duración después de la segunda cirugía: 20 días
oclusión (MCAO): Supervisión: diario
En primer lugar la cirugía: Otra información: déficits funcionales motoras espera; enviar-
a) flujo de láser Doppler (LDF) de la sonda y analgesia quirúrgica no vistos como colocación guía cánula
necesario en el cráneo por puntos finales: los ratones que no han recuperado considerablemente
utilizando cemento dental; de las cirugías (es decir, que no limpiar ellos mismos o espectáculo
b) ligadura permanente de Arteria carotis movimiento espontáneo, pero sentarse con apatía en una esquina) tienen, Externa y A. carotis
communis; según la experiencia del solicitante, hemorragia subaracnoidea
el bloqueo temporal del origen de la y por lo tanto son asesinados
MCA intraluminal con un filamento
En segundo lugar la cirugía: 90 minutos más tarde, segunda
anestesia para eliminar filamento para reperfusión

propuesta 8 pancreatitis taurocolato inducida; Duración, dependiendo del grupo experimental: Grupo A: 8 horas, 24
(GM y modelar de severa pancreatitis necrotizante; horas; Grupo B: muerte o 10 días; El investigador señaló que
WT ratones) laparotomía animales del grupo B de la cirugía experimentarían muy severo
Grupo experimental A: ductus Clip pancreatitis con una alta mortalidad
hepatocholedochus; duodeno incisión; La analgesia postoperatoria: si los signos de dolor detectados, buprenorfina 1 ml taurocolato en conducto
pancreático; (0,02 mg / kg im)
abrir de nuevo el clip Supervisión: varias veces al día
Experimental grupo B: Mismo procedimiento puntos finales: problemas quirúrgicos (anestesia, cirugía pero no eliminación de la grapa
(pancreatitis técnica); disminuido severamente la ingesta de alimentos o agua; pérdida de peso
severidad elevada cf. Grupo A); letal > 20%; no fisiológico, postura anormal
experimentos Grupo B (experimentos letales): punto final experimental es la muerte o 10 días después de la inducción
de la enfermedad

GM = genéticamente modificado; WT = tipo natural; im = intramuscular; IP = intraperitoneal; sc = por vía subcutánea. Ver final de la tabla para la plena

leyenda.
Una revisión de los puntos finales y los métodos de matanza 323

Tabla 1: continuado

Planeado intervalo de supervisión, la duración de la

Propuesta Nombre del modelo y tipo de experimentar un, información adicional y humana
(Especies) intervención quirúrgica (s) criterios de valoración que conducirían a matar antes de término si

propuesta 9 modelos de sepsis; el desarrollo de endo- Duración: máx. 96 horas (4 días)

(GM y choque tóxico; laparotomía Supervisión: después de la cirugía cada 4-6 horas y en estado avanzado
WT ratones) Grupo experimental A: CLP (cecal cada 1-2 horas
ligadura y punción) modelo Explicación de la analgesia post-quirúrgica ausente: interferencia con
Experimental grupo B: CASP (colon resultados de la investigación debido a metabolismo de los fármacos
ascendens stent peritonitis) modelo puntos finales: severamente alterada condición general o pérdida de peso> 20%

propuesta 10 Aguda modelo de insuficiencia renal; supervivencia Investigador declaró que> 80% de los animales mueren dentro de la primera 4
(GM y experimentos; laparotomía días después de la cirugía
WT ratones) En primer lugar la cirugía: nefrectomía unilateral Supervisión: para las primeras 24 horas, no habría una comprobación por hora;
En segundo lugar la cirugía: isquemia-reperfusión de lo contrario cada 6 horas modelo de lesión (IRI), de recortes de A. renalis, La analgesia
postoperatoria: 2 × / d buprenorfina 0.05ng / g im 35 o 42 minutos, respectivamente
puntos finales: la pérdida de peso> 20% o aumentarse empeoramiento de la condición
general o debería comportamiento patológico a ser evidentes

propuesta 11 modelo de insuficiencia renal crónica; Duración: 20 semanas

(Ratones GM) 5/6-nefrectomía El investigador señaló que el dolor severo solamente se anticipa durante 15 minutos
referencia a la intervención quirúrgica bajo anestesia general

Supervisión: al menos una vez al día; si las lesiones ocurrieron 2-3 x / d; Si el movimiento evita
animales 2 × / d
La analgesia postoperatoria: metamizol a través de agua potable durante 3 días (la ingesta de
agua se controla)
puntos finales: la pérdida de peso aguda del 15% dentro de unos pocos días o lenta pérdida de
peso de 20% debido a la ingesta de alimentos es visto como criterios objetivos para este patrón de
la enfermedad; si los animales sienten mal debido a las altas concentraciones de metabolitos, si se
convierten en caquéctico, y si constantemente potable y macerado, o si son demasiado débiles y
apáticos debido a la anemia

propuesta 12 modelo de insuficiencia renal crónica;
(Ratones WT) laparotomía; 7/8 nefrectomía-; 2-parte
la cirugía con 2 semanas en el medio
En primer lugar la cirugía: 75% de riñón derecho se pone Hoja de puntuacion que comprende cinco criterios que serían monitoreados: cauterizado
En segundo lugar la cirugía: nefrectomía izquierda lado;
ALZET Mini sc implantación de la bomba
En tercer lugar de la cirugía: 6 semanas más tarde, nuevo
ALZET Mini implantación de la bomba
Duración: 14 semanas después de la primera cirugía
analgesia intraoperatoria y post-operatorio: carprofeno (5 mg / kg
sc) 1 × / d durante 3-4 días
comportamiento, el peso, la conducta alimentaria, la movilidad, la apariencia. En
cada categoría, la puntuación más alta es necesaria para alcanzar la puntuación
que es igual a la variable humana que serían:
Comportamiento: inmóvil, desinteresado, encorvado
Peso: pérdida de> 10%
La conducta alimentaria: no come, no bebe, deshidratados
Movilidad: inmóvil, cojera o arrastrándose
Apariencia: sin brillo, capa rizada

Para los propósitos de esta tabla, los métodos de las propuestas fueron literalmente traducidos del alemán al Inglés.
un La duración dada para el experimento es de la cirugía hasta que se alcanza el punto final experimental.

si La atención se centró en los efectos de los procedimientos quirúrgicos descritos. Sin embargo, la cantidad total de dolor y sufrimiento para estos animales, y por lo tanto la
gravedad global de la propuesta, potencialmente pueden aumentar (o disminuir) en diversos momentos durante el experimento. Esto es debido a intervenciones quirúrgicas
experimentales podrían tener efectos perjudiciales sobre el animal y / o ser seguido por un número de otras intervenciones (severidad acumulativo). Dependiendo del estudio de
investigación, estas otras intervenciones podrían incluir pruebas de comportamiento, exploraciones, inyecciones, extracciones de sangre, alimentación forzada, irradiación, etc. El
impacto de la gravedad debido a la modificación genética (en su caso) no fue evaluada.

C Por simplicidad en los análisis actuales, los grupos experimentales fueron diferenciadas con A, B, o C. Hubo grupos experimentales más en las propuestas
actuales, y por lo tanto que la numeración podría diferir del extracto de las propuestas descritas aquí, como grupos experimentales sólo se quirúrgicos eran
analizado.

GM = genéticamente modificado; WT = tipo natural; im = intramuscular; IP = intraperitoneal; sc = por vía subcutánea.

324
Transversal constricción de la aorta (TAC)
Según la propuesta 3, después de una constricción de la aorta
transversal (TAC), el alivio del dolor se administra cada ocho
horas. Con respecto a ING Monitor-, se propuso que el peso
corporal del animal y la herida se revisa diariamente. Estaba
previsto que los animales se someterían a una cotomy thora-, por
lo que sería importante hacer un seguimiento de ellos, al menos,
cuatro veces al día, y esto consistiría principalmente de la
observación en su jaula. Además, no se especificó cuando la tasa
de mortalidad del 10% sería más probable que ocurra. Esto se
debe anotar en la hoja de puntuación y control sanitario debe
intensificarse durante este período, para asegurar que estos
animales son sacrificados en condiciones decentes en lugar de
morir. El criterio de valoración humana dada en las necesidades
de propuestas para ser más claro, ya que el significado de
“comportamiento ing ojo-Catch” o “problemas de cicatrización de
heridas” es bastante subjetiva. Adicionalmente,
Monotrauma y modelos politraumatismos
Propuesta 4 comprendía una monotrauma y un modelo trauma poli-. La
vigilancia de la salud propuesta era pobre, ya que después de un
traumatismo torácico bilateral, se puede prever que los ratones moriría.
La aplica- ción no incluyó una estimación de la mortalidad pated antici-.
Sin embargo, un estudio sobre este modelo trauma, publicado en 2017,
informó que 33% de los ratones murieron dentro de los primeros 30
minutos después de inducción de de una contusión en el pecho bilateral
(28). Por lo tanto, no debería haber una vigilancia constante durante al
menos tres horas después de que los animales se recuperan de la
anestesia, y, dependiendo de la condición de los animales individuales,
que deben ser revisados ​por lo menos 5-6 veces al día durante el resto
del experimento. Los solicitantes propusieron la administración de
analgésicos a través de agua potable. Además del hecho de que los
animales se minimice el movimiento después de un trauma severo, y que
la ingesta de agua generalmente se redujo notablemente después de la
cirugía (29), se sabe que el agua con- sumo sigue un ritmo diurno (30),
todo lo cual hace el agua y por lo tanto la analgesia ingesta demasiado
infrecuentes para proporcionar una gestión adecuada del dolor. Además,
recientes pruebas demuestran que modo de gestión de la buprenorfina a
través de agua potable puede ser insuficiente para alcanzar los niveles
de plasma requeridos (31). Otro estudio reciente encontró que esta vía
de administración parece sólo parcialmente eficaces para los animales
con insuficiencia renal leve a dolor post-quirúrgico moderado (32).
analgésicos inyectables deben administrarse y comida empapada deben
proporcionarse en el suelo de la jaula, como la alimentación normal y la
capacidad de beber es proble- deteriorados hábilmente. Aparte de la
utilización de la pérdida de peso, los puntos finales no estaban claras y
por tanto de beneficio tle lit- para evitar un sufrimiento innecesario.
K. Herrmann & P. ​Flecknell
Paraplejia y defecto óseo diafisaria
Propuesta 5 implicó dos intervenciones quirúrgicas que conducen
a la paraplejia y un defecto óseo de diáfisis, que se va a dar lugar
a impedi- ción prolongada y sufrimiento. Las ratas requerirían
intención cuidados y asistencia siva con orinar y defecar. Los
puntos finales en el curso del experimento aparecieron muy tarde,
por ejemplo, la vocalización del dolor en reposo y ción de
auto-mutilación. un control más frecuente y detallada, así como
una disposición para la supervisión durante la noche, se considera
imprescindible.
El trasplante de hígado
Propuesta 6 ratas comprendidas sometidos hígado trans- plantación.
Los animales iban a ser estudiado durante siete días después del
procedimiento, y parecían haber requerido el alojamiento individual,
por lo que la ingesta de analgésicos a través de su agua potable
podría cual supervisa. Como se señaló anteriormente, la ingesta
diurna de agua limita el valor de esta vía de administra- ción, que no
es eficaz en el alivio del dolor después de la cirugía severa. Además,
el alojamiento individual es, en sí mismo, estresante. El punto final
humano propuesto - insuficiencia orgánica - no indica los signos iCal
clin- que serán utilizados para evaluar esto. Los resultados del
muestreo de sangre diariamente para la función de monitor de
órganos quizá podrían haber sido utilizados como parte de la
evaluación del punto final.
modelo de isquemia
Los puntos finales propuestos para el modelo de isquemia con ratas
en Propuesta 7 podrían mejorarse y ampliarse. La frecuencia de
monitoreo apareció demasiado bajo, y la analgesia se debe
administrar. Una reciente revisión exhaustiva sobre el
perfeccionamiento de los modelos de isquemia, la directrices
MEJORAR (33), proporciona una valiosa orientación que debe
conside- rarse para futuros estudios.
pancreatitis necrotizante severa
Propuesta 8 describe un modelo que implica la pancreatitis necrotizante
severa en la que se espera una alta mortalidad, sobre todo en el grupo
experimental B. Sin embargo, la propuesta prevé pequeño detalle de la
frecuencia itoring MON, y el manejo del dolor es probable que sea
deficiente en la práctica, ya que el dolor adecuada gestión - ción requiere
la monitorización frecuente para evaluar el dolor. El investigador señaló
que la mortalidad sería alto, sin dar ninguna estimación. La alta
mortalidad en las primeras 24 horas se explica por una vasculopatía
sistémica cular de fugas, lo que lleva a la hipotensión y una necesidad
de terapia de fluidos (34). Por lo tanto, no debería haber continua-
Una revisión de los puntos finales y los métodos de matanza
monitoreo ous durante este período y la terapia de reemplazo de
fluidos tal vez para reducir la mortalidad. El investigador indicó que los
animales sólo se recibirían si se ha detectado la analgesia del dolor.
La pancreatitis es altamente probable que cause dolor severo - de
hecho, este modelo también se utiliza para el dolor estudio (35) - y se
sabe que el dolor de pancreatitis es particularmente difícil de manejar
con agentes analgésicos estándar (36). experimentos de
supervivencia con el criterio de valoración experimental de diez días
después de la cirugía, o el punto final de muerte dentro de este
periodo, se han previsto para un grupo. La muerte como un punto final
debe ser evitado, no sólo desde un punto de vista ético, sino también
desde un punto de vista científico (37). El investigador debe haber
establecido puntos finales antes para evitar esto; por ejemplo, uno o
más inflamatoria u otros marcadores Ular molec-, o signos clínicos,
pudieron ser identificados y utilizados. Esto permitiría tejido fresco que
se cionado COL- del animal, lo que podría aumentar el valor del
estudio (37).
modelos de sepsis
Propuesta 9 comprendía dos modelos de sepsis: ación cecal lig- y
punción (CLP) y colon ascendente stent de peritonitis (CASP). El dolor
puede ser anticipado en este modelo, por ejemplo, debido a una
peritonitis. Sin embargo, el investigador señaló que la analgesia no
sería posi- ble, ya que interfería con el modelo. Un dis- cusión
detallado y la justificación de esta afirmación estaban ausentes. El
investigador podría estar preocupado por la interferencia con los
procesos inflamatorios, pero estudios recientes indican que la
buprenorfina puede usarse en modelos de sepsis de roedores (38). Un
enfoque general para hacer frente a este problema reconocido de las
interacciones de los analgésicos y los modelos de investigación ha
sido sugerido por Peterson y sus colegas (39). La afirmación de que el
punto final humano “alterado gravemente el estado general” es vago.
Además del punto final propuesto de pérdida de peso corporal 20%,
biomarcadores cuantitativos quizás podrían ser identificados a predecir
el resultado de que en este modelo. Un examen amplio sobre el
perfeccionamiento de modelos de sepsis ha sido proporcionada por
Lilley et al. ( 38).
modelos de insuficiencia renal
El modelo de insuficiencia renal aguda en el ratón, que se describe en la
Propuesta 10, tiene una mortalidad que indicaría la necesidad de un
control continuo durante los primeros cuatro días. La ruta intramuscular
(para ser utilizado para la administración de analgésicos) debe evitarse
en los ratones ya que esto causa más dolor que la dosificación
intraperitoneal o subcutánea. Los puntos finales distintos de la pérdida
de peso no estaban claras. Propuestas 11 y 12 modelos renal crónica
interesadas Fail ure con fines de criterios de valoración experimentales
(20 semanas para que el / 6-nefrectomía 5 y 14 semanas para el
325
7/8-nefrectomía). Propuesta 11 planeó el modo de gestión de
analgésicos través del agua potable. Como se men- ciona
anteriormente, esto no es probable que sea eficaz. Propuesta 12
declaró que carprofeno serían utilizadas como analgésico, lo cual es
sorprendente dado que no esteroideos antiinflamatorios (AINE) no
se recomiendan para uso en animales con insuficiencia renal, ya
que podría modular la respuesta a la insuficiencia renal (40) . En la
Propuesta 11, la pérdida de peso fue el punto final única clara - los
otros eran no-específico y podrían mejorarse. Por ejemplo, en lugar
de decir “si se convierten en caquécticos”, condición corporal (BCS;
41) se debe utilizar para establecer un punto final Apropiada.
puntos finales, si se aplica sin demora, son vistos como “una estrategia
refinamiento diseñado para minimizar el dolor, sufrimiento, o malestar
experimentado por los animales durante un experimento” (42). En 1998,
una conferencia inter- nacional sobre la Utilizar de Hum puntos finales ane
en la experimentación con animales para la investigación biomédica
se llevó a cabo en Zeist, Países Bajos, y dio lugar a un número especial
sobre el tema en la revista Animales de Laboratorio ( 43). Desde
entonces, se ha avanzado en el desarrollo de criterios de valoración
más-humanas, las cuales, si implementado, evitaría el sufrimiento mal
ani- innecesarias y evitables. Actualmente, el uso de puntos finales no
sólo es un requisito legal en muchos países (19), sino que también es
generalmente considerado como la mejor práctica en la investigación y
las pruebas (44) basada en animales. Después de más de la mitad de
los procedi- mientos quirúrgicos previstos, se les dio puntos finales
predeterminados. De este modo, con la supervisión adecuada y
habilidades de reconocimiento del dolor, podría anticiparse que Fering
suficiente- innecesaria podría evitarse. Sin embargo, la gran mayoría de
los puntos finales propuestos se describió de forma deficiente y por lo
tanto no está claro. Además, eran generalmente no procedimiento
específico y también fueron etapa tardío (como se ve en la Tabla 1).
Para dar ejem- plos adicionales, una propuesta indicaba: “Si se supone
que el animal es sufrimiento, a pesar de la analgesia proporcionado
(potable ausente, el peso corporal pérdida), el animal se mató”; en esta
propuesta, no se proporcionó información sobre las evaluaciones de
ING o dolor Monitor-. En otra propuesta, donde las ratas desarrollaran
una peritonitis aguda severa y no recibirían la analgesia, se indicó que
los animales serían asesinados si “el dolor excedería de lo soportable”.
Por lo tanto, no sólo es probable que dicha información vaga requeriría
una interpretación subjetiva de la persona seguimiento de los animales,
sino también que esta incertidumbre podría retrasar la terminación del
estudio, y el plomo a la variabilidad en los criterios de valoración
utilizados. Por otra parte, cuando los intervalos de monitoreo se
especifican en realidad, los intervalos propuestos a menudo parecían
demasiado tiempo, que también podría dar lugar a dolor y sufrimiento
capaces Evitar- para los animales. Con el fin de reconocer la angustia,
el dolor y el sufrimiento, la monitorización frecuente, así como el
reconocimiento del dolor y habilidades Assessment, son requisitos
fundamentales.
326
Los límites del dolor y el sufrimiento deben determinamos
basan en un análisis de daños y beneficios, y esto debe
incorporar un diseño de estudio que maximice los beneficios
anticipados y minimiza los daños potenciales. La mayoría de los
puntos finales de las propuestas que hemos examinado podría, y
debería, ser mejorado. Si los puntos finales no se describen
claramente con criterios objetivos o cuantificables (a sesgo
Evitar), el personal responsable de la supervisión de los animales
no pueden actuar con rapidez cuando se cree un animal para ser
excediendo, o a punto de superar, el punto final acordado y, por
tanto, el límite de severidad asignado en el proyecto de licencia.
Por otra parte, teniendo en cuenta la duración de los
experimentos planeados y el potencial grado de dolor que dura
sustancial y sufrimiento en los proyec- tos que se muestran en la
Tabla 1, los investigadores deberían haber RESPETA pro una
explicación de por qué el esforzado para la meta de investigación
es, presumiblemente, de importancia excepcional a las
necesidades esenciales de los seres humanos y animales,
incluyendo para la solución de problemas científicos ( véase la
Sección 7, párr. 3 [24]). Esta disposición debe garantizar que los
proyectos de tal severidad proporcionan una explicación adicional
de por qué la investigación es jus- tificado. Para una propuesta,
esta información no estaba disponible (Propuesta 5); una
aplicación marcada la casilla que una justificación adicional fue
proporcionada (Propuesta 9), pero fue separado de la propuesta y
por lo tanto no está disponible para que evaluemos. En las demás
aplicaciones diez, los investigadores indicaron que era “no
aplicable” a sus proyectos propuestos. Hace dos décadas, los
organizadores de la primera conferencia inter- nacional en los
puntos finales humanas estaban seguros de que: “puntos finales
son parte de un proceso dinámico, influenciado por los avances
científicos, así como por la preocupación por el bienestar de los
animales a medida que evolucionan con el tiempo. Es muy
probable, por tanto,
Instamos a que el aumento de los esfuerzos son tomadas por la comunidad
cien- cien- para buscar experimental anterior (y por lo tanto menos inhumanos)
puntos finales. Los sujetos animales también deben ser beneficiados por las
nuevas tecnologías y otros avances ampliamente utilizados en los seres
humanos. Por ejemplo, los resultados de formación de imágenes se podrían
utilizar para determinar los puntos finales experimentales antes. Además, los
marcadores bio- podrían utilizarse para predecir el resultado, el cual, para
algunos entornos de investigación, podría ser incluso antes de la aparición de los
signos clínicos. La disponibilidad de biomarcadores cuantitativos y técnicas de
imagen no sólo debe avanzar en los objetivos científicos del estudio, pero
también puede utilizarse para reducir el dolor y la angustia que sufren los
animales de experimentación.
Sugerimos que se establecieron grupos de trabajo internacionales
con experiencia en las tres R y su respectivo campo de investigación,
con el fin de, en un primer paso, revisar la validez del modelo animal
en particular, y, en una segunda etapa, cuando demostrado su
utilidad,
K. Herrmann & P. ​Flecknell
recopilar y proporcionar recomendaciones para la un refinamiento del
modelo animal. La segunda parte de una evaluación tan crítico ha
llevado a cabo por unos pocos modelos y campos de investigación,
tales como accidente cerebrovascular isquémico (33), artritis
reumatoide (46), experimental auto - mielitis encéfalo inmune (47), y
para los modelos y procedimientos que implica ataques, convulsiones y
epilepsia (48, 49), y sepsis y choque séptico (38). Tales grupos de
expertos deben actualizar periódicamente sus evaluaciones de validez
y las recomendaciones de refinamiento, que deben considerarse como
una guía ayudando investigadores que están considerando y / o que ya
emplean estos modelos.
métodos de matanza
Anestesiar al animal antes del sacrificio (un procedimiento asesinato de
dos etapas) que generalmente se considera la forma más humana cuando
termina la vida de un animal (18). Los datos disponibles mostró que, tras
648 (de un total de
684) intervenciones quirúrgicas, los animales habría en última instancia ser
matados. Los otros 36 procedimientos quirúrgicos fueron seguidos por un
procedi- miento quirúrgico recuperación adicional; estos experimentos
fueron finalmente terminología NATed matando así. En 41% (264/684) de
los experimentos, se ha previsto que los animales se mataron en un
procedimiento de una etapa, mediante el uso de ya sea un método físico
(dislocación cervical, decapitación) o una sobredosis de un agente que,
cuando se administra en dosis altas, conduciría a la muerte. Los métodos
más frecuentemente mencionadas para terminar mentos de ratón
experimental en un procedimiento de una etapa fueron (en orden
decreciente de frecuencia): dislocación cervical, ide diox- de carbono (CO 2) inhalación,
y sobredosis de pentobarbital. En ratas conscientes, los medios más
comúnmente utilizados eran CO 2 inhalación, una sobredosis de
pentobarbital, y una sobredosis de isoflurano (Figura 2). Fuera de la casi el
60% restante de los experimentos (384), dos tercios de composición con un
procedimiento final que requiere anestesia antes de la matanza, por
ejemplo, para la perfusión de tejido o para la recolección de tejido / órgano.
Los animales en el otro tercio de los experimentos se anestesiaron en
primer lugar con un agente y luego murieron por otros medios. En
aproximadamente la mitad de los experimentos donde los roedores debían
ser anestesiados antes de la utilización de otro método para matarlos, CO 2 fue
elegido. Aunque CO 2 tiene propiedades anestésicas, sus causas utilizar el
miedo y la disnea y, dependiendo de la CO 2 velocidad de llenado de la
cámara de muerte, que puede causar dolor. Esta es la razón por CO 2 no
debe ser utilizada, ya sea como un anestésico o como un agente de
matanza, como es más dis- cussed continuación.
No propuesta explica por qué un determinado método se da
preferencia sobre otro con respecto a las consideraciones de bienestar
ani- mal. Cuando los investigadores habían planeado un procedimiento
quirúrgico final para colec- ción muestra u otros experimentos
terminales, varios declarado que, si el animal no alcanzó el punto final
experimental planeado y tuvo que ser muerto prematuramente
Una revisión de los puntos finales y los métodos de matanza 327

Figura 2: Los métodos y los agentes utilizados para matar animales conscientes en un procedimiento de una etapa

80

70

60

50
número de procedimientos

40

30

20

10

0
CO 2 isoflurano CO 2 o pento- ketamina / hidrato de disloque decapitación sin
isoflurano barbital xilazina coral cervical información

= Ratón; = Rata.

Tras 41% de los procedimientos (264/648), donde se planificaron animales para ser matado al final del experimento, se propuso un procedimiento de un solo paso.

Porque un humano punto final se ha llegado, entonces sería
utilizado otro método de matar. En muchos de estos casos, CO 2 sería
utilizado, sin adminis- tración previa de un agente anestésico
estándar, como se había planeado como parte del procedimiento
quirúrgico final.
Incluso aunque menos métodos crueles de sacrificio podrán ser
autorizados, si es necesario para alcanzar los objetivos de la
investigación, la elección de estos métodos debe justificarse en la
propuesta, y su impacto sobre el mal ani- tenido en cuenta en HBA del
proyecto. Sin embargo, en nuestro estudio muestra, la elección del
método no fue acompañada de una explicación científica o justificación.
Esto podría explicarse por la falta de conocimiento acerca de las
implicaciones para el bienestar de los métodos frecuentemente
elegidos, tales como CO 2.
el fortalecimiento de las conclusiones anteriores sobre los efectos de CO 2
en los roedores se ha publicado desde se presentaron las propuestas de
la muestra, en el momento (es decir, en 2010), no había pruebas
suficientes ya que apoya la opinión de que el CO 2 no debe ser
considerado como un método de sacrificio humanitario (véase, por
ejemplo, el informe AHWA de 2005 [50] y el informe Reunión de Consenso
Newcastle desde 2006 [51]). Sobre la base de que las pruebas, un
documento oficial en el bienestar preocupaciones asociadas con CO 2 su
uso fue puesto en libertad por la autoridad competente de Berlín a
principios de 2009 (52). Este documento fue enviado a todos los
investigadores animal que solicitó una licencia de proyecto, o se ha
notificado a la autoridad competente com- de la planificación para matar
animales para fines cien- Entific en este estado federal.

En las siguientes secciones, cubrimos métodos de matanza que a

Decapitación
menudo se proponen, pero que ya no se debe utilizar en animales
conscientes. En primer lugar, se discuten brevemente el uso de métodos
El debate sobre cómo interpretar la actividad eléctrica que persiste en
físicos (decapitación y cervi- cal dislocación) en ratones conscientes y
el cerebro durante un máximo de 30 segundos después de la
ratas, y el uso de hidrato de cloral, así como las precauciones que se
decapitación parece ya no será un problema, ya que los estudios
deben tomar cuando la administración de una sobredosis del barbitúrico
concluyeron que esta actividad no era una indicación de dolor, y que
inyectable, pentobarbital. Debido a la extensa investigación sobre el
los animales pierden rápidamente conciencia (27). Sin embargo,
perfeccionamiento de la utilización de CO 2,
debido a la distress y temen que los roedores pueden experimentar
cuando se maneja, sobrio y colocado en el diente guillo- (27), la
y la fuerte probabilidad de que las tasas de uso siguen siendo muy elevadas,
decapitación en general, sólo debe llevarse a cabo en animales
que revisó la literatura sobre el CO 2 utilizar en detalle. A pesar de que la
inconscientes.
investigación adicional y confirmar
328
Disloque cervical
La dislocación cervical (CD) es un método de matanza físico
común para ratones y ratas pequeñas por lo que se aplica presión
al cuello tirando rápidamente para separar la columna vertebral
desde el cerebro. En
2010, dislocación cervical era en su mayoría sigue considerando como una excepción a
la regla general de anaesthetis- animales ing antes del sacrificio, porque se suponía que
aseguraba una muerte rápida y, por tanto, habría menos estresante para el animal que
someterse a una inducción de la anestesia de antemano . Sin embargo, los estudios
que sugieren que la dislocación cervical podrían tener una alta tasa de fracaso ya había
sido publicada en ese momento (53, 54). En 2012, Carbone y sus colegas (55) verifican
estas preocupaciones con-. Evaluaron métodos comunes de dislocación cervical en
relación con el tiempo necesario para la detención ratorio respi- en ratones
anestesiados, y se encontró que más del 20% de los ratones continuó a respirar, ya sea
más allá del punto final experimental de 180 segundos (65%) o entre 27 y 150 segundos
(35%). Los autores concluyeron que la dislocación cervical de ratones es propenso a no
tener éxito en matar al animal, y ellos pusieron de relieve la importancia de la formación
en la realización de este método de matanza. Es importante destacar que este tipo de
formación debería tener lugar en ratones anestesiados única (55). En Suiza, desde
1993, la autoridad competente había sido requiriendo que, inmediatamente después de
CD, la muerte del animal está asegurada por guination exsan- (56). La autoridad
competente Swiss ha actualizado recientemente sus directrices y ahora estipula
generalmente anestesia antes de la CD, seguido por desangrado (57). En los casos
cuando sia anaesthe- previa no es factible, los efectos negativos para los anima- les
tienen que tomarse en cuenta en el HBA. dicha formación debería tener lugar en
ratones anestesiados única (55). En Suiza, desde 1993, la autoridad competente había
sido requiriendo que, inmediatamente después de CD, la muerte del animal está
asegurada por guination exsan- (56). La autoridad competente Swiss ha actualizado
recientemente sus directrices y ahora estipula generalmente anestesia antes de la CD,
seguido por desangrado (57). En los casos cuando sia anaesthe- previa no es factible,
los efectos negativos para los anima- les tienen que tomarse en cuenta en el HBA. dicha
formación debería tener lugar en ratones anestesiados única (55). En Suiza, desde
1993, la autoridad competente había sido requiriendo que, inmediatamente después de
CD, la muerte del animal está asegurada por guination exsan- (56). La autoridad
competente Swiss ha actualizado recientemente sus directrices y ahora estipula generalmente anestesia antes de laaversivo (por
El hidrato de cloral
El hidrato de cloral no es un agente piado humano y por lo tanto
appro-, ni para la anestesia (véase también Herrmann y Flecknell [20]),
ni para matar a los animales. Por lo tanto, su uso ha sido clasificado
como no aceptable por la Americana de Medicina Veterinaria Assoc
iation (AVMA) guías (27), por lo menos desde la década de 1990.
Cuando se utiliza por vía intraperitoneal, como es el caso en los
roedores, causa irritación y dolor, a menudo resultando en peritonitis,
íleo y úlceras gástricas. Además de ser un irritante fuerte, los animales
son propensos a experimentar espasmos musculares y jadeante y
pueden vocalizar como la muerte es causada por una depresión
gradual del sistema respiratorio (27).
pentobarbital
La inyección con pentobarbital ha sido un método ampliamente utilizado y
aceptado de matar. Sin embargo, algunas precauciones que se han
tomado, para garantizar la rápida
K. Herrmann & P. ​Flecknell
y la muerte sin dolor. En primer lugar, este barbitúrico se debe
administrar por vía intravenosa siempre que sea posible. Cuando esto no
es posible debido al tamaño de la mal ani-, la administración
intraperitoneal es la norma. Pentobarbital tiene un pH de 11, y ip modo
de gestión de las formulaciones de pH alto causa dolor. La mezcla con
lidocaína evita este problema y representa un refinamiento de potencial
(58). Una sobredosis suficiente necesario tener en cuenta, para
garantizar una muerte rápida. Un estudio reciente (59) en la humanidad
de diversos agentes en uso para la eutanasia encontraron efectos
variables después de la administración ip de una sobredosis aceptada
(200 mg / kg
ip) de pentobarbital en ratas. No estaba claro si este resultado se
debió a misinjection. Las tasas de fracaso cuando se inyecta por
vía intraperitoneal se han demostrado para ser alta (6-20% de
personal calificado; 60-63). Chisholm y Pang (59) concluyeron que
el cuación appro- de pentobarbital, cuando se administra por vía
intraperitoneal, necesita más investigación.
Dióxido de carbono
La buena práctica veterinaria recomienda que ani- mals son
anestesiados antes de morir, lo cual fue el caso para el 60% de los
experimentos propuestos. Sin embargo, más de la mitad de estas
muertes con anestesia previa previsto utilizar CO 2 como el agente
tético anaes-, y su único uso como agente anaes- tético / matar dual
era la elección más frecuente en nuestra muestra (Figura 2). La
humanidad de emplear CO 2 tanto para los animales el aturdimiento y
sacrificio ha sido cuestionada desde la década de 1980 (64). En
consecuencia, se ha convertido en una de las zonas más
investigados refinamiento, con múltiples estudios que demuestran que
su uso compromete el bienestar animal. El cuerpo creciente de
evidencia ha mostrado que los roedores encuentran la exposición al
CO 2 altamente
CD, seguido porejemplo,
desangrado59, 65-84).
(57). Disnea
En los casos (68,sia anaesthe- previa no es factible,
cuando
69), y el miedo y ansiedad (69, 75, 78, 81-84) se provocan, a partir de
las concentraciones de aproxi- madamente 10% de CO 2. La inhalación
de concentraciones de CO 2 desde aproximadamente el 40%, a la que
el mal ani- todavía puede ser consciente (dependiendo de la CO 2
velocidad de llenado de la cámara de eliminación), provoca acidosis,
irritación de las membranas mucosas (68, 76, 77) y por consiguiente el
dolor, como resultado de la formación de ácido carbónico en las
membranas mucosas (59, 71,
79). Además, se ha encontrado que Pulmonology hemorragia
monar y el edema pueden ocurrir antes de la pérdida de la
conciencia (78-80). Los hidrocarburos fluorados, tales como
isoflurano y sevoflurano, se han recomendado como alternativas
más humanas para inducir la inconsciencia antes del uso de CO 2. Los
críticos de la sustitución de CO 2 por estas alternativas han
argumentado que también producen repulsión, y por lo tanto su
uso no representaría una mejora. Mientras que los anestésicos
hidrocarburos fluorados se vuelven más aversivo al volver a
exposi- ción, la evidencia disponible sugiere que son
Una revisión de los puntos finales y los métodos de matanza
significativamente menos aversivo - de hecho, en la mayoría de los casos
no aversivos - en los animales no tratados previamente (70, 85, 86).
evidencia fisiológica en ratones, hámsters y la mayoría de las ratas
sugirieron que el CO 2 exposición induce un aumento significativo en los
niveles plasmáticos de las hormonas del estrés epinefrina y norepinefrina,
pero que los niveles plasmáticos de estas hormonas de estrés fueron
menores significativamente cuando los animales fueron expuestos a
isoflurano y sevoflurano (71). Además, Chisholm et al. ( 87) encontraron que
las ratas expuestas a CO 2,
pero no al isoflurano, indicaron un aumento en la vocalización,
probablemente debido no sólo a la angustia, sino también debido al dolor.
Ha habido incertidumbre sobre el indicador que se debe utilizar para
asegurar la pérdida de la conciencia. Moody y colegas demostraron que
Bency recum- y ausencia de movimiento no indican el plano de anestesia
necesario para no sentir estímulos nocivos (88). Un estudio que la pérdida
utilizada de movimiento como un proxy para la pérdida de la conciencia, se
encontró que un retorno de movimiento se observó en los animales
expuestos a 100% de CO 2 ( 89). Por lo tanto, la pérdida de movimiento no
es un indicador fiabilidad capaz de evaluar la riateness approp de este
método de matanza, como el dolor o malestar experimentado por el animal
aparentemente inconsciente puede ser perdido (59). La pérdida del reflejo
de enderezamiento (LORR) parece ser un indicador más fiable para la
pérdida de conciencia a un nivel en el que los estímulos nocivos no se
sienten (59, 90). Sin embargo, otro estudio ha sugerido que el investigador
debe esperar aproximadamente 40 segundos más allá LORR, antes de
pasar al 100% de CO 2 ( 88). La bradicardia en ratas fue identificado como
signo de irritaciones y dolor (76, 91, 92). Un estudio reciente encontró que
la bradicardia estaba presente en las ratas antes de la LORR, indicando
que los animales hicieron experimentan dolor antes de la pérdida de la
conciencia (59).
Teniendo en cuenta que el cuerpo grande y creciente de evidencia
sobre los efectos del CO 2, que ya debería haber sido excluidos de su
uso en anima- les conscientes en el momento de las propuestas se
presentaron en
2010. En 2010, el Consejo Canadiense de los Animales clasificación de
la utilización de CO 2 como condicionalmente aceptable capaz, y se
recomienda el uso de inhalantes la anestesiología antes de matar con
este agente (25). Sin embargo, esto todavía no se refleja adecuadamente
en la legislación pertinente. Durante el proceso de elaboración de
Directiva 2010/63 / UE, en 2005, el grupo de expertos sobre Salud y
Bienestar Animal (AHAW) de la Autoridad Europea de Seguridad
Alimentaria (AESA) dis- cussed CO 2 utilizar extensamente y concluyó
que no se iba a utilizar como único agente para matar los roedores (50).
No obstante, la opinión basada en la evidencia del panel de expertos no
se tuviera plenamente en considera- ción en la nueva Directiva (19). A
pesar de la evidencia de que el CO 2 su uso es inhumano, todavía es
probable que sea el agente más ampliamente utilizado para matar a los
roedores de laboratorio. Una posible explicación es que el CO 2 Es
barato, plantea riesgos mínimos para el personal, se puede utilizar para
matar a los animales en grupos, y no implica el acto de matar el
manual, que puede ser muy molesto para el personal. Sin embargo,
329
Dado que las preocupaciones de bienestar deben tener prioridad,
consideramos que las autoridades competentes tinise rigurosamente scru- la
justificación científica de la continua CO 2
usar y permitir que sólo cuando se da una justificación científica
plausible.
conclusiones
En Alemania, y al menos desde la transposición de
Dir caz 2010/63 / UE también en el resto de la UE, que es un requisito
legal que todos refinamiento métodos para ser utilizados en un
estudio se incluyen en las propuestas de investigación. En esta
revisión retrospectiva de las propuestas de investigación, se detectó
una falta general de uso planificado de refinamiento métodos.
Proponemos que este es un fuerte indicador de la falta de uso real de refinamiento
ción métodos en la práctica, en lugar de su utilización estar
bajo-reportado en publicaciones de investigación basados ​en
animales (como a menudo se sugiere). Más aún, es probable que
esto sea un problema a gran escala, no sólo restringida a Alemania.
Suponemos que la omisión: de refinamientos de las propuestas
representa o bien una falta de conocimiento de lo que puede ser
implementado achiev- hábilmente, o una falta de comprensión de la
importancia de mejoras tanto a animales Welfare y la calidad de los
datos científicos adquirido. A lo mejor de nuestro conocimiento,
nuestro estudio es el primero en opinar sobre el refinamiento métodos
mencionados en las propuestas de investigación. Por lo tanto, sería
interesante realizar un estudio similar para evaluar si la situa- ción ha
cambiado desde 2010. El estudio también podría útilmente ser
ampliado para incluir otros países. El Europeo Directiva 2010/63 / UE Ahora
lates que se precisan retrospectiva de las evaluaciones de ciertos
estudios en animales (19), que debe ayudar a identificar las
deficiencias y omisiones en la aplicación de las tres R. Sin embargo,
esta tarea se ha asignado a las autoridades competentes, que ya
estaban dotados de recursos sub antes de añadir esta nueva
responsabilidad (julio de 2016, comunicación personal con el Dr.
Heidemarie Ratsch, titular de la autori- dad competente en Berlín del
1996-2016). Por lo tanto, una solución podría ser factible para
externalizar estas revisiones cruciales a los comités de expertos
independientes integrada, no sólo en la aplicación de las tres R, sino
también en sus respectivos campos de investigación. Publicación de
los resultados de esos exámenes permitirían lecciones que hay que
aprender y una aplicación más eficaz de las tres R en el futuro.
Agradecimientos
Estamos muy agradecidos a Thorsten Busse por su ayuda en el
desarrollo de una base de datos electrónica para la comparación de los
datos. Queremos reconocer la Fun- dación SET alemán, Stiftung zur
Förderung der von Erforschung Ersatz- und zur Ergänzungsmeth oden
Einsch - ränkung von Tierversuchen, por financieramente SOPORTE-
330
ing este proyecto. Agradecemos también ZEBET cuya concesión
adicional de viaje (FK 1329-472) habilitado el primer autor para presentar
los resultados del proyecto en las conferencias adicionales. No hay
conflictos de intereses, y no se requería aprobación ical et-.
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